四氧取代丁烷橋修飾的ndga衍生物，它們的合成方法和藥學用途的製作方法

2023-08-07 05:09:41 1

專利名稱：：四氧取代丁烷橋修飾的ndga衍生物，它們的合成方法和藥學用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及去曱二氫化愈創木酸(nordihydroguaiareticacid)書亍生物、它們的製備方法以及將它們用於治療病毒感染、發炎性疾病、代謝性疾病、血管(包括心血管)疾病以及增殖疾病如癌症的使用方法。
背景技術：
：去曱二氫化愈創木酸(NDGA,式I)具有如下的化學結構，NDGA式I其中有兩個鄰苯二酚基團，和一個2，3-二曱基丁烷橋。所述丁烷橋通過一個4位連接兩個鄰苯二酚單元。NDGA是一種能夠從一種生長於美國西南部和墨西哥的沙漠植物矮橡樹(arrea)的葉子含有的樹脂中分離出來的天然化合物，它有(2S,3R)的內消旋構象，該構象是對稱結構，並且不是旋光活性的。關於NDGA和它的衍生物的研究最近吸引了不斷增長的興趣。大量NDGA衍生物已經被報導，並且可分類如下類型1:醚鍵4建合的NDGA,最普通的NDGA衍生物，在該衍生物中一個取代基與鄰苯二酚片段的一個或多個羥基化學鍵合。類型2:酯鍵鍵合的NDGA衍生物，在所述衍生物中，一個取代基與鄰苯二酚片段的一個或多個羥基共價鍵合。類型3:端環的NDGA衍生物，在所述衍生物中，鄰苯二酚片段上的兩個羥基通過醚鍵或碳酸酯鍵被連接在一起形成5-6元環。類型4:二取代的NDGA衍生物，在所述衍生物中，鄰苯二酚片段的一個羥基被甲基化，另一個與一個取代基共價鍵合。類型5:苯環修飾，在所述修飾中，取代基化學地連接到所述苯環上。類型6:丁烷橋修飾，在所述修飾中，橋上的兩個甲基基團被去除、或者被取代基修飾。NDGA及其合成衍生物具有很多特性。作為一種脂質加氧酶抑制劑，NDGA能夠導致大鼠的嚢性腎病。、匕外，它顯示出多種生物活性，包括蛋白激酶C的抑制，2細胞凋亡的誘發，3細胞膜的改變，4細胞0&2+水平的上升5和平滑肌肉細胞中0&2+通道的激活，6體外預形成的阿爾茨海默氏病(3澱粉纖維(Alzheimer'sbeta-amyloidfibrils)的石皮裂，7抗氧化，8等等。在世界上一些地方，這一天然產物NDGA在商業上作為一種食品添加劑使用，以使脂肪和黃油防腐。最近，植物木脂素NDGA的衍生物已經被用於通過抑制病毒轉錄來阻斷病毒複製。9_16這些化合物能夠通過使下述這些的Spl-依賴型啟動子失活來抑制人類免疫缺陷病毒(HIV)、9-13單純皰滲病毒(HSV)、14'15和人乳頭瘤病毒(HPV)轉錄因子"的生成。而且，(四氧曱基)去甲二氳化愈創木酸(M4N,式II，terameprocol)能夠起到一種抗HIV前病毒轉錄抑制因子的作用，並且引起對多種在培養物和鼠體內轉化的人和大鼠細胞的生長抑制。17_19化合物M4N目前處於治療人癌症的臨床試驗中。雖然M4N(式II)是格外有效並且無毒的抗癌劑，M4N和一些其它曱基化的NDGA都顯示出差的水溶性，這多少限制了它們在某些藥物作用研究中的應用。為了解決這一問題，NDGA的一種水溶性衍生物，(四氧二甲基甘氨酸)去曱二氬化愈創木酸(G4N,式III)已經被設計和合成了。"'18formulaseeoriginaldocumentpage7G4N是非常有效的對HIV-1、HSV-1和HSV-2突變不敏感的抑制劑.17'22然而，它多少是不穩定的，並且在水溶液中有一個相對短的半衰期，報導稱，這是由於連接二曱基甘氨酸單元到NDGA主體結構上的酯鍵所導致的。18因此，需要這樣的NDGA衍生物，它們中的一些具有改進的水溶性，以及良好的穩定性，作為水溶性化合物和疏水性化合物均具有需要的藥學效果。本發明人已開發了新的NDGA衍生物，該衍生物具有這些優勢，並且將能夠用於治療組合物和治療方法中。
發明內容本發明涉及去曱二氫化愈創木酸衍生化合物、藥物組合物、它們的製備方法、以及它們和包括它們的藥劑盒的使用方法，所述使用方法用於治療疾病和不適症，特別是那些由一種病毒感染導致或者伴有一種病毒感染的疾病、一種發炎性疾病、一種代謝性疾病、一種血管疾病或一種增殖疾病。本發明是基於從本發明人的認識開展的研究，所述發明人認識到1,4-二(鄰苯二酚-4-基)-丁烷(式IV),—種二去曱基化的NDGA,作為H-69小細胞肺癌細胞的增殖抑制劑顯示出10倍於NDGA的藥效。(麥當奴，R.W.;本賈布旁，W;劉，T.;法斯勒，S.;帕多，0.E.;法瑞爾，I.K.A.;格拉瑟，M.;塞科，M.L;羅賓斯，D.L;《抗癌藥物設計》(Anti-cancerDrugDesign),2001,16(6)，261—270)。本發明人發明了一種基於丁烷橋修飾標為BB-N的新的NDGA衍生物，其中BB表示丁烷橋修飾，並且N表示在下面式V的NDGA:1,4-二(鄰苯二酚-4基)丁烷-橋修飾NDGA(BB-N)-丁烷式IV式V本發明的一個方面涉及標為"BB-N"具有前述的通式結構(式V)的丁烷橋修飾去甲二氫化愈創木酸衍生化合物，以及它的藥學上可用的鹽式V的化合物中，每個X選自由-CHO、-CN、-CH2C1、-CH2Br和-CH2F構成的組。然而，在其中所述BBK汙生物作為一種中間體使用以製造下面公開的"BB-Sb4N"衍生物的情況中，X同樣可是H或-CH2CH3，其中標記"X"在適當的式中用"Z，，代替。本發明的另一個方面涉及一種標為"BB-Sb4N"的具有下面通式結構(式VI)丁烷橋修飾的四氧取代去甲二氫化愈創木酸衍生化合物，以及它的藥學上可用的BB-Sb4N式VI在標記"BB-Sb4N，，中，"BB，，代表所述NDGA基本部分N的丁烷修飾部分並且"Sb4N，，代表本發明的橋修飾的四氧取代的去曱二氫化愈創木酸衍生化合物的四氧取代的去曱二氫化愈創木酸部分。所述化合物包括兩個鄰苯二酚單元、一種丁烷橋和在"Sb4N，，中被標為"Sb4"的一種四個基團Y,每個取代NDGA羥基基團的H(有時指"取代基Y")所述丁烷橋在1，4位通過所述鄰苯二酚的苯基環的4位連接兩個鄰苯二酚。在所述丁烷橋的2,3位的取代基(Z)選自由H,-CHO、-CN、-CH2CH3、-CH2C1、-CH2Br和-CH2F構成的組。Y選自由下列基團構成的組-A-R;-咖Jkl,其中x是一個1到10的整數，並且Hal是一個囟原子，代表氯、氟、溴或碘的任意一種；-咖H20)yH,其中y是一個1到10的整數；和一個氨基甲酸酯鍵合的基團，所述基團選自由下列基團構成的組義『，義^^T2，義fT^、13和l口。r^C其中n是一個1到6的整數，L是有2-6個碳和任選地有1-3個卣原子的一種飽和線性烴鏈，L是任選地包括0-3個雙4A和任選地包括任意0、N和S中的l-3個原子的一種5到7元環，和T3是甲基或乙基。當Y是-A-R時，R是端基，且A是帶有任選的雜原子的一種線性飽和烴側鏈，該側鏈在一端通過醚鍵或氨基曱酸酯鍵鍵合在各自的羥基殘餘的0基團上，並且在另一端4建合到端基R的一個碳或一個雜原子上。所述側鏈A選自由下面基團構成的組一種C廣Cw線性飽和烴鏈，它任選地具有1-5個選自0、N和S的雜原子，並且它通過醚4建4建合到NDGA的各自羥基殘餘0基團上；以及l-5個單元的一種聚乙二醇(PEG)鏈。所述端基R選自由下列基團構成的組一種5到7元碳環，所述碳環選自由下面基團構成的組有1到3個N、0或S雜原子的一種完全飽和環；一種環，它含有用於形成一個6或7元環的1到3個雙鍵和用於形成一個5元環的1到2個雙鍵，且所述5到7元環帶有1到3個N、0或S雜原子；包含氨基甲酸酯鍵、脲鍵、碳酸酯鍵或醯胺鍵的一種環；和一種水溶性基團，它選自由磺酸的一種鹼金屬鹽；膦酸的一種鹼金屬鹽；一種藥學上可用的鹽；一種糖和一種多羥基基團構成的組。本發明的另一個方面是一種組合物，它包括所述BB-N化合物或所述BB-Sb4N化合物和一種藥學上可用的載體，任選地含有其它藥學上可用的賦形劑。本發明的另一個方面是製備下文提到的所述BB-N化合物或所述BB-Sb4N化合物的方法。本發明的另一個方面是以有效量的所述BB-N化合物或所述BB-Sb4N化合物單獨地或作為藥物組合物的一部分對一受治療者給藥預防性地或者治療一種病毒感染的方法。本發明的另一個方面是以有效量的所述BB-N化合物或所述BB-Sb4N化合物單獨地或作為藥物組合物的一部分對一受治療者給藥預防性地或者治療一種增殖疾病的方法。本發明的另一個方面是以有效量的所述BB-N化合物或所述BB-Sb,N化合物單獨地或作為藥物組合物的一部分對一受治療者給藥預防性地或者治療一種發炎性疾病的方法。本發明的另一個方面是以有效量的所述BB-N化合物或所述BB-Sb4N化合物單獨地或作為藥物組合物的一部分對一受治療者給藥預防性地或者治療一種代謝性疾病的方法。本發明進一步的一個方面是以有效量的所述BB-N化合物或所述BB-Sb4N化合物單獨地或作為藥物組合物的一部分對一受治療者給藥預防性地或者治療一種血管疾病的方法。本發明的另一個方面是藥劑盒，該藥劑盒包括含有所述BB-N化合物或所述BB-Sb4N化合物的一種藥物組合物和用於預防性地或者治療一種病毒感染、一種增殖疾病、一種發炎性疾病、一種代謝性疾病或一種血管疾病的使用說明。具體實施例方式如上所述，本發明涉及去曱二氫化愈創木酸衍生化合物，含有它們的藥物組合物，製造它們的方法，以及它們和含有它們的藥劑盒的使用方法，該使用方法用於治療疾病和紊亂，特別地，病毒感染，例如，舉例但不限於，人類免疫缺陷病毒(HIV)、人乳頭瘤病毒(HPV)(所有亞型)、單純皰疹病毒1和2(HSV-1和HSV-2)、帶狀皰滲病毒、巨細胞病毒EB病毒(EpsteinBarrvirus)、痘病毒(小痘、牛痘(cowpox)、猴痘、牛痘(vaccinia))、正肝去氧核糖核酸病毒(orthohepadnavirus)、JC病毒、和BK病毒；發炎性疾病，例如，舉例但不限於，各種類型的關節炎和炎症性腸病；代謝性疾病，例如，舉例但不限於，糖尿病；血管疾病，例如，舉例^旦不限於，高血壓、心血管疾病和黃斑變性；和增殖疾病，例如各種類型的癌症。本發明基於如下考慮，包括使用用於治療癌症和病毒包括HIV的試劑的經驗；具有與NDGA相關的一種化學結構的衍生物；此類衍生物與(四氧曱基)去甲二氫化愈創木酸(M4N)(terameprocol)相比具有更強的藥效，更好的PD/PK表現和更小或沒有副作用，其中至少一些製劑是口服生混合物的內消旋形式，這使化學和生物學表徵更加容易。用於NDGA母體化合物修飾所述取代官能團選自成功用於藥物分子修飾的最普通的化學基團。它們已經能夠被合成並且準備好以合理的水溶性被配製，作為HC1或其他鹽的形式或游離^鹹，它們有可觀的水溶性。本發明其他NDGA衍生物是疏水的。本發明的NDGA衍生物具有良好的穩定性，無論它們是水溶性化合物還是疏水化合物。所述衍生物已經準備好放大到商業化生產。本發明的NDGA衍生物基於NDGA是具有廣泛生物活性的天然化合物的事實被開發。NDGA有很多副作用，這些被本發明的衍生物克服。丁烷橋修飾的NDGA(BB-N)衍生物，如1,4-二(鄰苯二酚-4-基)-丁烷，具有比NDGA更好的生物活性。所述衍生物具有改善的生物活性。引導本發明進展的研究同樣顯示NDGA衍生物的羥基修飾，如M孔阻止腫瘤細胞複製並且選糹奪性地誘導腫瘤細胞死亡(細胞凋亡)。這是通過阻止Spl-調節的cdc2(p34)和凋亡抑制蛋白(survivin)的生成而實現的。凋亡抑制蛋白是在癌症前期和癌症細胞中過度表達的凋亡蛋白的抑制劑(IAP)，並且很少在健康的成人細胞中被發現。M4N也阻止人類免疫缺陷病毒(HIV)、單純皰滲病毒(HSV)和人乳頭瘤病毒(HPV)的增殖。這是通過使病毒繁殖非常重要的病毒Spl依賴型啟動子失活而實現的。本發明的BB-Sb4N衍生物將通過使用合適的官能團修飾NDGA的羥基來顯著地改善它們的活性以阻止Spl-調節的cdc2和凋亡抑制蛋白的生成。定義本發明使用的"緩衝劑"包括任何本領域常規的緩衝劑，例如舉例說明，三羥曱基氨基甲烷(Tris)、磷酸鹽、咪唑和重碳酸鹽。本發明使用的"環糊精"是指未改性環糊精或改性環糊精，並且包括但不限於a-環糊精、P-環糊精、Y-環糊精和任何含有額外修飾的改性環糊精，例如羥丙基-P-環糊精("HP-(3-CD")或磺丁基醚P-環糊精("SBE-e-CD")。環糊精典型地有6(ot-環糊精)、7((3-環糊精)和8(y-環糊精)糖，上至三個取代每糖，因而0到24個初級取代是可能的(初級取代被定義為取代直接連接到環糊精環上)。本發明使用的修飾或未修飾環糊精可有任何合適數量和位置的初級取代或其他修飾。本發明使用的本發明的"NDGA衍生物"是指下文中被標為"BB-N"或"BB-Sb4N"的NDGA的一種衍生物。"