加壓循環培養裝置及加壓循環培養系統的製作方法

2023-08-08 05:22:11

專利名稱：加壓循環培養裝置及加壓循環培養系統的製作方法
技術領域：
本發明涉及在生物體的細胞及組織的培養中使用的培養技術，例如涉及在細胞及組織的培養研究及治療用組織等的培養中使用、對被培養物循環供給的培養液的送液、能夠進行對使用該培養液的被培養物的加壓刺激的加壓循環培養裝置及加壓循環培養系統。
背景技術：
生物體的細胞及組織的培養、以及培養對應於生物體的部位的細胞及組織的技術已實用化並被廣泛採用。關於在這樣的培養中使用的培養裝置，已知使培養液循環、使用該培養液對被培養物進行加壓的技術(例如，專利文獻1)。已知有將多個送液缸與培養柱連接而構成多對培養系統、用1個培養裝置驅動多個送液缸的技術(例如，專利文獻2)。專利文獻1 特開2001 - 238663號公報， 專利文獻2 特開2003 — 125755號公報。但是，在被培養物的培養中，需要培養液的循環供給和物理刺激。培養液的供給是用來相對於被培養物供給新鮮的培養液的送液。物理刺激是通過培養液的加壓。這樣的送液是使培養液流動，加壓通過提高封入的培養液的壓力來實現。這樣的送液和加壓儘管對象是培養液，也必須以分別完全不同的形態來實現。即，以往是以分別的機構及部位進行， 有機構變複雜的問題。此外，被培養物很少是單一的，而要求將多個被培養物同時培養、比較培養的推移及被培養物的成長過程。在這樣的情況下，需要設置多個培養裝置、在相同條件下同時培養，但在並設了不同的培養裝置的情況下，有在相同條件的設定上費時費力的問題。

發明內容
所以，本發明的加壓循環培養裝置的目的是使將對被培養物供給的培養液進行加壓使其及循環的機構簡單化。此外，本發明的加壓循環培養系統的目的是使多個被培養物的同時培養變得容
易ο為了達到上述目的，本發明的加壓循環培養裝置具備收容部、壓力傳遞部、和培養液循環路。上述收容部是積存培養液、並且收容被培養物的機構。上述壓力傳遞部與上述收容部連通，是使外部壓力向上述培養液傳遞的機構。上述培養液循環路經由上述壓力傳遞部連接在上述收容部上，是使上述培養液通過上述壓力傳遞部循環到上述收容部中的機構。在該加壓循環培養裝置中，具備這樣的結構，使外部壓力經由上述壓力傳遞部作用在上述培養液上，能夠進行相對於處於上述收容部中的上述被培養物的加壓、和上述收容部的上述培養液的循環。此外，為了達到上述目的，本發明的加壓循環培養系統構成具備已述的加壓循環培養裝置的上述收容部、上述壓力傳遞部、和上述培養液循環路的多個培養單元，具備產生相對於該培養單元的上述壓力傳遞部施加的外部壓力的加壓驅動部。在這樣的加壓循環培養系統中，使由上述加壓驅動部產生的上述外部壓力經由上述壓力傳遞部作用在上述培養液上，能夠進行相對於處於各培養單元的上述收容部中的上述被培養物的加壓、和上述收容部的上述培養液的循環。根據本發明的加壓循環培養裝置，能夠得到以下的效果。(1)能夠用簡單化的機構實現對被培養物供給的培養液的加壓和循環，能夠實現構造的簡單化及使用的容易化，能夠降低裝置成本。(2)能夠作為多個收容部同時設置，能夠經由培養液進行相對於多個被培養物的共通的加壓動作，並且培養液相對於被培養物的循環能夠按照每個收容部進行。此外，根據本發明的加壓循環培養系統，除了上述效果以外，還能夠連接多個收容部、經由培養液進行相對於多個被培養物的共通的加壓動作，培養液相對於被培養物的循環能夠按照每個收容部進行，能夠供作被培養物的許多培養及其生產、以及實驗性的比較培養。並且，本發明的其他目的、特徵及優點通過參照附圖及各實施方式會而更加清楚。


圖1是表示有關第1實施方式的加壓循環培養裝置的一例的圖； 圖2是表示有關第2實施方式的加壓循環培養裝置的一例的圖3是表示恆溫箱的貫通部的一例的圖； 圖4是表示培養部的一例的圖5是表示培養部主體與截止閥驅動部及接頭部的分離的圖6是表示壓力發生器部的一例的圖7是表示控制部的一例的圖8是表示主程序的處理次序的流程圖9是表示壓力的0調整的處理次序的流程圖10是表示壓力的0調整動作的圖11是表示加壓運轉的處理次序的流程圖12是表示加壓運轉動作的圖13是表示加壓運轉動作的圖14是表示送液處理的處理次序的流程圖15是表示送液動作的圖16是表示送液動作的圖17是表示與加壓運轉時的活塞的往復動作對應的壓力及液量的圖； 圖18是表示與送液運轉時的活塞的往復動作對應的壓力及液量的圖； 圖19是表示有關第3實施方式的加壓循環培養裝置的一例的圖； 圖20是表示有關第4實施方式的加壓循環培養系統的一例的圖； 圖21是表示送液處理的處理次序的流程圖； 圖22是表示活塞的往復動作的處理次序的流程圖；圖23是表示有關第5實施方式的加壓循環培養系統的一例的圖； 圖M是表示設置在恆溫箱的貫通部中的密封部的一例的圖。附圖標記說明
2A、2B、2C 加壓循環培養裝置，4 培養部，6 培養部主體，7 培養腔室部(收容部)，8 壓力傳遞部，9 壓力發生器部，10AU0B 加壓配管，12 恆溫箱，14 培養液，16 壓力傳遞部，18 截止閥驅動部，30、30A、30B、30C 培養迴路，34 加壓介質，72、72A、72B、72C 截止閥部，94 壓力傳遞空間部(培養液積存部)，108 加壓介質空間部(外部壓力作用部)，132 加壓驅動部，200A、200B 加壓循環培養系統。
具體實施例方式〔第1實施方式〕
