一種樟芝油的高效萃取方法
2023-08-03 15:46:16 1
一種樟芝油的高效萃取方法
【專利摘要】本發明涉及一種樟芝油的高效萃取方法。所述的方法包括以下步驟：首先對樣品進行預處理研磨和培養，再通過碳18固體吸附分離和真空濃縮，然後進行超聲提取最後得到樟芝油。本發明中的樟芝菌菌絲體發酵液通過碳18固體吸附劑分離並初步濃縮，然後採用真空濃縮進一步濃縮，有選擇性的去除了無效成分，可以使濃縮物中的有效成分濃度大幅提高。
【專利說明】一種樟芝油的高效萃取方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於生物工程【技術領域】，具體涉及一種樟芝油的高效萃取方法。
【背景技術】
[0002]近年來，研究發現樟芝成分複雜，含有很多生理活性物質具有多種生理活性，如抗氧化、保肝、抗癌、解毒、消炎等，對食物中毒等危急病症具有神奇的療效。因此，樟芝長期以來被作為人們解酒、保肝及抗疲勞的傳統藥方，也被作為傳統中藥用於肝臟疾病的治療及食物中毒等疾病的治療。但樟芝野生量極少，隨著人們對樟芝研究的不斷深入及需求量的增加，樟芝樟芝的價格日漸水漲船高，目前，市價已高達每公斤15000美元，成為世界上最珍貴的野生真菌，價格早已超出靈芝、人參及冬蟲夏草等傳統珍貴藥材。
[0003]樟芝油相對於樟芝更加便於攜帶，更有利於人體的吸收。樟芝油在醫藥、食品及化妝品等領域中均有著極大的開發和利用價值，因此需要開發出一種樟芝油的高效萃取方法，滿足工業化生產。
【發明內容】
[0004]本發明的目的就是針對上述現有技術中存在的缺陷提供一種操作簡便的樟芝油的高效萃取方法。
[0005]本發明的技術方案如下:
一種樟芝油的高效萃取方法，包括以下步驟:
(1)樣品預處理:取牛樟芝3-5g量漂洗乾淨，烘乾研磨成粉狀，，先後加入斜面培養基及搖床培養基中進行培養，得到樟芝菌菌絲體發酵液；
(2)將步驟(I)中得到的樟芝菌菌絲體發酵液通過碳18固體吸附劑分離並初步濃縮；
(3)將步驟(2)中的菌絲體發酵液真空濃縮至原體積的15%-20%，加入甲醇浸泡，超聲提取2次，微孔濾膜過濾，取濾液置入500ml圓底燒瓶，加入去離子水及氯化鈉，連接水蒸氣蒸餾裝置後加熱提取，並旋蒸回收甲醇，加10_20ml乙醚萃取3次，真空乾燥Ih得到所述的樟芝油。
[0006]步驟(I)中所述的斜面培養基的組成為:馬鈴薯15-25%，葡萄糖1_3%，磷酸二氫鉀
0.1-0.5%，硫酸鎂水合物0.1-0.3%，瓊脂1-3%。
[0007]步驟(I)中所述的搖瓶培養基的組成為:馬鈴薯汁30-50%，葡萄糖1-3%，硫酸鎂水合物 0.1-0.3%，硫酸鈉 0.03-0.08%，磷酸二氫鉀 0.1-0.5%。
[0008]優選的，步驟(I)中所述的樣品在斜面培養基及搖瓶培養基中培養時，培養時間均為 3-5d。
[0009]優選的，步驟(I)中樣品在斜面培養基及搖瓶培養基中培養時，所述的培養溫度均為 24-26 °C。
[0010]優選的，步驟(3)中甲醇的加入量為10_20ml。
[0011]優選的，步驟(3)中超聲提取時間為每次20-30min，提取溫度為40_45°C。
[0012]優選的，步驟(3)中所述的去離子水、氯化鈉與濃縮後的菌絲體發酵液的重量份之比為(1-5):(0.05-0.13):(0.25-0.5)。
[0013]優選的，步驟(3)中的加熱提取時間為4_6h。
[0014]優選的，步驟(3)中所述的真空乾燥的溫度為40_45°C。
[0015]本發明與現有技術相比，具有以下有益效果:
1.本發明中的樟芝菌菌絲體發酵液通過碳18固體吸附劑分離並初步濃縮，然後採用真空濃縮進一步濃縮，有選擇性的去除了無效成分，可以使濃縮物中的有效成分濃度大幅提聞。
