一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法

2023-07-06 22:05:11

一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法
【專利摘要】本發明公開了一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，涉及物質的確定方法。所述方法包括下列步驟：（1）未經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化：A.粉碎、篩選；B.蛋白純化；C.粗多糖純化；（2）經過擠壓膨化的紅小豆蛋白和多糖液純化：A.粉碎、篩選；B.加水攪拌；C.擠壓膨化；D.粉碎、篩選；E.蛋白純化；F.粗多糖純化；（3）利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經過擠壓膨脹前後的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。通過比較擠壓膨化前後的物質成分變化，很容易發現經過擠壓膨脹的蛋白和多糖含量顯著增高。利用體外測定糖苷酶一致的方法，能夠輕鬆測定經過擠壓膨化的紅小豆粉與未經過擠壓膨化紅小豆粉的糖苷酶抑制率。
【專利說明】一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及物質的確定方法，具體而言，本發明涉及一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法。
【背景技術】
[0002]在過去，紅豆由於其高纖維及蛋白含量，被推薦為降糖食物。植物化學家對紅豆中化學成分進行分析，發現其富含酚類化合物，兒茶素、綠原酸等。紅豆具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，對鏈脲佐菌素(STZ)誘導的糖尿病大鼠血糖有改善作用。紅豆汁可降低甘油三酯並抑制胰脂肪酶活性，有利於防治高甘油三酯血症。在保健功能食品領域，對小豆的深入研究開發相對較少，尤其對小豆粉起降糖作用的中關鍵生物活性物質缺乏研究。

【發明內容】

[0003]本發明的目的是提供一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法。藥理實驗結果表明，通過擠壓膨化製備的小豆粉多糖和蛋白含量更高，降血糖功效更好。
[0004]本發明為解決上述技術問題採用的技術方案是:一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，包括下列步驟:
[0005]( I)未經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化:
[0006]Α、粉碎、篩選:取質量合格的紅小豆，粉碎、過篩，測定獲得的物質的成分；
[0007]B、蛋白純化:採用常規酸鹼沉降法進行蛋白純化；
[0008]C、粗多糖常規純化:
[0009]a、粗多糖液製備；
[0010]b、粗多糖純化；
[0011](2)經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖液純化:
[0012]A、粉碎、篩選:取質量合格的紅小豆,粉碎、過篩；
[0013]B、加水攪拌:在紅小豆粉中添加8-10%的水，用攪拌機攪拌均勻；
[0014]C、擠壓膨化:取攪拌後的紅小豆粉，放入擠壓機中進行擠壓膨化；
[0015]D、粉碎、篩選:將擠壓膨化後的紅小豆粉粉碎、過篩，測定獲得的物質的成分，比較擠壓膨化前後的物質成分變化；
[0016]E、蛋白純化:採用常規酸鹼沉降法進行蛋白純化；
[0017]F、粗多糖常規純化:
[0018]a、粗多糖液製備；
[0019]b、粗多糖純化；
[0020](3)利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經過擠壓膨脹前後的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。
[0021]所述過篩為過55-65目篩。
[0022]所述進行蛋白純化的酸鹼沉降法的具體做法為:稱取原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心5-15min,收集上清用IM氫氧化鈉調pH到8.0-10.0,磁力攪拌25-35min, 5000r離心15_25min，收集上清液。用IN鹽酸調pH到6.0-8.0, 5000r離心15-25min,棄去上清液,沉澱用去離子水潤洗2_3遍,凍幹備用。
[0023]所述粗多糖液製備的具體做法為:稱取原料粉，浸泡20_40min，加15_25倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達70-90%，3-5°C冷藏過夜，3500r離心15_25min，沉澱加5-15mL水溶解，得到粗多糖液。
[0024]所述粗多糖純化的具體做法為:粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液0.5-1.5mL,3-5 °C冷藏過夜，3500r離心15-25min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到70_90%，3-5°C冷藏過夜，4500r離心5-10min，棄去上清液，沉澱加5_15mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮25-35min,過濾,加蒸懼水定容於25mL容量瓶。
[0025]所述擠壓膨化過程中擠壓機I區溫度範圍為140-180°C、II區溫度範圍為120-160。。。
