一種梔子總苷提取物及其製備方法
2023-07-07 08:57:06
專利名稱：一種梔子總苷提取物及其製備方法
技術領域：
本發明涉及中藥技術領域，具體涉及一種梔子總苷提取物物及其製備方法。
背景技術：
梔子又名山梔子，是茜草科植物山梔Gardenia jasminoides Ellis.的果實，性苦寒，無毒。梔子始載於《神農本草經》，具有利膽、促胰腺分泌、降壓、鎮靜、降溫、抗菌抗炎作用。梔子中主要含有環烯醚萜苷類、有機酸類、梔子黃色素類等。梔子環烯醚萜苷類化合物包括梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷、梔子酸、羥異梔子苷等，其中梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷是很好的活性成分中國專利CN1660198A公開了梔子環烯醚萜苷用於治療膽囊炎、膽結石症；中國專利CN1460483A公開了梔子環烯醚萜苷用於治療腦血管疾病；中國專利CN1546507A公開了梔子苷類用於心腦血管疾病；中國專利CN1689581A公開了梔子苷用於病毒性疾病；文獻資料鄭佔虎等編著，中藥現代研究與應用，第四卷，學苑出版社，1998，3174報導了梔子苷類具有保肝、促膽汁胰腺分泌、鎮痛、抗炎等作用；因此，梔子提取物應以梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷為指標，確定其質量。
現在梔子提取物主要有兩種一種為高純度的梔子苷，為單一個化合物。多採用矽膠柱層析、氧化鋁、活性炭、重結晶等方法製備唐傳勁等，梔子苷簡易分離純化方法，中國民族民間醫藥雜誌，2005，77，360；張麗茹等，梔子中京尼平苷的分離及其含量測定，中草藥，2004，35(11)，1253；CN1706858A。另一種為梔子環烯醚萜苷提取物，對梔子苷或梔子環烯醚萜苷類總量進行測定，而對梔子的另一主要活性成分京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷未沒有進行含量確定，從而造成梔子提取物質量不均一，其實質還是混合物，物質基礎不明確，其組成成分與相互比例因方法而異，不具有普遍性及廣泛的適用性。
現有技術中梔子總苷提取物的提取純化方法多採用大孔樹脂方法(1)水洗脫後直接以高濃度乙醇洗脫，這種方法不僅無法去除極性稍強於梔子苷的環烯醚萜苷類成分，而且弱極性雜質殘留很多呂茂平等，大孔樹脂對梔子苷分離效果的研究，中草藥，2002，33(9)，794；姚平等，大孔吸附樹脂純化梔子中總環烯醚萜苷和梔子苷的研究，中草藥，2006，37(1)，57；陳鋼等，大孔吸附樹脂純化注射用梔子提取物的研究，中國中藥雜誌，2005，30(3)，188；金日顯等，大孔吸附樹脂法富集梔子中梔子苷的工藝研究，中國實驗方劑學雜誌，2005，11(3)，1；(2)經水洗或低濃度乙醇洗脫除雜後再用高濃度乙醇洗脫，一般所謂低濃度乙醇為30％，大部分梔子苷已經被當作雜質除掉，因此實際上無法獲得高質量的梔子總苷提取物中國專利CN1546507A；(3)水洗後，採用10％乙醇洗脫除雜，再用低濃度乙醇20-30％洗脫獲得中國專利CN1706859A，這種方法得到的梔子提取物中除了環烯醚萜苷類，還含有有機酸類化合物，如綠原酸、異綠原酸等，水和10％乙醇只能洗脫下部分有機酸類，另外10％乙醇把京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷、部分梔子苷都洗脫下來，因此無法得到高含量、高產率既含有梔子苷又含有京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷的梔子提取物；因此現有技術沒有一種獲得含有高含量梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷提取物的方法，一定程度上局限了活性物質梔子總苷在醫藥領域的應用。
發明內容
本發明是將梔子總苷提取物的標準提高；本申請梔子總苷提取物為組分有效部位；組分有效部位我們認為首先應將方法來源的有效部位研究清楚，通過對各成分的藥效篩選、量效關係與藥物代謝研究，優選出強效活性成分，保留中等活性成分，篩除低效或無效成分，將強效活性與中等活性組成優選的有效部位即組分有效部位；對組分有效部位進行比例優選研究，從而確定組分有效部位的組成和比例，也即標準有效部位，該有效部位不但物質基礎清楚，而且具有顯著的生物活性，這種標準有效部位既是組分有效部位。
梔子總苷提取物，含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷，其中梔子苷含量為45％-90％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為5％-30％，梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計大於等於50％且小於100％。
梔子總苷提取物，其中梔子苷含量為50％-80％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為5％-25％，梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計大於等於55％且小於100％。
本申請梔子總苷提取物可以按照本申請工藝方法製備得到；或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照上述本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；梔子總苷提取物製備治療和/或預防腦血管疾病、抑菌、抗病毒、抗炎藥物中的應用。
一、製備方法取梔子用乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至5.0-10；將溶液經非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，非極性或弱極性大孔樹脂柱為HPD-100、100A、300、400、400A、450或D101、1300-I、1400、AB-8中的一種；先用水除去雜質，再用6％-30％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；或先用水、1％-5％稀乙醇洗脫除去雜質，再用6％-30％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；或先用水、3％-5％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用10％-20％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得。
