一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法
2023-08-08 17:13:51
專利名稱：一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法
技術領域：
本發明涉及一種肽的製備，尤其是一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法。
背景技術：
降血壓肽，又稱為血管緊張素轉化酶(Angiotensin Converting Enzyme, EC3.4. 15. 1，簡稱ACE)抑制肽，是從食物蛋白中分離出的一類具有顯著降低血壓功效的肽，通常為小分子肽。在眾多降壓物質中，降血壓肽因其無毒副作用的降壓功能成為活性肽研究的熱點。從天然食物蛋白中分離的降血壓肽，雖然降壓效果不如合成藥物那麼強烈，但其具有安全性高，只對高血壓患者起到降壓作用，對血壓正常者無降壓作用，不會有降壓過度現象發生。現在已經從乳酪蛋白中的乾酪素、乳清蛋白等；動植物蛋白中的雞肉、明膠、豬肉、雞蛋、蕎麥、玉米、椰菜、大蒜等；魚貝藻類蛋白中的沙丁魚、金槍魚、鱔魚頭、牡蠣、裙帶菜等許多食品中分離出ACE抑制劑；國內的研究者還從中國傳統的食品即墨老酒，豆腐乳中發現ACE抑制肽。現代醫學研究證明，海參富含多糖、海參素、海參皂甙、穀氨酸、甘氨酸、精氨酸、 硒、鋅、鐵、碘、鈣、超氧化物歧化酶(SOD)、硫酸軟骨素等50多種對人體有益的營養成分。經實驗測定，海參水解肽也具有一定的ACE抑制活性，是潛在的降血壓物質。另外，海蜇種類多，數量大，在我國分布廣，是海洋浮遊動物群落的重要組成部分。海蟄體內含有較高的蛋白質及鈣、磷、碘、鐵等無機鹽，素有「水產瑰寶」之美稱，中醫學認為，海蜇具有擴張血管，降血壓之功效。另外，中國毛蝦為我國特有種類，我國沿海均有分布，尤以渤海沿岸產量最多。 而毛蝦中的胺基酸中含有與降血壓肽結構有關的支鏈胺基酸和芳香族胺基酸，中國毛蝦是降壓物質提取的良好原料。另外，海帶含有藻膠酸、昆布素，半乳聚糖等多糖類，海帶氨酸、 穀氨酸、天門冬氨酸，脯氨酸等胺基酸，維生素B1、B2、C、P及胡蘿蔔素，碘、鉀、鈣等無機鹽。 中醫認為，海帶具有軟堅散結、消痰平喘、通行利水、祛脂降壓等功效。現代醫學研究表明， 從海帶裡提取出的褐藻氨酸和甘露醇具有降壓作用。目前，國內關於降血壓肽的研究主要集中在肽的分離純化、結構鑑定和活性評價方面。如何確定最佳、優化的酶解條件及對降血壓肽提高分離提取效率是一個亟待解決的技術問題。同時，目前，還未見有利用多種海洋生物製取複合降血壓肽的研究報導。
發明內容
為了克服現有技術的不足，本發明提供一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法。該方法的原料選取科學、工藝合理、操作簡便、可操作性強、分離提取效率高，易實現工業化生產。依照該方法製取所得的複合降血壓肽，具有良好的降壓功效。本發明解決其技術問題所採用的技術方案是一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法，其是選取海參、海蟄、海帶和中國毛蝦為原料，按重量百分比稱取海參5 10%、 海蟄50 65%、海帶10 25%和中國毛蝦10 20%分別進行脫鹽、軟化處理；再分別經打漿後加入10 30倍的純淨水過膠體磨製成漿狀物；漿狀物加熱滅除微生物；冷卻後進行酶解處理，加熱滅酶；冷卻後離心去除不溶物，取上清液通過管式膜過濾脫除大分子；濾過液通過截留分子質量為3000DaltOn的有機膜分級，收集3000DaltOn以下的截留液；截留液納濾濃縮脫鹽，乾燥，復配，得複合降血壓肽。本發明選取海參、海蟄、海帶和中國毛蝦為原料，將每一原料分別經脫鹽、軟化處理，再分別經加水磨漿，加熱滅除微生物；冷卻後酶解，滅酶；離心，取上清液再分別經管濾、超濾、納濾，乾燥，復配，得複合降血壓肽。