第1實施方式是使收容被培養物的收容部與壓力傳遞部連通、使相對於壓力傳遞部的外部壓力傳遞給培養液的結構。關於該第1實施方式參照圖1。圖1是表示有關第1實施方式的加壓循環培養裝置的一例的圖。該加壓循環培養裝置2A是本發明的加壓循環培養裝置的一例，作為功能部而具備培養部4、培養部主體6、培養腔室部7、壓力傳遞部8、壓力發生器部9、加壓配管10A、 10B、和恆溫箱12。培養部4是與培養液14 (圖2)的供給一起、將由壓力發生器部9生成的壓力向培養腔室部7傳遞的培養機構，具備可拆裝的培養部主體6，培養部主體6具備培養腔室部7、 和壓力傳遞部8的培養液側壓力傳遞部8A。培養腔室部7是收容被培養物的收容部的一例，作為由生物體的細胞及組織構成的被培養物，例如收容細胞或由細胞和連接體構成的三維結構體等、進行細胞分化、增殖、 細胞外基質的產生等的機構，能夠如箭頭13表示那樣在壓力傳遞部8上拆裝。在該實施方式中，培養腔室部7與培養部4 一起設置在恆溫箱12中。壓力傳遞部8具備已述的培養液側壓力傳遞部8A和加壓介質側壓力傳遞部8B，例如將由壓力發生器部9生成的壓力通過加壓介質側壓力傳遞部8B從培養液側壓力傳遞部 8A傳遞給培養腔室部7。加壓介質側壓力傳遞部8B與進行培養腔室部7的開閉的截止閥驅動部18 —起通過連結部20連結。壓力發生器部9是產生相對於培養腔室部7的壓力、及用於培養液14 (圖2)的循環的壓力的壓力發生源、壓力發生機構的一例，將其壓力向加壓配管10AU0B輸出。加壓配管10AU0B是壓力傳遞管的一例，加壓配管10AU0B只要使用具備耐壓性、 耐熱性、柔性的軟管就可以，例如由耐壓軟管構成。將在壓力發生器部9中生成的壓力通過加壓配管10AU0B施加在壓力傳遞部8上。恆溫箱12是培養庫的一例，具有與外界隔斷的密閉性。在該恆溫箱12中具備用來使加壓配管10AU0B貫通的貫通部22。貫通部22具備將恆溫箱12的內外封閉的密封部。 在該實施方式中，由兩根加壓配管10AU0B構成，是將從壓力發生器部9通過加壓配管IOA 施加在壓力傳遞部8上的壓力用加壓配管IOB送回到壓力發生器部9中的結構，但也可以代替這樣的結構而由單一的加壓配管10構成。
具備這樣的結構，將由壓力發生器部9生成的壓力從加壓配管10AU0B向壓力傳遞部8施加，從該壓力傳遞部8向處於培養腔室部7中的被培養物施加。此外，培養液受到施加在壓力傳遞部8上的壓力，能夠循環到培養腔室部7中。〔第2實施方式〕
第2實施方式公開了將有關第1實施方式的已述的功能部具體化的結構例。關於該第2實施方式參照圖2。圖2是表示有關第2實施方式的加壓循環培養裝置的一例的圖。在圖2中，對於與圖1相同的部分賦予相同的附圖標記。在該加壓循環培養裝置2B中，作為由收容被培養物62 (圖4)的培養腔室部7、作為培養液循環路的一例的培養液配管24A、24B、培養液積存部沈構成的封閉系統的培養迴路30的培養單元而具備培養部4。在此情況下，培養部主體6也構成能夠拆裝的單元。培養迴路30被培養液14充滿，培養腔室部7與壓力傳遞部8連接，設置在恆溫箱12內。通過壓力傳遞部8與壓力發生器9由加壓配管(例如耐壓軟管)10A、IOB連接而形成加壓迴路 52，該加壓迴路52被加壓介質(水等)34充滿。加壓配管IOB例如經由埠部156連接在加壓介質側壓力傳遞部8B上。加壓水堵塞閥36設置在壓力發生器部9 一側，但也可以設置在恆溫箱12 —側、做成不使加壓介質34向壓力發生器部9返回的結構。培養迴路30、截止閥驅動部18和壓力傳遞部8設置在恆溫箱12內，加壓配管10A、 IOB和截止閥驅動用配線32貫通恆溫箱12的貫通部22。該貫通部22進行密封處理，使恆溫箱12的氮、碳酸氣體的消耗成為最小限度。所以，在培養部4上經由培養液配管24A、24B連接有培養液積存部沈，從該培養液積存部沈經由培養液配管24A注入培養液14。培養部主體6連結在培養液排出部觀上， 循環到培養部主體6中的培養液14從培養液排出部觀經由培養液配管24B回到培養液積存部沈中。這樣，作為使培養液14循環而培養培養部主體6內的被培養物的迴路而構成培養迴路30。在此情況下，也可以做成使在培養部主體6中循環的培養液14不向培養液積存部沈返回而向培養液積存部沈以外排出的結構。在截止閥驅動部18上連接著截止閥驅動用配線32，該截止閥驅動用配線32經由貫通部22被導出到恆溫箱12的外部，連接在壓力發生器部9 一側。截止閥驅動部18是將截止閥在加壓時向「閉」驅動、在培養液14的循環時向「開」驅動的驅動機構。為了使驅動機構的發熱成為最小限度，優選的是設為在不通電時為「閉」的常閉。在該實施方式中，在壓力發生器部9中內置有截止閥驅動部18的控制機構。恆溫箱12構成實現適合於被培養物的培養的最優環境的最優環境室，設定為最優的氧濃度、碳酸氣體濃度、溫度及溼度。壓力發生器部9使用加壓水等的加壓介質34將產生的壓力經由加壓配管10AU0B 作用在壓力傳遞部8上。所以，在壓力發生器部9上連接著加壓水堵塞閥36、38。這些加壓水堵塞閥36、38是配置在加壓介質34的注入口和排出口，將注入的加壓介質34封閉的機構。使用作為將加壓水堵塞閥36、38打開、經由魯爾連接器42等連接到軟管40上的吸引機構的注射器44，將容器46內的加壓介質34經由軟管48導入到壓力發生器部9中、再導入到加壓配管10AU0B中。箭頭50表示將加壓介質34吸入時的注射器44的活塞的移動方向。所以，由壓力發生器部9、加壓配管10AU0B及壓力傳遞部8構成加壓迴路52。這部分是不需要無菌性的部分。