或者將上述洗脫液加入有機溶劑乙醇或丙酮提取，提取液濃縮至幹。
本申請製備梔子總苷的方法區別現有技術的方法在於1、梔子中除了環烯醚萜苷類，還含有有機酸類，包括綠原酸、異綠原酸等。提取液中有分子狀態的有機酸、也有離子狀態的有機酸。未經調節PH值，提取液直接進行大孔樹脂柱層析，水能洗脫下離子狀態的有機酸類，10％～30％的乙醇能洗脫下分子狀態的有機酸類，但是和梔子苷等混在一起，被洗脫下來，降低了提取物中梔子苷等的含量。提取液調節PH值後有機酸轉化成離子狀態，進行大孔樹脂柱層析，水或低濃度乙醇就可以把其洗脫下來，保障了成品中梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷的含量，減少了雜質的存在。
2、梔子的環烯醚萜苷類除了含有梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷，還含有其他環烯醚萜苷化合物，如梔子酸、羥基梔子苷等。大孔樹脂純化時，已有方法基本採用約30％乙醇洗脫，使所有的梔子環烯醚萜苷類化合物都洗脫下來，無法得到高含量的含有梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷的提取物。我們經過研究，驚奇地發現，梔子環烯醚萜苷類化合物之間極性也有很大的差別，大孔樹脂柱層析時，採用1％～5％的乙醇可以把除梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷外大部分梔子環烯醚萜苷類化合物洗脫下來，5％～30％的乙醇可以把梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷一起洗脫下來。經過低濃度1％～5％乙醇的洗脫後，再得到的梔子提取物中，梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量較高。
3、經過上述柱層析後梔子提取物中，仍含有部分糖類、大極性的化合物。這些化合物難溶於有機溶劑。為了進一步提高提取物含量，又保證提取物的的得量，我們採用乙醇或丙酮溶解處理柱層析後的樣品，濃縮乾燥後得到的梔子提取物含量得到進一步提高。當然乙酸乙酯、乙醇或丙酮的混合溶劑都可以選擇使用。
二、檢測分析方法高效液相色譜條件為色譜條件與系統適應性實驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫35℃；檢測波長238nm；以乙腈-水體積比＝10∶90為流動相；梔子苷對照品溶液的配製精密稱取梔子苷對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，並定容至刻度；京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷對照品溶液的配製精密稱取京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，並定容至刻度；供試品溶液的配製精密稱取樣品，預處理後加到容量瓶中加甲醇溶解搖勻，並定容至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄60分鐘的色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。
實驗結果見表1表1不同梔子提取物含量測定
實驗結論通過上述實驗表明，本申請梔子總苷提取物質量穩定，有效成分均一，是質量可控的標準化提取物。
三、藥理實驗1、抗菌實驗研究實驗藥物本申請梔子總苷標準提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室提供；現有技術梔子提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室按照文獻方法製備呂茂平等，大孔樹脂對梔子苷分離效果的研究，中草藥，2002，33(9)，794。
實驗動物Wistar大鼠，體重190-230g；菌種金黃色葡萄球菌、肺炎球菌、流感嗜血桿菌、大腸桿菌；實驗方法大鼠分組，雌雄各半，上述不同方案組藥物灌胃給藥2次/日，每次給藥量為100mg/kg，共5次，末次給藥後2小時，ip戊巴比妥鈉35mg/kg麻醉，腹主動脈無菌採血，注入無菌負壓採血管，凝固後離心分離血清，新華1號濾紙片製備無菌的小圓片，分裝於無菌小瓶內，取上述血清加入小瓶中，浸泡1小時，置零下20℃冰箱保存。
菌種復活後，分別在MHA平板及MHA血平板上純培養15小時，用無菌生理鹽水洗取菌落，用無菌棉籤取菌液均勻塗布於平板表面，待平板略幹後，在標記位置上貼上上述不同方案的濾紙片，放入37℃溫箱24小時取出，攝像機攝像，圖象分析儀測量抑菌圈直徑，實驗結果見表2表2不同方案組血清紙片抗菌實驗結果
注與空白血清組比較**P＜0.01，*P＜0.05；2、抗病毒實驗研究實驗藥物本申請梔子總苷標準提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室提供；現有技術梔子提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室按照文獻方法製備姚平等，大孔吸附樹脂純化梔子中總環烯醚萜苷和梔子苷的研究，中草藥，2006，37(1)，57；。
採用半體內法作抗病毒作用試驗(1)對甲型流感病毒的影響實驗採用半體內法，不同方案組、正常對照組及空白對照組，將不同藥物相同濃度分別與病毒直接作用，立即接種於雞胚尿囊腔中，用石蠟封接種孔，置37℃孵箱培養48h，收取每胚之尿液，用0.5％雞紅血球凝集試驗，判斷藥物的抗病毒活性，結果見表3(2)對乙型流感病毒的影響接種方法、藥物劑量同甲型流感病毒實驗。結果見下表3。
表3對流感病毒的作用比較
注-代表無病毒生長，+-代表少量病毒生長，++代表較多病毒生長，+++代表大量病毒生長3、抗炎試驗實驗藥物本申請梔子總苷標準提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室提供；現有技術梔子提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室按照文獻方法製備金日顯等，大孔吸附樹脂法富集梔子中梔子苷的工藝研究，中國實驗方劑學雜誌，2005，11(3)，1。
實驗方法取昆明種小鼠，體重20-22g，雌雄不分，分為生理鹽水組、上述不同方案組，尾靜脈給藥，給藥量150mg/kg，每天給藥一次，連續給藥7天，於末次給藥30分鐘後，用二甲苯棉球接觸小鼠左耳約5s，15分鐘後脫頸椎處死，以打孔器將小鼠雙耳相同部位等面積切下，用電子天平精確稱重，以左耳重減右耳重為小鼠的耳腫脹度，並求出抑制率。實驗結果見表4表4不同方案抗炎實驗結果