[0026]本發明的有益效果是:
[0027]1、通過比較擠壓膨化前後的物質成分變化，很容易發現經過擠壓膨脹的蛋白和多糖含量顯著增高。經過擠壓膨脹的小豆的蛋白和多糖具有明顯較高的α糖苷酶一致活性。
[0028]2、利用體外測定糖苷酶一致的方法，能夠輕鬆測定經過擠壓膨化的紅小豆粉與未經過擠壓膨化紅小豆粉的糖苷酶抑制率，結果顯示可提高糖苷酶抑制率4倍以上。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0029] 圖1為為擠壓膨脹紅小豆粉對正常鼠降血糖活性實驗結果圖
[0030]圖2為擠壓膨脹紅小豆粉對糖尿病鼠降血糖活性實驗結果圖
[0031]圖3為擠壓膨脹紅小豆蛋白對糖尿病鼠降血糖活性實驗結果圖
[0032]圖4為擠壓膨脹紅小豆蛋白對糖尿病鼠口服葡萄糖耐量影響結果圖
【具體實施方式】
[0033]實施例1:
[0034]一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，包括下列步驟:
[0035]( I)未經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化:
[0036]Α、粉碎、篩選:取質量合格的紅小豆，粉碎、過55目篩，測定獲得的物質的成分；
[0037]B、蛋白純化:採用酸鹼沉降法進行蛋白純化:稱取原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心5min，收集上清用IM氫氧化鈉調pH到8.0，磁力攪拌25min，5000r離心15min,收集上清液。用IN鹽酸調pH到6.0, 5000r離心15min,棄去上清液,沉澱用去尚子水潤洗2遍,凍幹備用；
[0038]C、粗多糖純化:
[0039]a、粗多糖液製備:稱取原料粉，浸泡20min，加15倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達70%，3°C冷藏過夜，3500r離心15min，沉澱加5_15mL水溶解，得到粗多糖液；
[0040]b、粗多糖純化:粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液0.5mL, 3°C冷藏過夜，3500r離心15min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到70%，31:冷藏過夜，450(^離心5min，棄去上清液，沉澱加5mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮25min，過濾，加蒸餾水定容於25mL容量瓶；
[0041](2)經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖液純化:
[0042]A、粉碎、篩選:取質量合格的紅小豆,粉碎、過55目篩；
[0043]B、加水攪拌:在紅小豆粉中添加8%的水，用攪拌機攪拌均勻；
[0044]C、擠壓膨化:取攪拌後的紅小豆粉，放入擠壓機中進行擠壓膨化；I區溫度為140°C、II 區溫度為 120。。； [0045]D、粉碎、篩選:將擠壓膨化後的紅小豆粉粉碎、過55目篩，測定獲得的物質的成分，比較擠壓膨化前後的物質成分變化；
[0046]E、蛋白純化:採用酸鹼沉降法進行蛋白純化:稱取一定量原料粉末用蒸餾水按照I:8比例浸泡過夜，3500r離心5min，收集上清用IM氫氧化鈉調pH到8.0，磁力攪拌25min，5000r離心15min,收集上清液。用IN鹽酸調pH到6.0, 5000r離心15min,棄去上清液,沉澱用去離子水潤洗2遍，凍幹備用；
[0047]F、粗多糖純化:
[0048]a、粗多糖液製備:稱取原料粉，浸泡20min，加15倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達70%，31:冷藏過夜，350(^離心15min，沉澱加5mL水溶解，得到粗多糖液；
[0049]b、粗多糖純化；粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液0.5mL, 3°C冷藏過夜，3500r離心15min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到70%，31:冷藏過夜，450(^離心5min，棄去上清液，沉澱加5mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮25min，過濾，加蒸餾水定容於25mL容量瓶；
[0050](3)利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經過擠壓膨脹前後的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。
[0051]實施例2:
[0052]一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，包括下列步驟:
[0053]( I)未經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化:
[0054]Α、粉碎、篩選:取質量合格的紅小豆，粉碎、過60目篩，測定獲得的物質的成分；
[0055]B、蛋白純化:採用酸鹼沉降法進行蛋白純化:稱取原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心IOmin,收集上清用IM氫氧化鈉調pH到9,磁力攪拌30min, 5000r離心20min，收集上清液。用IN鹽酸調pH到7.0, 5000r離心20min，棄去上清液，沉澱用去尚子水潤洗2遍,凍幹備用；