在壓力發生器部9上，設置有將輸入信息及輸出信息在視覺上顯示的顯示部M。貫通部22例如圖3所示，設置有將恆溫箱12的主體側與門側分隔的門襯56，在該門襯56上設有加壓配管10A、IOB的貫通部58A、58B，和將截止閥驅動用配線32貫通的貫通部58C等。貫通部58A、58B、58C只要形成在設在門襯56上的貫通部密封體上就可以。接著，關於培養部4參照圖4。圖4是表示培養部的一例的圖。在圖4中，對於與圖1及圖2相同的部分賦予相同的附圖標記。在該培養部4中具備培養部主體6，該培養部主體6例如由不鏽鋼等不呈現生物體毒性的耐腐食性材料形成。在該培養部主體6中具備培養腔室部7和壓力傳遞部8。培養部主體6是能夠被傳遞壓力的耐壓容器，安裝著密封蓋88、壓力傳遞膜104、 截止閥部72的閥部82，具備作為培養液積存部沈的培養液袋、由矽管等的培養液配管 24A、24B構成的培養液14的培養迴路30，構成密閉的封閉系統培養迴路。在培養腔室部7中形成有收容被培養物62的收容空間部64，該收容空間部64是圓筒形。在該收容空間部64中，沿直徑方向形成有通路部66、68，通路部66連通到壓力傳遞部8，並且通路部68連通在培養液配管24B上。培養腔室部7和密閉蓋88通過密封件 89密封。收容空間部64作為被培養物62而收容細胞或由細胞和連接體構成的三維結構體等，是進行細胞分化、增殖、細胞外基質的產生等的部分。在培養時，將培養腔室部7設置到調節了溫度、氧濃度、碳酸氣體濃度等的環境的恆溫箱12或恆溫槽中。在培養變溫動物的細胞時等，也有不使用恆溫箱12的情況。在通路部68 —側具備止回閥70及截止閥部72。止回閥70構成將從作為收容部的培養腔室7的收容空間部64排出的培養液14的循環封閉而阻止倒流的第2閥。止回閥 70設置在培養腔室7的下遊側的培養液出口處，由球閥74和彈簧76構成。在球閥74上作用著處於壓縮狀態的彈簧76的復原力，為了使培養液14流到通路部68中，需要勝過彈簧 76的推壓力的液壓。該止回閥70也可以不一定設置。截止閥部72具備通到通路部68的閥室78、突出到該閥室78中的圓錐臺狀的閥座部80、和由抵接在該閥座部80上的由彈性體構成的閥部82。在該閥部82上安裝著截止閥驅動部18具備的柱塞84。截止閥驅動部18受到電信號而使柱塞84進退，將閥座部80和閥部82開閉。在閥室78的培養液排出部觀上連接著培養液配管MB，當截止閥部72打開時，培養液14能夠從閥室78向培養液配管24B —側流出。在培養腔室部7上設置有可開閉的密封蓋88，維持培養迴路30的密封狀態。此外，在該培養腔室部7的底面部形成有觀察窗90，該觀察窗90由透明部件封閉。觀察窗90 是用來在加壓中或將加壓暫時中斷而觀察內部的細胞等的狀態的小窗，由石英、人工藍寶石等能夠充分承受壓力、變形較小、透明而不給顯微鏡觀察帶來不良影響的材料構成。在該觀察窗90上例如設置有顯微鏡接眼透鏡92，能夠從外部監視被培養物62的狀況。密封蓋 88是將收容空間部64關閉的蓋，為了顯微鏡觀察而優選的是由能夠向培養腔室部7導光的透明的部件構成。此外，在壓力傳遞部8中形成有積存培養液14、將壓力向培養液14傳遞的作為培養液積存部的壓力傳遞空間部94，該壓力傳遞空間部94是扁平的筒形。在該壓力傳遞空間部94中，在直徑方向上形成有已述的通路部66和通路部96。該通路部96具備止回閥98，連接著培養液配管24A。該止回閥98構成將培養液14的循環封閉、阻止培養液14從壓力傳遞空間部94向培養液配管24A倒流的第1閥，安裝在壓力傳遞部8的上遊側的培養液入口處，由球閥100和彈簧102構成。在球閥100上作用著處於壓縮狀態的彈簧102的復原力，為了使培養液14流到通路部96中，需要勝過彈簧102的推壓力的液壓。在該壓力傳遞部8上設置有將壓力傳遞空間部94關閉的壓力傳遞膜104，並且在該壓力傳遞膜104與接頭部106之間形成有加壓介質空間部108。該加壓介質空間部108 是使壓力從恆溫箱12的外部經由壓力傳遞介質作用的外部壓力作用部的一例。壓力傳遞膜104是將外部壓力向培養液14傳遞的壓力傳遞膜的一例，是將培養腔室部7及壓力傳遞空間部94密閉、將來自壓力發生器部9的壓力向收容空間部64傳遞的功能部。該壓力傳遞膜104隻要使用較薄的彈性體的膜、或塑料膜等就可以。該壓力傳遞膜104如果是柔軟到在安裝狀態下能夠忽視張力的程度的狀態，則壓力幾乎不變化地傳遞給壓力傳遞空間部 94。由壓力傳遞膜104分隔的壓力傳遞空間部94的壓力向收容空間部64傳遞。即使有因壓力差而發生張力那樣的情況，也只要設定成能夠在培養程序中忽視就可以。接頭部106是將由壓力發生器部9生成的壓力向培養腔室部7傳遞的機構，可相對於培養部主體6拆裝。壓力傳遞空間部94和加壓介質空間部108經由壓力傳遞膜104 相接。接頭部106是將加壓介質空間部108堵塞的堵塞機構，並且是使來自加壓配管10A、 IOB的壓力作用在壓力傳遞膜104上的機構。該接頭部106與培養腔室部7嵌合，將由壓力發生器部9生成的壓力向培養腔室部7傳遞。在此情況下，加壓配管10A、IOB只要使用內徑5 (mm)以下左右的有柔性的耐壓軟管就可以。如果使管變細，則空氣不會在中途停止， 並且耐壓性提高。在接頭部106的埠部110、112上連接著加壓配管10A、10B。在該接頭部106上，形成有插入到加壓介質空間部108中的插入部114，在該插入部114上設有用來維持與加壓介質空間部108的氣密性的密封體116。該密封體116保持接頭部106與壓力傳遞部8的連接部的氣密性而能夠進行壓力傳遞。加壓介質空間部108是當嵌合壓力傳遞部8時出現的空間部。該部分被加壓介質 34充滿。為了儘量減少空氣的殘留，使間隙為最小限度(4〔mm〕以下)，容易將空氣趕出，使得空氣不會殘留。該部分的壓力通過壓力傳遞膜104傳遞給壓力傳遞空間部94。該部分由於內部與培養液14及細胞組織相接，所以要求無菌性。在這樣的結構的培養部4中，如圖5所示，可以根據需要而使培養部主體6與接頭部106及截止閥驅動部18分離或合體。