迷迭香酸作為過氧亞硝酸抑制劑的應用的製作方法

2023-07-12 18:44:06

專利名稱：迷迭香酸作為過氧亞硝酸抑制劑的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及迷迭香提取物中單一成分迷迭香酸有效抑制內源性氧化劑過亞硝酸根毒性方面的應用。
背景技術：
迷迭香酸(cichoric acid)是一種多酚羥基酸，是一分子咖啡酸和一分子3，4-二羥基苯基乳酸(即丹參素)的縮合物，1958年首次從迷迭香植物(i osm^"^0^fc/朋fo)中分離提取而得名，其結構如下。迷迭香酸分布廣泛，主要分布於唇形科、紫草科、葫蘆科、椴木科、傘形科。研究發現，迷迭香酸具有較強的抗氧化作用。研究表明其作用機理為迷迭香酸與不飽和脂肪酸競爭性與脂質過氧基結合，以終止脂質過氧化的連鎖反應，降低脂質過氧化速率，而迷迭香酸被氧化為醌式。迷迭香酸的抗氧化作用與其結構有關，其鄰二酚羥基是清除自由基活性的物質基礎。
在生物體內，過亞硝酸根是由一氧化氮和超氧根陰離子反應生成的一種細胞毒性物質，具有強氧化和硝化能力，可以和許多生物大分子反應，如可以造成DNA鹼基修飾和單鏈斷裂，蛋白質氧化和硝化修飾，脂質過氧化等。作為一種強氧化劑，過氧亞硝酸陰離子能夠與多種生理物質發生氧化還原反應。有證據顯示，在各種細胞的損傷中都伴隨著過氧亞硝酸陰離子的形成，如心肌缺血細胞、肺損傷細胞、炎症細胞、癌症細胞甚至包括肝臟細胞等等。過氧亞硝酸對生物大分子的損傷可以產生一系列的細胞毒性作用，包括使細胞代謝發生障礙、影響細胞信號傳導機制以及引起細胞能量耗竭，導致細胞的凋亡、死亡從而引發疾病。由過氧亞硝酸引起的疾病主要有心血管疾病、缺血再灌注損傷，局部炎症、神經退行性疾病及癌症等。
在患有動脈粥樣硬化的病人中檢測到3-硝基酪氨酸的存在(ButterfiddDA，Howard BJ, et al.， Inducible nitric oxide synthase is present within humanatherosclerotic lesions and promotes the formation and activity of peroxynitrite,Lablnvest75: 77-85， 1996.)，證明過氧亞硝酸在動脈粥樣硬化中的病理作用。
Wang首次發現了在心肌缺血再灌注損傷中，過氧亞硝酸含量明顯增加(Wang P， Zweier JL. Measurement of nitric oxide and peroxynitrite generation inpostischemic heart. Evidence for peroxynitrite國mediated reperflision injury. J BiolChem. 271: 29223-29230， 1996)。研究發現，過氧亞硝酸能明顯加重小鼠心臟缺血再灌注損傷並引發缺血再灌注心律失常(Ma XL， Lopez BL et al.，Peroxynitrite aggravates myocardial reperflision injury in the isolated perflised ratheart, Cardiovasc Res. 36: 195-204， 1997. Tecder國Unal M, Kanzyk Y，Peroxynitrite in reperflision arrhythmias and its whole blood chemiluminescenceresults, Pharmacol Res. 49: 7-16， 2004.)，這些都證明了過氧亞硝酸是病理條件下心肌損傷中的主要介導物。