本發明是科學合理的選取具有降壓功能的海參、海蟄、海帶和中國毛蝦為原料，經過酶解、管濾、超濾、納濾將具有ACE抑制活性的小分子肽分離出來，並保存了其完好的結構和有效的生物活性。實驗表明，採用該工藝分離出的降血壓肽成分復配後，經原發性高血壓大鼠實驗，能顯著地降低大鼠舒張壓。該方法中確定了最佳優化的酶解技術方案，所採用的管濾、超濾、納濾分離提取技術，使其提取的效率高。 本發明的利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法工藝合理、操作簡便、可操作性強，易實現工業化生產。
具體實施例方式一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法，其具體工藝步驟如下
a、原料的選取與處理選取海參、海蟄、海帶和中國毛蝦為原料，按重量百分比稱取 海參5 10%、海蟄50 65%、海帶10 25%和中國毛蝦10 20%分別放入冷水中浸泡 Mh以上，去除鹽分，洗淨，撈出浙幹水分，分別使用打漿機進行打漿處理，之後加入10 30 倍的純淨水採用膠體磨將物料細化處理，得海參漿狀物、海蟄漿狀物、海帶漿狀物和中國毛蝦漿狀物；
b、酶解將步驟(a)所得到的海參漿狀物、海蟄漿狀物、海帶漿狀物和中國毛蝦漿狀物加熱至溶液中心溫度為95 100°C，保持lOmin，滅除微生物；然後進行酶解處理，其中各漿狀物酶解的條件為
將海參漿狀物溫度調節至50 55°C加入複合蛋白酶，其用量為海參重量的3 10%。， 酶解1 池後，加入風味蛋白酶，其用量為海參重量的2 10%。，酶解2 池，得海參酶解液；
將海蟄漿狀物溫度調節至35 40°C，調節pH值3 3. 5，加入胃蛋白酶，其用量為海蜇重量的2 5%。，酶解2 證後，調節溫度為45 50°C，pH值為5 5. 5，加入木瓜蛋白酶，其用量為海蜇重量的4 8%。，酶解1 池，得海蜇酶解液；
將海帶漿狀物溫度調節至45 55°C，加入纖維素酶、果膠酶和複合蛋白酶，酶解3 4h，得海帶酶解液；其中，所述的纖維素酶的用量為海帶重量的4 8%。、果膠酶的用量為海帶重量的2 6%。、複合蛋白酶的用量為海帶重量的3 10%。；
將中國毛蝦漿狀物溫度調節至45 55°C，調節pH值為9. 5 10，加入鹼性蛋白酶，其用量為中國毛蝦重量的的3 7%。，酶解1 池後，調節pH值為6. 5 7，加入風味蛋白酶， 其用量為中國毛蝦重量的2 10%。，酶解1 池，得中國毛蝦酶解液；
c、滅酶將步驟(b)所得到的海參酶解液、海蜇酶解液、海帶酶解液、中國毛蝦酶解液分別加熱至溶液中心溫度為95 100°C，保持lOmin，進行滅酶處理，然後冷卻至4°C，靜置過夜；
d、離心將步驟(c)得到的滅酶、冷卻、靜置的海參酶解液、海蜇酶解液、海帶酶解液、中國毛蝦酶解液分別採用離心機離心去除不溶物，並收集上清液；
e、膜過濾將步驟(d)得到的海參、海蜇、海帶、中國毛蝦上清液分別通過管式膜過濾脫除大分子，其管膜濾過液再分別通過孔徑大小為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集 3000Dalton以下截留液；其3000DaltOn以下的截留液通過納濾濃縮脫鹽，得納濾截留液；
f、乾燥將步驟(e)得到的海參、海蜇、海帶、中國毛蝦納濾截留液乾燥，復配，制粉，得複合降血壓肽。下面結合實施例對本發明做進一步說明。實施例1
一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法，其具體工藝步驟如下
a、原料的選取與處理稱取海參10kg、海蟄50kg、海帶25kg和中國毛蝦15kg為原料， 分別放入冷水中浸泡36h，去除鹽分，洗淨，撈出浙幹水分，分別使用打漿機進行打漿處理， 之後加入20倍的純淨水採用膠體磨將物料細化處理，得海參漿狀物、海蟄漿狀物、海帶漿狀物和中國毛蝦漿狀物；
