扁豆原位叢生芽組織培養方法

2023-08-10 08:19:46

專利名稱：扁豆原位叢生芽組織培養方法
技術領域：
本發明涉及一種扁豆組織培養的方法，特別是一種扁豆原位叢生芽組織培養方法，用於現代農業技術領域。
背景技術：
利用生物技術素改良作物已成為現代農業的一項重要技術途徑。而組織培養是生物技術的基礎。組織培養的成功取決於是否具有良好的再生系統。扁豆組織培養研究比較少。
經對現有技術文獻的檢索發現，程林梅等在《中國油料作物學報》，1998年20(2)6～8，撰文「大豆不同外植體植株再生的研究」該文對不同大豆品種的不同組織誘導率研究表明下胚軸＞上胚軸＞小真葉＞幼胚，再生頻率平均為34％，最高達50％。報導提及大豆誘導再生植株頻率低，重複性差。大豆組培的不定芽少，繁殖倍數低生長慢，在培養中品種基因型間差異大。扁豆是豆科作物，和豆科作物一樣組織培養具有困難，一個高效扁豆再生植株體系，是利用生物技術改良扁豆的技術關鍵。

發明內容
本發明針對背景技術的不足和缺陷，克服扁豆組織培養中再生能力低的問題，提供一種扁豆原位叢生芽組織培養方法，通過高效的植株再生系統，使其解決在組織培養中扁豆不定芽少，繁殖數量低，生長慢和基因型間差異大的難點，達到扁豆組織培養的再生芽多，並通過培養基的培養使再生植株健壯的目的。
本發明是通過以下技術方案實現的，本發明採用扁豆再生腋芽分生組織的方法，扁豆種子經消毒處理，放在萌發培養基上萌發扁豆無菌苗；將萌發的大豆在解剖鏡下用解剖刀去除下胚軸、頂尖生長點，保留二片子葉，並製造一定的傷口，把外植體放在長芽培養基上；不定芽長大切下再放在生根培養基上，長出根系得到再生苗後移栽到大盆，用這種培養基方法可以得到很多叢生的扁豆不定芽，經培養後得到再生苗。
以下對本發明作進一步的描述，方法步驟如下(1)種子消毒和萌發培養。種子用水清洗放在70％的酒精中25～35秒，取出放在10％的次氯酸鈉溶液中15～25分鐘，用無菌水清洗2～4次，消毒種子放在MSB+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.1～1mg/L，pH5.8，萌發培養基上23℃～25℃萌發3天～5天。
(2)原位叢生芽萌發和生長培養。萌發扁豆去除下胚軸，取出頂尖生長點，保留二片子葉，放在MSB+6-BA 2～4mg/L，pH5.8，長芽培養基上保持23℃～27℃，培養26天～30天，至芽長至2～4cm高。
(3)原位叢生芽的培養和生根。切下不定芽放在MSB+IBA(吲哚丁酸)0.1～0.5mg/L，pH5.8，生根培養基上23℃誘導生根23天～25天，移栽到大盆，經培養後得到再生苗。
本發明具有實質性特點和顯著進步，與選用子葉、子葉節等外植體培養再生植株相比，本發明能產生叢生的不定芽、芽生長快且封頂芽少、植株生長健壯、培養時間縮短、各品種間組織培養再生差異小，重複性好，用本發明方法建立扁豆原位叢生芽高效再生系統適合於各種扁豆品種的組織培養，並能快速得到扁豆組織苗。
具體實施例方式
結合本發明方法的內容提供以下三個實施例實施例1試驗品種為交選扁豆1號，50粒；種子用水清洗放在70％酒精中25秒，取出在10％的次硫酸鈉15分鐘，用無菌水清洗2次，消毒種子放在MSB+6-BA 0.1mg/L，pH 5.8，萌發培養基上23℃萌發5天；將萌發的扁豆在解剖鏡下用解剖刀去除下胚軸、兩片子葉間頂芽和側芽的生長點，保留二片子葉，放在MSB+6-BA 2mg/L，pH 5.8，長芽培養基上保持23℃萌發30天，培養至2cm高；切下不定芽放在MSB+IBA 0.1mg/L，pH5.8，生根培養基23℃誘導生根25天，移栽到大盆得到再生苗；獲得交選扁豆1號再生植株356株。產生叢生的不定芽7-10個/棵、試管苗培養60天，芽生長快且封頂芽少、植株生長健壯、品種內組織培養再生差異小，誘導再生植株頻率達到712％。