藥學上可用的載體"是指非毒性的固體，半固體或液體填充物、稀釋劑、膠嚢材料或任何常規類型的製劑輔料。"藥學上可用的載體"是在使用的劑量和濃度上對於受試者是非毒性的，並且與製劑的其他配料相容。例如，用於包括本發明的兒茶酚丁烷(catecholicbutane)或NDGA衍生物的製劑的載體優選地不包括氧化劑和其他已知的對此類衍生物有害的化合物。合適的載體包括，但不限於，水、葡萄糖、丙三醇、生理鹽水、乙醇、緩衝劑、二甲亞碸、聚氧乙烯醚(35)蓖麻油(CremophorEL)及其組合。所述載體可包括額外的試劑如潤溼劑或乳化劑或pH緩衝劑。如需要可加入其他材料如抗氧化劑、保溼劑、翁度穩定劑和類似試劑。本發明使用的"藥學上可用的鹽"包括酸加成鹽(與多肽的游離氨基形成)和那些與無才幾酸舉例如鹽酸或;粦酸，或有^L酸如乙酸、苯羥乙酸和乙二酸形成的。與游離羰基形成的鹽可同樣衍生於無機鹼舉例如鈉、鉀、銨、鉤或氫氧化鐵，以及此類有機鹼如異丙胺、三曱胺、2-乙氨基乙醇和組氨酸。本發明的NDGA衍生物藥學上可用鹽的非限制性實施例包括例如下列通式的鹽:k[酸]其中BB-N是丁烷橋修飾的NDGA,Sb是如下面表1和2所述的一種取代基，k是一個整數或非整數，並且酸是有機或無機酸，如下面非限定性表A所舉的例子。表ASb酸k包括一個鹼式氮原子HC1、HBr、HN03、MeS03H、H2S04、天門冬氨酸、檸檬酸、苯磺酸、樟腦酸、樟腦磺酸、乙磺酸、2-羥基乙石黃酸、曱酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、D-葡萄糖酸、乙醇酸、N-苯醯基氨基乙酸、L-乳酸、順丁烯二酸、蘋果酸、丙二酸、煙酸、棕櫚酸、樸酸、磷酸、水楊酸、丁二酸、酒石酸、對曱基苯磺酸。1-4包括兩個鹼式氮原子HC1、HBr、HN03、MeS03H、H2S04、天門冬氨酸、檸檬酸、苯磺酸、樟腦酸、樟腦磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、曱酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、D-葡萄糖酸、乙醇酸、N-苯醯基氨基乙酸、L-乳酸、順丁烯二酸、蘋果酸、丙二酸、煙酸、棕櫚酸、樸酸、磷酸、水楊酸、丁二酸、酒石酸、對甲基苯磺酸。1-8本發明使用的"藥學上可用賦形劑"包括運輸體、佐劑、或稀釋劑或其他輔料物質，例如本領域常規的已經可公開獲得的那些。例如，藥學上可用的輔料物質包括pH調節和緩衝劑，張力調節劑、穩定劑、潤溼劑等等。除非另有具體說明，一種"環"，如本發明使用的如"5元環"、"6元環"、"7元環"的詞是指帶有任意表明的雜原子的碳環。本發明可替換^使用的術語"受治療者(subject)"、"宿主(host)"和"患者"是指被用本發明的組合物治療的動物，包括但不限於，猿、人、貓、犬、馬、牛、豬、羊、山羊、哺乳類農場動物、哺乳類運動動物、和哺乳類寵物。"基本上純化的"化合物是指本發明的NDGA衍生物是基本沒有不是本發明的NDGA衍生物化合物(下文中的"非NDGA衍生物")的化合物。基本上沒有是指至少50°/。、優選地至少70%、更優選地至少80%、和甚至更優選地至少90%沒有非NDGA衍生物。如本發明使用的，"治療(treatment)","治療(treating)"等詞是指獲得期望的藥理學和/或生理學效果。所述效果可是預防性的指完全或者部分防止異常狀況或疾病或其症狀並/或可是治療性的指部分或完全治癒異常狀況或疾病和/或由該異常狀況或疾病引起的不利的影響。"治療"因此，舉例說明，覆蓋了動物、優選地哺乳動物、更優選地人的異常狀況或疾病的任何治療，包括(a)防止受治療者中異常狀況或疾病的發生，所述受治療者可能是易患該異常狀況或疾病但還未被診斷患有它；(b)抑制異常狀況或疾病，例如抑制它的發展；和(c)擺脫、緩解或改善所述的異常狀況或疾病，舉例如，引起異常狀況或疾病的消退。本發明僅通過實施例描述但並不以任何方式理解為限制本發明。因此，本發明不受限於描述的特定實施例，並且顯而易見的有所變化。同樣應被理解的是本發明使用的術語僅是為了描述特定實施例的目的，不理解為是限制性的，因為本發明的範圍僅受基於本臨時專利申請的非臨時專利申請的附加的權利要求的限制。在有數值範圍的情況中，應理解為在所述範圍的上限和下限之間每個中間值，除非文字另有明確表示到下限的單位(unit)十分位，和在所述範圍的任何其他的表述的或介於中間的值，被包含於本發明。這些更小範圍的上限和下限可獨立地包括在所述更小範圍內，並且在所述範圍任何具體地排除的端值也被包含於本發明。在所述範圍包括一個或兩個端值的情況中，範圍不包括那些包括的端值的任一或兩個同樣也包括在本發明中。需要重視的是如本發明所用，單數形式"a"、"an"和"the"包括複數除非文字另有明確表述。因此，例如"一種衍生物(aderivative)"包括該衍生物的複數形式以及"所述NDGA衍生物(theNDGAderivative)"是指一種或多種NDGA衍生物及為本領域技術人員所知的它的等同物。本發明提到的所有出版物，包括專利、專利申請和雜誌文章以全文作為引文併入本發明，包括它們引用的引文也作為引文併入本發明。本發明討論的出版物僅為公開日在本發明申請的申請日以前的。本發明沒此外，提供的出版日期可能會不同於實際出版日期，這可能要獨立地證實如上所述，本發明的一個方面涉及標為"BB-N"的具有通式(式V)的丁烷橋修飾去曱二氫化愈創木酸衍生化合物，以及它的藥學上可用鹽丁烷-橋修飾跳A(BB-N)式V式V的化合物中，每個X選自由-CHO、-CN、-CH2C1、-CH2Bi^p-CH2F構成的組。然而，如上所述，在其中所述BB-N衍生物作為一種中間體使用以製造下面公開的"BB-Sb4N，，衍生物的情況中，X同樣可是H或-CH2CH3，其中標記"X"在適當的式中用"Z"代替。本發明的另一個方面涉及標為"BB-Sb4N"的具有下面通式結構(式VI)的一種丁烷橋修飾的四氧取代去曱二氬化愈創木酸衍生化合物，以及它的藥學上可用的鹽BB-Sb4N式VI同樣如上所述，Y選自由下列基團構成的組:_(CH2)xHal，其中x是一個1到10的整數，並且Hal是一個卣原子，代表氯、氟、溴或碘的任意一種；-(CH2CH20)yH,其中y是一個1到10的整數；和一個氨基曱酸酯鍵合的基團，所述基團選自由下列基團構成的組^^,義^^T2，J[T^、T3和l口。1^《e其中n是一個1到6的整數，L是有2-6個碳和任選地有1-3個囟原子的一種飽和線性烴鏈，L是任選地包括0-3個雙4建和任選地包括任意0、N和S中1-3個原子的一種5到7元環，和L是曱基或乙基。當Y是-(CH》xHal時，x優選地是1到3,並且Hal是氯或氟；更優選地，在本例中，例如Y是一(CH2)2F。當Y是-(CH2CH20)yH時，y優選地是l到3，並且更優選地，例如在本例中，Y是-(CH2)2OH(當y是1時)；或-(CHJ廠O-(CH2)2-0H(當y是2時)。隨著上述Y的限定，所述丁烷橋:f又代基Z和NDGA的BB-Sb4N^f汙生物的取代的Y基團的側鏈A和端基R可選自在上面
發明內容中提出的那些並且也以表的形式在下面的表l中提出表ltableseeoriginaldocumentpage16tableseeoriginaldocumentpage17合適的側鏈A的非限制性實施例是C廠C4線性鏈，如乙烯、丙烯或丁烯，在一端通過醚4建鍵合到NDGA的各自羥基殘餘0基團；C2-C4線性鏈，如乙烯、丙烯或丁烯，有0或N雜原子，並且所述鏈在一端通過醚4定4建合到NDGA的各自羥基殘餘O基團；1-3個單元的聚乙二醇(PEG)鏈；或氨基甲酸酯鍵。所述側鏈在另一端鍵合到R端基的碳或雜原子上。合適的Y和端基R的非限制性實施例在下面的表2中提出:表2tableseeoriginaldocumentpage18合成丁烷橋修飾的NDGA(BB-N)和標為(BB-Sb4N)的丁烷橋糹務飾的四氧取代的去甲二氫化愈創木酸衍生化合物在下面提出。合成l，4—二(鄰苯二酚—4-基)-丁烷的幾種方法，原料的一種再文獻中被報導(如通過多步合成方法，參看《抗癌藥物設計》(AnticancerDrugDesign),2001,16,261-270;和通過相應硼酸的自我偶聯，參看《四面體通訊》(TetrahedronLett),2002,43,8149—8151)。然而，這些方法產生低產率的預期產物，並且一些原料不是直接獲得的。為了克服現有合成方法的低效，本發明人開發了一種新的合成1，4-二(鄰苯二酚-4-基)-丁烷方法以通過簡化的步驟獲得非常高的產率。麥克馬瑞(McMurry)耦聯一個乙醛以產生一種順式和反式化合物的混合物，該混合物糹皮還原以產生期望的作為式V的BB-N彩於生物的一個前體的四氧曱基-BB-N:formulaseeoriginaldocumentpage19(羥曱基)-1,4-二(3,4.甲氧苯基)-丁烷formulaseeoriginaldocumentpage192,3-二(羥曱基)-1,4-二曱氧苯基)-丁烷formulaseeoriginaldocumentpage19起始的2,3-二(羥甲基)-1,4-二(3,4-二甲氧苯基)丁烷嫩購才艮據文獻合成(JACS，1957,79,3823-3827;《四面體副刊》(Tetrahedron:Ass.)1998,9，2827—2831;《四面體》(Tetrahedron)1996,52(39)，12799-12814;《四面體副刊》(TetrahedronAss.)1995,6(4),843—844)。從所述丁烷橋修飾NDGA衍生物BB-N(式V,如上解釋的其中X基團被Z基團代替)合成醚鍵鍵合的丁烷橋修飾四氧取代的NDGA衍生物BB-Sb4N(式VI)的方法在下面提出。一般方法1:卣代烷和丁烷橋修飾NDGA(BB-N)在鹼催化條件的反應Z=H;-CHO,-CN,-CH2CH3,-CH2F,-CH2CI，-CH2BrR'=CI,Br一般方法2:甲基苯磺酸活化的醇與丁烷橋修飾NDGA(BB-N)的反應formulaseeoriginaldocumentpage21方法:Z=H;-CHO,-CN,-CH2F，-CH2CI,-CH2Br合成氨基甲酸酯鍵鍵合的丁烷橋修飾四氧取代的NDGA(BB-Sb4N)的一般方法1:異氰酸酯化合物與BB-N的反應BB-NR—NH2R-NCO:=H;陽CHO，-CN,-CH2F,-CH2CI,-CH2Br一般方法2:激活的氨基化合物和BB-N的反應:Z=H;-CHO，-CN,-CH2F，-CH2CI,-CH2BrH^BB-S4N21根據本發明的特定的NDGA衍生化合物BB-N和BB-Sb4N的製備方法的細節將在下面的實施例部分提出。在合適製劑中的本發明的NDGA衍生物，優選地但不專有地在藥物組合物中作為活性成分或作為兩種或多種活性成分中的一種在合適的情況下伴有藥學上可用的載體或賦形劑，能夠被安全給藥至需要此類治療的受治療者，所述給藥是通過鼻腔傳輸、吸入、通過靜脈的舉例如輸注或注射至中央靜脈、動脈內(伴有或沒有阻塞)、腹膜內、間質內、皮下、透皮、皮內、目艮內、肌肉內、體表、顱內、腦室內、口服、或口腔、或植入給藥。而且，所述NDGA衍生物能夠安全地給藥至需要此類治療的受治療者，所述NDGA是以溶液、懸浮液、半固體或固體的適當形式，或脂質體製劑、納米顆粒製劑、或膠粒製劑用以通過上述一種或多種途徑給藥。更進一步，脂質體製劑、納米顆粒製劑、或膠粒製劑中的所述NDGA衍生物能夠包埋於生物降解高分子材料製劑並且安全地給藥，如通過皮下植入。本發明用於給藥的組合物可是任何合適的形式，例如但不限於，溶液，懸浮液、片劑、丸劑、膠嚢、緩釋製劑或粉末、親水或疏水的液體、粉末如冷凍千燥生成的粉末、氣霧劑、水的或水溶性的組合物、疏水組合物、脂質體組合物、膠粒組合物如基於吐溫⑧80或二嵌段共聚物的膠粒組合物、納米顆粒組合物、聚合體組合物、環糊精配合物組合物、乳液、或基於稱為"脂質核Uipocores)"的納米顆粒的脂質。本發明進一步包括含有藥物組合物的組合物，所述藥物組合物包括所述NDGA衍生物和藥學上可用的載體或賦形劑。這些組合物可包括根據所述NDGA衍生物的所需用途選擇的緩衝劑，也可包括其他適於預期用途的物質。本領域技術人員已經能夠根據本發明所公開的從本領域已知的種類繁多的緩沖劑中選擇適用於預期用途的恰當的緩衝劑。在一些實施例中，所述組合物能夠包括本領域已知的種類繁多的藥學上可用的賦形劑。在很多出版物中描述了適於本發明使用的藥學上可用的賦形劑，包括例如，傑納羅(傑納羅，A.,雷明頓《藥學的科學與實踐》，19版，利平科特，威廉士&威金斯，(1995));安塞爾等(安塞爾，H.C.等，《藥物劑型和藥物運輸系統》，第7版，利平科特，威廉士&威金斯(1999));和凱比(凱比，A.H.,《藥物賦形劑手冊》，第三版，美國藥品協會)。本發明的組合物是根據潛在的給藥模式配製的。因此，例如如果所述組合物預期為鼻內或吸入給藥，基於本