[0056]C、粗多糖純化:
[0057]a、粗多糖液製備:稱取原料粉，浸泡30min，加20倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達80%，4°C冷藏過夜，3500r離心20min，沉澱加IOmL水溶解，得到粗多糖液；
[0058]b、粗多糖純化:粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液1.0mL，4°C冷藏過夜，3500r離心20min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到80%，4°C冷藏過夜，4500r離心lOmin，棄去上清液，沉澱加IOmL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮30min，過濾，加蒸餾水定容於25mL容量瓶；[0059](2)經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖液純化:
[0060]A、粉碎、篩選:取質量合格的紅小豆,粉碎、過60目篩；
[0061]B、加水攪拌:在紅小豆粉中添加9%的水，用攪拌機攪拌均勻；
[0062]C、擠壓膨化:取攪拌後的紅小豆粉，放入擠壓機中進行擠壓膨化；I區溫度為160°C、II 區溫度為 140。。；
[0063]D、粉碎、篩選:將擠壓膨化後的紅小豆粉粉碎、過60目篩，測定獲得的物質的成分，比較擠壓膨化前後的物質成分變化；
[0064]E、蛋白純化:採用酸鹼沉降法進行蛋白純化:稱取一定量原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心lOmin，收集上清用IM氫氧化鈉調pH到9.0，磁力攪拌30min, 5000r離心20min,收集上清液。用IN鹽酸調pH到7.0, 5000r離心20min,棄去上清液，沉澱用去離子水潤洗3遍，凍幹備用；
[0065]F、粗多糖純化:
[0066]a、粗多糖液製備:稱取原料粉，浸泡30min，加20倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達80%，4°C冷藏過夜，3500r離心20min，沉澱加IOmL水溶解，得到粗多糖液；
[0067]b、粗多糖純化；粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液1.0mL，4°C冷藏過夜，3500r離心20min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到80%，4°C冷藏過夜，4500r離心lOmin，棄去上清液，沉澱加IOmL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮30min，過濾，加蒸餾水定容於25mL容量瓶；
[0068](3)利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經過擠壓膨脹前後的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。
[0069]實施例3:
[0070]一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，包括下列步驟:
[0071]( I)未經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化:
[0072]Α、粉碎、篩選:取質量合格的紅小豆，粉碎、過65目篩，測定獲得的物質的成分；
[0073]B、蛋白純化:採用酸鹼沉降法進行蛋白純化:稱取原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心15min,收集上清用IM氫氧化鈉調pH到10.0，磁力攪拌35min,5000r離心25min,收集上清液。用IN鹽酸調pH到8.0, 5000r離心25min,棄去上清液,沉澱用去離子水潤洗3遍，凍幹備用；
[0074]C、粗多糖純化:
[0075]a、粗多糖液製備:稱取原料粉，浸泡40min，加25倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達90%，5°C冷藏過夜，3500r離心25min，沉澱加15mL水溶解，得到粗多糖液；
[0076]b、粗多糖純化:粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液1.5mL, 5°C冷藏過夜，3500r離心25min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到90%，5°C冷藏過夜，4500r離心lOmin，棄去上清液，沉澱加15mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮35min，過濾，加蒸餾水定容於25mL容量瓶；
[0077](2)經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖液純化:
[0078]A、粉碎、篩選:取質量合格的紅小豆，粉碎、過65目篩；[0079]B、加水攪拌:在紅小豆粉中添加10%的水，用攪拌機攪拌均勻；
[0080]C、擠壓膨化:取攪拌後的紅小豆粉，放入擠壓機中進行擠壓膨化；I區溫度為180°C、II 區溫度為 1600C ；
[0081]D、粉碎、篩選:將擠壓膨化後的紅小豆粉粉碎、過65目篩，測定獲得的物質的成分，比較擠壓膨化前後的物質成分變化；