注與空白血清組比較**P＜0.01，*P＜0.05；4、對狗心肌缺血保護作用實驗藥物本申請梔子總苷標準提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室提供；現有技術梔子提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室按照文獻方法製備中國專利CN1546507A。
實驗方法取實驗狗，分為生理鹽水組、現有技術梔子提取物組、本申請梔子總苷標準提取組，給藥組分別在狗前肢皮下頭靜脈給藥，給藥量每次20mg/kg，生理鹽水組等容不等量，每天給藥1次，連續給藥3天，給藥第3天後用戊巴比妥鈉25mg/kg靜脈麻醉，氣管插管，接人工呼吸機加以正壓呼吸，從左側第五肋開胸，剪開心包，暴露心臟，將心包切開緣縫於胸壁，在左冠狀動脈前降支分二期結紮，並緩慢iv利多卡因8mg/kg以防結紮前可能引起的心室顫動，隨後縫合心包及胸壁。心梗後24h，狗經戊巴比妥鈉麻醉後處死，迅速取出心臟，切除大血管和脂肪組織，核對前降支結紮點的位置，稱全心重，然後切除右心室和左右心房，留下室中隔及左心房，稱得左心室重，從心尖和開始與前降支垂直方向將左心室切成2-3mm厚的肌片，浸於硝基四唑藍溶液(NBT)中染色30min，剪下缺血區心肌組織稱重，計算心肌梗塞範圍，即心梗範圍＝缺血區重/左心室重×100％，結果見表5表5不同方案組對狗心肌缺血的保護作用
注與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05；5、對大鼠腦梗塞的影響實實驗藥物本申請梔子總苷標準提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室提供；現有技術梔子提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室按照文獻方法製備中國專利CN1706859A。
實驗方法取健康SD大鼠，體重240-260g，隨機分組模型對照組、現有技術梔子提取物組、本申請梔子總苷標準提取組，各實驗組給藥量100mg/kg，灌胃給藥。給藥3天後，於末次給藥1小時，取大鼠，水合氯醛300mg/kg ip麻醉，頸部切口，分離並結紮右側頸總動脈，縫合肌肉皮膚後，右側位固定，在右耳和右眼外眥連線中點切開皮膚，分離顳肌，暴露顴突及顳骨，在顴突的頭端1～2mm處開一約3×3mm的骨窗，暴露大腦中動脈(MCA)，將MCA灼斷，縫合切口。參考Bederson法，處死動物，取右大腦半球，切成5片，置於2g/LNPT中37℃溫育15min染色，仔細挖取並稱重未被染成蘭色的白色梗塞腦組織，實驗結果見表6表6對大鼠腦梗塞保護情況
注與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05；6、對四氯化碳致大鼠慢性肝損傷的影響實驗藥物本申請梔子總苷標準提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室提供；現有技術梔子提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室按照文獻方法製備中國專利CN1706859A。
實驗方法取Wistar大鼠，按體重隨機分組，正常對照組、肝損傷模型組、現有技術梔子提取物組、本申請梔子總苷標準提取組，給藥組灌胃給藥，給藥量為100mg/kg。除正常對照組外，各組動物腹腔注射10％CCl4植物油0.5ml/100g體重，每周兩次，共12周，正常對照組ip生理鹽水。造模同時每日ig給藥一次。實驗結束前，動物禁食12小時，取股動脈血，以3000轉/分離心10分鐘，分離血清，測定GPT、GOT，實驗結果見表7表7不同方案組對肝損傷的影響結果
注與模型組比較**P＜0.01，*P＜0.05；7、在鴨體內對鴨肝炎病毒的影響實驗藥物本申請梔子總苷標準提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室提供；現有技術梔子提取物，北京本草天源藥物研究院實驗室按照文獻方法製備呂茂平等，大孔樹脂對梔子苷分離效果的研究，中草藥，2002，33(9)，794。
實驗方法取北京鴨，經腿脛靜脈注射上海麻鴨DHBV-DNA陽性鴨血清，每隻0.3ml，感染後7天取血，分離血清，檢測血清中DHBV-DNA含量。雛鴨血清經檢測DHBV呈陽性後，將鴨隨機分為組病毒對照組、現有技術梔子提取物組、本申請梔子總苷標準提取組，灌胃給藥，給藥量為80mg/kg，每天2次。對照組給予同體積生理鹽水，連續給藥10天。分別與藥物治療後5天(T5)、10天(T10)和停藥後3天(P3)自鴨脛靜脈取血，分離血清，按缺口翻譯試劑盒說明書方法，用32P標記DHBV-DNA探針，並作鴨血清斑點雜交，放射自顯影膜片斑點，酶標儀測定OD值(濾光片為490nm)，計算血清DHBV-DNA光密度，以雜交斑點OD值作為標本DHBV-DNA水平值，實驗結果見表7。
表7在鴨體內對鴨肝炎病毒DHBV-DNA的影響
注與模型組比較**P＜0.01，*P＜0.05；實驗結論藥理實驗結果表明，本申請梔子總苷提取物比現有技術梔子提取物具有更好的藥理作用(現有技術梔子提取物與對照組統計學上沒有差異，而本申請梔子總苷提取物與對照組比較具有顯著性差異)。
七.製備實施例實施例1提取工藝取梔子用10％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至5.0；將溶液HPD-100層析分離；先用水除去雜質，再用6％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計53.3％，其中梔子苷含量為46.2％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為7.1％；或先用水、1％稀乙醇洗脫除去雜質，再用30％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計51.9％，其中梔子苷含量為45.7％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為6.2％；或先用水、1％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用10％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計50.1％，其中梔子苷含量為45％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為5％；或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；梔子總苷提取物在製備抗炎、抗菌、抗病毒、治療心腦血管疾病或肝病的藥物方面中的應用。