b、酶解將步驟(a)所得到的海參漿狀物、海蟄漿狀物、海帶漿狀物和中國毛蝦漿狀物加熱至溶液中心溫度為100°C，保持lOmin，滅除微生物；然後進行酶解處理，其中各漿狀物酶解的條件為
將海參漿狀物溫度調節至加入複合蛋白酶90g，酶解Ih後，加入風味蛋白酶20g， 酶解池，得海參酶解液；其中複合蛋白水解酶可為市購的商品酶，如ftOtamex複合蛋白酶， 也可以自行配製，配製的複合蛋白水解酶中含有木瓜蛋白酶和澱粉酶。本實施例採用的是自行配製複合蛋白水解酶；
將海蟄漿狀物溫度調節至37°C，調節pH值3，加入胃蛋白酶250g，酶解池後，調節溫度為50°C，pH值為5，加入木瓜蛋白酶200g，酶解池，得海蜇酶解液；
將海帶漿狀物溫度調節至50°C，加入纖維素酶200g、果膠酶IOOg和複合蛋白酶250g， 酶解池，得海帶酶解液；其中複合蛋白水解酶採用的是自行配製複合蛋白水解酶；
將中國毛蝦漿狀物溫度調節至50°C，調節pH值為10，加入鹼性蛋白酶75g，酶解1. 後，調節PH值為6. 5，加入風味蛋白酶150g，酶解1.證，得中國毛蝦酶解液；
c、滅酶將步驟(b)所得到的海參酶解液、海蜇酶解液、海帶酶解液、中國毛蝦酶解液分別加熱至溶液中心溫度為100°C，保持lOmin，進行滅酶處理，然後冷卻至4°C，靜置過夜；
d、離心將步驟(c)得到的滅酶、冷卻、靜置的海參酶解液、海蜇酶解液、海帶酶解液、 中國毛蝦酶解液分別採用三足式離心機，控制轉速2000 rpm，離心去除不溶物，並收集上清液；
e、膜過濾將步驟(d)得到的海參、海蜇、海帶、中國毛蝦上清液分別通過管式膜過濾脫除大分子，其管膜濾過液再分別通過孔徑大小為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集 3000Dalton以下截留液；其3000DaltOn以下的截留液通過納濾濃縮脫鹽，得納濾截留液；
f、乾燥將步驟(e)得到的海參、海蜇、海帶、中國毛蝦納濾截留液噴霧乾燥，復配，粉碎成粉，得複合降血壓肽。實施例2
一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法，其具體工藝步驟如下
a、原料的選取與處理稱取海參^g、海蟄65kg、海帶IOkg和中國毛蝦20kg為原料，分別放入冷水中浸泡48h，去除鹽分，洗淨，撈出浙幹水分，分別使用打漿機進行打漿處理， 之後加入10倍的純淨水採用膠體磨將物料細化處理，得海參漿狀物、海蟄漿狀物、海帶漿狀物和中國毛蝦漿狀物；
b、酶解將步驟(a)所得到的海參漿狀物、海蟄漿狀物、海帶漿狀物和中國毛蝦漿狀物加熱至溶液中心溫度為95°C，保持lOmin，滅除微生物；然後進行酶解處理，其中各漿狀物酶解的條件為
將海參漿狀物溫度調節至50°C加入複合蛋白酶25g，酶解池後，加入風味蛋白酶25g， 酶解2.證，得海參酶解液；其中複合蛋白水解酶可為市購的ftOtamex複合蛋白酶；
將海蟄漿狀物溫度調節至35°C，調節pH值3. 3，加入胃蛋白酶195g，酶解池後，調節溫度為45°C，pH值為5. 5，加入木瓜蛋白酶325g，酶解池，得海蜇酶解液；
將海帶漿狀物溫度調節至陽°C，加入纖維素酶40g、果膠酶60g和複合蛋白酶30g，酶解 4h，得海帶酶解液；其中複合蛋白水解酶可為市購的ftOtamex複合蛋白酶；
將中國毛蝦漿狀物溫度調節至45°C，調節pH值為9. 5，加入鹼性蛋白酶140g，酶解池後，調節PH值為7，加入風味蛋白酶200g，酶解池，得中國毛蝦酶解液；
c、滅酶將步驟(b)所得到的海參酶解液、海蜇酶解液、海帶酶解液、中國毛蝦酶解液分別加熱至溶液中心溫度為98°C，保持lOmin，進行滅酶處理，然後冷卻至4°C，靜置過夜；
d、離心將步驟(c)得到的滅酶、冷卻、靜置的海參酶解液、海蜇酶解液、海帶酶解液、 中國毛蝦酶解液分別採用管式離心機，控制轉速2500 rpm，離心去除不溶物，並收集上清液；