另外，止回閥70，98由於是用來防止培養液14的倒流的機構，所以既可以使用例如能夠防止倒流的電磁閥，也可以使用所謂的單向閥，也可以同時使用。在培養時，用培養液出口側的截止閥驅動部18將截止閥部72開閉。接著，關於壓力發生器部9參照圖6。圖6是表示壓力發生器部的一例的圖。在圖 6中，對於與圖1、圖2、圖4相同的部分賦予相同的附圖標記。壓力發生器部9是用來根據設定的壓力值及培養液的循環量進行動作的驅動源。 在該壓力發生器部9中具備加壓裝置118和控制部120。在加壓裝置118中，作為壓力容器而設置有壓力缸122，該壓力缸122收容加壓介質34，保持通過活塞1 的動作發生的壓力，向壓力傳遞部8傳遞該壓力。在該壓力缸122上形成有埠部124、126，具備活塞128。 活塞1 將作為壓力容器的壓力缸122的加壓介質34壓縮，將壓力缸122加壓或減壓，在培養液14的循環時也起到泵的作用。加壓介質34隻要是水、油等流體就可以。在埠部1 上連接著加壓配管10A，在埠部1 上連接著軟管40。加壓配管10AU0B是用來將壓力缸122內的壓力向培養腔室部7傳遞的配管，是有耐壓性且柔軟的管，是用來充滿加壓介質34的管。在活塞1 上經由彈簧130連結著加壓驅動部132。加壓驅動部132是使活塞 128進退的驅動機構，從控制部120接受控制輸出，產生使活塞128向壓力缸122的加壓方向移動的驅動力、和使活塞128向壓力缸122的減壓方向移動的驅動力。彈簧130相對於加壓方向的驅動力被壓縮而產生抵抗力，在減壓方向的驅動力作用下壓縮被解除。即，彈簧130被壓縮時的抵抗力經由活塞1 而作為壓力傳遞給壓力缸 122內的加壓介質。箭頭m表示彈簧130的壓縮量，箭頭η表示活塞128的移動量。加壓驅動部132具備步進馬達等驅動裝置，使彈簧130壓縮。通過具備彈簧130，馬達等的動作範圍擴大，容易控制壓力，精度也提高。也可以代替該彈簧130而使用能夠進行輸出調節的伺服馬達等進行加壓驅動部132的輸出調節，調節活塞128的推壓力。關於該彈簧130，由於其壓縮量與壓縮力、即傳遞給流體的壓力成比例，所以容易控制壓力。在以血壓水平的較低的壓力進行加壓循環培養的情況下，將在尺寸上有互換性的最大測量壓力較低的壓力傳感器和在尺寸上有互換性的彈簧常數較小的彈簧成組更換。 例如將滿刻度為1〔MPa〕的壓力傳感器134變更為100〔kPa〕的傳感器，將彈簧變更為彈簧常數為1/10的彈簧。在此情況下，只要使顯示值的讀值設為1/10就可以(例如，0. 5 (MPa) 的顯示改讀為50〔kPa〕)。或者，也可以從輸入部142輸入正在使用低壓用零件的情況、通過對應於此的運算程序顯示正確的壓力顯示。也可以使用能夠進行轉矩調節的伺服馬達， 做成將彈簧省去的結構。在壓力缸122上設置有已述的壓力傳感器134，將其檢測壓力值傳遞給控制部 120。壓力傳感器134感應壓力缸122內的壓力。在靜止流體中，由於在連續的地方的哪裡壓力都相等，所以壓力缸122的壓力與培養腔室部7內的壓力相等，通過壓力缸122的壓力計測，能夠不與培養液14接觸而間接地得知培養腔室部7內的壓力。壓力傳感器134隻要根據施加的壓力選擇就可以。在相鄰於壓力缸122的位置處設置有加壓配管部135，在該加壓配管部135的一個埠部136連接著加壓配管10B，在另一個埠部138連接著軟管40。控制部120從驅動電源140供電，並且從輸入部142輸入(動作)設定值，產生已述的加壓驅動部132的控制輸出，並且產生相對於截止閥驅動部18A、18B、18C的控制輸出。 即，控制部120是按照設定輸入一邊感應壓力一邊控制運轉的機構。設想在該實施方式的壓力發生器部9中並列設置多個培養部4的情況，能夠產生相對於多個截止閥驅動部18A、 18BU8C的控制輸出。該控制部120中從輸入部142施加設定輸入，此外，能夠得到相對於顯示部M的顯示輸出。從輸入部142輸入例如壓力的強度、壓力的周期、培養液的循環量等設定信息。在顯示部M上顯示輸入值及加壓動作中的壓力值等輸入輸出信息。控制部120例如圖7所示，具備CPU (Central Processing Unit )144、輸入輸出部(1/0)146、存儲部148、和計時器部149。CPU144通過OS (Operating System)及培養程序的執行，進行用於培養處理的各種功能部的控制及數據的讀取及讀出。1/0146用於來自輸入部142的輸入數據的取入、及相對於顯示部M的顯示數據的輸出等。存儲部148是程序及數據等的記錄介質，具備程序存儲部150、數據存儲部152、 和RAM (Random 一 Access Memory) 154。程序存儲部150由記錄介質構成，在該程序存儲部150中，除了 OS以外，還保存有培養程序、加壓循環培養控制程序等的固件及各種應用軟體。RAMlM用於程序處理。此外，計時器部149是計時機構的一例，在加壓動作中的經過時間的計測、及用來計算每單位時間的加壓動作的時間計測等中使用。接著，關於培養處理參照圖8。圖8是表示主程序的處理次序的流程圖。在該培養處理的主程序中，如圖8所示，通過電源的接通執行初始設定(步驟 S11)。該初始設定進行控制部120的1/0146的初始化及各種初始值的設置等。如果初始設定完成，則進行有無動作設定的判斷(步驟S12)。在該動作設定中，判斷有無由輸入部142進行動作設定的模式的選擇，在進行動作設定的情況下(步驟S12的 「是」)，能夠進行各種設定的變更(步驟S13)。在能夠設定或變更的項目中，包括最高壓力 (Pmax)、最高壓力持續時間(Pmax時間)、最低壓力(Riiin)、最低壓力持續時間(Riiin時間)、 加壓運轉時的Pmax和Rnin的重複次數(加壓運轉內循環數)、加壓運轉和送液動作的重複次數(加壓、送液循環數)、送液量的設定等。