糖皮質激素在製備遲發性出血性膀胱炎治療藥物中的應用的製作方法

2023-07-12 04:24:01 1

專利名稱：糖皮質激素在製備遲發性出血性膀胱炎治療藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及糖皮質激素在製備遲發性出血性膀胱炎治療藥物中的應用。
背景技術：
遲發性出血性膀胱炎(late-onset hemorrhagic cystitis, L0HC)是異基因造血 幹細胞移植(allogeneic hematopoietic stem celltransplantation,allo-HSCT)的常見 併發症，嚴重LOHC常導致患者住院時間延長，痛苦增加。LOHC臨床症狀不一，輕者只表現為 鏡下血尿，重者可引起尿路阻塞，甚至會威脅到患者的生命。遲發性出血性膀胱炎的發生機 制仍不明確。多數報導稱病毒感染，如BKV、CMV、ADV等，尤其是BK病毒與LOHC的發生密切 相關。然而，病毒感染引起LOHC的結論目前僅僅建立在LOHC患者同時存在病毒血症和/或 病毒尿症，或膀胱黏膜上皮細胞可檢測到病毒存在的基礎上，至於病毒感染如何導致LOHC 發生仍沒有確切證據。另外，並不是所有病毒尿症、病毒血症患者均發生L0HC，而且在臨床 過程中，病毒血症或病毒尿症的清除並不一定使LOHC症狀緩解。因此，HC可能尚存在其他 致病因素。故對於LOHC患者，現仍無統一有效的治療方案，一般仍以水化、鹼化及支持治療 為主。像高壓氧、膀胱內注射rhGM-CSF或透明質酸甚至膀胱切除等治療均有有效報導，但 並未得到一致肯定。難治性LOHC仍是造血幹細胞移植領域的亟待解決的難題之一。Leung等曾研究發現，自體造血幹細胞移植和異基因造血幹細胞移植 (allo-HSCT)後患者尿BK病毒水平及高峰均相似，但LOHC僅發生在allo-HSCT患者，這說 明BK病毒感染或許僅是HC發生的先決條件，而造血重建過程中的異基因免疫在HC發生中 可能起到重要促進作用。

發明內容
本發明的目的是提供糖皮質激素在製備遲發性出血性膀胱炎治療藥物中的應用。本發明保護糖皮質激素在製備遲發性出血性膀胱炎治療藥物中的應用。常用的糖皮質激素均可採用，如強的松、地塞米松、甲基強的松龍等。本發明還保護一種糖皮質激素和抗病毒藥物的組合物。所述組合物中常用的糖皮質激素均可採用，如強的松、地塞米松、甲基強的松龍 等；常用的抗病毒藥物均可採用，如磷甲酸鈉、更昔洛韋等。所述糖皮質激素和所述抗病毒 藥物單獨包裝。所述組合物在製備遲發性出血性膀胱炎治療藥物中的應用也屬於本發明的保護 範圍。本發明還保護一種遲發性出血性膀胱炎治療藥物，它的活性成分包括糖皮質激
O所述藥物中，活性成分具體可由糖皮質激素和抗病毒藥物組成。所述藥物的活性 成分中常用的糖皮質激素均可採用，如強的松、地塞米松、甲基強的松龍等；常用的抗病 毒藥物均可採用，如磷甲酸鈉、更昔洛韋等。所述糖皮質激素和所述抗病毒藥物單獨包裝。
⑶19+⑶5+B淋巴細胞是人體「天然抗體」的重要來源，這些「天然抗體」為低親和 力的IgM抗體，具有多反應性，被認為是抵禦病毒或細菌感染的第一道防線。這些抗體的多 反應性也可識別自身抗原，在體內凋亡細胞的清除中起到重要作用。但這些抗體的自身反 應性被認為與自身免疫病的發生相關，並且⑶19+⑶5+B淋巴細胞還可產生高水平IL-10， 同時可增強抗原提呈能力。在人類和動物模型中，均證實了循環中CD19+CD5+B淋巴細胞 增加與自身免疫病的密切關係。本發明發現，隨著LOHC的持續，部分抗病毒無效的患者 ⑶19+⑶5+B細胞比例明顯升高，而予激素治療後，治療有效的患者大多為⑶19+⑶5+B細胞 比例升高者。激素治療後，激素治療有效組患者⑶19+⑶5+B細胞比例較治療前顯著下降， 恢復至發病時水平，無效患者於治療前後無顯著差異。對於激素治療後達冊，但激素減量 過程中LOHC症狀再次加重的患者，或激素治療後達CR，但激素減量後復發的患者，監測其 CD19+CD5+B細胞比例仍可發現其與症狀相關的升高，再次予激素治療後症狀好轉的同時 ⑶19+⑶5+B細胞比例下降至最初發病時水平。