補骨脂衍生物透皮吸收劑的製備方法和臨床應用的製作方法

2023-08-01 01:11:41 1

補骨脂衍生物透皮吸收劑的製備方法和臨床應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種補骨脂衍生物透皮吸收劑的製備方法和臨床應用，取補骨脂粉末用乙醇提取，提取物再經全乙醯化製取衍生物。補骨脂提取物全乙醯化衍生物加羧甲基纖維素(或聚乙烯醇)2-10g、甘油1g、蓖麻油1g、氮酮1-2g。稱取海藻酸鈉共10g，加入水100ml，羧甲基纖維素2-10g製備成透皮製劑。該製劑，製備方法簡單，易溶於水，原料來源廣，成本低廉，無副作用。
【專利說明】補骨脂衍生物透皮吸收劑的製備方法和臨床應用

【技術領域】
[0001] 本發明屬於醫學臨床用藥，具體說是涉及一種適用於骨折、骨不連、股骨頭壞死、 骨質疏鬆的治療與預防的藥物。

【背景技術】
[0002] 骨折癒合是一個極其複雜的生物學過程，受諸多因素的影響，如何早期促進骨折 癒合一直是骨傷科領域研究的重點課題。近年來，對骨折遲緩癒合、不癒合治療研究取得較 大進展。中藥治療骨折，歷史悠久，經驗獨特，應用廣泛。已從傳統的內服外敷，發展為從單 味或複方中提取有效成份製成的針劑，以其簡便、療效確切而顯示其優越性。但中藥促進骨 折癒合的療效機理是一項極為複雜的過程。隨著研究的深入，中藥對其的影響受到越來越 多學者的關注。
[0003] 補骨脂是豆科植物補骨脂的乾燥果實，含有多種有效成分。體外試驗表明，補骨脂 能抑制分離破骨細胞在骨片上形成的吸收陷窩的增加與擴張，說明其對分離破骨細胞有抑 製作用。研究發現，補骨脂素對大鼠成骨細胞增殖和鹼性磷酸酶活性有明顯促進作用。 補骨脂素的衍生物包括5-甲氧基補骨脂素（5-M0P)，8_甲氧基補骨脂素（8-M0P)和一 些取代物，現將其中幾種典型結構列如下：Pabulenol ;Saxalin ;王因草；水合氧化前胡素； 獨活醇；甲酸氧化前胡素一些羥基衍生物。 林舉擇等用MTT法測定補骨脂注射液對大鼠成骨細胞增殖的影響，結果顯示原代成骨 細胞逐漸形成纖維細胞集落，有成纖維細胞型表現，傳代成骨細胞逐漸被細胞分泌的基質 所包埋，形成鈣化。補骨脂對新生大鼠成骨細胞的增殖有顯著促進作用，表明利用胰酶消化 法可以分離培養出純度高、數量較多且培養時間明顯縮短的成骨細胞。補骨脂抗骨質疏鬆 的作用與其增加成骨細胞的數量和促進成骨細胞的增殖能力有關。[林舉擇，陳昇愷，羅家 棟，補骨脂注射液對體外培養大鼠成骨細胞增殖的影響[J].中醫正骨，2004,16?) :6.]


