一種淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑的製作方法

2023-08-08 01:38:26 2

一種淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑，其成分是經過標記與化學修飾的化學合成的雙鏈小RNA分子，其中：雙鏈小RNA分子的正向序列為：5′-UACAGUACUGUGAUAACUGAAG-3′，雙鏈小RNA分子的反向序列為：5′-CsUsUCAGUUAUCACAGUACUsGsUsAs-Chol3′，反向序列進行以下化學修飾：3′端膽固醇修飾，5′端兩個硫代修飾，3′端4個硫代修飾，反向序列全鹼基甲基化修飾。本發明的突出優點是人工合成了降低淡水魚肌肉主要過敏原的新型小RNA化合物，製作的抑制劑能夠明顯抑制PVALB表達，同時在使用後魚肉質不受影響。
【專利說明】一種淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種新穎的具有抑制肌肉小清蛋白表達的化學合成劑，其能降低淡水魚肌肉中主要過敏原--小清蛋白含量。
【背景技術】
[0002]過敏性疾病被世界衛生組織認定為當前世界性的重大衛生學問題之一。魚類是常見的食物過敏原。小清蛋白(Parvalbumin, PVALB)是一種高親和力的鈣結合蛋白，在快速收縮-舒張肌纖維中表達量高，且能耐高溫、極端PH和變性劑。國內外近年研究表明鯉魚、鮭魚和鱈魚等魚類中主要過敏原都是小清蛋白，且小清蛋白作為過敏原在魚類中存在著交叉反應，小清蛋白已確定是魚類的主要泛變應原。由於在高溫和蛋白酶作用下的高穩定性，在高溫下烹煮和接觸胃腸道酶後，仍能使易感人群過敏，因此降低魚類肌肉中小清蛋白的含量對於預防食物 過敏和生產低致敏性產品具有重要意義。
[0003]隨著魚類及其加工產品消費的增長，相應的食物過敏現象也將日益增加。因此食品製造商和監管機構正在尋求技術來檢測日常飲食中主要的過敏原和治療方法。在最近的關於治療魚類過敏研究中，低過敏性鯉魚小清蛋白突變體方法獲得了一定療效，但此類治療魚類過敏的免疫療法不僅花費較高、治療繁瑣，而且無法從源頭上截斷過敏原。

【發明內容】

[0004]針對現有技術的不足，本發明的目的在於提供了一種淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑，進而提供一種降低魚類食用過敏的新途徑。本發明通過化學合成一對特異抑制魚類小清蛋白表達的核苷酸短鏈，從降低肌肉小清蛋白含量方面來減少食用魚類過敏現象，既為消費者安全食用低致敏性魚類產品提供新方法，也為保持我國淡水魚類高效健康養殖持續發展奠定基礎解決了上述【背景技術】中的問題。
[0005]一種淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑，其成分是經過標記與化學修飾的化學合成的雙鏈小RNA分子，其中:
雙鏈小RNA分子的正向序列為:5' -UACAGUACUGUGAUAACUGAAG-3'，
雙鏈小 RNA 分子的反向序列為:5' -CsUsUCAGUUAUCACAGUACUsGsUsAs-ChoU'， 反向序列進行以下化學修飾:
3'端膽固醇修飾，5'端兩個硫代修飾，3'端4個硫代修飾，反向序列全鹼基甲基化修飾。
[0006]與現有技術相比，本發明的有益效果是:
(I)本發明是綜合運用分子生物學、動物營養學和化學合成原理，對淡水魚主要過敏原深入研究基礎上，研究開發的具有聞效、穩定等特點的過敏原抑制劑。
[0007](2)本發明生產工藝成熟、產品質量穩定、價格合理、核心技術先進和經濟效益顯著，是目前比較理想的魚類過敏原抑制劑，具有廣闊的市場前景。
[0008](3)本發明的突出優點是人工合成了抑制魚類過敏原的新型小RNA化合物，製作的抑制劑能夠明顯抑制表達小清蛋白，降低魚類肌肉中小清蛋白的含量，同時在使用抑制劑後魚類肉質不受影響。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]圖1為本發明淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑對鯉魚肌肉小清蛋白表達的影響(n=5)的柱形圖。 [0010]圖2為本發明淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑對草魚肌肉小清蛋白表達的影響(n=5)的柱形圖。
【具體實施方式】
[0011]為了使本發明的技術手段、創作特徵、工作流程、使用方法達成目的與功效易於明白了解，下面進一步闡述本發明。
[0012]實施例1
本發明淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑對鯉魚肌肉小清蛋白表達的影響:
通過鯉魚肌肉局部注射的方式，發揮小清蛋白過敏原抑制劑在降低肌肉中小清蛋白的作用。以不注射任何試劑為陰性對照組，以注射PBS (磷酸鹽緩衝液)為陽性對照組，以注射小清蛋白過敏原抑制劑為試驗組，試驗組注射劑量為20μ g/g體重，連續注射三天，每天一次，注射完成後一周取鯉魚背部肌肉，並對小清蛋白表達定量分析，具體結果如圖1所示:注射小清蛋白過敏原抑制劑的試驗組鯉魚肌肉小清蛋白表達量比陽性和陰性對照組顯著降低；陽性和陰性對照組鯉魚小清蛋白表達量差異不顯著。因此注射小清蛋白過敏原抑制劑能降低鯉魚肌肉小清蛋白表達量。
[0013]實施例2
本發明淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑對草魚肌肉小清蛋白表達的影響:
實驗分組如實施例1，實驗一周後，取草魚背部肌肉對小清蛋白表達定量分析，具體結果如圖2:注射小清蛋白過敏原抑制劑的試驗組草魚肌肉小清蛋白表達量比陽性和陰性對照組顯著降低；陽性和陰性對照組草魚小清蛋白表達量差異不顯著。因此注射小清蛋白過敏原抑制劑能降低草魚肌肉小清蛋白表達量。
[0014]實施例3
小清蛋白過敏原抑制劑對草魚肉質指標的影響
實驗分組如實施例2，實驗一周後，取五組草魚背部肌肉進行指標測量，與兩對照組相比，注射小清蛋白過敏原抑制劑的試驗組肌肉營養成分差異不顯著，具體請參見表1。
[0015]表1小清蛋白過敏原抑制劑對草魚肌肉營養成分的影響(平均值土標準差)n=5
【權利要求】
1.一種淡水魚小清蛋白過敏原抑制劑，其特徵在於，其成分是經過標記與化學修飾的化學合成的雙鏈小RNA分子，其中: 雙鏈小RNA分子的正向序列為:5' -UACAGUACUGUGAUAACUGAAG-3'， 雙鏈小 RNA 分子的反向序列為:5' -CsUsUCAGUUAUCACAGUACUsGsUsAs-ChoU'， 反向序列進行以下化學修飾: 3'端膽固醇修飾，5'端兩個硫代修飾，3'端4個硫代修飾，反向序列全鹼基甲基化修飾。
【文檔編號】A23K1/16GK103931936SQ201410139704
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月9日 優先權日:2014年4月9日
【發明者】褚武英, 張建社, 朱鑫, 李玉瓏 申請人:長沙學院