技術領域：
簡便的目的所述組合物可被轉化為粉末或者氣霧劑形式。其他製劑，例如用於口服或腸胃外運輸，因在其本
技術領域：
是常規的也可被使用。(catecholicbutane)的藥物組合物用以治療所述疾病，在所述組合物被與藥學上可用的載體和其他可選的賦形劑配製的情況中，其中所述載體包括溶解劑和賦形劑的至少一種，所述助溶劑和賦形劑選自由(a)—種水溶性有機溶劑；(b)—種環糊精(包括一種改性的環糊精)；(c)一種離子、非離子或兩親表面活性劑；(d)—種改性纖維素；(e)—種非水溶性脂質和(a)-(e)的載體的任意組合構成的組。所述水溶性有機溶劑可優選地但不是必需的，是其他的而非二甲亞碸。非限制性實施例性的水溶性有機溶劑包括聚乙二醇("PEG")、例如，PEG300、PEG400或PEG400單月桂酸酯、丙二醇("PG")、聚乙烯吡咯烷酮("PVP，，)、乙醇、苯酚或二曱基乙醯胺。所述環糊精或改性環糊精，不限制於，是a-環糊精、(3-環糊精、Y-環糊精、HP-(3-CD或SBE-P-CD。所述離子、非離子或兩親表面活性劑可包括例如但不限於表面活性劑如非離子表面活性劑聚氧乙烯山梨醇酐單月桂酸酯(也稱為聚山梨酯)，如聚山梨酯20和聚山梨酯80,作為吐溫⑧20或吐溫⑧80商業可得、d-a-聚乙二醇1000維生素E琥珀酸酯("TPGS")、單油酸甘油酯(也稱為甘油單油酸酯)、酯化脂肪酸(esterifiedfattyacid)或摩爾比為35:1的環氧乙烷和蓖麻油的反應產物，作為蓖麻油聚氧乙烯35醚(CremophorEL)商業可得。優選地，對於某些實施方案，當表面活性劑是非離子表面活性劑時，所述非離子表面活性劑在沒有黃原膠下存在。改性纖維素的非限制性實施例包括乙基纖維素("EC")、羥丙基甲基纖維素("HPMC")、甲基纖維素("MC")或羧基曱基纖維素("CMC")。在本發明的一個實施方案中，所述兒茶酚丁烷(catecholicbutane)可溶解於能在使用前被乙醇("EtOH")稀釋的改性纖維素。所述非水溶性脂質包^M"列如一種或多種油，如蓖麻油(castoroil)、芝麻油(Sesameoil)或椒樣薄荷油(peppermintoil),—種或多種蠟,如蜂蠟或棕櫚蠟，以及混合的脂肪乳液組合物如英脫利匹特(Intralipid)(法瑪西亞普強，現在的輝瑞)，根據每製造商的推薦量使用。例如，推薦的成人劑量不超過2g脂肪/kg體重/天(20mL,10mL和6.7mL/kg的英脫利匹特10°/。、20°/。和30%,分別地)。英脫利匹特10%相信在1000mL中含有純化的大豆油(SoybeanOil)100g、純化的蛋黃卵磷酯12g、無水甘油22g、加足量注射(injectionq.s.ad)用水至1000mL。用氬氧化鈉調節pH值至大約8。英脫利匹特20%相信在1000mL中含有純化的大豆油(SoybeanOil)200g、純化的蛋黃卵磷酯12g、無水甘油22g、加足量注射(injectionq.s.ad)用水至1000mL。用氫氧化鈉調節pH值至大約8。英脫利匹特30°/。相信在1000mL中含有純化的大豆油(SoybeanOil)300g、純化的蛋黃卵磷酯12g、無水甘油16.7g、加足量注射(injectionq.s.ad)用水至1000mL。用氫氧化鈉調節pH值至大約7.5。這些英脫利匹特產品存儲於25。C以下的控溫室並且不應^皮冷凍。本發明的一個實施方案中，所述NDGA衍生物溶解於或者溶解並稀釋於不同載體以形成用於動物包括人口服給藥的液體組合物。例如，在所述實施方案的一個方面，所述NDGA衍生物溶解於水溶性有機溶劑如PEG300、PEG400或PEG400單月桂酸酯(所述"PEG化合物，，)或PG中。在另一個實施方案中，所述NDGA衍生物溶解於改性環糊精，如HP-|3-CD或SBE-P-CD。在另一個實施方案中，本發明的NDGA衍生物在含有所述PEG化合物和HP-|3-CD的組合製劑中被溶劑化並/或稀釋。在另一個實施方案中，本發明的NDGA衍生物被溶解於改性纖維素如HMPC、CMC或EC。在另一個實施方案中，本發明的NDGA^f汙生物;陂溶解於另一個組合製劑，所述組合製劑含有改性環糊精和改性纖維素，舉例如HP-P-CD和HPMC或HP-I3-CD和CMC。在另一個實施方案中，所述NDGA衍生物溶解於離子、非離子或兩親表面活性劑如吐溫⑧20、吐溫⑧80、TPGS或酯化脂肪酸。例如，本發明的化合物能夠溶解於單獨的TPGS、或單獨的吐溫⑧20、或如TPGS和PEG400、或吐溫⑧20和PEG400的組合。在另一個實施方案中，本發明的NDGA衍生物溶解於非水溶性脂質如蠟、脂肪乳液例如英脫利匹特、或油。例如，本發明的化合物能夠溶解於單獨的梯又樣薄荷油、或椒樣薄荷油和吐溫⑧20和PEG400、或椒樣薄荷油和PEG400、或椒樣薄荷油和吐溫⑧20、或椒樣薄荷油和芝麻油的組合。當然，EC可取代HPMC或CMC或添加到上述實施例中；PEG300或PEG400單月桂酸酯能夠耳又代PEG400或添加在上述實施例中；吐溫⑧80可取代吐溫⑧20或添加到上述實施例中；並且其它油如玉米油、橄欖油、大豆油、礦物油或甘油可耳又代椒樣薄荷油或芝麻油或添加到上述實施例中。進一步地，可使用加熱，例如，在配製這些組合物中的任一的過程得所述NDGA衍生物均勻分布的懸浮液。在另一個實施方案中，所述的NDGA衍生物可作為固體口服給藥，有或沒有任何相伴的載體。在一個實施方案中，所述NDGA書f生物如前述的實施例首先溶解於液體載體，然後製成固體組合物作為口服組合物給藥。例如，所述NDGA書f生物溶解於改性環糊精如HP-p-CD，並且所述組合物被冷凍乾燥生成適合口服給藥的粉末。在進一步的實施方案中，所述NDGA衍生物溶解於或者懸浮於TPGS溶液，適當加熱以獲得均勻分布的溶液或者懸浮液。冷卻後，所述組合物變成乳霜狀並且適合口服給藥。在另一個實施方案中，所述NDGA衍生物溶解於油並且添加蟲奪蠟以產生蠟狀固體組合物。通常，在製備口服製劑時，在添加其它賦形劑以產生更穩定的組合物前，本發明的NDGA衍生物首先被溶劑化。不穩定的製劑是不利的。不穩定的液體製劑往往形成晶體析出物或者兩相溶液。不穩定的固體製劑往往出現顆粒和結塊並且有時含有流質的液體。優化的固體製劑光滑、均一併且有窄的熔化溫度範圍。通常，製劑中賦形劑的比例可影響穩定性。例如，太少的硬化劑如蜂蠟可使所述製劑對於上乘的口服製劑而言過於流質。因此，通常，對於本發明的液體製劑，使用的賦形劑應當是本發明的NDGA衍生物的良好溶劑。換句話說，無需加熱所述賦形劑應該能夠溶解所述NDGA衍生物。所述賦形劑除了與NDGA衍生物彼此也應該相容以使它們能夠形成穩定的溶液、懸浮液或乳液。同樣地，通常，對於本發免結塊和不均勻的製劑。為了避免固體製劑在質地上所不希望的太流質或不均一，所述賦形劑應該彼此相容以使它們形成光滑均一的固體，甚至在沒有所述NDGA衍生物存在的情況下。本發明進一步涉及製造本發明的藥物組合物的方法，所述方法涉及生產或提供基本純化的所述NDGA衍生物，將所述組合物與藥學上可用的載體或賦形劑組合，並且用適合預期給藥模式的方法配製所述組合物。發現了本發明的化合物和組合物作為各種情況的治療試劑的用途，例如，希望對患有如惡性的、癌前或前期腫瘤的增殖疾病、病毒疾病、發炎性疾病、代謝性疾病或血管疾病的受治療者提供治療的情況。本發明的化合物和組合物能夠用於治療多種胂瘤和癌症，包括但不限於，血液惡性肺瘤如白血病、例如急性或慢性淋巴細胞白血病、急性或慢性髓性白血病、急性或慢性粒細胞白血病、兒童急性白血病、慢性淋巴細胞白血病、毛細胞白血病、惡性皮膚T細胞、蕈樣肉芽腫、非惡性纖維化皮膚T細胞淋巴瘤、淋巴瘤樣丘滲、T細胞富集皮膚淋巴增生、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、大皰性類天皰瘡、盤狀紅斑糹良瘡、扁平苔蘚、腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、骨/軟組織惡性纖維組織細胞瘤、神經瘤和惡性腫瘤如神經母細胞瘤、膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經膠質瘤、腦幹膠質瘤、腦腫瘤室管膜瘤、髓母細胞瘤、男性和女性乳l泉癌、胃腸道類闌尾癌(carcinoidtumorgastrointestinal)、腎上腺皮質癌、胰島細胞癌、透明細胞癌、肌腱鞘透明細胞肉瘤、大腸癌、腸癌、皮膚T細胞淋巴瘤、子宮內膜癌、食道癌、尤文家族腫瘤、性腺外生殖細胞瘤、肝外膽管腫瘤、眼癌、眼內惡性黑色素瘤、導管癌、眼癌視網膜母細胞瘤、口腔黏膜增生、侵潤口腔腫瘤、膽嚢癌、胃癌、胃腸道類腫瘤、性腺外生殖細胞瘤，生殖細胞瘤，妊娠滋養細胞肺瘤、肝癌、下咽癌、眼內惡性黑色素瘤、月夷島細月包癌(內分泌胰腺)、卡波西氏肉瘤、喉癌、肝癌、肺腫瘤和癌症力。非小細l包肺癌和小細胞肺癌、惡性間皮瘤、黑色素瘤、梅克爾(Merkel)細胞癌、多發性內分泌腫瘤症候群、蕈樣肉芽肺、多發性骨髓瘤、鼻腔腫瘤、副鼻竇癌、鼻咽癌、口腔和唇癌、口咽癌、胰腺癌、曱狀旁腺癌、陰莖癌、嗜鉻細胞瘤、松果體和幕上原始神經瘤、垂體瘤、胸膜肺母細胞瘤、前列腺癌、直腸癌、腎癌、腎盂和輸尿管移行細胞癌、視網膜母細胞瘤、橫鄉丈肌肉瘤、唾液腺肺瘤、成人軟組織肉瘤、賽扎裡(Sezary)症候群、皮膚癌、小腸腫瘤、睪丸腫瘤和癌症、胸腺、曱狀腺癌、尿道癌、移行和鱗狀細胞泌尿系腫瘤、婦科肺瘤和癌症如子宮頸癌、卵巢肺瘤和癌症、卵巢上皮癌、卵巢生殖細胞腫瘤、子宮癌、子宮內膜癌、陰道癌、外陰癌、原發性巨球蛋白血症、腎母細胞瘤、肝肺瘤包括肝癌("HCC，，)和膽管腫瘤、其他肺腫瘤包括小細胞和透明細胞癌、不同器官的肉瘤；以及其4也癌症和肺瘤。本發明的NDGA書f生物可有效治療的病毒疾病的非限制性實施例其中舉例包括但不限於由人類免疫缺陷病毒(HIV)、人乳頭瘤病毒(HPV)(所有亞型)、單純皰滲病毒1和2(HSV-1和HSV-2)、帶狀皰滲病毒、巨細胞病毒、EB病毒(EpsteinBarrvirus)、痘病毒(小痘、牛痘(cowpox)、猴痘、牛痘(vaccinia))、正肝去氧核糖核酸病毒(orthohepadnavirus)、JC病毒、和BK病毒引起的病毒感染。本發明的NDGA衍生物可有效治療的發炎性疾病的非限制性實施例其中舉例包括但不限於類風溼關節炎、骨關節炎、牛皮癬、肉狀瘤病、系統性紅斑狼痴、斯蒂爾病、嚢性纖維化、慢性阻塞性肺病和炎症性腸疾病如潰瘍性結腸炎和克羅恩病。發明的NDGA衍生物可有效治療的代謝性疾病的非限制性實施例其中舉例包括但不限於糖尿病(幼年型和成人型)、尿崩症、X症候群、高脂血症、高膽固醇血症、低血糖、動脈粥樣硬化、酮症酸中毒、艾迪生病、庫欣症候群、曱狀旁腺功能尤進、甲狀腺功能亢進症、白細胞無力症和卟啉症。發明的NDGA衍生物可有效治療的血管疾病的非限制性實施例其中舉例包括但不限於肺動脈高壓、肺動脈高壓、心血管病和黃斑變性。如上所述，有效劑量的所述NDGA衍生物給藥至受治療者，其中"有效劑量，，是指足以產生預期效果的劑量。在一些實施方案中，所述的預期效果是至少減少所述病毒感染或發炎、代謝、或增殖疾病的一種或多種症狀。典型地，本發明的組合物含有從少於約0.1%上至約99%的活性成分，也就是本發明的NDGA衍生物；任選地，本發明含有約5%到約90%的所述活性成分。給藥的合適劑量取決於被治療的受治療者、舉例如受治療者的基本健康狀況、受治療者的年齡、疾病或異常狀況的狀態、受治療者的體重。通常，約0.1mg到約500mg可給藥至兒童並且約0.1mg到約5g可給藥至成人。所述NDGA能夠以單劑量或更典型地多劑量給藥。本領域技術人員可根據本發明所7>開的通過各種方法容易地確定對給定的試劑的優選劑量。本領域普通技術人員根據本發明所公開的通過路徑試驗建立劑量響應曲線能夠容易地確定其他有效劑量。NDGA衍生物的量當然根據使用的特定的NDGA衍生物以及含有所述NDGA書f生物的製劑的性質和給藥路徑而變化。所述NDGA的給藥頻率和劑量將由照顧者根據年齡、體重、疾病狀態、健康狀態和病人的反應決定。因此，所述試劑可每天一次或多次或簡便地決定的合適的所需時長給藥。本發明包括有多劑量或單位劑量所述NDGA衍生物的藥劑盒。在該藥劑盒中，除了裝有多劑量或單劑量含有所述NDGA衍生物的組合物的容器，還有它用於特定適應症的使用說明，如信息單或描述藥品使用和治療感興趣的病理學狀態如任何各種發炎、代謝、血管或增殖疾病或病毒感染的相伴效果的包裝插入物。