[0016]2.微生物油脂中較大部分油脂易氧化，本發明中在對樟芝菌進行增養後，將培養得到的菌絲體發酵液在真空條件下進行濃縮，避免了油脂與空氣的接觸，避免油脂氧化，而且又可以保證在較低的溫度下對樣品進行濃縮。
[0017]3.生成油脂的最適溫度在25°C左右，溫度可影響油脂的組成及含量，因此，本發明中將樣品的培養溫度限定為24-26°C，可保證樟芝油的最大化生產。
[0018]4.水蒸氣蒸餾水與超聲輔助提取法均為真菌油脂的提取方法，而兩者各有優缺點，本發明中將二者有機的結合，不僅操作方法簡便，產品穩定性好，對生產設備及技術人員要求不高，而且明顯提高了樟芝非揮發性及熱不穩定油脂的提取。
[0019]4.本發明在對樟芝菌絲體中的油脂進行萃取前，先對樣品先後進行預處理及培養，可最大程度的生產更大產量的樟芝油。
【具體實施方式】
[0020]本發明通過以下具體實施例更詳細的說明本發明，可以使本專業技術人員更全面的了解本發明，但不以任何方式限制本發明。
[0021]實施例1
一種樟芝油的高效萃取方法，包括以下步驟:
(1)樣品預處理:取牛樟芝3g量漂洗乾淨，烘乾研磨成粉狀，，先後加入斜面培養基及搖床培養基中進行培養，培養時間均為3d，培養溫度均為24°C，培養得到樟芝菌菌絲體發酵液；
(2)將步驟(I)中得到的樟芝菌菌絲體發酵液通過碳18固體吸附劑分離並初步濃縮；
(3)將步驟(2)中的菌絲體發酵液真空濃縮至原體積的15%，加入甲醇1ml浸泡，超聲提取2次，每次時間為20-30min，提取溫度為40°C，微孔濾膜過濾，取濾液置入500ml圓底燒瓶，加入去離子水及氯化鈉，連接水蒸氣蒸餾裝置後加熱提取4h，並旋蒸回收甲醇，力口1ml乙醚萃取3次，在40°C下真空乾燥Ih得到所述的樟芝油。
[0022]步驟(I)中所述的斜面培養基的組成為:馬鈴薯15%，葡萄糖1%，磷酸二氫鉀0.1%，硫酸鎂水合物0.1%，瓊脂1%。
[0023]步驟(I)中所述的搖瓶培養基的組成為:馬鈴薯汁30%，葡萄糖1%，硫酸鎂水合物0.1%，硫酸鈉0.03%，磷酸二氫鉀0.1%。
[0024]步驟(3)中所述的去離子水、氯化鈉與濃縮後的菌絲體發酵液的重量份之比為1:0.05:0.25。
[0025]實施例2 一種樟芝油的高效萃取方法，包括以下步驟:
(1)樣品預處理:取牛樟芝5g量漂洗乾淨，烘乾研磨成粉狀，，先後加入斜面培養基及搖床培養基中進行培養，培養時間均為5d，培養溫度均為26°C，培養得到樟芝菌菌絲體發酵液；
(2)將步驟(I)中得到的樟芝菌菌絲體發酵液通過碳18固體吸附劑分離並初步濃縮；
(3)將步驟(2)中的菌絲體發酵液真空濃縮至原體積的20%，加入甲醇20ml浸泡，超聲提取2次，每次時間為20-30min，提取溫度為45°C，微孔濾膜過濾，取濾液置入500ml圓底燒瓶，加入去離子水及氯化鈉，連接水蒸氣蒸餾裝置後加熱提取6h，並旋蒸回收甲醇，力口20ml乙醚萃取3次，在45°C下真空乾燥Ih得到所述的樟芝油。
[0026]步驟(I)中所述的斜面培養基的組成為:馬鈴薯25%，葡萄糖3%，磷酸二氫鉀0.5%，硫酸鎂水合物0.3%，瓊脂3%。
[0027]步驟(I)中所述的搖瓶培養基的組成為:馬鈴薯汁50%，葡萄糖3%，硫酸鎂水合物
0.3%，硫酸鈉0.08%，磷酸二氫鉀0.5%。
[0028]步驟(3)中所述的去離子水、氯化鈉與濃縮後的菌絲體發酵液的重量份之比為5:
0.13:0.5。
[0029]實施例3
一種樟芝油的高效萃取方法，包括以下步驟:
(1)樣品預處理:取牛樟芝4g量漂洗乾淨，烘乾研磨成粉狀，，先後加入斜面培養基及搖床培養基中進行培養，培養時間均為4d，培養溫度均為25°C，培養得到樟芝菌菌絲體發酵液；