大量的文獻報導，在炎症的發生過程中，伴隨過氧亞硝酸的生成，如在老鼠禾口人的急性腸炎(Singer II, Kawkkka , et al.， Expression ooof induc諸le nitricoxide synthase and nitrotyrosine in colonic epithelium in inflammatory boweldisease, Gastroenterology, 111: 871-88, 1996.)及慢性關節炎(Yokozawa T，Koshiishi I, et al.， Association between the expression of inducible nitric oxidesynthase by chondrocytes and its nitric oxide generating activity in adjuvantarthritis in rats， Nitric Oxide 8: 164-169， 2003.)等的病變處均檢測到了硝基酪氨酸的存在。
過氧亞硝酸在神經退行性疾病中同樣起作用，在帕金森氏症、阿爾海默茨氏症、亨廷頓氏舞蹈症、多發性硬化症及顱腦損傷中都檢測到過氧亞硝酸的生成(Chabrier PE， Demerle-Pallardy C， et al.， Nitric oxide synthases :targets fortherapeutic strategies in neurological diseases, Cell Mol Life Sci. 55:1029-1035，1999. Ischiropoulos H， Beckman JS, Oxidative stress and nitration inneurodegeneration: cause, effect, or association J Clin Invest 111: 163-169, 2003.Torreilles F, Salman-Tabcheh S， et al.， Neurodegenerative disorder: the role ofperoxynitrite， Brain Res. 30: 153-163， 1999.)。
由於過氧亞硝酸能引起DNA單鏈斷裂，從而誘發癌變。大量實驗證明，在慢性炎症及慢性感染中檢測到8-硝基鳥嘌呤的產生，是導致癌症的直接誘因(Ma N， Tagawa T， et al" 8-Nitroguanine formation in oral leukoplakia, apremalignant lesion. Nitric Oxide 14: 137-143， 2006.)。
由於人體內缺少內生性的使過亞硝酸根失活的酶，研究過亞硝酸根特異性的清除劑已成為本領域內的熱點。目前， 一些在水果、茶葉以及綠色蔬菜中含量豐富的抗壞血酸、維生素E、黃酮類化合物以及多羥基酚類化合物已被確認為有效的天然過亞硝酸根清除劑。目前用於清除體內過氧亞硝酸的天然中草藥清除劑主要是一些複合成分(Hye Rhi Choi, Jae Sue Choi， Yong NamHan, etal.， Phytother. Res. 2002， 16， 364~367 )，用單一成分的迷迭香酸清除體內過氧亞硝酸未見報導。

發明內容
本發明的目的在於提供迷迭香酸在製備過亞硝酸根抑制劑中的應用。
本發明的目的在於提供迷迭香酸在製備治療或預防由過亞硝酸根引起的動脈粥樣硬化的藥物中的應用。
本發明的目的在於提供迷迭香酸在製備治療或預防由過亞硝酸根引起的慢性或急性炎症的藥物中的應用。
本發明的目的在於提供迷迭香酸在製備治療或預防缺血再灌注損傷的藥物中的應用。
本發明的目的在於提供迷迭香酸在製備治療或預防由過亞硝酸根引起的神經退行性疾病的藥物中的應用。