實施例2取梔子用95％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至10；將溶液經100A大孔樹脂柱層析分離；先用水除去雜質，再用30％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計大於等於98.7％，其中梔子苷含量為89.1％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為9.6％；或先用水、5％稀乙醇洗脫除去雜質，再用30％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計大於等於99.5％，其中梔子苷含量為90.2％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為9.3％；或先用水、5％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用20％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計大於等於99.3％，其中梔子苷含量為90％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為9.3％；或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；
本申請梔子總苷標準提取物製備在製備抗炎、抗菌、抗病毒、治療心腦血管疾病或肝病的藥物方面中的應用。
實施例3提取工藝取梔子用50％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至8.5；將溶液經300大孔樹脂層析分離；先用水除去雜質，再用15％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計74.2％，其中梔子苷含量為44.2％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為30％；或先用水、3％稀乙醇洗脫除去雜質，再用20％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計75.7％，其中梔子苷含量為45.7％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為30％；或先用水、4％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用15％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計75％，其中梔子苷含量為45％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為30％；或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；本申請梔子總苷標準提取物製備在製備抗炎、抗菌、抗病毒、治療心腦血管疾病或肝病的藥物方面中的應用。
實施例4
取梔子用55％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至9.5；將溶液經400大孔樹脂柱層析分離；先用水除去雜質，再用8％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計55％，其中梔子苷含量為50％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為5％；或先用水、2％稀乙醇洗脫除去雜質，再用10％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計56.1％，其中梔子苷含量為50％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為6.1％；或先用水、5％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用20％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計57.4％，其中梔子苷含量為51.2％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為6.2％；或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；本申請梔子總苷標準提取物製備在製備抗炎、抗菌、抗病毒、治療心腦血管疾病或肝病的藥物方面中的應用。
實施例5取梔子用90％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至7.5；將溶液經400A大孔樹脂柱層析分離；先用水除去雜質，再用25％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液加入丙酮提取，濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計89.2％，其中梔子苷含量為60％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為29.2％；或先用水、4％稀乙醇洗脫除去雜質，再用25％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計91.9％，其中梔子苷含量為61.9％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為30％；或先用水、5％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用20％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計90％，其中梔子苷含量為60％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為30％；或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；本申請梔子總苷標準提取物製備抗炎、抗菌、抗病毒、治療心腦血管疾病或肝病的藥物方面中的應用。