除了被註明是預測實施例的那些，本發明現在還被用下面具體的非限制性實施例進行更多細節描述。一般步驟除非另有說明，所有反應在烤箱乾燥(120°C)的玻璃器皿中在氮氣下進行。丙酮、二氯甲烷、1,4-二噁烷、乙酸乙酯、正己烷和四氫呋喃從邁克卡落迪特化工廠(MallinckrodtChemicalCo.)購得。丙酮用4A分子篩乾燥並蒸餾。二氯甲烷、乙酸乙酯和正己烷用CaH2乾燥並蒸餾。1，4-二噁烷和四氫呋喃在氮氣氛下用鈉和二苯甲酮蒸餾乾燥。去甲二氫化愈創木酸從FlukaChemicalCo.購得。鹽酸4-(2-氯乙基)嗎啉、鹽酸4-(3-氯丙基)嗎啉、單鹽酸1-(3-氯丙基)哌啶、單鹽酸l-(2-氯乙基)哌啶、2-氯乙醇、(2-氯乙氧基)乙烯、鹽酸l-(2-氯乙基)吡咯烷、N,N，-二環己基碳二亞胺(DCC)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和碳酸鉀從AldrichChemicalCo.購^尋。熔點由步琪(Buchi)535熔點儀測得。分析薄板色i普(TLC)在從默克公司(MerckInc.)購得的預塗板(矽膠60F-254)上進行。氣相色譜分析在裝有25米交聯曱基矽橡膠毛細管柱(0.32mm直徑)的惠普5890系列n儀器上進行。氮氣作為載氣使用並且流速在14.0mL/分鐘保持恆定。保留時間h在下列條件下測量注射器溫度260°C,恆溫柱溫度280°C。氣相色譜和低分辨質"^普分析在裝有安捷倫5973網絡質量選才奪檢測器和毛細HP-1柱的安捷倫科技6890N網絡GC系統上進行。用重力柱色譜的純化通過使用默克試劑矽膠60(顆粒尺寸0.063-0.200mm,70-230目ASTM)進行。所有化合物的純度由HPLC或GC檢測大於99.5%。紫夕卜(UV)光譜在日立IJ3300UV/VIS光譜儀上測量。紅外(IR)光語在JascoFT-IR-5300傅立葉變換紅外光譜儀上測量。才良道的波數參照聚苯乙烯1601cm—4V及收。吸收強度按照下列簡寫記錄s，強；m,中；w,弱。螢光強度在日立F-450(T螢光光語儀上測量。質子麗R譜使用氘代氯仿作為溶劑和3-(三甲基矽基)丙酸鈉作為內標在VarianMercury-400(400MHz)譜儀上測得。C"-麗R譜使用氖代氯仿或重水作為29溶劑在VarianMercury-400(400固z)諳儀上測得。C"化學位移參照CDC13的三重峰的中心(577.Oppm)。多重性按照下列簡寫記錄s,單峰；d，二重峰；t,三重峰；q,四重峰；m,多重峰；J,耦合常數(hertz)。高分辨質譜由JEOLJMS-HX110質譜儀測得。電噴霧離子化質譜(ESI-MS)分析在裝有菲尼根-MAT公司菲尼根LCQ的電噴霧離子化源的四級杆離子阱質量分析儀上進行。計算機計算在矽谷圖形公司02+工作站上進行。軟體ChemofficeUltra10.0^皮用於畫化學結構和合成線^^。軟體PCModel7.5^皮用於用一致的價力場(CVFF)最小化能量直到最大衍生物小於1.OkcalmolT。實施例11，4-二(3，4-甲緣苯基)-丁烷(C2。H2604，FW=330.42)"化合物A"的合成方法1.Mg/THF2.化學式:C8H9Br02分子量:217.0643%化學式C2oH2g04分+量330.42使用中村等2°的涉及1,4-二碘丁烷和衍生自3,4-二曱氧基溴苯的格氏試劑(Grignardreagent)耦聯的^f務飾方法合成所述化合物，產率43%。熔點93-94°C(文獻21熔點91-92°C)。HPLC純度99.25%。'HNMR(CDC13,300MHz):5=1.58-1.68(m，4H)、2.55-2.65(m,4H)、3.85(s，6H)、3.86(s,6H)、6.69(s,2H)、6.70(dd，J=7.9,1.6Hz，2H)、6.78(d,J=7.9Hz，2H)卯m，與所示結構一致。"C雨R(CDC13,75MHz):5=31.1、35.3、55.7、55.9、111.2、111.7、120.1、135.2、147.0、148.7卯m;與所示結構一致。分析C2。H2604,計算值C:72.70,H:7.95;實驗值C:72.51,H:7.82。MS(EI)，m/e=331(M+l);與(:2112604—致。實施例21,4-二(3，4-羥基苯基)丁烷(也稱為1，4-二(鄰^i酚-4-基)T烷CwIU)4，FW=274.31)"化合物B"的合成方法BBr3100%化學式C2oH2e04分子量330.42化學式c16Hi804分子量274.31通過使用三溴化硼"切斷實施例1的產物1,4-二(3，4-甲氧基苯基)丁烷的芳香基的甲氧基合成定量產率的這個化合物。用TLC發現粗產品是純的，因此它無需進一步純化用於衍生物的製備。分析用的樣品用二氯曱烷和甲醇(95:5,V/V)作為洗脫液的^圭膠柱純化。熔點140-142°C。HPLC純度98.5%。4NMR(DMSO—d6,300MHz):5=1.60(t,J=6.5Hz,4H,2CH2)、2.65(t，J=6.5Hz,4H，2CH2)、6.65-6.85(m，6H,6Ar-H)、9.56(brs，4H,40H)ppm;與所示結構一致。13C麗R0)MS0-d6,75MHz):5=31.5、36.3、114.5、115.8、120.1、136.5、143.5、145.5ppm,與所示結構一致。MS(EI),m/e=275(M+l),與d晶A結構一致。分析C16H1804,計算值C:70.06,H:6.61;實驗值C:70.31,H:6.82。實施例31，4-二(3，4-乙猛苯基)丁烷(C24H3404，FW=386.52)"化合物C"的合成方法C2H5l/K2C0370%化學式Cl6H1804分子量274.31化學式C24H3404分子量386-52向實施例2的1,4-二(3，4-羥基苯基)丁烷(700mg,2.56mmol)的丙酮溶液(26ml)中添加碳酸鉀(2.39g，16.9mmol,6.6當量)和石典乙烷(2.40g,15.4mmol,6.0當量)，並且該混合物加熱回;危24小時。反應的TLC表明反應的完成。該反應混合物冷卻到室溫，過濾並且所得固體用丙酮洗滌。所得合併的濾液減壓濃縮。所得殘留物用乙酸乙酯(lOOmL)溶解並且用水(50mL)洗滌。所得水層用乙酸乙酯(50mL)再萃取。所得合併的有機萃取液用無水Na2S04乾燥，並且減壓濃縮得到粗產品(1.06g)，所得粗產品用乙酸乙酯-異丙醇(1:1，6mL)結晶得到純的晶體產物(700mg,70%產率)。熔點113-115°C。HPLC純度98.50%。力NMR(CDC13，300MHz):5=1.43(t,J=6.8Hz,6H)、1.44(t,J=6.8Hz，6H)、1.61-1.65(m,4H)、2.40-2.60(m，4H)、4.06(q,J=6.8Hz,4H)、4.07(q,J=6.8Hz，4H)、6.63-6.72(m，4H)、6.79(d,J=8.2Hz,2H)ppm;與所示結構一致。13CNMR(CDC13,75MHz):5=14.9、31.1、35.3、64.5、64.7、113.9、114.2、120.4、135.5、146.8、148.6ppm;與所示結構一致。分析C2AA計算值C:74.57，H:8.88;實一驗值C:74.78,H:8.75,與所示結構一致。實施例41,4-二{3，4-二[3-(哌啶-1-基)丙氧基]苯基}-丁烷(C"H7SN404，FW=775.16)"化合物D"的合成方法本化合物可用至少兩種方法合成。方法l:使用碳酸鉀作為一種催化劑formulaseeoriginaldocumentpage32向1,4-二(3，4-羥基苯基)丁烷(1.10g,4.0mmol)的丙酮(40mL)溶液中添加碳酸鉀(13.25g,96mmol,24當量)和N-(3-氯丙基)哌啶鹽酸(9.5g，48mmol，12當量)和石典化鈉(2.4g，16mmol,4當量)，並且該混合物糹皮加熱回流40小時。TLC監測該反應的完成。反應混合物被過濾並且所得固體用丙酮洗滌。所得合併濾液真空濃縮。己烷(200mL)尋皮加到所得殘留物中，並且所得混合物在一臺Rotavapor裝置中在60。C加熱15分鐘。所得己烷層被移出並且對所剩殘留物的該才乘作再重複兩次。所得合併的己烷萃取液減壓濃縮以得到粗產品。所得粗產品用己烷乙酸乙酯三乙胺(5:5:0.5)到乙酸乙酯曱醇三乙胺(9:1:0.5)作為梯度洗脫液的矽膠(250g)純化，以產生白色固體的純的產物(1.56g,產率50.4%)。它進一步用乙酸乙酯-己烷結晶以得到一種晶體產物(1.03g)。熔點91-93°C。HPLC純度99.43°/。。力麗R(CDCh，100MHz):5=1.38-1.50(m，8H)、1.53-1.68(m,20H)、1.95-2.07(m,8H)、2.35-2.60(m,28H)、3.9(t,J=6.4Hz，4H)、4.0(t，J=6.4Hz，4H)、6.63-6.72(m,4H)、6.77(d,J=8.0Hz,2H)ppm,與所示結構一至丈。13CNMR(CDC13,75MHz):5=24.5、27.0、31.3、35.4、54.7、56.2、67.9、68.1、114.4、114.7、120.6、135.7、147.1、149.0ppm，與所示結構一致。分析C4SH78N404,計算值C:74.37,H:10.16，N:7.23;實驗值C:74.07，H:10.06,N:7.13。MS(ESI):m/z=803.7(M+H)+、802.7(M)、678.6、402.4、126.0,與所示結構一致。方法2:^^用氫化鈉作為一種催化劑formulaseeoriginaldocumentpage33向1，4-二(3,4-二羥基苯基)丁烷(13.0g,45.78mmol)的無水DMF(1L)溶液中添加60。/。的氫化鈉石蠟懸浮液(9.9g，248mmol,5.4當量)，並且該混合物在65。C加熱1小時。然後該混合物冷卻到室溫，加入N-(3-氯丙基)哌啶鹽酸(37.0g,229腿o1,5.0當量)和碘化鈉(6.9g,46mmol,1等量)，並且該混合物在室溫攪拌120小時。TLC監測完全轉化成該產物。反應的後續操作通過將該反應混合物緩慢加入水(3L)和二乙醚(2.5L)中進行。水層再次用二乙醚(2L)萃取。合併的有機萃取物用濃鹽水(750mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥並且減壓濃縮。粗產物用矽膠柱色譜純化。該柱用矽膠(500g)和混合溶劑乙酸乙酯甲醇三乙胺(93:2:5)填柱，並用乙酸乙酯曱醇三乙胺(93:2:5到91:4:5)梯度洗脫以產生白色固體的產物(26.7g，產率75.4°/。)。該產物用乙酸乙酯己烷結晶以產生晶體化合物(21.4g)。分析數據與方法1製備的樣品獲得的分析數據相同。實施例51,4-二{3，4-二[3-(哌啶-1-基)丙氧基]苯基}-丁烷四鹽酸鹽(C48H78N4044HC1，FW=921.00)"化合物E"的合成方法formulaseeoriginaldocumentpage34向水冷卻的(0-5°C)的濃HC1水溶液(7.0mL11NHC1，77mmol,24mol當量)的95%乙醇(21mL)溶液滴加1,4-二{3，4-二[3-(派咬-l-基)丙氧基]苯基)-丁烷(2.50g，3.225mmol)的95%乙醇(21mL)*的溶液。該溶液在0-5。C攪拌三小時並且在水浴溫度保持在45。C的旋轉蒸發器中除去溶劑。所得鹽酸鹽高真空乾燥48小時。所得粗產品用乙醇:乙醚結晶在72小時高真空乾燥後得2.46g產品(83.2%產率)。*注原料1，4-二{3，4-二[3-(哌啶-l-基)丙氧基]苯基}-丁烷室溫下不完全溶於95%乙醇，所以該混合物加熱到45。C使l,4-二(3,4-二[3-(哌咬-1-基)丙氧基]苯基}-丁烷溶解。溶液冷卻到室溫並且添加到乙醇的HC1溶液中。該產品的分析數據如下。熔點270-280°C(分解)。HPLC純度98.5°/。。卡爾'費^f木庫侖法測定水分(MoisturecontentbyKarlFishermethod):2.4974%。元素分析C48H82N404C14,要求值C:62.59，H:8.97,和N:6.08;實-驗值C:62.38，H:9.30,和N:5.89滴定法測定氯元素(無水基底)理論值15.40%;實驗值15.44%(理i侖值的100.3%)。