最高壓力(Pmax)是從壓力發生器部9對培養腔室部7施加的最大壓力，最高壓力持續時間(Pmax時間)是其持續時間。最低壓力(Rnin)是從壓力發生器部9對培養腔室部 7施加的最小壓力，最低壓力持續時間(Riiin時間)是其持續時間。加壓運轉時的Pmax和 Pmin的重複次數(加壓運轉內循環數)表示加壓運轉時的壓力變化的次數。加壓運轉和送液動作的重複次數(加壓、送液循環數)表示每單位時間的次數。此外，送液量是循環到培養腔室部7中的培養液14的每1次的送液量。如果完成該動作設定，則回到步驟S12，再次進行動作設定的判斷(步驟S12)。如果沒有動作設定(步驟S12的「否」)，則判斷運轉開始的指示(步驟S14)。如果從輸入部142 指示運轉開始(步驟S14的「是」)，則進行壓力的0調整(步驟S15)。在0調整的完成後，轉移到加壓運轉(步驟S16)，進行送液動作(步驟S17)。交替地進行加壓運轉和送液動作，監視加壓、送液循環是否結束(步驟S18)。此外，也可以在加壓、 送液循環的中途進行壓力的0調整。在該步驟S18中，判斷加壓、送液循環數是否達到了規定數，如果使加壓運轉和送液動作持續直到達到規定數，則在加壓、送液循環數達到規定數的情況下(步驟S18的「是」)，回到步驟S12。加壓、送液循環的結束也可以代替步驟S18而由使用者進行運轉停止。接著，關於壓力的0調整參照圖9及圖10。圖9是表示壓力的0調整的處理次序的流程圖，圖10是表示0調動作的圖。該處理次序是主程序的步驟S15 (圖8)的處理次序。在該處理次序中，如圖10所示，在截止閥部72的開放狀態下，將施加在被培養物62上的壓力作為基準壓力I^ref，將其設為I^ref =O0所以，將該截止閥部72開放(步驟S151 )，驅動加壓驅動部132而使活塞1 作為規定位置而成為0調位置(步驟S152)。在該時點，也可以用注射器44將加壓配管10A、 IOB中的加壓介質34調整成壓力傳遞膜104成為水平或大致水平。進行這樣的調整，判斷壓力傳感器Π4的值是否穩定(步驟S153)。如果壓力傳感器134的壓力穩定(步驟S153的 「是」)，則將此時的壓力傳感器134的壓力值作為基準壓力Pref，設為I^ref =0而存儲，將截止閥部72關閉(步驟S1M)，回到主程序中。接著，關於加壓運轉參照圖11、圖12及圖13。圖11是表示加壓運轉的處理次序的流程圖，圖12是表示最高壓力的加壓動作的圖，圖13是表示最低壓力的加壓動作的圖。該處理次序是主程序的步驟S16 (圖8)的處理次序。在該加壓運轉的處理次序中，如圖12所示，將截止閥部72關閉(步驟S161)，作為壓力傳感器134的檢測值的目標值而設置加壓的最高壓力(Pmax)(步驟S162)。通過加壓運轉的開始，由壓力傳感器134監視壓力(步驟S163)。如果壓力傳感器 134的檢測值比作為目標值的最高壓力(Pmax)小(步驟S163的「是」)，則通過加壓驅動部 132將活塞128向加壓方向驅動(步驟S164)。如果壓力傳感器134的檢測值不比目標值(Pmax)小(步驟S163的「否」)，則判斷壓力傳感器134的檢測值是否比目標值大(步驟S165)。如果壓力傳感器134的檢測值比目標值大(步驟S165的「是」)，則通過加壓驅動部132將活塞128向減壓方向驅動(步驟S166)。 此外，如果壓力傳感器134的檢測值不比目標值大(步驟S165的「否」)，則通過加壓驅動部 132將活塞128的驅動停止(步驟S167)。監視最高壓力持續時間(Pmax時間)的經過(步驟S168)，控制成壓力傳感器134的檢測值維持為最高壓力(Pmax)(步驟S169)。如果經過最高壓力持續時間(Pmax時間)(步驟S168的「是」)，則對壓力傳感器134 的檢測值的目標值設置加壓的最低壓力(Riiin)(步驟S169)。在該最低壓力的設定後，通過壓力傳感器134監視該壓力(步驟S170)。如圖13所示，如果壓力傳感器134的檢測值比作為目標值的最低壓力(Rnin)小(步驟S170的「是」S)， 則通過加壓驅動部132將活塞128向加壓方向驅動(步驟S171)。如果壓力傳感器134的檢測值不比目標值(Rnin)小(步驟S170的「否」)，則判斷壓力傳感器134的檢測值是否比目標值大(步驟S172)。如果壓力傳感器134的檢測值比目標值大(步驟S172的「是」)，通過加壓驅動部132將活塞128向減壓方向驅動(步驟S173)。 此外，如果壓力傳感器134的檢測值不比目標值大(步驟S172的「否」)，則通過加壓驅動部 132將活塞128的驅動停止(步驟S174)。監視最低壓力持續時間(Riiin時間)的經過(步驟S175)，控制成壓力傳感器134的檢測值維持為最低壓力(Riiin)(步驟S175)。監視加壓動作是否達到規定次數(步驟S176)。即，重複加壓動作直到成為加壓運轉時的Pmax和Rnin的重複次數(加壓運轉內循環數)，在達到規定次數(步驟S176的「是」) 後，將活塞128的位置移動到進行0調的位置(步驟S177)，結束該處理。另外，在該實施方式中，在加壓及減壓時監視每次壓力值，但也可以連續地進行加壓和減壓、定期地進行壓力的監視，此外，加壓方法並不限定於上述實施方式的樣式。接著，關於送液動作參照圖14、圖15及圖16。圖14是表示送液處理的處理次序的流程圖，圖15是表示培養液的壓出狀態的圖，圖16是表示培養液的吸入狀態的圖。該處理次序是主程序的步驟S17 (圖8)的處理次序。該送液動作相對於進行送液的培養迴路30在將截止閥部72打開的狀態下通過由活塞1 的往復動作進行的加壓及減壓來實現培養液14的送液。S卩，活塞128的往復動作通過以活塞0調位置為基準僅壓入規定量L、再次回到0調位置的控制來實現。由此，通過第1閥的開放狀態及第2閥的封閉狀態，將培養液14用外部壓力吸入到收容部及壓力傳遞部中。此外，通過第1閥的封閉狀態及第2閥的開放狀態，能夠用外部壓力使培養液14從收容部及壓力傳遞部流出。