本發明選用具有藥用價值的中草藥迷迭香作為研究對象，並分離純化迷迭香中有效活性成分迷迭香酸。經研究發現，從迷迭香中提取的迷迭香酸能夠有效抑制由過氧亞硝酸引起的生物大分子損傷，具體來說，它可以有效抑制由過亞硝酸誘導的DNA鏈斷裂，在低濃度下抑制率達40%，還可抑制由過亞硝酸引起的蛋白質酪氨酸硝化、低密度脂蛋白脂質過氧化反應，在低濃度下抑制率均達到50%以上。通過細胞實驗，進一步表明迷迭香酸能有效保護
細胞，阻止過亞硝酸根對細胞的破壞損傷作用。所有研究表明植物單體迷迭香酸能有效清除過亞硝酸根，並將它用於製備治療或預防由過亞硝酸根引起各類疾病的藥物中的有效成分。
因此，本發明提供迷迭香酸清除過氧亞硝酸的效率，通過對過氧亞硝酸的抑制或清除來治療或預防由其引起的一系列疾病。
本發明提供的藥物製劑包括經口服給藥製劑，如片劑、丸劑、滴丸、膠囊等。
本發明在製劑時，主藥迷迭香酸加入藥學上可接受的載體，採用常規的製劑技術，將其製成所需的劑型。
本發明所用的製藥輔料包括纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸鎂、乳糖、玉米澱粉等。
本發明通過動物藥理實驗，確定迷迭香酸用於清除過亞硝酸的使用劑量
範圍是30-100mg(迷迭香酸)/kg (體重)/天，抑制效果達60°/。以上。
本發明通過動物毒理實驗，確定迷迭香酸在有效清除劑量範圍內無毒副作用，可以長期服用。
以下結合附圖對本發明作進一步詳細描述。試驗例l:迷迭香酸對過氧亞硝酸的清除
(1) 材料
迷迭香酸按實施例1製備；
過氧亞硝酸(PN)，按照文獻(Rao M. Uppu and William A. Pryor,synthesis of peroxynitrite in a two-phase system using isoamyl nitrite andhydrogen peroxide, Analytical Biochemistiy， 1996， 236: 242—249)製備；
雙氫羅丹明(DHR123)，購自日本東京化成工業株式會社；磷酸鹽緩衝溶液，PH7.4。
(2) 方法與結果
通過測定過亞硝酸根氧化雙氫羅丹明(DHR123)後螢光值的大小來計算迷迭香酸清除過亞硝酸根的能力將l^iM的過亞硝酸根加入到含5jiM的雙氫羅丹明、濃度分別為0ing/mL、 5pig/mL、 lOpg/mL 、 15ng/mL、 20pg/mL的迷迭香酸的0.1M磷酸鹽緩衝溶液中，室溫下攪拌反應至少5分鐘後，用螢光光譜儀測定螢光強度(發射波長485nm，激發波長530nm)。按公式
ONOCT清除率- (l-A樣品/A對照)xi00%A樣品樣品管的螢光強度，A對照對照管的螢光強度
計算不同濃度的迷迭香酸對過氧亞硝酸的清除率。其結果見表l。從表l
可以看出，當迷迭香酸濃度為15pg/mL和2(^g/mL時，其對過氧亞硝酸的清除率通過t檢驗無顯著性差異。
表l迷迭香酸對過氧亞硝酸的清除率(k±S, n=5)
迷迭香酸濃度(pg/mL)_清除率(％)
0o土o.o
542.4±3.39
1079.4±2.73
1581.3±2.19*
2081.9±2.13*
根據組間t檢驗，*t<to.05,S，無顯著差異。
圖1為不同濃度迷迭香酸的清除率曲線圖。圖1反映了迷迭香酸對過氧亞硝酸的清除情況，從圖1可以看出，迷迭香酸對過氧亞硝酸有很強的清除
效果，當迷迭香酸濃度達到10嗎/mL時，對過氧亞硝酸的清除率為80%左右。試驗例2:迷迭香酸對過氧亞硝酸誘導DNA鏈斷裂的抑制
(1)材料迷迭香酸按實施例1製備；
過氧亞硝酸(PN)，按照文獻(Rao M. Uppu and William A. Pryor，synthesis of peroxynitrite in a two-phase system using isoamyl nitrite andhydrogen peroxide, Analytical Biochemistiy, 1996, 236: 242—249)製備；