實施例2試驗品種為泥城1號，50粒；種子用水清洗放在70％酒精中30秒，取出在10％次硫酸鈉20分鐘，用無菌水清洗3次，消毒種子放在MSB+6-BA 0.5mg/L，pH 5.8，萌發培養基上24℃萌發4天；將萌發的扁豆在解剖鏡下用解剖刀去除下胚軸、兩片子葉間頂芽和側芽的生長點，保留二片子葉，放在MSB+6-BA 3mg/L，pH 5.8，長芽培養基上保持25℃萌發28天，培養至3cm高；切下不定芽放在MSB+IBA 0.3mg/L，pH5.8，生根培養基上23℃誘導生根24天，移栽到大盆得到再生苗；獲得泥城1號，再生植株389株。產生叢生的不定芽7-10個/棵、試管苗培養56天，芽生長快且封頂芽少、植株生長健壯、品種內組織培養再生差異小，誘導再生植株頻率達到778％。
實施例3試驗品種為泥城2號，50粒；種子用水清洗放在70％酒精中35秒，取出放在10％次硫酸鈉25分鐘，用無菌水清洗3次，消毒種子放在MSB+6-BA 1mg/L，pH 5.8，萌發培養基上25℃萌發3天；將萌發的扁豆在解剖鏡下用解剖刀去除下胚軸、兩片子葉間頂芽和側芽的生長點，保留二片子葉，放在MSB+6-BA 4mg/L，pH 5.8，長芽培養基上保持27℃萌發26天，培養至4cm高；切下不定芽放在MSB+IBA 0.5mg/L，pH 5.8，生根培養基上23℃誘導生根23天，移栽到大盆得到再生苗；獲得泥城2號再生植株373株。產生叢生的不定芽7-10個/棵、試管苗培養52天，芽生長快且封頂芽少、植株生長健壯、品種內組織培養再生差異小，誘導再生植株頻率達到746％。
本發明具有實質性特點和顯著進步，與選用子葉、子葉節等外植體培養再生植株相比，本發明能產生叢生的不定芽7-10個/棵、試管苗培養52-60天，芽生長快且封頂芽少、植株生長健壯、培養時間縮短20-30天、重複性好，各品種間組織培養再生差異小，誘導再生植株頻率達到712％-778％。用本發明方法建立扁豆原位從生芽高效再生系統適合於各種扁豆品種的組織培養，並能快速得到扁豆組織苗。
權利要求
1.一種扁豆原位叢生芽組織培養方法，其特性在於，採用扁豆再生腋芽分生組織的方法，扁豆種子經消毒處理，放在萌發培養基上萌發扁豆無菌苗，去除下胚軸、頂尖生長點，保留二片子葉，把外植體放在長芽培養基上，不定芽長大切下再放在生根培養基上，長出根系得到再生苗後移栽到大盆，經培養後得到再生苗。
2.根據權利要求1所述的扁豆原位叢生芽組織培養方法，其特徵是，通過步驟對其進一步限定如下(1)種子用水清洗放在70％的酒精中25～35秒，取出放在10％的次氯酸鈉溶液中15～25分鐘，用無菌水清洗2～4次，消毒種子放在MSB+6-BA0.1～1mg/L，pH5.8，萌發培養基上23℃～25℃萌發3天～5天；(2)萌發扁豆去除下胚軸、頂尖生長點，保留二片子葉，放在MSB+6-BA2～4mg/L，pH5.8，長芽培養基上保持23℃～27℃，培養26天～30天至2～4cm高；(3)切下不定芽放在MSB+IBA0.1～0.5mg/L，pH5.8，生根培養基上23℃誘導生根23天～25天，移栽到大盆，經培養後得到再生苗。
3.根據權利要求2所述的扁豆原位叢生芽組織培養方法，其特徵是，步驟(2)中，所述的萌發扁豆取出頂尖生長點，即將萌發的扁豆在解剖鏡下用解剖刀去除下胚軸、兩片子葉間頂芽和側芽的生長點。
全文摘要
一種扁豆原位叢生芽組織培養方法，用於現代農業技術領域。本發明採用扁豆再生腋芽分生組織的方法，扁豆種子經消毒處理，放在萌發培養基上萌發扁豆無菌苗，去除下胚軸、頂尖生長點，保留二片子葉，把外植體放在長芽培養基上，不定芽長大切下再放在生根培養基上，長出根系得到再生苗後移栽到大盆，經培養後得到再生苗。本發明能促使其產生叢生的不定芽，芽生長快，且封頂芽少，植株生長健壯，培養時間縮短，各種間組織培養再生差異小，用本發明方法建立扁豆原位叢生芽高效再生系統適合於各種扁豆品種的組織培養，並能快速得到扁豆組培苗。
文檔編號A01H4/00GK1605248SQ20041008430
公開日2005年4月13日 申請日期2004年11月18日 優先權日2004年11月18日
發明者武天龍, 袁娟, 馬明, 馬曉紅 申請人:上海交通大學