^NMR(D20，300MHz):5=1.25-1.50(m，8H)、1.55-1.75(m，12H)、1.82(d，J=14.4Hz，8H)、2.06—2.10(m，8H)、2.39(s，4H)、2.76(t,J=12.1Hz，8H)、3.11(q,J=7.8Hz，8H)、3.39(d,J=11.6Hz，8H)、3.98-4.00(m，8H)、6.64(dd,J=1.8，8.0Hz，2H)、6.79(d,J=1.8Hz，2M)、6.84(d，J=8.0,2H)ppm;與所示結構一致。13CNMR(D20，100MHz):5=24.5、27.0、31.3、35.4、54.7、56.2、67.9、68.1、114.4、114.7、120.6、135.7、147.1、149.0ppm;與所示結構一致。MS(ESI),m/z=777(M++2),775(M+);與游離鹼C48H78N404(775.16)結構一致。實施例61，4-二{3，4-二[2-(1-甲基-哌嚷-4-基)乙氧基]苯基}-丁烷(C44H74N804，FW=779.21)"化合物F"的合成方法35分子量779.11化學式C7H15CIN2分子量162.66步驟l:N，-甲基-N-2-氯乙基哌嚷從它的二鹽酸鹽的合成方法N，-曱基1-2-氯乙基哌溱二鹽酸(10.0g,45.4mmol)緩慢加到50%碳酸鉀水溶液(200mL)和乙醚(200mL)的一種混合液中，並且該混合物攪拌30分鐘，分層，水層用乙醚(2x200mL)萃取。合併的有機萃取液用無水硫酸鈉乾燥並且濃縮得到N，-甲基-N-2-氯乙基哌嗪(6.2g)。步驟2:1，4-二{3，4-二[2-(1-甲基-艱嚷-4-基)乙氧基]苯基}-丁烷的合成方法向化合物2(1.0g，3.65mmol)的丙酮(40mL)溶液中添加無水碳酸鉀(2.52g，18.25mmo1,5當量)和N，-甲基-N-2-氯乙基哌溱(2.90g,18.25mmol)，並且該混合物被加熱回流。36小時後，添加額外量的碳酸鉀(2.528g)和N，-曱基-N-2-氯乙基哌。秦(2.90g)並且再繼續回流36小時。反應混合物冷卻到室溫，過濾，用丙酮(200mL)洗滌並且濃縮。所得粗產品用分別地85:10:5到65:30:5的CH2C12:MeOH:Et3N作為梯度洗脫液的矽膠(250g)純化，以得到所需產物(0.88g,產率31.1%)。它進一步用乙酸乙酯-己烷結晶純化。HPLC純度99.67%.力麗R(CDC13，300MHz):5=1.55-1.63(m，4H)、2.28(s,6H)、2.29(s，6H)、2.33-2.63(m，36H)、2.81(t,J=6.0Hz，4H)、2.82(t,J=6.0Hz，4H)、4.10(q，J=6.0Hz，8H)、6.67(dd，J=8.2Hz和1.7Hz,2H)、6.70(d,J=1.7Hz，2H)、6.78(d,J=8.2Hz，2H)36ppm;與所示結構一至丈。13C麗R(CDC13,75MHz):5=31.2、35.3、46.1、53.7、55.1、57.3、67.3、67.4、114.4、114.7、120.9、146.0、147.9、148.7ppm;與所示結構一致。分析C44H74Ns04，計算值C:67.83,H:9.59和N:14.39;實驗值C:67.53，H:9.71和N:14.03。實施例71，4-二{3，4-二(2-曱基-噻唑-4-基-甲氧基)苯基}丁烷四鹽酸鹽(C36H3SN404S4'4HC1，FW=718.97)"化合物G"的合成方法化學式C36H幼N404S4分子量718.97首先，4-氯甲基-2-甲基噻唑由它的鹽酸鹽製備。這通過將4-氯甲基-2-甲基p塞唑鹽酸鹽(2.5g,13.5mmol)加入50。M灰酸鉀水溶液和乙醚(每種30mL)完成。該混合物在室溫攪拌15分鐘。分離所述有機層，用無水K2C03乾燥並且濃縮得到4-氯曱基-2-曱基噻唑(2.01g)。它被用於下面的1,4-二{3,4-二(2-甲基-噻唑-4-基-甲氧基)苯基)丁烷四鹽酸鹽向一種冰冷的實施例2的1，4-二(3，4-羥基苯基)丁烷(616mg,2.25mmol)的DMF(15mL)溶液中添加60%的氫化鈉石蠟(541mg,13.5mmol,6mol當量)懸浮液。該混合物在0。C下攪拌30分鐘然後在室溫下攪拌30分鐘。然後加入4-氯甲基-2-甲基噻唑(2.01g,13.5mmol,6mol當量)的DMF(5mL)溶液並且該反應混合物在室溫攪拌16小時。向該反應混合物加入飽和NH4C1水溶液(150mL)和乙醚(350mL)。搖勻後，分離有機層，並且用乙醚(150mL)萃取水層。合併的有機層和萃取液用水(50mL)和濃鹽水(50mL)洗滌，用無水Na2S04乾燥並減壓濃縮得到粗產物。所得粗產物以己烷乙酸乙酯(50:50到0:100)作為洗脫液用矽膠(250g)的矽膠柱色譜純化以產生白色固體產物(0.88g,54.3%產率)。該產物進一步用乙酸乙酯-己烷結晶純化。熔點96-98°C。HPLC純度:99.99%。4麗R(CDC13)1.51-1.61(m，4H)、2.48-2.60(m，4H)、2.71(s，6H)、2.72(s,6H)、5.20(s，4H)、5.22(s，4H)、6.69(dd,J=8.2Hz，1.8，2H)、6.80(d，Jl.8Hz,2H)、6.88(d，J=8.2Hz，2H)、7.18(s,4H)ppm;與所示結構一致。13C麗R(CDC13)19.1、30.9、35.2、67.8、68.0、115.3、115.4、115.6、115.7、121.5、136.4、146.8、148.5、152.4、152.5、166.1ppm;與所示結構一致。分析(:361138仏0434計算值:C:60.13,H:5.34，和N:7.79。實驗值C60.07，H5.22,和N:7.70。實施例81，4-二{3，4-二(2-(N，N，-二曱基氨基)-乙氧基]苯基}-丁烷(C32H54N404，FW=558.41)"化合物H"的合成方法isCI化學式CwH，s04分子量274.31化學式C4H10CINHf:107.58化學式C32Hs即4分子f:558.80向1,4-二(3，4-二羥基苯基)-丁烷(1.096g,4醒ol)的丙酮(40mL)溶液中添加無水碳酸鉀(6.64g,48腿ol)和二甲氨基氯乙烷鹽酸鹽(3.46g,24mmol)，並且該混合物被加熱回流。12小時後，添加額外量的碳酸鉀(6.g)和二甲氨基氯乙烷鹽酸鹽(3.46g)並且反應混合物加熱回流64小時。反應混合物的TLC表明反應完成。反應混合物冷卻到室溫，過濾，用丙酮(150mL)洗滌並且濃縮。所得粗產品用分別地94:1:5到85:10:5的CH2C12:MeOH:Et3N作為梯度洗脫液的珪膠(250g)柱層析純化，以得到所需產物(1.28g,產率57.8%)。這種原料用乙酸乙酯-己烷結晶得到進一步更純的產物(300rag)。熔點65-67°C。HPLC純度99.04%。力麗R(CDCh,300MHz):5=1.59-1.63(m,4H)、2.33(s，12H)、2.34(s,12H)、2.50-2.56(m,4H)、2.73(t，J=6.lHz,4H)、2.74(m,J=6.lHz,4H)、4.07(q,J=6.lHz,8H)、6.68(dd,J=7.9Hz,1.9Hz,2H)、6.71(d，J=1.9Hz，2H)、6.80(d,J=7.9Hz，2H)ppm;與所示結構一致。13C麗R(CDCh，75MHz):5=31.1、35.3、45.9、46.1、58.3、67.8、67.191、4.6、114.9、120.9、136.0、147.1、148.9ppm，與所示結構一致。分析C32H5404N4,計算值C:68.78，H:9.76,和N:10.03;實驗值:C:69.82，H:9.85,和N:9.83。如下列預測實施例A-R顯示的，額外的化學反應能夠實現以根據本發明的實施方案合成化合物。預測實施例A1，4-二_3，4-幾基苯基)丁烷(或者稱為1，4-二(鄰苯二酚-4-基)-丁烷)在實施例2中的"化合物B，，的另外的合成方法預測實施例B391，4-二{3，4-二[2-(哌咬-l-基)乙氧基]苯基}丁烷四鹽酸鹽；游離鹼(C44H7。N404，FW=719.05)和4HC1鹽(d線MHCl，FW=864.89)的合成方法i-(2-氯乙基)哌啶2、04HCI化學式C"H74Cl4N404分子量864.89預測實施例c1，4-二{3，4-二[3-(C44H7。N408，FW=783.合成方法(嗎啉-1-基)丙氧基]苯基}-丁烷四鹽酸鹽游離鹼05);4HC1鹽(C44H7。N408'4HC1，FW=928.89)的NCIO、4-(3-氯丙基)嗎啉4HCI化學式0^74，408:928.89預測實施例D1，4-二{3，4-二[2-(C4。H62線，FW=726合成方法(嗎啉-l-基)乙*1&]苯基}-丁烷四鹽酸鹽游離鹼94);4HC1鹽(C40H62N408'4HC1，FW=872.79)的,,ci4-(2-氯乙基)嗎啉o.化學式C恥H66CI4n!^C分4"量872.7940預測實施例E1，4-二{3，4-二[2-(吡咯-l-基)乙氧基]苯基}-丁烷四鹽酸鹽游離鹼(C4。H62N404，FW=662.94);4HC1鹽(C4。H62N404MHC1,FW=808.79)的合成方法分子量808.79預測實施例F1，4-二{3，4-二[2-(1-甲基-p底溱-4-基)乙氧基]苯基}-丁烷四鹽酸鹽游離鹼(。41174&04，FW=779.11);4HC1鹽(C44H74N804'4HC1，FW=924.95)的合成方法化學式C44H78CI4N804分子量924鄰5預測實施例G1，4-二{3，4-二(2-羥基乙緣)苯基}-丁烷游離鹼(C24H3408，FW=450.23)的合成方法方法l廣OH分子量450.52預測實施例H1，4-二{3，4-二(2-(N，N，-二(2-羥乙基)乙氧基)苯基}-丁烷四鹽酸鹽游離鹼(C4。H7。N4012，FW=799.00);4HC1鹽(C4。H7。N4012MHC1,FW=944.85)的合成方法formulaseeoriginaldocumentpage43預測實施例I1，4-二{3，4-二[2-(2-羥基乙氧基)乙氧基]苯基}-丁烷游離鹼(C32H5。012，FW=626.73)的合成方法化學式分子量626-73預測實施例J1，4-二{3，4-二[2-(哌咬-l-基)乙基氨甲醯氧]苯基}-丁烷四鹽酸鹽游離鹼(。7肌FW-890.15);4HC1鹽(C48H74N808'4HC1，FW-1036.99)的合成方法方法l43formulaseeoriginaldocumentpage44預測實施例K1，4-二{3，4-二[2-(嗎啉-l-基)乙基氨甲醯氧]苯基}-丁烷四鹽酸鹽游離鹼(04411661^012，FW=899.04);4HC1鹽(C44H66N8012'4HC1，FW=1044.89)的合成方法formulaseeoriginaldocumentpage44化學式C48H78CI4N808分子量1。36,99H4HCI化學式C44H70CI4N8O12分4"量1044.89預測實施例L1，4-二{3，4-二[(2-N，N-二曱基絲乙基)氨甲醯氧]苯基}-丁烷游離鹼(C36H58Ns08，FW=730.89)的合成方法。hA2-異氰酸-N,N-二曱基乙胺化學式-CseHggNsOB分子量730.89預測實施例M1，4-二{3，4-二[(呋喃-2-基)曱基-氨甲醯氧]苯基}-丁烷游離鹼(C4。H38N4012，FW=766.75)的合成方法預測實施例N1，4-二(3,4-二曱氧苯基)-2，3-二(氯曱基)-(2S，3R)-丁烷(C22H28C1204，FW=427.36)的合成方法2,3-二(羥曱基)-l，4-二(3,化學式C22H28a2044-二曱氧苯基)-丁烷分子量427.36預測實施例o1，4-二(3，4-(C22H28Br24，FW=二曱氧苯基)-2，3-二(溴甲基)-(2S，3R)-丁烷516.26)的合成方法2，3-二(羥曱基)-1，4-二(3，4-二甲氧苯基)-丁烷化學式C22H28Br204分子量516.26預測實施例P1，4-二(3，4-二甲氧苯基)-2，3-二(氟曱基)-(2S，3R)-丁烷(C22H28F20FW=394.45)的合成方法2，3-二(鞋甲基)—1,4-二(3,化學式C22H28F2044-二曱氧苯基)丁烷分子量394.45formulaseeoriginaldocumentpage47預測實施例Q1，4-二(3，4-二曱氧苯基)-2，3-二甲絲-(2S，3R)-丁烷((^HmO,FW=386.44)的合成方法分子量386.44formulaseeoriginaldocumentpage47預測實施例R1，4-二(3，4-二甲氧苯基)-2，3-二^J^(2S，3R)-丁烷(C22H24N204，FW=380.44)的合成方法化學式C22H24N204分子量380.44formulaseeoriginaldocumentpage47根據進行的一般實驗，下面涉及體外細胞毒性和有效性研究的具體的非限定性實施例將進一步描述本發明。