pBR322DNA，購自寶生物工程(大連)有限公司；磷酸鹽緩衝溶液，pH7.4。(2)方法與結果
取5|iL濃度為0.05|ig/mL的pBR322 DNA加入到含0.5mM過亞硝酸根、濃度分別為0pg/mL、 25jng/mL、 50pg/mL、 100Mg/mL、 150pg/mL迷迭香酸的0.1M磷酸鹽緩衝溶液中，於37"C反應15min後進行瓊脂糖凝膠電泳。其結果見圖2，其中Lane 1為對照DNA，不加過亞硝酸根和抑制劑；Lane 2為加入0.5 mmol/L過亞硝酸根而未加抑制劑的DNA; Lane 3-6為加入0.5mmol/L過亞硝酸根後，分別加入濃度為25pg/mL、 50pg/mL、 100pig/mL、150jig/mL迷迭香酸後的DNA。
對圖2進行分析得出迷迭香酸具有保護DNA免受過氧亞硝酸損傷的作用，且隨著迷迭香酸濃度的增大效果更加明顯。從圖2可以看出，隨著迷迭香酸濃度的增大，被保護的DNA越多，且具有完全保護DNA免受過氧亞硝酸損傷的趨勢。
試驗例3:迷迭香酸對過氧亞硝酸誘導酪氨酸硝化的抑制
(1) 材料迷迭香酸按實施例1製備；
過氧亞硝酸(PN)，按照文獻(Rao M. Uppu and William A. Pryor，synthesis of peroxynitrite in a two-phase system using isoamyl nitrite andhydrogen peroxide, Analytical Biochemistry, 1996, 236: 242—249)製備；
酪氨酸，購自北京化學試劑公司；磷酸鹽緩衝溶液，pH7.4。
(2) 方法與結果
取2mM過亞硝酸根加入到含ImM酪氨酸、濃度分別為0pg/mL、15pg/mL、 25pg/mL、 50|ig/mL、 75pg/mL、 lOOpg/mL迷迭香酸的0.1M磷酸鹽緩衝溶液中，37n反應15min後，採用標準曲線法，用HPLC-UV檢測3-硝基酪氨酸(3-NT)的生成量，其結果見表2。表2迷迭香酸抑制3-硝基酪氨酸生成量(i±S， n=5)
迷迭香酸濃度(lig/mL)3-硝基酪氨酸生成量 (jimol/L )
071.6±1.5
1562.1 ±3.0*
2551.1±3,3*
5039.7±3.3*
7531.0±3.3*
畫22.1 ±2.7*
與空白對照組比較，*p<0.05圖3為表2對應的曲線圖。從圖中可以看出，迷迭香酸抑制3-硝基酪氨酸生成的效果，隨著迷迭香酸濃度的增加，3-硝基酪氨酸的生成量也隨之減少，且在一定範圍(15~100|ig/mL)內具有濃度依賴關係。當迷迭香酸濃度為1004g/mL時，3-硝基酪氨酸的生成量為22嗎/L左右，抑制率達到69%，說明迷迭香酸能抑制過氧亞硝酸引起的酪氨酸硝化，而且抑制效果與迷迭香酸濃度有依賴關係。
試驗例4:迷迭香酸對過氧亞硝酸誘導低密度脂蛋白損傷的抑制
(1) 材料迷迭香酸按實施例1製備；
過氧亞硝酸(PN)，按照文獻(Rao M. Uppu and William A. Pryor，synthesis of peroxyrdtrite in a two-phase system using isoamyl nitrite andhydrogen peroxide, Analytical Biochemistry, 1996， 236: 242—249)製備；
低密度脂蛋白(LDL)，購自中國協和醫科大學生化室；硫代巴比妥酸(TBA)、三氯乙酸(TCA)，購自美國Sigma公司；磷酸鹽緩衝溶液，pH7.4。