實施例6取梔子用100％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至8.5；將溶液經450大孔樹脂柱層析分離；先用水除去雜質，再用12％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液加入乙醇提取，濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計94.7％，其中梔子苷含量為80％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為14.7％；或先用水、2％稀乙醇洗脫除去雜質，再用15％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液洗，脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計95.2％，其中梔子苷含量為80.2％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為15％；或先用水、3％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用14％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計95.9％，其中梔子苷含量為81.3％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為14.6％；或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；本申請梔子總苷標準提取物製備在製備抗炎、抗菌、抗病毒、治療心腦血管疾病或肝病的藥物方面中的應用。
實施例7取梔子用25％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至5.0；將溶液經D101大孔樹脂柱層析分離；先用水除去雜質，再用25％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計77.7％，其中梔子苷含量為52.7％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為25％；或先用水、4％稀乙醇洗脫除去雜質，再用28％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計78.9％，其中梔子苷含量為54.0％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為24.9％；或先用水、4％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用19％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量79.4％，其中梔子苷含量為54.2％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為25.2％；或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；本申請梔子總苷標準提取物製備在製備抗炎、抗菌、抗病毒、治療心腦血管疾病或肝病的藥物方面中的應用。
實施例8取梔子用乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至5.0-10；將溶液經1300-I大孔樹脂柱層析分離；先用水除去雜質，再用28％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液加入乙醇，濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計91.7％，其中梔子苷含量為80.8％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為10.9％；或先用水、1％稀乙醇洗脫除去雜質，再用30％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計90.5％，其中梔子苷含量為80.2％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為10.3％；或先用水、3％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用20％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計90.2％，其中梔子苷含量為80.1％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為10.1％；或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；
本申請梔子總苷標準提取物製備在製備抗炎、抗菌、抗病毒、治療心腦血管疾病或肝病的藥物方面中的應用。
實施例9取梔子用乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至5.0-10；將溶液經1400大孔樹脂柱層析分離；先用水除去雜質，再用6％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計65.3％，其中梔子苷含量為53.3％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為12.0％；或先用水、1％稀乙醇洗脫除去雜質，再用8％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計63.7％，其中梔子苷含量為53.0％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為10.7％；或先用水、3％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用12％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計64.9％，其中梔子苷含量為53.1％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為11.8％；或梔子總苷為現有技術製備，包括市售；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計66.3％，其中梔子苷含量為52.9％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為13.4％。