本發明中對水化、鹼化及抗病毒治療均無效的LOHC患者，採取了糖皮質激素治 療，觀察其治療反應，同時監測患者發病過程不同階段外周血B淋巴細胞亞群變化，探討其 與激素治療反應間的關係。結果發現大部分病人對激素治療有反應，並且糖皮質激素的療 效與⑶19+⑶5+B細胞亞群比例明顯相關。遲發性出血性膀胱炎患者如果在某一階段中 ⑶19+⑶5+B細胞亞群佔總B細胞的比例顯著高於發病時⑶19+⑶5+B細胞亞群佔總B細胞 的比例(較發病時升高倍數中位值2. 45倍，百分比中位值為24. 26%),提示糖皮質激素輔 助治療可以取得比較好的療效。而沒有明顯升高者，則提示激素治療效果不好。本發明對 於遲發性出血性膀胱炎患者的治療具有重大意義。


圖I(A)為步驟一治療結束評估療效時(即B、C組步驟二開始前)的A、B、C三組 CD19+CD5+B細胞亞群比例；圖I(B)為不同檢測時間點(發病24小時內，步驟一治療結束 時(即B、C組步驟二開始前)，B、C組加激素後1周，A、B組CR時)⑶19+⑶5+B細胞亞群 比例。圖2為B組⑶19+⑶5+B細胞亞群比例發病過程中的變化。
具體實施例方式以下的實施例便於更好地理解本發明，但並不限定本發明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自 常規生化試劑商店購買得到的。下述實施例中的％，如無特殊說明，均為數量百分含量。以 下實施例中的定量試驗，均設置三次重複實驗，結果取平均值。HC分級(WHO標準)I度鏡下血尿；II度肉眼血尿；III度肉眼血尿伴血塊；IV 度肉眼血尿伴血塊、尿道堵塞。疼痛分級法(VRS) :0級無痛；1級(輕度)雖有疼痛但可以忍受，能正常生活， 睡眠不受幹擾；2級(中度)疼痛明顯，不能忍受，要求服用止痛劑，睡眠受到幹擾；3級 (重度)疼痛劇烈，不能忍受，需要止痛藥，睡眠受到嚴重幹擾，可伴有植物神經紊亂或被 動體位。
臨床療效評估(部分緩解和完全緩解均視為治療有效):部分緩解(PR):患者有症狀好轉的明確證據(如尿頻患者每日排尿次數減少 25% ；尿痛分度下降；尿急消失)和/或II度以上膀胱炎級別下降。完全緩解(CR)血尿和尿路刺激症狀(尿頻、尿急、尿痛)消失，且之後超過一周 未復發。治療失敗尿路刺激症狀(尿頻、尿急、尿痛)和血尿無改善甚至加重，或僅暫時改
業
口 ο以下實施例的整個治療過程中，患者每天均進行水化和鹼化。水化靜脈輸液加飲 水量達到3L · m_2 · cf1。鹼化II - IV度膀胱炎患者每8小時或6小時靜脈輸注80ml 5% (質量百分含量)碳酸氫鈉溶液，膀胱炎降至I度時改為每12小時靜脈輸注80ml 5% (質 量百分含量)碳酸氫鈉溶液或每日口服三次碳酸氫鈉片(每次Ig) ； I度膀胱炎患者每12 小時靜脈輸注80ml 5% (質量百分含量)碳酸氫鈉溶液或每日口服三次碳酸氫鈉片(每次 Ig)。病原學檢測聚合酶鏈反應(PCR)方法檢測血及尿中巨細胞病毒(CMV)、腺病毒 (ADV)、EB病毒(EBV)抗原水平。血、尿只要有一個陽性，都視為陽性。抗病毒治療更昔洛韋(5mg · kg—1 · cf1)或磷甲酸鈉(80_120mg · kg—1 · cf1)；實施 例中採用的給藥方式為注射。糖皮質激素治療給予強的松或地塞米松或甲基強的松龍，給藥劑量見實施例； 實施例中採用的給藥方式為口服給藥或靜脈注射均可。25例首次發生且未進行任何治療的遲發性出血性膀胱炎(LOHC)患者，其中按預 定方案處理的LOHC患者為24例(依次進行步驟一和步驟二的治療)，因合併急性移植物抗 宿主病(aGVHD)未按預定方案處理的LOHC患者為1例(直接進行步驟三的1的治療)。實施例、25例確診LOHC患者中，24例按預定流程處理。由於初次病原學檢測中，所有患者中只有9例CMV陽性，其餘均為陰性，所以之後 的病原學檢測僅檢測CMV。一、抗病毒治療24例患者進行抗病毒治療(17例給予磷甲酸鈉；7例給予更昔洛韋)。