(2) 方法與結果將含400嗎的低密度脂蛋白溶液、濃度分別為0|ig/mL、 50pg/mL、100pg/mL 、 150嗎/mL 、 200|ig/mL的迷迭香酸溶液加入到含1 mmol/L過亞硝酸根的磷酸鹽緩衝溶液(100mmol/L， pH7.4)中，在37卩水浴中反應4小時，然後取0.5mL反應液與0.5mL的10%硫代巴比妥酸溶液以及0.5mL的0.75%三氯乙酸溶液混合後置於沸水浴中15分鐘，4000rpm離心25分鐘，取上清液于波長532nm處測硫代巴比妥酸反應產物(thiobarbituric acid reactivesubstances, TBARS)的吸光度，平行測定5次。根據測定各組TBARS吸光值及TBARS摩爾吸光係數(1.5 x 105 M"cm—1)，換算出TBARS濃度，其結果見表3。
表3迷迭香酸抑制硫代巴比妥酸反應產物的生成量(又土S, n=5)
迷迭香酸濃度Oig/mL) TBARS吸光值TBARS濃度(拜ol/L )
對照組0.317±0.009*2.09±0.06
500.277±0.010*1.87±0.07
1000.232 ±0.009*1.58±0.06
1500.197±0細*1.31 ±0.05
2000.168±0細*1.11±0.05
與空白對照組比較，*p<0.01。
圖4為試驗例4的效果圖，圖4反映出迷迭香酸抑制過氧亞硝酸對LDL損傷的效果，硫代巴比妥酸反應產物的濃度隨著迷迭香酸濃度的增加而減少，說明迷迭香酸濃度越高，LDL氧化損傷程度越小。如圖4所示，lmmol/L過氧亞硝酸能引起400嗎LDL發生氧化反應，生成2.10pmol的TBARS，當加入迷迭香酸抑制劑時，TBARS的生成量明顯降低，而且迷迭香酸的濃度與TBARS的生成量呈濃度依賴關係。
試驗例5:迷迭香酸對過氧亞硝酸損傷RAW細胞的保護
(1)材料
迷迭香酸按實施例1製備；
過氧亞硝酸(PN)，按照文獻(Rao M. Uppu and William A. Pryor，synthesis of peroxynitrite in a two-phase system using isoamyl nitrite andhydrogen peroxide, Analytical Biochemistry, 1996， 236: 242—249)製備；RAW264.7細胞或P815肥大細胞瘤細胞，購自上海中科院細胞所；杜比可磷酸緩衝鹽(dpbs)、牛血清、Earles基礎培養基，購自北京華美
生科生物技術公司；
阿爾瑪藍染料(Alamar Blue),購自美國Biosource International公司；磷酸鹽緩衝溶液，pH7.4。(2)方法與結果
1、 將RAW264.7細胞加入到96孔的組織培養皿中進行融合，將每個孔用dpbs洗滌兩次，以除去蛋白質和其他血清成分，再向毎個孔中加入200mL
dpbs;
2、 將濃度分另lJ為50uM、 100 yM、 200 uM、 300 uM、 400 uM、 500 uM、
600 u M的過亞硝酸根溶液加入到各孔中並測定細胞活性，以確定可引起損傷的過亞硝酸根的適宜濃度，其濃度為500uM;
3、 將分別含有l|ig/mL、 10嗎/mL、 50jig/mL、 100嗎/mL、 200|ig/mL的
迷迭香酸磷酸鹽緩衝溶液加入到各孔中，隨後向所有孔中加入過亞硝酸根溶液，最終濃度為500li M， 15分鐘後，除去各孔中的培養液。
4、 細胞損傷的測定將含有10% (v/v)阿爾瑪藍染料和10% (v/v)牛血清的Earies基礎培養基加入到上述各孔細胞中，放置1小時，染料的細胞代謝生成螢光產物與活細胞的數量直接相關。此外，螢光代謝物的生成在2小時內呈線性。然後將各孔取出100)iL用螢光板讀數計(激發波長545nm，發射波長575nm)測定螢光產物的量，平行測定4次，其結果如圖5所示。