細胞毒性和有效性研究本發明的具體化合物已經進行體外研究。所述的體外研究已表明本發明的各種類型的NDGA衍生物能安全有效地用於病毒感染或增值、發炎、代謝或血管疾病的預防或患後治療。下列實施例解釋該測試涉及的所述研究。細胞毒性研究針對細胞毒性進行的研究包括已知的MTS、臺盼藍(TrypanBlue)和MTT實驗。MTS實驗使用CellTiter96⑧AQ，us單溶液細胞增殖檢測(普洛麥格生物技術有限公司，麥迪遜，威斯康星，美國)完成。有代謝活性即存活的細胞使MTS,四唑化合物(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑，內鹽)變為可溶於組織培養基的有色甲暨。所述甲暨的吸收的測量在490nm讀取。待用試劑被直接加至96孔板的基質中的細胞，培養1-4小時並且通過板讀取器記錄結果。IC5。通過對採集數據作圖獲得。IC5。是與空白實驗比較能夠抑制測試材料的生長或存活的50°/。的測試材料的濃度。在臺盼藍測試中，細胞被胰蛋白酶化並且樣品被添加到臺盼藍染料和生理鹽水的溶液中。存活的細胞能夠保持該染料在它們的細胞膜外，而受損或者死亡的細胞則不能。計數存活和非存活(藍色)的細胞，並且計算存活百分比。增殖率使用來自安慰劑處理過的細胞的值計算，並且比較處理過的細胞和未處理過的細胞的存活率。MTT測試是一種用以決定存活細胞的數目的比色法。有代謝活性的細胞使MTT試劑，(3-(4，5-二曱基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物)變為可溶於二甲亞碸(DMSO)的紫色甲暨晶體。所述MTT試劑被添加到MTT(無色)介質中。將該介質加到細胞並且培養4小時。將DMSO加到細胞並混合。然後有色溶液在540nm讀值，在630mn處校正。ICs。通過採集的數據作圖獲得。抗病毒活性SEAP測試抗病毒活性使用SEAP(分泌型鹼性磷酸酶)測試決定，所述測試中細胞與SEAP和TAT質粒共轉染。TAT是人類免疫缺陷病毒(HIV)基因表達的反式激活因子並且是兩個或者多個對於HIV基因表達必需的病毒調節因子(TAT和REV)之一。TAT通過與TARRNA元件結合併且激活長末端重複序列(LTR)啟動子的轉錄來起作用。TAT蛋白穩定轉錄的延伸並且也已顯示與轉錄開啟有關。之前的研究已經顯示TAT是抗體-依賴型T細胞增殖減少的媒介，基本上導致免疫反應的失敗。TAT也直接刺激卡波希細胞(Kaposi"cell)生長。因為TAT沒有明顯的細胞同系物，這一強正性調節因子已經成為用於抗AIDS藥物發展的非常有吸引力的目標。與現有HIV逆轉錄抑制因子(AZT,DDI)或阻止新一輪感染的潛在蛋白酶抑制因子相比，遏制病毒基因TAT調節的完整前病毒DNA表達的抑制因子將在早期抑制病毒(蘇(Hsu)等，《科學》(Science)254:1799-1802,1991)。意於闡明在宿主真核細胞內轉錄和轉錄後水平控制基因表達的因子的努力最近已經使TAT功能的定量評估成為可能(山姆，《紐約科學學院年報》(Ann.N.Y.Acad.Sci.)616:64-70，1990)。為了篩選TAT調節的轉錄激活(TAT-TRS)的抑制因子，SEAP報告基因,皮置於質粒pBC12/HIV/SEAP中HIV-1LTR啟動子的控制下。TAT-編碼的活性通過第二質粒構建pBC12/CMV/t2提供。COS-7細胞和這兩種質粒的瞬間共轉染導致鹼性磷酸酶分泌到通過簡單比色測試分析的培養基中(伯格等，《基因》(Gene)66:1-10,1988)。因此，SEAP測試提供了TAT轉錄激活的間接測定。在SEAP測試中，抑制因子應當通過TAT蛋白(TAT-TRS)引起通過HIV-1LTR啟動子的轉錄激活降低SEAP報告基因表達。TAT蛋白在巨細胞病毒啟動子的控制下表達，並且誘導非內源性的抗熱型的分泌型鹼性磷酸酶的表達。如果TAT轉錄激活被藥物阻止，SEAP報告因子將不會分泌到基質。由對硝基苯磷酸底物在405nm處對SEAP進行比色檢測。參看Gnabre13。由MTT測試分析細胞以比較對於SEAP抑制作用的細胞毒性。目的是所述藥物能夠抑制SEAP,而沒有太大的毒性。抗增殖活性使用涉及基於DNA片段的細胞凋亡的TiterTACS⑧凋亡檢測試劑盒(安迪生物科技有限公司U&DSystemsInc.),明尼阿波利斯，明尼蘇達，美國)和ELISAVEGF(血管上皮生長因子)和凋亡抑制蛋白(survivin)測試來測定抗增殖活性。在DNA片段測試中，細胞凋亡原位檢測特別地由TiterTACS⑧96-孔凋亡檢測試劑盒,批次號TA600(R&DSystemsInc.)完成。TiterTACS測試在無需使用比色檢測直接計數標記細胞下提供培養的細胞的凋亡定量分析。細胞經測試化合物處理，未處理的作為實驗陰性對照，或者經TACS核酸酶處理作為陽性對照。TACS核酸酶允許對每個實驗系統產生陽性對照在標記前用TACS核酸酶簡要處理細胞在每個細胞內產生DNA分裂，以提供特別針對所研究體系的適當的陽性對照。催化dNTPs添加到DNA片段的TdT酶允許使用辣根過氧化物酶標記鏈黴親和素(streptavidin-HRP)溶液及隨後的TACS-藍寶(TACS-Sapphire)底物在450nm的比色檢測。在450nm處的強吸收表明細胞的凋亡。處理過的細胞與未處理的細胞和核酸切開的細胞相比較以判斷凋亡的程度。ELISA(酶聯免疫吸附試驗)VEGF研究按照製造商的使用Endogen人VEGFELISA試劑盒，批號EHVEGF(皮爾斯生物科4支/>司(PierceBiotechnology,Inc.),羅克福德，伊利諾伊，美國)的說明完成。通過用去鐵敏(DFO)處理細胞創造用於該細胞的低氧狀態，該狀態螯合離子並引起細胞分泌VEGF到基質。上清液(基質)被移除並且冷凍用以測試，並且細胞被用臺盼藍試驗計數以致所得結果能夠被正態化到細胞數。VEGF由三明治ELISA測量，所述三明治ELISA能夠捕獲在抗體覆蓋的微板上基質中的蛋白，然後使用生物素化的抗體試劑檢測該蛋白。由標準曲線獲得的結果能夠使使用者量化每個樣品中蛋白的數量。ELISA-凋亡抑制蛋白測試凋亡抑制蛋白是在很多人的癌中但不在正常成人組織中大量表達的凋亡抑制因子，並且被認為是可能的細胞死亡/存活的終結效應期的調節因子。凋亡抑制蛋白以細胞循環依賴方式在G2-M中表達，直接與有絲分裂紡錘體微管結合。已顯示的是在細胞分裂階段保持細胞存活可能需要Thr34的凋亡抑制蛋白磷酸化作用，磷酸化作用缺陷的凋亡抑制蛋白突變體的表達已經顯示出在幾種人黑色素細胞系引起凋亡。磷酸化的凋亡抑制蛋白對半胱天冬酶通路起作用以抑制半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-9的形成，因而抑制凋亡。因此，減少凋亡抑制蛋白表達的化合物預期將提高凋亡和細月包死亡率。按照製造商的使用SurveyorIC人全凋亡抑制蛋白免疫測試，批號SUV647(R&DSystems,Inc.)的說明研究測試的化合物對凋亡抑制蛋白的效果。為了凋亡抑制蛋白蛋白含量分析細胞溶胞產物。所述試劑盒包括覆有特別針對凋亡抑制蛋白的抗體的板和可識別結合到板上的凋亡抑制蛋白的生物素化的抗體試劑。所述板在板讀取器設定的450nm處讀取和在540nm處校正。根據布拉德福德(Bradford)方法(布拉德福德，M.1976,分析生物化學(AnalBiochem)72:248-254)的蛋白實驗被用於根據全蛋白含量量化和正態化樣品。由標準曲線獲得的結果能夠使使用者量化每個樣品中凋亡抑制蛋白蛋白的數量。抗發炎活性基於測試的化合物對初級人表皮細胞(PHKs)的效果測定抗發炎活性。PHKs在發炎過程中具有重要的作用，合成大量細胞因子、粘合分子和生長因子。研究被完成以測定測試化合物是否能夠抑制表皮細胞從而阻止或減少y幹擾素(IFN-y)、白細胞介素-8(IL-8)、肺瘤壞死因子oc(TNF-a)、粒/巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、細胞間翁附分子-1(ICAM-l,也是CD54)和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的產生。PHKs首先由TNF-a處理以誘導致前炎症狀態和前炎症細胞因子的釋放。隨後按照製造商的使用R&DSystems,Inc.的蛋白測試(QuantikineELISA試劑盒；批號MCP-I試劑盒DCPOO，GM-CSF試劑盒:DGM00,和IFN-y:DIF50)的說明測試特異性細胞因子。涉及抗病毒和抗增殖活性的細胞毒性研究的一般實驗測試從ATCC獲得並且根據ATCC指示保存的三個細胞系HeLa(宮頸腺癌)、A549(肺癌)、和C0S-7(SV40移植的猴腎)。這些細胞系的研究被認為是測試的物質對哺乳動物包括人的疾病的效果的指示物。所有化合物溶解於DMS0並且DMS0作為安慰劑使用。所述樣品首先溶於DMS0成為lOmM稀釋液，然後進一步稀釋為5、1、0.5、0.1、0.05、51和0.01mM溶液。這些溶液以1%濃度(1|u1比100ju1基質)被加到基質用以以IOO、50、10、5、1、0.5和0.1juM化合物來處理細胞。淨皮發現有低IQ的化合物進一步用DMS0稀釋。溶液特別是IOraM溶液在使用前檢查沉澱。如果有沉澱物，所述溶液被加熱到65。C並且加到加熱的基質。100pl基質的L5-8xl04細胞被接種在96-孔板的孔中，並且過夜培養。所述板的孔的外側孔填有200jal無菌去離子(DI)水以抑制基質揮發。24小時後，測試化學品在基質中以1%基質體積的濃度製備。所述測試樣品基質在加入100jul每孔前糹皮用移液管混合。基質糹皮加到"僅基質"孑L。所述孔板和它的內容物被培養24-72小時，取決於所進行的研究。在MTS測試的日子，MTS試劑被從冷藏拒取出並且放至室溫。使用多通道移液管，20ju1的MTS試劑被加到每個孔並且培養一到四小時。從培養器內一小時後直到空白孔是約0.20D,該板參照690nm波長在490nm讀取。所得結果隨後掃描到設計用於在數據輸入後進行所有需要的計算的MicrosoftExcel⑧才莫板。4全查所得數據的統計4晉誤；包括在所該組數據點的中間值的10%以內數據點。空白("僅基質")的平均值被扣除並且所得數據插入代表處理/未處理的生長響應的表格。SEAP實驗下述SEAP實驗作為報告系統用以測量HIV轉錄的TAT-介導轉錄激活的活性。MTT測試測量細胞增殖並且用於證實SEAP活性的水平不單取決於細胞毒性。這些測試被用於篩選可作為抗病毒劑尤其是抗HIV候選物的潛在的藥物化合物。C0S-7(綠猴腎)細胞使用Fugene6試劑(羅氏應用科學，批號11815091001,印第安納波利斯，印第安納州，美國)和兩種質粒共轉染pHIVSEAP(在HIVLTR促進因子控制下SEAP表達媒介)和pCTAT(在CMV(細胞巨大型病毒)促進因子控制下HIVTAT轉錄因子表達媒介)。在測試化合物處理48小時後，在添加對-硝基苯磷酸底物後在405nm測試樣品SEAP活性。SEAP活性抑制的百分比根據安慰劑對照進行計算。實施例9SEAP/MTT和MTS研究-細胞毒性和抗病毒有效性基於上面提到的一般實驗，對上述實施例指示的化合物的SEAP/MTT和MTS研究結果在下面的表3中給出，其中左邊的一欄是測定的測試化合物並且ECs。顯示有對照組的效果的50%的該化合物的濃度。ICs。如前述定義。表3化合物SEAPEC5C0S-7IC5。A549IC5。HeLaIC5。A>100jaM>100ijM>100jaM>100juMC>100jaM>100juM>100iaM>100iuMD0.7-0.8juM0.8-0.9iuM1-2juM5_6jliME9juM5-10jaMF>100jaM>100iuMG>100juM>100jaMH30-40juM20-30iaM20-40juM20-30iaM表3顯示了使用作為細胞存活性指示物的MTS測試所測定的在兩個細胞系中具有生物活性的化合物的結果。IC"農度顯示了這些化合物對細胞存活的抑制作用的不同程度。以劑量依賴型方式所有化合物能夠減少細胞存活性因而導致凋亡。化合物D在A549和HeLa細胞中顯示最強的細胞存活性抑制作用，而它的鹽酸鹽(化合物E)在兩種細胞系中顯示第二強的抑制作用。