第一周進 行兩次病原學檢測兩次均為陰性的患者抗病毒治療10-14天(每周進行兩次血CMV病原 學檢測)，然後進行療效評估；出現陽性結果的患者持續進行抗病毒治療(每周進行兩次病 原學檢測)，直至連續兩次結果均為陰性，進行療效評估。24例患者中，6例患者抗病毒治療有效，18例患者抗病毒治療無效。治療有效的患 者作為A組；4例為給予磷甲酸鈉的患者，2例為給予更昔洛韋的患者。對於治療有效的患者，繼續進行抗病毒治療至CR。A組中，中位起效時間為7. 5天； 最終5例患者達到CR, LOHC中位持續時間為19天(12-30天)；1例患者達到PR,但持續21 天后加重至III度，至患者血液病復發死亡，膀胱炎持續。二、糖皮質激素聯合抗病毒治療對於抗病毒治療無效的18例患者，進行糖皮質激素聯合抗病毒治療(即在原有抗 病毒治療的基礎上，進行糖皮質激素治療；糖皮質激素與抗病毒藥物同時給藥)。糖皮質激素治療過程如下療程一體重 50Kg,予地塞米松7. 5mg/ d ；地塞米松均可等量換算為強的松或甲基強的松龍，靜脈或口服給藥均可。7-10天後評估 療效；療程二 療程一結束後，糖皮質激素減量體重 50Kg,予地塞米松5mg/d。有效者每7天減原量的約1/3，至約地塞米松0. 75-lmg/ d—周后可直接停用；如激素減量過程中LOHC症狀持續不好轉或加重，可延緩減激素速 度，如2周減量一次，或每周減原劑量的1/4-1/5 ；激素治療無效者每3-5天減原量的約 1/3-1/2，至地塞米松0. 75-1. 5mg/d 一周後可直接停用。療程一結束時的評估療效結果15例患者治療有效。治療有效的患者劃入B組； 10例為繼續給予磷甲酸鈉的患者，5例為繼續給予更昔洛韋的患者。B組中，加糖皮質激素 至起效中位時間為3天(1-8天)；13例患者達CR，加糖皮質激素至達CR的中位時間為11 天(6-23天)；2例患者達冊。2例達ra的患者，分別在糖皮質激素減量至每日地塞米松3mg、0. 75mg時，I度膀 胱炎加重為II度，均再次予加糖皮質激素(地塞米松7. 5mg/天)治療，結果分別在糖皮質 激素加量後3天、2天開始好轉，分別在第2次糖皮質激素加量後7天、11天達到CR。3例患者治療無效。治療無效的患者作為C組，均為繼續給予磷甲酸鈉的患者。三、對合併aGVHD患者或復發患者進行治療1、對合併aGVHD患者進行治療1例患者發病時合併aGVHD，直接進行糖皮質激素聯合抗病毒治療(給予磷甲酸 鈉)，方法同步驟二，治療7天起效，18天後達到CR，將其劃入B』組。2、對合併aGVHD患者或復發患者進行治療對於步驟一和步驟二中達到CR的患者，隨訪1-6個月，觀察患者的復發情況。B組2例患者復發，對其進行病原學檢測，結果均為陰性。對該兩個復發患者進行 糖皮質激素治療(未再抗病毒)，均在加糖皮質激素24小時內起效，7天達CR(此次LOHC 為B』組)。C組1例患者抗病毒及抗病毒聯合治療無效，因腎毒性停用抗病毒藥物，僅採用水 化、鹼化及輸血支持治療，III度LOHC持續2月餘後CR。CR持續17天後復發，復發時伴CMV 血症，予抗病毒(磷甲酸鈉)治療，至病毒轉陰後，膀胱炎未緩解；遂進行糖皮質激素聯合抗 病毒(磷甲酸鈉)治療，方法同步驟二，治療7天起效，9天後達CR，該患者也劃入B組。根據步驟一至步驟三中患者的治療情況，除去發病時合併aGVHD的患者，剩餘的 24例患者可根據不同階段的療效分為三組A組步驟一的抗病毒治療中，治療有效的6例患者。C組步驟二的糖皮質激素聯合抗病毒治療中，治療無效的3例患者。B組步驟二的糖皮質激素聯合抗病毒治療中，治療有效的15例患者；和C組中復 發後治療有效的1例患者。A、B、C三組患者的臨床信息見表1。表1患者的臨床信息分組A(n=6)B (n-16)C (n=3)年齡(歲廣 中位值(跨度範圍)16.5 (12-50)21. 5(5-52)27 (20-34)男性個數5112HC發生時間(HSCT後天數廣28 (15-46)26(20-195)33(26-44)供者類型相關6(100%)16(100%)3(100%)親緣不全相合6(100%)10(62. 