圖5反映了在加入過氧亞硝酸後，細胞的活性隨著迷迭香酸濃度的增大而活性增大，說明了在細胞內，迷迭香酸具有保護細胞不被過氧亞硝酸誘導損傷的作用，且效果隨著迷迭香酸的濃度不同而改變。
試驗例6:迷迭香酸對過氧亞硝酸誘導巨噬細胞損傷的抑制
(1)材料
迷迭香酸按實施例1製備；過氧亞硝酸(PN)，按照文獻(Rao M. Uppu and William A. Pryor，synthesis of peroxynitrite in a two-phase system using isoamyl nitrite andhydrogen peroxide, Analytical Biochemistiy， 1996， "6: ;24:2—249)舉U備；
小白鼠，北京協和醫院提供。
(2)方法與結果
將取自小白鼠腹膜腔內的固有巨噬細胞，製成勻漿，用冷生理鹽水製成10%的細胞生理鹽水液。細胞勻漿丙二醛(MDA)的測定取10%新鮮勻漿1.5mL，分別加入生理鹽水O.lmL(空白組)、0.5mM的過氧亞硝酸O.lmL、5mg/mL維生素E O.lmL和5mg/mL迷迭香酸O.lmL。於37。C振蕩溫浴1.5小時，按丙二醛測定試劑盒操作，在532nm處比色測定各管吸光值，計算MDA濃度，其結果見表4。
表4迷迭香酸對過氧亞硝酸誘導巨噬細胞損傷的抑制(X±S， n=5)組別MDA (nmol/L)
空白組150,38±7.62
過氧亞硝酸(PN)組308.23 ±5.92*
PN與維生素E組120.38±3.82**
PN與迷迭香酸組115.62±4.65**
與對照組比較*卩< 0.001， **pt0.05,8。
由表4可知，在相同濃度下，空白組中MDA的生成量為150.38士7.62nmol/L，加入過氧亞硝酸後的MDA生成量明顯升高，抑制劑維生素E及迷迭香酸對過氧亞硝酸誘導巨噬細胞損傷都有明顯的抑制效果。對比實驗數據發現，迷迭香酸的抑制效果更優於抗氧化劑維生素E。由此證明，迷迭香酸是一種強抑制劑，可以抑制由過氧亞硝酸誘導的巨噬細胞損傷。
試驗例7:迷迭香酸對內毒素誘導大鼠腸損傷的保護
(1) 材料
迷迭香酸按實施例l製備；
脂多糖(LPS)，購自鼎國生物公司。
(2) 方法與結果脂多糖(LPS)引起的腸炎可以作為內毒素誘導大鼠腸損傷的模型。 內毒素誘導大鼠腸損傷模型製備脂多糖(3mg/kg)通過靜脈內給藥，加 入脂多糖4小時後，取正中切口入腹後分離腸繫膜上動脈。將腸組織迅速洗 滌，吸乾並稱重，收集血漿於枸櫞酸三鈉溶液中。迷迭香酸處理組注射脂 多糖3小時後給予迷迭香酸按1.5g/kg給藥，溶於2mL水中灌胃給藥，分離腸 繫膜上動脈。主要觀察指標迷迭香酸對大鼠小腸黏膜中超氧化物歧化酶和 丙二醛的影響，其結果見表5。
表5迷迭香酸對內毒素誘導大鼠腸損傷的保護(i±S， ri=10)
組別超氧化物歧化酶(NU/g)丙二醛(mol/g)
缺血再灌注組34.12±5.31*0.68±0.11**
迷迭香酸處理組55.66±5.92*0.54士0.12**
組間t檢驗*t>to ,05,18;"》0.05，180
由迷迭香酸對內毒素誘導大鼠腸損傷的保護試驗可知，經迷迭香酸給藥 後的大鼠腸組織中超氧化物歧化酶的活性明顯增加，從而抑制丙二醛的生成， 有效保護了大鼠腸組織免受內毒素誘導損傷。說明迷迭香酸在保護大鼠腸組 織損傷中具有良好的效果。
試驗例8:迷迭香酸對大鼠腳掌水腫的抑制效果
(1) 材料
迷迭香酸按實施例1製備； 角叉膠，購自北京鼎國生物公司； 小白鼠，北京協和醫院提供。
(2) 方法與結果