由SEAP測試決定的TAT轉錄激活的抑制作用的程度同樣在化合物間變化，如表3所示。化合物D在O.7-0.8pM之間的E"顯示出了其明顯的抗病毒活性。通過MTT測試的測試細胞(C0S-7)中細胞存活性的抑制濃度通常與TAT-轉錄激活的有效濃度類似。實施例10基於TiterTACS,VEGA和凋亡抑制蛋白凋亡研究的抗增殖活性基於上面的一般實驗，關於上面實施例指示的化合物的TiterTACSDNA片段,ELISAVEGA和ELISA凋亡抑制蛋白凋亡研究的結53果在表4中給出。表4tableseeoriginaldocumentpage54陽性=誘導凋亡陰性-未誘導凋亡測試的化合物在低的微摩濃度下已經顯示出明顯降低凋亡抑制蛋白蛋白的水平。所以，它們在DNA片段實驗中也顯示出強凋亡誘導作用。化合物H減少凋亡抑制蛋白蛋白表達因而能夠誘導凋亡。化合物D也是凋亡的誘導因子。這些化合物能夠以劑量依賴型方式減少凋亡抑制蛋白並且誘導凋亡。化合物H是凋亡抑制蛋白蛋白生產的最強蛋白抑制劑，其對於凋亡抑制蛋白生成的ICs。在25mM左右。VEGF蛋白的釋放同樣被這些化合物減弱。VEGF蛋白生成的抑制對於化合物D在低的微摩濃度範圍內。觀察到所有化合物以劑量依賴型方式的抑制作用。化合物D顯示出的對VEGF生成的ICs。在約4jaM,而化合物H顯示出的對VEGF生成的ICs。高於60jaM。表4的結果表明本發明的化合物在測試的細胞系中在抑制病毒活性和導致細胞死亡(凋亡)方面是有效的。在測試的化合物中，化合物D、E和H由於它們更低的ECs。和ICs。值顯示出比其他化合物更為有效。化合物D表現的最為有效。實施例11美國國家癌症中心DTP人肺瘤細胞系篩選美國國家癌症中心(NCI)提供發展治療項目(DTP)(http://dtp.nci.mh.gov/branches/btb/ivclsp.himl)來篩選提交的物質以支持癌症藥物發現。體外細胞系篩選項目(IVCLSP)是為DTP抗癌藥物發現項目提供直接支持的專門服務並且被設計用於篩選上至每年3000化合物的潛在抗癌活性。這一篩選的運作利用60中不同的人胂瘤細胞系，代表白血病、黑色素瘤、肺癌、結腸癌、腦癌、卯巢癌、乳腺癌、前列腺癌和腎癌。目的在於為了進一步評估優先考慮顯示出選擇性生長抑制作用或特定腫瘤細胞系的細胞殺死的合成化合物或天然產物樣品。這一篩選獨特於由給定化合物產生的60細胞系劑量響應的複雜性導致能夠用於模式識別算法的生物學響應模式(COMPARE項目，參看http://dtp.nci.nih.gov/docs/compare/compare.html)。使用這些算法，可能將推定的作用機制賦予測試化合物，或者確定響應模式是獨特的並與包含在NCI資料庫裡的任何標準原型化合物不相似。此外，隨著各種細胞分子靶在60細胞系的表徵，選擇最可能與特定分子靶作用的化合物是可能的。所述篩選是兩階段過程，始於所有化合物以10pM單劑量對抗60細胞系的評估。從該單劑量篩選的結果被報告作為中間值圖並且可用於使用COMPARE項目的分析。顯示明顯生長抑制作用的化合物^L以五個濃度水平對抗60細胞系進行評估。體外癌症篩選方法學癌症篩選板的人腫瘤細胞系在含有5%胎牛血清和2mML-穀氨醯胺的RPMI1640基質中生長。對於典型的篩選試-驗，細月包以在5000到40000細胞每孔範圍的平板密度被接種到100iaL的96孔微升板，取決於每個細胞系的倍增時間。在細胞接種後，該微升板在加入試驗藥物前在37°C、50線、95%空氣和IOO財目對溼度下培養24小時。在24小時後，每個細胞系的兩個板被用三氯乙酸(TCA)原位固定，以進行在藥物添加時間(Tz)對每個細胞系的細胞數目的測量。試驗藥物以需要的最終最大測試濃度的400倍溶於DMSO並且使用前冷凍存儲。在添加藥物的時候，一等份的冷凍濃縮液被解凍並且用含有50jag/ml慶大黴素(gentamicin)的完全基質稀釋到兩倍於需要的最終最大測試濃度。額外四倍、IO倍或者1/21og的系列稀釋液被製造以提供完全的五種藥物濃度還有對照。這些不同藥物稀釋液的100ul等份被加到適當的已經含有100ja1的基質的微升孔，產生需要的最終藥物濃度。隨著藥物的加入，該板在37。C、5%C02、95%空氣和100°/。相對溼度下培養48小時。對於貼壁細胞，測試通過添加冷的CTA終止。細月包用50ja1冷的50%(w/v)TCA(最終濃度，IO訂CA)溫和的添加原位固定並且在4。C培養60分鐘。除去上清液，該板用自來水洗滌五次並且空氣千燥。以0.4%(w/v)在1%乙酸中的磺醯羅丹明B(SulforhodamineB)(SRB)溶液(IOOial)被添加到每個孔，並且該^反在室溫培養10分鐘。染色後，用1°/。乙酸洗滌五次移除未結合的染料並且空氣乾燥該板。結合的染料隨後溶解於10mM的三(羥曱基)氨基曱烷，並且吸收值在515nm波長由自動板讀取器讀取。對於懸浮細胞，其方法學是一樣的，除了通過溫和添加50ju1801TCA(最終濃度，16°/TCA)將固定細胞固定在孔底部終止測試之外。使用七個吸收測量[時間0、(Tz)、控制生長、(C)、和在五種濃度水平的藥物存在下的測試生長(Ti)]計算在每個藥物濃度水平的生長百分比。生長抑制作用百分比如下計算xi00對於Ti〉/^z的濃度[(Ti-Tz)/Tz]x100對於Ti〈Tz的濃度。對於每種實驗藥劑計算三種劑量響應參數。50%(GI5)的生長抑制由[(Ti-Tz)/(C-Tz)]xi00=50計算，這是導致在藥物培養期間對照細胞在淨蛋白增加上50°/。的降低(由SRB染色測得)的藥物濃度。導致全生長抑制(TGI)的藥物濃度由Ti=Tz計算。LC5。(與藥物處理初期比較，導致在藥物處理末期測量的蛋白的50%的降低的藥物濃度)表示由[(Ti-Tz)/Tz]x100=-50計算得出的在處理後細胞的淨損失。如果達到活性的水平計算這三個參數的每個的值；然而，如果效果沒有達到或者超過，該參數的值被表達為大於或小於最大或最小測試濃度。對IOpM化合物A的上述NCIDTP研究結果的總結在表5中給出。tableseeoriginaldocumentpage56NSCLS(9)62.773.39E-67.31E--62.84E-5結腸癌(6)40.492.36E-66.45E--62.28E-5乳腺癌(8)59.721.00E-52.11E--53.08E-5卵巢癌(6)66.186.23E-61.46E--53.53E-5白血病(6)12.311.09E-64.28E--61.34E-5腎癌(8)82.548.OOE-61.70E--53.70E-5黑色素瘤(8)16.464.09E-67.74E--61.59E-5前列腺癌(1)2.841.41E-52.76E--55.39E-5CNS(5)78.881.90E-64.13E--61.10E-5所述結果表明化合物D在10yM濃度對抗所述60細胞系的許多類型有廣泛基礎活性。顯示的對細胞生長降低最強抑制效果是對抗前列腺癌細胞系，緊隨其後是白血病細胞系，最不劇烈的效果是對抗腎癌。GI5。、TGI和L"值在白血病和CNS癌症細胞系中全部最低，表明化合物D對抗這些類型的癌症的最強的藥效。實施例12抗發炎和抗血管疾病活性PHK研究基於測試化合物對上述人原代角質形成細胞(PHKs)的效果並且按照各種研究使用的試劑盒的使用說明測定之前描述的實施例的一些化合物的抗發炎活性。雖然這些研究更典型地用於抗發炎研究，^f旦它們同樣適用於血管疾病，因為由人原代角質形成細胞的測試結果可推斷到血管內皮。僅PHKs的MCP-l數據是劑量依賴型的，所以MCP-l的I"。能夠被計算，但其他細胞因子則不能。多種化合物的MCP-l的研究結果在下面的表6中顯示。表6化合物MCP-lIC5。A>100juMC>100juM57D3|aMH75juM通過MCP-1蛋白生產所測試的化合物在TNF-a-處理的PHK中的抗發炎活性的結果在表6中顯示。MCP-1蛋白的ICs。濃度顯示出不同程度的發炎細胞因子的抑制作用。在這些測試的其他結果中，所有被測試的化合物均能以劑量依賴型的方式減少MCP-1蛋白生成。化合物D在TNF-a-處理的PHK中顯示出最強的MCP-1抑制作用。實施例13口腔生物利用度指示性的滲透性研究滲透性研究由本發明和申請的受讓人的外界合同商完成以通過Caco-2細胞單層測定化合物D和G的滲透性。口服生物利用度的一個重要因素是化合物在小腸被吸收的能力。通過細胞單層的藥物表觀滲透性(Papp)的測量與人腸吸收密切相關，並且幾個哺乳動物細胞系包括Caco-2、LLC-PK1和MDCK適於這一測量(阿特森，P.等，在人腸上皮(Caco-2)細胞中人口服藥物吸收和表觀藥物滲透係數的相互關係。《生物化學和生物物理研究通訊》(BiochemBiophysResComm)175:880-885(1991);斯圖爾特，B.H.等，在體外和原位才莫型中多種腸滲透的比壽交與人的吸收的關係。《藥物研究》(PharmRes)12:693(1995))。P-糖蛋白(P-gp,由MDR1編碼)是ABC轉運體超級家族的一員並且在人腸、肝和其他組織中表達。P-gp的腸表達可影響作為該轉運體底物的藥物分子的口服生物利用度。與P-gp的相互作用能夠使用極化細胞系統如Caco-2細胞單層和人P-gpcDNA-表達LLC-PK1和MDCK細胞單層中藥物運輸的直接測試法進行研究。Caco-2細胞(人腺癌結腸細胞系Caco-2,ATCC批號HTB-37,在段落18和45之間使用)被植於BDFalconHTS24-Multiwell上，1jliM培養插入物(BD批號351180)(BD生物科學發現實馬IS殳備，渥本，MA，USA)。伴隨每3-4天替換基質，所述細胞培養21到25天。單層完整性通過預實-驗^爭上皮細胞電阻(TEER)測量和實-驗後螢黃(LuciferYe11ow)A到B通量測試法而進行評定。轉運緩沖劑是力口入10mMHEPES(N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸)緩衝的HBSS(漢克斯平衡鹽溶液)並且用NaOH調pH值至7.4。受體溶液通過將r/。DMSO加至轉運緩衝劑製成。測試溶液是在轉運緩衝液中1°/。的最終DMSO濃度的化合物D和H的DMSO溶液。對於兩種滲透性比較物化合物(50iaM作為"高，，的卩H]-普萘洛爾(propranolol)和50jaM作為"低，，的["C]-甘露醇)以及陽性對照P-dp底物(5juM卩H]-地高辛(digoxin))的供體溶液通過稀釋等份的輻射標記和非輻射標記的存儲液至1%最終DMS0濃度的轉運緩衝劑來製備。測試物品化合物D和H以單濃度(1|uM)在A到B和B到A方向觀'J試。供體和受體溶液被添加到單層的頂點或基底腔(取決於被測量的轉運的方向)。所述單層在37。C環境溼度和C02下在環形搖床(50rpm)上培養。90分鐘後，供體和受體腔的樣品被取出用於分析。為了測定樣品和實驗樣品盤的非特異性結合的程度，所述樣品溶液在上述條件下在一個24孔測試板的單孔中培養。90分鐘後，樣品從每個孔中取出用於分析。所有樣品採集後，螢黃溶液以100nM的最終濃度被加到每個單層。插入物被置於含有轉運緩衝劑的新受體板。30分鐘在37。C環境溼度和C02下在環形搖床(50rpm)上的培養後，樣品被從受體腔取出用於測量螢黃通量百分數。兩種滲透性比較物化合物代表高滲透性(50nM[力]-普萘洛爾)和低滲透性(50jaM["C]-甘露醇)在A到B的方向測試，伴隨樣品從供體和受體腔在90分鐘的一個時間點取出。對照P-gp底物是5juM[3H]_地高辛(digoxin)在A到B和B到A方向測試，伴隨樣品從供體和受體腔在90分鐘的一個時間點取出。複製單層在每個培養中使用。使用與內標的峰面積比由LC/MS/MS分析樣品。測試物品濃度基於峰面積比計算，所述峰面積由在轉運緩衝劑中含有標稱濃度的測試物品的供體溶液的適當的稀釋液獲得。樣品適當地稀釋以保證響應在質量檢測器的線性範圍內。比較物和對照樣品由液相閃爍計數分析。螢黃濃度使用螢光板讀取器測定。59預實驗跨上皮細胞電阻(TEER)測量(中間值411Dcm2)和實驗後螢黃A到B通量(中間值0.1%)確認了單層完整性。陽性對照地高辛的極化確認了功能性P-gp轉運模型。滲透比較物甘露醇和普萘洛爾的Papp值(中間值，對於甘露醇4.lxl(T±SD2.4x10—7,對於普萘洛爾1.5x1(T士4.2xl(T5)在該測試系統的測試設施中觀察到的歷史範圍內，這表明合適的功能模式。滲透比較物甘露醇和普萘洛爾以及陽性對照P-gp底物地高辛的結果在下面表7中報導。表7化tableseeoriginaldocumentpage60n,d.-未檢測獲得的在Caco-2細胞單層中測試化合物的雙向滲透數據以及極化比在表8中報導。