5%)3(100%)幹細胞來源骨髓+外周血幹細胞6(100%)16(100%)3(100%)移植幹細胞量(單個核細胞X108/Kg) *6. 88±1. 077. 16±1. 457. 32 土0. 90診斷時的HC級別I度-II度6(100%)10(62.50%)2(66.67%)III度-IV度0(0. 00%)6(37. 50%)1 (33. 33%)抗病毒藥物磷甲酸鈉4(66.67%)11(63. 16%)3(100%)更昔洛韋2 (33. 33%)5(31. 25%)0 (0. 00%)表1中採用Mann-Whitney』 s U檢驗，組間比較均採用Mann-Whitney』 s U檢驗， P 值均> 0. 05。* Mean士 s. d. #Median (range) ；HSCT =造血幹細胞移植。四、步驟一至三中的流式細胞儀檢測LOHC發病24小時內留取患者肝素抗凝外周血(每例患者留取4ml)，進行流式細 胞儀檢測。治療過程中每周留取患者肝素抗凝外周血(每例患者留取4ml)，直至LOHC達 CR ；另外，糖皮質激素治療前、糖皮質激素治療後1周、PR、CR或治療過程中病情再次加重、 復發時也留取肝素抗凝外周血(每例患者留取4ml)，進行流式細胞儀檢測。如增加檢測 時間點與常規每周檢測時間點相差< 1天，僅留取一次外周血。流式細胞儀檢測內容以 ⑶19+細胞佔淋巴細胞百分比代表總B細胞，⑶19+⑶5+/⑶19+代表⑶19+⑶5+B細胞佔總 B細胞的比例，D19+⑶23+/⑶19+代表⑶19+⑶23+B細胞佔總B細胞的比例，⑶19+⑶27+/ ⑶19+代表⑶19+⑶27+B細胞佔總B細胞的比例。4種單克隆抗體中3種購自美國BD Biosciences公司，包括APC標記的抗CD19單抗(產品目錄號340437) ；PerCP_CY5. 5標記 的抗⑶5單抗(產品目錄號341089) ；PE標記的抗⑶23單抗(產品目錄號341007)。FITC 標記的抗⑶27單抗購自美國eBioscience公司(產品目錄號11-0279)。1、糖皮質激素治療中，治療前⑶19+CD5+B細胞亞群的比例與療效密切相關各組中，CD19+細胞百分比、D19+CD23+/CD19+、CD19+CD27+/CD19+ 的值見表 2。表2 各組中，CD19+ 細胞百分比、D19+CD23+/CD19+、CD19+CD27+/CD19+ 的值
權利要求
糖皮質激素在製備遲發性出血性膀胱炎治療藥物中的應用。
2.如權利要求1所述的應用，其特徵在於所述糖皮質激素為強的松、地塞米松或甲基 強的松龍。
3.糖皮質激素和抗病毒藥物的組合物。
4.如權利要求3所述的組合物，其特徵在於所述糖皮質激素為強的松、地塞米松或甲 基強的松龍；所述抗病毒藥物為磷甲酸鈉或更昔洛韋。
5.如權利要求3或4所述的組合物，其特徵在於所述糖皮質激素和所述抗病毒藥物 單獨包裝。
6.權利要求3至5中任一所述組合物在製備遲發性出血性膀胱炎治療藥物中的應用。
7.—種遲發性出血性膀胱炎治療藥物，它的活性成分包括糖皮質激素。
8.如權利要求7所述的藥物，其特徵在於它的活性成分由糖皮質激素和抗病毒藥物 組成。
9.如權利要求8所述的藥物，其特徵在於所述糖皮質激素為強的松、地塞米松或甲基 強的松龍；所述抗病毒藥物為磷甲酸鈉或更昔洛韋。
10.如權利要求8或9所述的藥物，其特徵在於所述糖皮質激素和所述抗病毒藥物單 獨包裝。
全文摘要
本發明公開了糖皮質激素在製備遲發性出血性膀胱炎治療藥物中的應用。所述糖皮質激素可為強的松、地塞米松或甲基強的松龍等。本發明還保護含有糖皮質激素的遲發性出血性膀胱炎治療藥物，該藥物還可含有抗病毒藥物組分。本發明中對水化、鹼化及抗病毒治療均無效的遲發性出血性膀胱炎患者，採取了糖皮質激素聯合抗病毒治療，發現大部分病人對激糖皮質激素治療有反應。本發明對於遲發性出血性膀胱炎患者的治療具有重大意義。
文檔編號A61K45/06GK101940789SQ201010165108
公開日2011年1月12日 申請日期2010年4月30日 優先權日2010年4月30日
發明者劉代紅, 劉開彥, 許蘭平, 黃曉軍 申請人:北京大學人民醫院