[0082]E、蛋白純化:採用酸鹼沉降法進行蛋白純化:稱取一定量原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心15min，收集上清用IM氫氧化鈉調pH到10.0,磁力攪拌35min, 5000r離心25min,收集上清液。用IN鹽酸調pH到8.0, 5000r離心25min,棄去上清液，沉澱用去離子水潤洗3遍，凍幹備用；
[0083]F、粗多糖純化:
[0084]a、粗多糖液製備:稱取原料粉，浸泡40min，加25倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達90%，5°C冷藏過夜，3500r離心25min，沉澱加15mL水溶解，得到粗多糖液；
[0085]b、粗多糖純化；粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液1.5mL, 5°C冷藏過夜，3500r離心25min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到90%，5°C冷藏過夜，4500r離心lOmin，棄去上清液，沉澱加15mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮35min，過濾，加蒸餾水定容於25mL容量瓶；
[0086](3)利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經過擠壓膨脹前後的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。
[0087]下面通過實驗方法來具體說明本發明的有益效果:
[0088]實驗1:糖苷酶測定體外實驗，利用化學測定方法，選用葡萄糖測定試劑盒，測定不同品種的紅小豆粉的糖苷酶 抑制率，其中以降血糖拜糖平為陽性對照，實驗結果平行測定2次。
[0089]結果如下:不同品種紅小豆糖苷酶抑制率:
[0090]
【權利要求】
1.一種提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，包括下列步驟: (1)未經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化: A、粉碎、篩選:取紅小豆，粉碎、過篩，測定獲得的物質的成分； B、蛋白純化:採用常規酸鹼沉降法進行蛋白純化； C、粗多糖常規純化: a、粗多糖液製備； b、粗多糖純化； (2)經過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖液純化: A、粉碎、篩選:另取紅小豆，粉碎、過篩，測定獲得的物質的成分； B、加水攪拌:在紅小豆粉中添加8-10%的水，攪拌均勻； C、擠壓膨化:取攪拌後的紅小豆粉，進行擠壓膨化； D、粉碎、篩選:將擠壓膨化後的紅小豆粉粉碎、過篩； E、蛋白純化:採用常規酸鹼沉降法進行蛋白純化； F、粗多糖常規純化: a、粗多糖液製備； b、粗多糖純化； (3)利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經過擠壓膨脹前後的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。
2.根據權利要求1所述的提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，所述過篩為過55-65目篩。
3.根據權利要求1所述的提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，所述進行蛋白純化的酸鹼沉降法的具體做法為:稱取原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心5-15min,收集上清用IM氫氧化鈉調pH到8.0-10.0,磁力攪拌25_35min, 5000r離心15-25min,收集上清液。用IN鹽酸調pH到6.0-8.0, 5000r離心15_25min，棄去上清液，沉澱用去尚子水潤洗2-3遍,凍幹備用。
4.根據權利要求1所述的提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，所述粗多糖液製備的具體做法為:稱取原料粉，浸泡20-40min，加15-25倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達70-90%，3-5°C冷藏過夜，3500r離心15-25min，沉澱加5-15mL水溶解，得到粗多糖液。
5.根據權利要求1所述的提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，所述粗多糖純化的具體做法為:粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液0.5-1.5mL，3-5°C冷藏過夜，3500r離心15-25min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到70_90%，3_5°C冷藏過夜，4500r離心5-10min,棄去上清液，沉澱加5_15mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮25_35min，過濾，加蒸餾水定容於25mL容量瓶。
6.根據權利要求1所述的提高紅小豆降血糖效果的物質的確定方法，所述擠壓膨化過程中的擠壓機I區溫度範圍為140-180°C、II區溫度範圍為120-160°C。
【文檔編號】G01N1/34GK103743869SQ201410008568
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月8日 優先權日:2014年1月8日
【發明者】任貴興, 麼楊 申請人:中國農業科學院作物科學研究所