表8tableseeoriginaldocumentpage60測試物品從頂點和基底腔(質量平衡)以及在培養的最後從沒有細胞(非特異性結合)的24孔培養板的單孔的回收在表9中報導。表9tableseeoriginaldocumentpage61*>100°/。的質量平衡/回收值典型地歸結於在培養過程中升高的溶解性。結論結果非常具有鼓舞性。在Cac。-2細胞單層的透過性研究作為腸吸收體外模型證明了化合物H屬於由BCS透過性分類體系測定的高滲透等級，化合物D屬於中到高滲透等級。單層TEER結果以及實驗後螢黃通量結果表明通過整個實驗功能型細胞單層的存在。P-gp轉運陽性對照，地高辛，顯示極化轉運(極化率5.4，表7)表明合適的功能性測試體系。化合物H在所述測試後從所述頂點和基底腔中以及從沒有細胞的測試板(表9)中的回收是完整的，表明化合物H對細胞或者塑料樣品盤的非特異性結合的程度不影響所述測試。然而，質量平衡和非特異性結合測定實驗顯示化合物D被結合在塑料板和/或細胞到可能已經減少可用於擴散和轉運的化合物的數量的程度。結果，表觀P,值和導致的極化率(表8)可低估化合物D的滲透性並且在將它劃至BCS滲透性等級如表10所示時應該伴有警告使用。表IOtableseeoriginaldocumentpage61觀察到的化合物H在Caco-2細胞單層中的A-B滲透性(表8)高於甘露醇的A-B滲透性。基於BCS滲透性等級(表10)，化合物H應被視為高度滲透性的化合物。觀察到的化合物D的A-B滲透性值在那些觀察到的甘露醇和普萘洛爾的A-B滲透性之間。基於BCS滲透性等級(表10),化合物D應被視為中到高度滲透性的化合物。如上所述，然而，這些分級應當根據這些化合物觀察到的結合程度加以警告地解釋。化合物D和H顯示出0.1-0.2的極化比，表明這些化合物A-B滲透性超過B-A滲透性。這一發現與P-gp介導的B-A外向通量相悖，並且表明涉及了由轉運體而非P-gp的主動的A-B通量。上述研究證明了本發明的NDGA衍生物的代表性化合物是有用的藥用化合物。本領域的技術人員可以意識到在未離開本發明廣泛的發明概念下能夠做出對上述實施例的改變。因此，應被理解的是本發明不限於公開的特定實施例而應覆蓋附加的權利要求限定的本發明的主旨和範圍內的變化。參考資料1.德朗，T.;斯圖塔克，M.;奎利恩，R.;賈哈馬達斯，K.Br.《藥理學雜誌》(J.Pharmacol.)2003，140，295-304。2.中館，T.《日本藥理學雜誌》(Jpn.LPharmacol.)1989,49,1-9.3.豪斯特，B.;格雷格，H.;瑪麗安，B.《癌症研究和臨床肺瘤學雜誌》(J.CancerRes.Clin.Oncol.)2003，129，569—576。4.藤原，T.;三角，Y.;池原，Y.《生物化學和生物物理研究通i孔》(Biochem.Biophys.Res.Commum.)2003，301,927—933。5.(a)程，J.S.;簡，C.R.《體外毒理學》(Toxicol.InVitro)2002,16，485-190。(b)王，J.L.;常,H.J.;鄭,L.L.;劉，C.P.;李，K.C;周，LJ.;盛，J.S.;羅，Y.K.;蘇，W.;羅，Y.P.;陳，W.C;陳，R.C;簡，C.R.《藥理學和毒理學》(Pharmacol.Toxicol.)2001，89，301-305。(c)蘇，W.;鄭，L.L.;林，M.C;常，H.L;李，LC;周，LJ.;羅，Y.K.;盛，LS.常，H.T.;王，J.L.;劉，C.P.;陳，W.C;簡，C.R.《神經化學國際版》(Neurochem.Int.)2002，40，249-254。(d)黃，LL;陳，W.C;黃，C.J.;蘇，S.S.;陳，J.S.;程，H.H爭;常，H.T.;簡，B.P.;簡，C.R.《生命科學》(LifeSciences)2004,75,2341-2351。6.山衝於，H.;長野，N.;平野，M.;;H"木，L;渡邊，M.今泉，Y.《藥理學與實驗醫療學報》(LPharmacol.Exp.Ther.)1999,291，140-146.7.大野，L;長谷川，K.;吉池，Y.;高島，A.;山田，M.;內木，H.《神經化學雜誌》(J.Neurochem.)2002，81,434-440。8.李，C.H.;張，Y.S.;何，S.J.;木恩，Y.M.;樸，S.J.;厄令，T.《實驗細胞研究》(Exp.Cell.Res.)2003，289，335-341。9.胡，J.R.;鄭，W.N.;才各納比，L;吉扎，P.;黃，R.C.《醫學化學雜誌》(J.Med.Chem.)1998,41,2994-3000。10.黃，R.C;李，Y.;吉扎，P.E.;格納比，J.N.;愛德爾阿澤姆，I.S.;金，LY.;胡，J.R.《抗病毒研究》(AntiviralRes.)2003,58，57-64。11.金，LY.;哈奇米拉伊，G.H.;黃，R.C;胡，J.R.《基因微生物學雜誌》(J.GeneticsMol.Biol.)2002，13,248-257。12.格納比，LN.;布雷迪，LN.;克蘭頓，D.J.;伊託，Y.;迪特默，J.;貝茨，R.B.;黃，R.C.《美國國家科學學會進展》(Proc.Natl.Acad.ScLUSA)1995,92,11239-11243。13.格納比，J.;伊託，Y.;馬，Y.;黃，R.C.《色譜分析雜誌》(LCh腦atogr.A.)1996，719，353-364。14.陳，H.;滕，L.;李，J.;帕克，R.;默德，D.E.;格納比，J.;胡，J.R.;鄭，W.N.;黃，R.C.《醫學化學雜誌》(J.Med.Chem.)1998，41，3001-3007。15.帕克，R.;吉扎，P.E.;默德，D.E.;黃，R.C.《抗病毒63研究》(AntiviralRes.)2003，58，35-45。16.克拉格，J.;卡拉漢，M.;黃，R.C;德盧西婭，A.《抗病毒研究》(AntiviralRes.)2000,47,19—28。17.常，C-C;海勒，J.D.;郭，J.;黃，R.C.《美國國家科學學會進展》(Proc.Natl.Acad.ScLUSA)2004，101，13239-13244.18.海勒，J.D.;郭，L;吳，T.C;卡斯特，W.M.;黃，R.C.《癌症研究》(CancerRes.)2001，61,5499-5504。19.(a).帕克，R.;常，CC;梁，Y.C.;鍾，Y.;亨瑞，R.A.;林，E.;,默德，D.E.;黃，R.C.《臨床癌症研究〉XCIin.CancerRes.)，2005,11(12)，4601-4609。(b).常，CC;梁，Y.C.;庫特則，A.;胡，C.I.;林，C.F.;默德，D.E.;周，T.C.;李，Y.C.;黃R.C.網上發表於2006年3月17日，《癌症化學療法和藥理學》(CancerChemotherapyandPharmacology)。20.中村M，松尾K.,和中村E.《美國化學學會雜誌》(J.Am.Chem.Soc.)2004,126，3686。21.《化學學會雜誌》(J.Chem.Soc.)1934，142322.尼卡斯S.P.等，《AAPS雜誌》2004:6(4)文章30(http://www.aapsj.org)。權利要求1.一種丁烷橋修飾去甲二氫化愈創木酸衍生化合物(BB-N)，它具有下面的通式結構(式V)，以及它的藥學上可用的鹽其中每個X選自由-CHO、-CN、-CH2Cl、-CH2Br和-CH2F構成的組。式V2.—種組合物，包括權利要求1所述的BB-N化合物和一種藥學上可用的載體，任選地包括其它藥學上可用的賦形劑。3.—種向受治療者給藥的方法，用預防或者治療病毒感染的有效量的一又利要求1所述的BB-N化合物單獨地或者作為一種藥物組合物的一部分給藥。4.一種向受治療者給藥的方法，用預防或者治療增殖疾病的有效量的權利要求1所述的BB-N化合物單獨地或者作為一種藥物組合物的一部分給藥。5.—種向受治療者給藥的方法，用預防或者治療發炎性疾病的有效量的一又利要求1所述的BB-N化合物單獨地或者作為一種藥物組合物的一部分給藥。6.—種向受治療者給藥的方法，用預防或者治療代謝性疾病的有效量的4又利要求1所述的BB-N化合物單獨地或者作為一種藥物組合物的一部分給藥。7.—種向受治療者給藥的方法，用預防或者治療血管疾病的有效量的權利要求1所述的BB-N化合物單獨地或者作為一種藥物組合物的一部分給藥。8.—種藥劑盒，所述藥劑盒包括含有權利要求1所述的BB-N化合物的一種藥物組合物和關於它的預防性地或治療性地用於一種病毒感染、一種增殖性疾病、一種發炎性疾病、一種代謝性疾病和一種血管疾病中的至少一種的使用說明。9.一種丁烷橋修飾的四氧取代去甲二氫化愈創木酸衍生化合物(BB-Sb4N),它具有下面的通式結構(式VI),以及它的藥學上可用的鹽其中每個Z選自由H,-CH0、-CN、-CH2CH3、-CH2C1、-CH2Br和-CH2F構成的組；其中Y選自由下列基團構成的組-A-R;-(CH2)xHal，其中x是一個1到10的整數，並且Hal是一個卣原子，代表氯、氟、溴或碘的任意一種；-(CH2CH20)yH,其中y是一個1到10的整數；和一個氨基甲酸酯鍵合的基團，所述基團選自由下列基團構成的組;[TT1，義K^^2，義E!^^、T3和ltj0K^"e其中n是一個1到6的整數，L是有2-6個碳和任選地1-3個滷原子的一種飽和線性烴鏈，L是任選地包括0-3個雙鍵和任選地包括任意0、N和S中1-3個原子的一種5到7元環，和L是曱基或乙基；其中當Y是-A-R時，R是端基，且A是帶有任選的雜原子的一種線性飽和烴側鏈，該側鏈在一端通過醚鍵或氨基曱酸酯鍵鍵合在各自的羥基殘餘的0基團上，並且在另一端鍵合到端基R的一個碳或一個雜原子上；所述側鏈A選自由下面基團構成的組一種C廣d6線性飽和烴鏈，它任選地具有1-5個選自0、N和S的雜原子，並且它通過醚4建4建合到NDGA的各自羥基殘餘0基團上；以及l-5個單元的一種聚乙二醇(PEG)鏈；BB-Sb4N式VI所述端基R選自由下列基團構成的組一種5到7元碳環，所述碳環選自由下面基團構成的組有1到3個N、0或S雜原子的一種完全^fe和環；一種環，它含有用於形成一個6或7元環的1到3個雙H和用於形成一個5元環的1到2個雙4建，且所述5到7元環帶有1到3個N、0或S雜原子；包含氨基甲酸酯鍵、脲鍵、碳酸酯鍵或醯胺鍵的一種環；和一種水溶性基團，它選自由磺酸的一種鹼金屬鹽；膦酸的一種鹼金屬鹽；一種藥學上可用的鹽；一種糖和一種多羥基基團構成的組。10.—種組合物，包括片又利要求9所述的BB-Sb4N化合物和一種藥學上可用的載體，任選地包括其它藥學上可用的賦形劑。11.一種向受治療者給藥的方法，用預防或者治療病毒感染的有效量的權利要求9所述的BB-Sb4N化合物單獨地或者作為一種藥物組合物的一部分給藥。12.—種向受治療者給藥的方法，用預防或者治療增殖疾病的有效量的權利要求9所述的BB-Sb4N化合物單獨地或者作為一種藥物組合物的一部分給藥。13.—種向受治療者給藥的方法，用預防或者治療發炎性疾病的有效量的;f又利要求9所述的BB-Sb4N化合物單獨地或者作為一種藥物組合物的一部分給藥。14.一種向受治療者給藥的方法，用預防或者治療代謝性疾病的有效量的權利要求9所述的BB-Sb4N化合物單獨地或者作為一種藥物組合物的一部分給藥。15.—種向受治療者給藥的方法，用預防或者治療血管疾病的有效量的權利要求9所述的BB-Sb4N化合物單獨地或者作為一種藥物組合物的一部分給藥。16.—種藥劑盒，所述藥劑盒包括含有權利要求9所述的BB-Sb4N化合物的一種藥物組合物和關於它的預防性地或治療性地用於一種病毒感染、一種增殖性疾病、一種發炎性疾病、一種代謝性疾病和一種血管疾病中的至少一種的使用說明。全文摘要本發明涉及去甲二氫化愈創木酸衍生化合物，即丁烷橋修飾的去甲二氫化愈創木酸(NDGA)化合物和丁烷橋修飾的四氧取代NDGA化合物，也公開了含有它們的藥物組合物、它們的製備方法、以及它們和含有它們的藥劑盒的使用方法，所述使用方法用於治療疾病和紊亂，特別是那些由病毒感染如HIV感染、HPV感染、或HSV感染導致的或者與其有關的疾病、一種發炎性疾病如各種類型的關節炎和炎症性腸道疾病、代謝性疾病如糖尿病、血管疾病如高血壓和黃斑變性、或一種增殖疾病如各種類型的癌症。文檔編號A01N37/02GK101547602SQ200780044510公開日2009年9月30日申請日期2007年10月2日優先權日2006年10月2日發明者喬納森·D.·赫勒,羅西奧·A.·洛佩斯,阿曼達·瓊·莫裡斯,陳慶奇申請人:埃裡莫斯醫藥品有限公司