在該處理次序中，如圖14所示，將截止閥部72維持為開狀態(步驟S181)，進行活塞128的往復動作。在該往復動作中，如圖15所示，通過將活塞1 僅移動規定量L(步驟 S182)，將加壓介質34壓出，由此，截止閥部72打開的培養迴路30的壓力傳遞膜104如虛線所示那樣向壓力傳遞空間部94 一側膨脹突出。培養液14僅從截止閥部72壓出該突出量的容積。培養液14由於有作為第1閥的止回閥98，所以不會倒流。此外，如圖16所示，如果使活塞1 回到0調位置(步驟S183)，則隆出到壓力傳遞空間部94中的壓力傳遞膜104如虛線所示那樣回到原來的位置，培養液14僅從止回閥98 一側進入到壓力傳遞空間部94中該返回的容積。在此情況下，作為第2閥的止回閥70阻止培養液14的流出，但在沒有設置止回閥70的情況下，只要將截止閥部72關閉就可以。重複活塞128的往復運動直到規定的送液結束，判斷規定量的送液是否完成(步驟S184)，當規定量的送液完成時，結束該處理，回到主程序(圖8)。另外，培養液14的送液量只要由輸入部142任意地設定就可以，此外，也可以根據培養迴路30而變化。接著，關於加壓運轉及送液運轉參照圖17及圖18。圖17是表示加壓運轉時的彈簧的伸縮及壓力的圖，圖18是表示送液運轉時的活塞的進退及壓力的圖。在加壓運轉時，如圖17的A所示，活塞1 重複從0調位置前進到最高壓力位置並僅維持規定時間、通過其時間經過而從最高壓力位置後退到最低壓力位置並僅維持規定時間、通過其時間經過而從最低壓力位置朝向最高壓力位置前進的進退移動。通過該活塞128 的進退，如圖17的B所示，通過加壓介質34對培養液14從0調位置或最低壓力(Rnin)轉移到最高壓力(Pmax)而維持最高壓力(Pmax)後，從最高壓力(Pmax)下降到最低壓力(Riiin)， 將最低壓力(Pmin)僅維持規定時間，這樣的最高壓力和最低壓力交替地作用。該壓力變動通過培養液14相對於被培養物62作用。此時，液量發生對應於活塞128的移動量的變動。 另外，在圖17中，TPmax是自從最低壓力或0調位置向最高壓力上升的時點起至持續最高壓力的時間、從最高壓力向最低壓力切換的時點為止的時間，TPmin是自從最高壓力向最低壓力下降的時點起至持續最低壓力的時間、從最低壓力向最高壓力上升的時點為止的時間。此外，在送液運轉時，如圖18的A所示，使活塞1 在規定量L的位置和0調位置之間交替重複地進退移動，相對於該活塞1 的進退，由於截止閥部72是打開的，所以如圖 18的B所示，培養液14的壓力基本上為0。相對於壓力傳遞膜104相對於該活塞128的進退移動的前後運動，容積的變動產生培養液14的壓出和吸入，在培養腔室部7中發生培養液14的送液。〔第3實施方式〕
第3實施方式公開了與上述實施方式不同的加壓配管的結構。在第1及第2實施方式中，由多個加壓配管10AU0B構成，但也可以由單一的加壓配管IOA構成。該加壓循環培養裝置2C如圖19所示，做成了用單一的加壓配管IOA連結培養部 4與壓力發生器部9、在連接著加壓配管IOB的埠部156上經由已述的軟管40連接注射器44、在軟管40的中途部具備加壓水堵塞閥36的結構。通過這樣的結構，也能夠與上述實施方式同樣進行加壓動作及送液動作。在圖19 中，對於與圖2相同的部分賦予相同的附圖標記而省略其說明。〔第4實施方式〕第4實施方式同時設置多個加壓循環培養裝置，構成能夠進行多培養的加壓循環培養系統。關於該第4實施方式參照圖20。圖20是表示有關第4實施方式的加壓循環培養系統的一例的圖。在圖20中，對於與圖2相同的部分賦予相同的附圖標記。在該加壓循環培養系統200A中，作為加壓循環培養裝置，通過3組培養部4A、4B、 4C構成培養迴路30A、30B、30C、並且相對於這些培養迴路30A 30C用單一的壓力發生器部9進行加壓、送液。所以，做成使用配管160、162將培養部4A 4C串聯、並且在串聯的培養部4A — 側連接加壓配管10A、在培養部4C 一側連接加壓配管10B、用單一的壓力發生器部9進行加壓及送液的結構。在此情況下，相對於壓力發生器部9的1臺能夠將多組培養腔室部7與壓力傳遞部8連接。具有多組培養部的加壓迴路52由連接到壓力發生器部9的供水部上的軟管48、 加壓水堵塞閥38、壓力缸122、加壓配管10A、串聯連接的3個培養部4A 4C、加壓配管10B、 壓力發生器部9的排水部的加壓水堵塞閥36、軟管40形成。並且，各培養腔室部7形成分別獨立的培養迴路30A、30B、30C。各截止閥驅動用配線32連接到與壓力發生器部9的3個各自的輸出端子164相對應的截止閥驅動部18A、18B、18C (圖6)上，只要分別進行截止閥部72A、72B、72C的開閉就可以。各培養迴路30A 30C是獨立的迴路，所以能夠按照培養迴路30A 30C對細胞、培養液、連接體、成長因子等賦予差異而同時培養。此外，壓力的強度及樣式在3個迴路中都能夠施加相同的壓力。在培養液14的循環動作中，為了避免在流到培養迴路30A、30B、30C中的培養液量中發生不均勻，只要1個個迴路流過就可以。也可以由控制部120進行各培養迴路30A、30B、 30C的培養液14的流量設定，通過與其對應的控制，能夠分別流過各培養迴路30A、30B、30C