【發明內容】

[0004] 本發明的目的在於提供一種全乙醯化補骨脂衍生物透皮製劑的製備方法。是提供 一種製備方法簡單，易溶於水，原料來源廣泛的治療和預防骨折的藥物。
[0005] 本發明的優點是製備方法簡單，原料來源廣，成本低廉，無副作用。
[0006] 本發明的補骨脂衍生物透皮製劑的製備方法，包括以下步驟：
[0007] 提取方法：取補骨脂粉末（過40目篩）100g，加10倍量70%乙醇，浸泡20hr，力口 熱回流提取2h，提取2次，每次40min。合併2-3次濾液，減壓回收溶劑，濃縮，乾燥，乾燥物 用甲醇溶解，活性碳脫雜質再除去甲醇溶劑，濃縮，乾燥，得到補骨脂素提取物。
[0008] 補骨脂衍生物製備：將補骨脂素提取物30g，乙酸酐200ml和氨基磺酸2g，混合於 室溫下反應30min，再將溫度繼續上升至60-90°C反應20min完成反應。至反應完全結束， 過濾除去未反應乙酸酐。產物中加入乙酸乙酯200ml衝洗，碳酸氫鈉5% (10mLX2)衝洗。 然後乾燥，過濾，減壓濃縮得到產品。
[0009] 補骨脂全乙醯化衍生物透皮製劑的製備： 1. 方案1 :補骨脂全乙醯化衍生物透皮製劑的組方：補骨脂全乙醯化衍生物l〇g、羧甲 基纖維素2-10g、甘油lg、蓖麻油lg、氮酮l-2g。稱取補骨脂衍生物10g，加入水100ml、羧 甲基纖維素2-10g，攪拌至澄明膠液，攪拌下依次加入氮酮l-2g、甘油lg、蓖麻油lg，混勻， 用碳酸氫鈉調節PH值為7-7. 5左右，超聲15min。使用時塗布於紗布上，覆蓋在治療部位。 2. 方案：2 :補骨脂全乙醯化衍生物透皮製劑的組方：補骨脂全乙醯化衍生物10g、聚乙 烯醇2-10g、甘油lg、蓖麻油lg、氮酮l-2g。稱取補骨脂衍生物10g，加入水100ml、聚乙烯 醇2-10g，攪拌至澄明膠液。攪拌下依次加入氮酮l-2g、甘油lg、蓖麻油lg，混勻，用碳酸氫 鈉調節PH值為7-7. 5左右，超聲15min。使用時塗布於紗布上，覆蓋在治療部位。
[0010] 所述的藥物組合物，在製備促進人或動物骨折癒合的治療中的應用。
[0011] 為了進一步的驗證本發明成品製劑的療效，我們將上述具體製備方法1-3中製備 的藥物進行了相應的動物試驗，現將結果報告如下。
[0012] 試劑：骨形態發生蛋白-2 (BMP-2)抗體購於北京博奧森生物技術有限公司
[0013] 動物分組模型製備：40隻無特定病原體昆明小鼠（由鄭州大學醫學院實驗動物中 心[Scxk(豫）2010-0002])提供。小鼠體重的範圍為25?30g，3月齡，雌雄各半。 40隻小鼠隨機分成治療組、模型組兩組，每組20隻。治療組、模型組小鼠以20%氨基 甲酸乙酯5mg/kg腹腔注射麻醉，暴露大鼠股骨，用鋼鋸將股骨鋸開，以達到骨髓滲出為度， 將創口縫合。然後治療組小鼠在傷口附近肢體外敷透皮製劑，qd，連續給藥7-14d並連續3d 肌內注射青黴素以抗感染。模型組小鼠不作處理。
[0014] 標本採集與組織學處理 40隻小鼠分別在第1、2周末處死，取股骨做組織學製備。股骨用4% PFA加0. IM磷酸 緩衝液調整PH值為7. 2,室溫固定3d。然後用20% EDTA加0. IM磷酸緩衝液調整PH值為 7. 2,浸泡S-IOd脫鈣，再經系列乙醇脫水，石蠟包埋，沿股骨幹長軸方向行厚度切成5 μ m厚 片，部分行HE染色。隨機取5張股骨片，分別在X400奧林巴斯FV1000放大雷射掃描共聚 焦顯微鏡下觀察。
[0015] 免疫組化染色 小鼠處死後以骨痂為中心，包括上、下骨端各Icm取出標本,置入5%乙二胺四乙酸 (EDTA)液中脫鈣10-15d，酒精逐級脫水，透明，浸蠟，石蠟包埋，5μπι厚連續切片，ABC法免 疫組化染色（ABC試劑盒由Vector公司提供）。正常組骨組BMP-McAb染色為陰性，骨折後 骨痂組織染色為陽性。
[0016] 統計學處理採用SPSS10. 0軟體進行統計分析。各組數據以[±s表示，兩組間比較 採用獨立樣本t檢驗，P < 0. 05表示差異有統計學意義。
[0017] 結果與結論 2. 1BMP-2蛋白的免疫陽性產物表達於骨基質內和骨母細胞胞質內，呈棕黃色。採用半 定量法判斷BMP-2蛋白的表達情況：選10個高倍視野，顯色的陽性反應細胞數 75%為+++，無明顯陽性反應細胞為_。計數資料的統計學分析採用卡 方檢驗。檢驗標準α =〇.〇5。 2. 2術後7d兩組ΒΜΡ-2蛋白的表達情況比較 表1海藻酸鈉衍生物水溶液對骨折小鼠骨中BMP-2含量的影響（2W，η = 20)

【權利要求】
1. 補骨脂素衍生物透皮製劑的製備方法，其特徵在於補骨脂素經乙醇提取，減壓回收 溶劑，濃縮，乾燥；乾燥物用甲醇溶解，活性碳脫雜質再除去甲醇溶劑，濃縮，乾燥。將補骨 脂素提取物，乙酸酐和催化劑氨基磺酸混合進行全乙醯化反應得到補骨脂素全乙醯化衍生 物。
2. 補骨脂素全乙醯化衍生物透皮製劑的組方：補骨脂全乙醯化衍生物10g、羧甲基纖 維素（或聚乙烯醇）2-10g、甘油lg、蓖麻油lg、氮酮l-2g。
3. 權利2全乙醯化補骨脂衍生物透皮製劑在製備促進人或動物骨折癒合的治療中的 應用。
【文檔編號】A61K36/487GK104288219SQ201410573329
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月14日 優先權日:2014年10月14日
【發明者】王寶英, 王永學, 司豔莉, 張利彬, 範秉琳 申請人:新鄉醫學院