e、膜過濾將步驟(d)得到的海參、海蜇、海帶、中國毛蝦上清液分別通過管式膜過濾脫除大分子，其管膜濾過液再分別通過孔徑大小為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集 3000Dalton以下截留液；其3000DaltOn以下的截留液通過納濾濃縮脫鹽，得納濾截留液；
f、乾燥將步驟(e)得到的海參、海蜇、海帶、中國毛蝦納濾截留液噴霧乾燥，復配，粉碎成粉，得複合降血壓肽。 實施例3
一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法，其具體工藝步驟如下
a、原料的選取與處理稱取海參^ig、海蟄60kg、海帶22kg和中國毛蝦IOkg為原料， 分別放入冷水中浸泡Mh，去除鹽分，洗淨，撈出浙幹水分，分別使用打漿機進行打漿處理， 之後加入30倍的純淨水採用膠體磨將物料細化處理，得海參漿狀物、海蟄漿狀物、海帶漿狀物和中國毛蝦漿狀物；
b、酶解將步驟(a)所得到的海參漿狀物、海蟄漿狀物、海帶漿狀物和中國毛蝦漿狀物加熱至溶液中心溫度為100°C，保持lOmin，滅除微生物；然後進行酶解處理，其中各漿狀物酶解的條件為
將海參漿狀物溫度調節至52°C加入複合蛋白酶Mg，酶解1. 後，加入風味蛋白酶 70g，酶解池，得海參酶解液；其中複合蛋白水解酶可為市購的ftOtamex複合蛋白酶；
將海蟄漿狀物溫度調節至40°C，調節pH值3. 5，加入胃蛋白酶120g，酶解3.證後，調節溫度為48°C，pH值為5. 2，加入木瓜蛋白酶480g，酶解lh，得海蜇酶解液；
將海帶漿狀物溫度調節至450C，加入纖維素酶132g、果膠酶44g和複合蛋白酶110g，酶解3.證，得海帶酶解液；其中複合蛋白水解酶可為市購的ftOtamex複合蛋白酶；將中國毛蝦漿狀物溫度調節至55°C，調節pH值為9. 5，加入鹼性蛋白酶30g，酶解Ih 後，調節PH值為7，加入風味蛋白酶20g，酶解lh，得中國毛蝦酶解液；
c、滅酶將步驟(b)所得到的海參酶解液、海蜇酶解液、海帶酶解液、中國毛蝦酶解液分別加熱至溶液中心溫度為100°C，保持lOmin，進行滅酶處理，然後冷卻至4°C，靜置過夜；
d、離心將步驟(c)得到的滅酶、冷卻、靜置的海參酶解液、海蜇酶解液、海帶酶解液、 中國毛蝦酶解液分別採用三足式離心機，控制轉速3000 rpm，離心去除不溶物，並收集上清液；
e、膜過濾將步驟(d)得到的海參、海蜇、海帶、中國毛蝦上清液分別通過管式膜過濾脫除大分子，其管膜濾過液再分別通過孔徑大小為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集 3000Dalton以下截留液；其3000DaltOn以下的截留液通過納濾濃縮脫鹽，得納濾截留液；
f、乾燥將步驟(e)得到的海參、海蜇、海帶、中國毛蝦納濾截留液噴霧乾燥，復配，粉碎成粉，得複合降血壓肽。下面以動物實驗進一步說明本發明的降壓效果。本動物實驗是將55隻SHR隨機分為5組，空白對照組，樣品低劑量組，中劑量組和高劑量組和陽性對照組，每組11隻。空白對照組給予0.9%的生理鹽水灌胃。低劑量組 給予樣品水溶液以200 mg/kg · d劑量灌胃；中劑量組給予樣品以400 mg/kg · d劑量灌胃；樣品高劑量組給予樣品水溶液以800 mg/kg ·(!劑量灌胃；陽性對照組給予卡託普利 0. 54 mg/kg ·(!劑量灌胃。連續給藥5周。每周測定尾動脈收縮壓一次，數據見附表。 附表SHR尾動脈收縮壓的變化(Mean 士 SD，η = 11)
權利要求
1.一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法，其特徵在於其是選取海參、海蟄、海帶和中國毛蝦為原料，按重量百分比稱取海參5 10%、海蟄50 65%、海帶10 25%和中國毛蝦10 20%分別進行脫鹽、軟化處理；再分別經打漿後加入10 30倍的純淨水過膠體磨製成漿狀物；漿狀物加熱滅除微生物；冷卻後進行酶解處理，加熱滅酶；冷卻後離心去除不溶物，取上清液通過管式膜過濾脫除大分子；濾過液通過截留分子質量為3000DaltOn 的有機膜分級，收集3000DaltOn以下的截留液；截留液納濾濃縮脫鹽，乾燥，復配，得複合降血壓肽。