的流量。根據這樣的結構，同時設置多個培養腔室部7、分別收容不同的被培養物62，既可以同時在多個條件下培養，也可以在在相同條件下培養，處理的主程序(圖8)是已述那樣的。接著，關於該加壓循環培養系統200A的送液處理參照圖21。圖21是表示送液處理的處理次序的流程圖。該處理次序如已述那樣，是具備培養迴路30A、30B、30C的情況下的處理次序。在多個培養迴路30A、30B、30C的送液中，相對於各培養迴路30A、30B、30C設定順序而進行送液動作。作為送液的對象的培養迴路30A、30B、30C的某1個在將作為其對象的截止閥部 72A、72B、72C的某個打開的狀態下進行活塞128的往復動作，進行培養液14的送液。在此情況下，活塞128的往復動作通過以活塞128的0調位置為基準僅壓入規定量L、再回到0 調位置的控制來實現。所以，在該處理次序中，如果設為以培養迴路30A、30B、30C的順序進行送液動作， 則將截止閥部72A打開、將其他截止閥部72B、72C關閉(步驟S201 )，進行活塞1 的往復動作(步驟S202)，接著，將截止閥部72B打開、將其他截止閥部72C、72A關閉(步驟S203)，進行活塞128的往復動作(步驟S204)，接著，將截止閥部72C打開、將其他截止閥部72A、72B 關閉(步驟S205)，進行活塞128的往復動作(步驟S206)，回到主程序(圖8)。
在該處理次序中，在活塞128的往復動作中，如圖22所示，如果將活塞1 僅移動規定量L (步驟S211)，則將加壓介質34壓出，截止閥部72A打開的培養迴路30A的壓力傳遞膜104相應地隆出到壓力傳遞空間部94中。由此，將培養液14從截止閥部72A壓出。止回閥98阻止培養液14的倒流。如果使活塞128回到0調位置(步驟S212)，則隆出到壓力傳遞空間部94 一側的壓力傳遞膜104向原來的位置返回，培養液14相應地從止回閥98 — 側向壓力傳遞空間部94進入。由於在截止閥部72A—側有止回閥70，所以不會流出。重複該往復運動直到規定的送液結束(步驟S213)，將規定量的培養液14送液。針對截止閥部72A說明了該活塞1 的往復動作產生的送液，但針對截止閥部72B 一側的培養迴路30B、截止閥部72C —側的培養迴路30C也是同樣的。〔第5實施方式〕
第5實施方式公開了不同的加壓配管的結構。在第4實施方式中，由多個加壓配管10A、 IOB構成，但也可以由單一的加壓配管IOA構成。在該加壓循環培養系統200B中，如圖23所示，與第3實施方式(圖19)同樣，也可以做成用單一的加壓配管IOA連結培養部4與壓力發生器部9、在連接著加壓配管IOB的埠部156上經由已述的管40連接注射器44、在管40的中途部具備加壓水堵塞閥36的結構。通過這樣的結構也能夠與上述實施方式同樣進行加壓動作及送液動作。在圖23 中，對於與圖2相同的部分賦予相同的附圖標記而省略其說明。〔上述實施方式的特徵事項及其他實施方式〕
(1)能夠在保持培養部4的密閉性的同時、將培養部4與壓力發生器部9分離。(2)通過截止閥部72 (72A、72B、72C)的開閉和壓力發生器部9的加壓動作，能夠進行培養液14的相對於被培養物62的加壓、和培養液14的送液。(3)培養部4及壓力發生器部9的驅動控制能夠在1處進行。(4)與以往的裝置相比使構造簡單化，所以容易處理，能夠降低裝置自身的成本。(5)能夠進行多個培養部的連接，此外能夠相對於各培養部進行相同的加壓動作。(6)能夠利用已有的恆溫箱、進行溫度、氣體濃度等的環境設定。(7)在處理細胞等的實驗中，即使使用相同的細胞，如果實驗開始時間等不同，則有不能取得再現性的情況，在此情況下，也能夠臨時設定各種的條件而進行培養實驗，也能夠得到可靠性較高的結果。因而，能夠減少實驗次數，實現培養成本的降低。即，能夠通過 1個培養系統同時進行比較實驗及多個種類的細胞培養實驗的比較等。(8)能夠同時培養多個培養系統，在同時進行多個培養的情況下，必須維持無菌的部分僅是培養迴路30就可以，能夠與不需要無菌的加壓迴路52分離，並且是簡單的構造。(9)壓力傳遞空間部94與被培養物62的收容空間部64相鄰，用有柔性的膜狀的壓力傳遞膜104分隔，在壓力傳遞膜104的外側連接著壓力傳遞部，構成少量的加壓介質空間部108，將它們設置在培養部主體6上，實現了構造的簡單化。(10)形成封閉系統的密閉迴路，安全性較高，培養時的周圍環境不要求高度的清潔度。能夠實現簡單而高精度的培養。(11)也可以將培養部主體6取出到恆溫箱12外而進行顯微鏡觀察，也可以在恆溫箱12內放入顯微鏡而遠程觀察。由於培養系統是封閉系統，所以培養液14的蒸發較少，如果不持續長期，即使不加溼也沒有問題，所以不會給顯微鏡帶來不良影響。(12)培養部主體6分別形成單獨的培養迴路30，與壓力傳遞部8連結。壓力傳遞膜104用有柔性的膜將加壓介質34與培養液14隔絕，但由於壓力幾乎沒有阻力地傳遞，所以壓力的傳遞效率較好，壓力損失較少。(13)能夠由1臺的壓力發生器部9 (母機)進行多個培養部主體6 (子機)內的培養。能夠通過截止閥部72的開閉切換加壓及培養液循環，能夠用1個裝置兼具備加壓和循環的兩個功能。(14)通過將配管和配線穿通到恆溫箱12的主體和門的接縫中，所以容易將培養部4設置到恆溫箱12中。並且，在培養部4向恆溫箱12設置時，由於貫通部22被密封，所以能夠保持恆溫箱12的氣密性。(15)通過使用的彈簧130和壓力傳感器134能夠選擇壓力的範圍，能夠容易地進行高、低的壓力的切換。(16)通過將截止閥部72打開而將內部的壓力向大氣壓開放，能夠以該壓力為基準而將壓力傳感器134校準。在此情況下，將壓力傳感器134的相對壓力校準為「0」 (大氣壓)。