(2)將步驟(I)中得到的樟芝菌菌絲體發酵液通過碳18固體吸附劑分離並初步濃縮；
(3)將步驟(2)中的菌絲體發酵液真空濃縮至原體積的18%加入甲醇15ml浸泡，超聲提取2次，每次時間為25min，提取溫度為42°C，微孔濾膜過濾，取濾液置入500ml圓底燒瓶，加入去離子水及氯化鈉，連接水蒸氣蒸餾裝置後加熱提取4-6h，並旋蒸回收甲醇，加15ml乙醚萃取3次，在42°C下真空乾燥Ih得到所述的樟芝油。
[0030]步驟(I)中所述的斜面培養基的組成為:馬鈴薯20%，葡萄糖2%，磷酸二氫鉀0.3%，硫酸鎂水合物0.2%，瓊脂2%。
[0031]步驟(I)中所述的搖瓶培養基的組成為:馬鈴薯汁30-50%，葡萄糖2%，硫酸鎂水合物0.2%，硫酸鈉0.05%，磷酸二氫鉀0.3%。
[0032]步驟(3)中所述的去離子水、氯化鈉與濃縮後的菌絲體發酵液的重量份之比為3:
0.08:0.35。
[0033]以上所述實施例只是本發明的較佳實例，並非來限制本發明實施範圍，故凡依本發明申請專利範圍所述的構造、特徵及原理所做的等效變化或修飾，均應包括本發明專利申請範圍內。
【權利要求】
1.一種樟芝油的高效萃取方法，其特徵在於，包括以下步驟: (1)樣品預處理:取牛樟芝3-5g量漂洗乾淨，烘乾研磨成粉狀，，先後加入斜面培養基及搖床培養基中進行培養，得到樟芝菌菌絲體發酵液； (2)將步驟(1)中得到的樟芝菌菌絲體發酵液通過碳18固體吸附劑分離並初步濃縮； (3)將步驟(2)中的菌絲體發酵液真空濃縮至原體積的15%-20%，加入甲醇浸泡，超聲提取2次，微孔濾膜過濾，取濾液置入500ml圓底燒瓶，加入去離子水及氯化鈉，連接水蒸氣蒸餾裝置後加熱提取，並旋蒸回收甲醇，加10_20ml乙醚萃取3次，真空乾燥lh得到所述的樟芝油。
2.根據權利要求1所述的一種樟芝油的高效萃取方法，其特徵在於，步驟(1)中所述的斜面培養基的組成為:馬鈴薯15-25%，葡萄糖1-3%，磷酸二氫鉀0.1-0.5%，硫酸鎂水合物0.1-0.3%,瓊脂 1-3%。
3.根據權利要求1所述的一種樟芝油的高效萃取方法，其特徵在於，步驟(1)中所述的搖瓶培養基的組成為:馬鈴薯汁30-50%，葡萄糖1-3%，硫酸鎂水合物0.1-0.3%，硫酸鈉0.03-0.08%，磷酸二氫鉀 0.1-0.5%。
4.根據權利要求1所述的一種樟芝油的高效萃取方法，其特徵在於，步驟(1)中所述的樣品在斜面培養基及搖瓶培養基中培養時，培養時間均為3-5d。
5.根據權利要求1所述的一種樟芝油的高效萃取方法，其特徵在於，步驟(1)中樣品在斜面培養基及搖瓶培養基中培養時，所述的培養溫度均為24-26°C。
6.根據權利要求1所述的一種樟芝油的高效萃取方法，其特徵在於，步驟(3)中甲醇的加入量為10-20ml。
7.根據權利要求1所述的一種樟芝油的高效萃取方法，其特徵在於，步驟(3)中超聲提取時間為每次20-30min，提取溫度為40_45°C。
8.根據權利要求1所述的一種樟芝油的高效萃取方法，其特徵在於，步驟(3)中所述的去離子水、氯化鈉與濃縮後的菌絲體發酵液的重量份之比為(1-5):(0.05-0.13):(0.25-0.5)。
9.根據權利要求1所述的一種樟芝油的高效萃取方法，其特徵在於，步驟(3)中的加熱提取時間為4-6h。
10.根據權利要求1所述的一種樟芝油的高效萃取方法，其特徵在於，步驟(3)中所述的真空乾燥的溫度為40-45°C。
【文檔編號】C12R1/645GK104293841SQ201410556123
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月20日 優先權日:2014年10月20日
【發明者】劉巴寧, 鄭安喬 申請人:中山安蕎生物科技有限公司