2.一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法，其特徵在於其具體工藝步驟如下a、原料的選取與處理選取海參、海蟄、海帶和中國毛蝦為原料，按重量百分比稱取 海參5 10%、海蟄50 65%、海帶10 25%和中國毛蝦10 20%分別放入冷水中浸泡 24h以上，去除鹽分，洗淨，撈出浙幹水分，分別使用打漿機進行打漿處理，之後加入10 30 倍的純淨水採用膠體磨將物料細化處理，得海參漿狀物、海蟄漿狀物、海帶漿狀物和中國毛蝦漿狀物；b、酶解將步驟(a)所得到的海參漿狀物、海蟄漿狀物、海帶漿狀物和中國毛蝦漿狀物加熱至溶液中心溫度為95 100°C，保持lOmin，滅除微生物；然後進行酶解處理，其中各漿狀物酶解的條件為將海參漿狀物溫度調節至50 55°C加入複合蛋白酶，其用量為海參重量的3 10%。， 酶解1 池後，加入風味蛋白酶，其用量為海參重量的2 10%。，酶解2 池，得海參酶解液；將海蟄漿狀物溫度調節至35 40°C，調節pH值3 3. 5，加入胃蛋白酶，其用量為海蜇重量的2 5%0，酶解2 釙後，調節溫度為45 50°C，pH值為5 5. 5，加入木瓜蛋白酶，其用量為海蜇重量的4 8%。，酶解1 池，得海蜇酶解液；將海帶漿狀物溫度調節至45 55°C，加入纖維素酶、果膠酶和複合蛋白酶，酶解3 4h，得海帶酶解液；其中，所述的纖維素酶的用量為海帶重量的4 8%。、果膠酶的用量為海帶重量的2 6%。、複合蛋白酶的用量為海帶重量的3 10%。；將中國毛蝦漿狀物溫度調節至45 55°C，調節pH值為9. 5 10，加入鹼性蛋白酶，其用量為中國毛蝦重量的的3 7%。，酶解1 池後，調節pH值為6. 5 7，加入風味蛋白酶， 其用量為中國毛蝦重量的2 10%。，酶解1 池，得中國毛蝦酶解液；c、滅酶將步驟(b)所得到的海參酶解液、海蜇酶解液、海帶酶解液、中國毛蝦酶解液分別加熱至溶液中心溫度為95 100°C，保持lOmin，進行滅酶處理，然後冷卻至4°C，靜置過夜；d、離心將步驟(c)得到的滅酶、冷卻、靜置的海參酶解液、海蜇酶解液、海帶酶解液、 中國毛蝦酶解液分別採用離心機離心去除不溶物，並收集上清液；e、膜過濾將步驟(d)得到的海參、海蜇、海帶、中國毛蝦上清液分別通過管式膜過濾脫除大分子，其管膜濾過液再分別通過孔徑大小為3000DaltOn的有機膜截留分級，收集 3000Dalton以下截留液；其3000DaltOn以下的截留液通過納濾濃縮脫鹽，得納濾截留液；f、乾燥將步驟(e)得到的海參、海蜇、海帶、中國毛蝦納濾截留液乾燥，復配，制粉，得複合降血壓肽。
全文摘要
本發明涉及一種利用海洋生物製取複合降血壓肽的方法，其是按重量比稱取海參5～10%、海蟄50～65%、海帶10～25%和中國毛蝦10～20%為原料，分別進行脫鹽、軟化處理；再分別經打漿後加水磨製成漿狀物；加熱滅除微生物；冷卻後進行酶解處理，滅酶；冷卻後離心，取上清液通過管式膜過濾脫除大分子；濾過液通過截留分子質量為3000Dalton的有機膜分級，收集3000Dalton以下的截留液納濾濃縮脫鹽，乾燥，復配，得複合降血壓肽。本發明的方法中確定了最佳優化的酶解技術方案，採用的管濾、超濾、納濾分離提取技術，其提取效率高，所得的複合降血壓肽降壓效果顯著。本發明的方法選料科學、工藝合理、操作簡便、易實現工業化生產。
文檔編號C07K1/34GK102409072SQ20111038472
公開日2012年4月11日 申請日期2011年11月29日 優先權日2011年11月29日
發明者劉新, 劉昌衡, 唐聚德, 孫永軍, 張綿松, 王志偉, 胡煒, 袁文鵬 申請人:山東好當家海洋發展股份有限公司, 山東省科學院生物研究所