取20隻小鼠，平均分成4組。其中組l、組2為對照組，於右後腳掌皮 下分別注射0.05mL生理鹽水和0.05mLlQ/。的角叉膠溶液；組3、組4分別為 組l、組2相對應的實驗組，在注射前每天灌藥(迷迭香酸)lg/kg—次，連 續5天，然後於右後腳掌皮下分別注射0.05mL生理鹽水(組3)和0.05mL 1% 的角叉膠溶液(組4)。用足趾容積測量儀分別測量致炎前後1、 2、 3、 4小時 大鼠足趾至踝關節部的容積。腫脹度為過敏前後的體積差，其結果見表6。_表6迷迭香酸對角叉膠致過敏的抑制(X±S， n=5)
組 —_ 腫脹度(mL)
1 1.60±0.05
2 1.54±0.06
3 1.57±0.10*
4 1.62±0.13*
lh
0.74 ±0.11 1.38 ±0.26 0.68±0.34* 0.95 ±0.45*
2h
0.64 ±0.07 1.04±0.23 0.61 ±0.07* 0.72 ±0.46*
3h
0.48±0.13 0.92 ±0.62 0.32 ±0.28* 0.53±0.51*
4h
0.31±0.10 0.87±0.15 0,13±0.16* 0.32 ±0.62*
與正常對照組比較+p〈0.05。
從表6可知，在連續灌藥(迷迭香酸)5天後的老鼠(組3和組4)腫脹 度低於非灌藥組(組1和組2)，並且在注入角叉膠後，灌藥組的消退速度明 顯快於非灌藥組。說明迷迭香酸具有消炎的作用。


圖1是迷迭香酸清除過氧亞硝酸的曲線圖2是迷迭香酸抑制過氧亞硝酸誘導DNA鏈斷裂的電泳圖3是迷迭香酸對過氧亞硝酸誘導酪氨酸硝化影響的趨勢圖4是迷迭香酸抑制過氧亞硝酸誘導低密度脂蛋白損傷的曲線圖5是迷迭香酸防止過氧亞硝酸介導RAW細胞損傷的趨勢圖。
具體實施例方式
實施例l:迷迭香中迷迭香酸的提取、分離及純化
將乾燥迷迭香莖和葉子粉碎，稱取其粉末100g，置於三角瓶中，加入 500mL水，在9(TC水浴中浸提45min，浸提兩次，合併提取液。用18%鹽酸 溶液調pH值至2.5左右。用微孔濾膜進行抽濾，再用乙酸乙酯進行萃取，經 三次萃取後合併萃取液，除去乙酸乙酯。然後以50%乙醇洗脫迷迭香殘渣， 乾燥後，加入300mLl。/。NaHCO3水溶液，6(TC浸提3次，濾膜抽濾，合併提 取液，濃縮乾燥即得水溶性迷迭香酸。用FeS04比色法，在572nm下測得吸 光度，計算迷迭香酸得率及其濃度。
實施例2:
按照本領域已知的方法製備片劑，每片含有下述成分迷迭香酸80mg
乳糖4 5mg
硬脂酸鎂5mg
聚乙烯吡咯垸酮10mg
微晶纖維素2 Omg
合計160mg
實施例3:
按照本領域已知的方法製備膠，迷迭香酸80mg
乳糖45mg
玉米澱粉25mg
硬脂酸鎂2mg
聚乙烯吡咯烷酮8mg
合計160mg
權利要求
1、迷迭香酸在製備過亞硝酸根抑制劑中的應用。
2、 迷迭香酸在製備治療或預防由過亞硝酸根引起的動脈粥樣硬化的藥物中的 應用。
3、 迷迭香酸在製備治療或預防由過亞硝酸根引起的慢性或急性炎症的藥物中 的應用。
4、 迷迭香酸在製備治療或預防由過亞硝酸根引起的缺血再灌注損傷的藥物中 的應用。
5、 迷迭香酸在製備治療或預防由過亞硝酸根引起的神經推行性疾病的藥物中 的應用。
全文摘要
本發明提供了迷迭香酸在製備過亞硝酸根抑制劑中的應用。本發明還提供了迷迭香酸在製備治療或預防由過亞硝酸根引起的動脈粥樣硬化、慢性或急性炎症、缺血再灌注損傷及神經推行性疾病的藥物中的應用。本發明選用具有藥用價值的中草藥迷迭香作為研究對象，並分離純化迷迭香中有效活性成分迷迭香酸。迷迭香酸能夠有效抑制由過氧亞硝酸引起的生物大分子損傷，具體來說，它可以有效抑制由過亞硝酸誘導的DNA鏈斷裂，在低濃度下抑制率達40％，還可抑制由過亞硝酸引起的蛋白質酪氨酸硝化、低密度脂蛋白脂質過氧化反應，在低濃度下抑制率都達到50％以上。
文檔編號A61P29/00GK101596184SQ20091008891
公開日2009年12月9日 申請日期2009年7月13日 優先權日2009年7月13日
發明者潘竟林, 羅雲敬, 鍾儒剛, 韓治國 申請人:北京工業大學