或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；本申請梔子總苷標準提取物製備在製備抗炎、抗菌、抗病毒、治療心腦血管疾病或肝病的藥物方面中的應用。
實施例10取梔子用85％乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至8.5；將溶液經AB-8大孔樹脂柱層析分離；先用水除去雜質，再用25％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液加入丙酮，濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計93.2％，其中梔子苷含量為62.0％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為31.2％；或先用水、4％稀乙醇洗脫除去雜質，再用25％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液，洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計95.0％，其中梔子苷含量為63.1％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為31.9％；或先用水、5％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用20％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得；梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計94.7％，其中梔子苷含量為62.2％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為32.5％；或梔子苷按照現有技術得到、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷按照現有技術得到，再按照本申請標準提取物的質量標準混合得到本申請梔子總苷標準提取物；本申請梔子總苷標準提取物在製備抗炎、抗菌、抗病毒、治療心腦血管疾病或肝病的藥物方面中的應用。
注本發明所要求保護的具體技術方案，不限於上述實施例所表達的技術方案的具體組合。
權利要求
1.一種梔子總苷提取物，其特徵在於含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷，其中梔子苷含量為45％-90％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為5％-30％，其中梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計大於等於50％且小於100％。
2.根據權利要求1所述的梔子總苷提取物，其中梔子苷含量為50％-80％，京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量為5％-25％，其中梔子總苷以梔子苷、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷含量計大於等於55％且小於100％。
3.根據權利要求1或2所述的一種梔子總苷提取物製備治療和/或預防腦血管疾病、抑菌、抗病毒、抗炎藥物中的應用。
4.根據權利要求1或2所述的一種梔子總苷提取物，其特徵在於製備方法取梔子用乙醇溶液提取得到乙醇提取液，濃縮至無醇味；濃縮液調節PH值至5.0-10；將溶液經非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，非極性或弱極性大孔樹脂柱為HPD-100、100A、300、400、400A、450或D101、1300-I、1400、AB-8中的一種；先用水除去雜質，再用6％-30％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；或先用水、1％-5％稀乙醇洗脫除去雜質，再用6％-30％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷部分的洗脫液；或先用水、3％-5％稀乙醇洗脫，除去雜質，再用10％-20％濃度的乙醇洗脫，收集含有梔子苷和京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷苷部分的洗脫液；洗脫液濃縮乾燥即得。
5.根據權利要求1或2所述的一種梔子總苷提取物，其特徵在於分析方法高效液相色譜條件為色譜條件與系統適應性實驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫35℃；檢測波長238nm；以乙腈-水體積比＝10∶90為流動相；梔子苷對照品溶液的配製精密稱取梔子苷對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，並定容至刻度；京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷對照品溶液的配製精密稱取京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，並定容至刻度；供試品溶液的配製精密稱取樣品，預處理後加到容量瓶中加甲醇溶解搖勻，並定容至刻度；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，記錄60分鐘的色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。
6.根據權利要求4所述的一種梔子總苷的提取物，其中製備方法中大孔樹脂洗脫液可以加入有機溶劑乙醇或丙酮提取，提取液濃縮至幹。
全文摘要
本發明公開了一種梔子總苷提取物，其特徵在於含有梔子苷和京尼平－1－β－D－龍膽雙糖苷，其中梔子苷含量為45％－90％，京尼平－1－β－D－龍膽雙糖苷含量為5％－30％，其中梔子總苷以梔子苷、京尼平－1－β－D－龍膽雙糖苷含量計大於等於50％且小於100％；優選為梔子苷含量為50％－80％，京尼平－1－β－D－龍膽雙糖苷含量為5％－25％，其中梔子總苷以梔子苷、京尼平－1－β－D－龍膽雙糖苷含量計大於等於55％且小於100％。藥理實驗表明，本申請梔子總苷提取物具有更好的藥理作用。
文檔編號A61P31/04GK101066311SQ20071010028
公開日2007年11月7日 申請日期2007年6月7日 優先權日2007年6月7日
發明者顧群, 李志剛, 魏俊玲, 郭小鵬, 渠守峰, 劉嚴, 曹豔芳 申請人:北京本草天源藥物研究院