即使培養液積存部26的高度上下變動，即使壓力傳遞膜104受到張力，也能夠將作為大氣壓的培養腔室部7內控制為壓力「0」。(17)只要做成每一定時間檢查壓力、在不能調節的情況下發出警報的結構就可以。(18)在使用多個培養迴路30的情況下，送液只要按照每個迴路依次進行就可以， 但也可以一次依次進行多個迴路，也可以根據送液的次序而1個個迴路進行送液。(19)在送液後，有培養液14的更換，所以只要在該時點也進行壓力的校準，就能夠始終以正確的壓力進行加壓實驗。(20)培養腔室部7及培養迴路30由於保持封閉系統而是安全的，只要僅在將被培養物62取出時為清潔環境就可以。(21)在上述實施方式中，在圖3中對貫通部22進行了例示，但為了將門襯56的密封進一步強化，如圖對所示，也可以做成設置密封部202、使加壓配管10A、10B、截止閥驅動用配線32貫通到該密封部202中的結構。如以上所說明的那樣，對本發明的最優選的實施方式等進行了說明，但本發明並不限定於上述記載，本領域的技術人員當然可以基於權利要求書中記載、或說明書中公開的發明的主旨而進行各種變形及變更，這樣的變形及變更當然包含在本發明的範圍中。本發明的加壓循環培養裝置及加壓循環培養系統能夠簡單化的結構實現相對於被培養物的加壓刺激和培養液的送液用，並且能夠廣泛地用在精度較高的培養實驗及組織培養中，具有實用性。
權利要求
1.一種加壓循環培養裝置，其特徵在於，具備收容部，積存培養液，並且收容被培養物；壓力傳遞部，與上述收容部連通，使外部壓力向上述培養液傳遞；以及培養液循環路，經由上述壓力傳遞部連接在上述收容部上， 使上述培養液通過上述壓力傳遞部循環到上述收容部中；使外部壓力經由上述壓力傳遞部作用在上述培養液上，能夠進行相對於處於上述收容部中的上述被培養物的加壓、和上述收容部的上述培養液的循環。
2.如權利要求1所述的加壓循環培養裝置，其特徵在於，還具備經由加壓迴路連接在上述壓力傳遞部上的壓力發生源，將由該壓力發生源產生的上述外部壓力通過上述加壓迴路向上述壓力傳遞部供給。
3.如權利要求1或2所述的加壓循環培養裝置，其特徵在於，還具備第1閥，設置在上述培養液循環路上中，在上述壓力傳遞部的上遊側將上述培養液的循環封閉；以及第2閥，設置在上述培養液循環路中，在上述收容部的下遊側將上述培養液的循環封閉；上述收容部的上述被培養物通過上述培養液承受作用在上述壓力傳遞部上的外部壓力；此外，上述收容部及上述壓力傳遞部的上述培養液在上述第1閥的開放狀態及上述第 2閥的封閉狀態下因外部壓力而被吸入上述收容部及上述壓力傳遞部中，在上述第1閥的封閉狀態及上述第2閥的開放狀態下因外部壓力而從上述收容部及上述壓力傳遞部流出。
4.如權利要求1、2或3所述的加壓循環培養裝置，其特徵在於，具備培養主體部，在該培養主體部中具備上述收容部和上述壓力傳遞部。
5.如權利要求1、2或3所述的加壓循環培養裝置，其特徵在於，上述壓力傳遞部具備積存上述培養液的培養液積存部，和經由壓力傳遞膜設置在該培養液積存部上、使外部壓力作用的外部壓力作用部，通過外部壓力使上述壓力傳遞膜進退， 對上述培養液傳遞外部壓力。
6.一種加壓循環培養系統，其特徵在於，具備多個培養單元和加壓驅動部，該培養單元具備收容部，積存培養液，並且收容被培養物；壓力傳遞部，與上述收容部連通，使外部壓力向上述培養液傳遞；以及培養液循環路，經由上述壓力傳遞部連接在上述收容部上，使上述培養液通過上述壓力傳遞部循環到上述收容部中，該加壓驅動部產生對這些培養單元的上述壓力傳遞部施加的外部壓力；使上述加壓驅動部產生的上述外部壓力經由上述壓力傳遞部作用在上述培養液上，能夠進行相對於處於各培養單元的上述收容部中的上述被培養物的加壓、和上述收容部的上述培養液的循環。
7.如權利要求6所述的加壓循環培養系統，其特徵在於，還具備第1閥，設置在上述培養液循環路中，在上述壓力傳遞部的上遊側將上述培養液的循環封閉；以及第2閥，設置在上述培養液循環路中，在上述收容部的下遊側將上述培養液的循環封閉；上述收容部的上述被培養物通過上述培養液承受作用在上述壓力傳遞部上的外部壓力；此外，上述收容部及上述壓力傳遞部的上述培養液在上述第1閥的開放狀態及上述第2閥的封閉狀態下因外部壓力而被吸入上述收容部及上述壓力傳遞部中，在上述第1閥的封閉狀態及上述第2閥的開放狀態下因外部壓力而從上述收容部及上述壓力傳遞部流出。
8.如權利要求6或7所述的加壓循環培養系統，其特徵在於，具備培養主體部，在該培養主體部中具備上述收容部和上述壓力傳遞部。
9.如權利要求6、7或8所述的加壓循環培養系統，其特徵在於，上述壓力傳遞部具備積存上述培養液的培養液積存部，和經由壓力傳遞膜設置在該培養液積存部上、使外部壓力作用的外部壓力作用部，通過外部壓力使上述壓力傳遞膜進退， 對上述培養液傳遞外部壓力。
全文摘要
一種具備收容部(培養腔室部(7))、壓力傳遞部(8)、和培養液循環路(培養迴路(30))的加壓循環培養裝置。收容部是積存培養液(14)並收容被培養物(62)的機構。壓力傳遞部是與上述收容部連通、使外部壓力向上述培養液傳遞的機構。培養液循環路經由上述壓力傳遞部連接在上述收容部上，是使上述培養液通過上述壓力傳遞部循環到上述收容部中的機構。具備這樣的結構，使外部壓力經由上述壓力傳遞部作用在上述培養液上，能夠進行相對於處於上述收容部中的上述被培養物的加壓、和上述收容部的上述培養液的循環。
文檔編號C12M3/00GK102575217SQ20108004397
公開日2012年7月11日 申請日期2010年10月8日 優先權日2009年10月9日
發明者佐藤光治, 木之內伊吹, 村田利己, 渡邊節雄, 高井秀忠 申請人:目的株式會社