一種化妝品中孕激素黃體酮的測定方法

2023-08-05 16:18:01

專利名稱：：一種化妝品中孕激素黃體酮的測定方法
技術領域：
：本發明涉及一種化妝品中孕激素黃體酮的測定方法，特別是涉及一種通過超高效液相色譜質譜聯用4義(UPLC/MS/MS)對化妝品中孕激素黃體酮進4於定性和定量一企測的方法。
背景技術：
：黃體酉同(Proglsterone)又名孕酉同(Utrogestan)、Ji力孕素(Pro—gestln),為孕激素，在醫療上黃體酮有口H和注射兩種劑型，具有人工調整月經周期等作用，但黃體酮也具有一定的副作用，大劑量時能抑制垂體促性腺激素的分泌，產生抑制排印作用。目前，化妝品中黃體酮對雀斑美容具有很好的療效，但是其檢測方法只有《化妝品衛生規範》中制定了黃體酮的高效液相色鐠法，此方法的缺點是不能對含有微量孕激素黃體酮的樣品，以及含有較多幹擾雜質的樣品進行準確定性判斷和定量測定，因此建立一種能夠準確定性、快速和準確定量的檢測方法，有利於監控化妝品領域黃體酮添加使用量和殘留量，從而保障化妝品的安全使用。
發明內容本發明所要解決的技術問題在於克服了孕激素黃體酮目前檢測標準中技術上既不能微量定量也不能準確定性的缺陷，通過摸索提取液、萃取液、定容液，以及最佳萃取溶劑配比7;口最佳色語條件而提供一種化妝品中孕激素黃體酮的定性和定量糹全測方法。為實現上述目的，本發明採取以下設計方案本發明的一種通過超高效液相色譜質語聯用儀(UPLC/MS/MS)對化妝品中孕激素黃體酮進行定性和定量檢測的方法包括如下步驟待測試樣為溶液狀樣品，準確稱取充分混勻後的樣品1.000g2.000g(±0.Olg)於lOmL具塞比色管中，在水浴上餾除乙醇等揮發性有機溶劑，用甲醇稀釋到10mL,充分混勻後'，濾膜過濾後獲得試樣處理液。待測試樣為膏狀、乳狀樣品，準確稱耳又充分混勻後的樣品1.000g~2.000g(±0.01g)於250mL錐形瓶中，在水浴上餾除乙醇等揮發性有機溶劑，加入飽和氯化鈉溶液50mL，2。/。硫酸2.0mL，充分振蕩溶解後轉移至250mL分液漏鬥，以環己烷30mL分三次萃耳又，必要時離心分離，合併環己烷，減壓蒸餾除去環己烷，甲醇溶解殘留物，轉移到10mL具塞比色管中，用曱醇稀釋到刻度，充分混勻後，濾膜過濾後獲得試樣處理液。稱取孕激素黃體酮標準品，用甲醇溶解並定容後作為儲備液，然後進一步用曱醇稀釋為具有濃度梯度的標準使用液；利用超高效液相色譜質譜聯用儀(UPLC/MS/MS)對標準使用液和試樣處理液進4於;險測；計算結果，試樣中孕激素黃體酮的計算公式為式中X-試樣中納他黴素的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);C-試樣處理液濃度(ng/mL);V-試樣定容體積，單位為克(mL);m-試樣質量，單位為克(g)。優選地，所述水浴上餾除乙醇等揮發性有機溶劑。優選地，添加飽和氯化鈉水溶液50mL,2y。硫酸水溶液2mL,充分振蕩溶解。優選地，採用環己烷30mL,分三次萃取。優選地，採用曱醇作為定容液。所述利用超高效液相色語質譜聯用儀(UPLC/MS/MS)對試樣處理液進行檢測的色語條件為液相色"i普條件色i普柱ACQUITYUPLCBEHC18,2.lmmx50mm,1.7fim;柱溫30°C;流動相乙腈+0.2%曱酸水溶液(60+40);流速0.3mL/min;進樣量5pL;質譜條件離子源電噴霧離子源；掃描方式正離子掃描；才全測方式多反應4t測；毛細管電壓(Kv):1.0;離子源溫度(°C):110;去溶劑溫度(°C):350;去溶劑流速(L/hr):700;本實驗的多反應監測(MRM)、駐留時間、錐孔電壓和碰撞能量參數見表l。表lACQUITYTQDMRM參數tableseeoriginaldocumentpage7注315.30〉109.OO為定性離子對315.30>97.OO為定量離子對並根據定性離子對315.30〉97.00結合質譜定性理論進行定性，外標峰面積法定量。本發明的優點是採用本發明的方法檢測化妝品中孕激素黃體酮，快速有效，RSD小於5。/。，既能準確的進行定性判斷，也能進行定量分析，最低檢測限達到0.01mg/kg。由此可見，本發明的方法，為化妝品中孕激素黃體酮的檢測，提供了一種可靠的便於實施的依據，能夠滿足研究、生產和曰常市場抽檢的需要。具體實施例方式實施例1,溶液狀化妝品中孕激素黃體酮的精密度和回收率檢測待測試樣為溶液狀樣品，準確稱取充分混勻後的樣品1.000g2.000g(±0.01g)於lOmL具塞比色管中，在水浴上餾除乙醇等揮發性有機溶劑，用甲醇稀釋到10mL，充分混勻後，過0.22um濾膜，作為試樣處理液備用。黃體酮標準儲備溶液稱取黃體酮0.Olg(準確至0.0001g)於100ml容量瓶中，用少量曱醇溶解，最後用甲醇稀釋至刻度，此溶液作為黃體酮標準儲備液。lmL此溶液含黃體酮0.lmg,再稀釋為10.0、50.0、100、200、500ng/mL的標準4吏用液。檢測條件為液相條件色語柱:ACQUITYUPLCBEHC18,2.lmmx50mm，1.7(im;柱溫30°C;流動相乙腈+0.2%甲酸水溶液(60+40);流速0.3mL/min;進樣量5pL;質譜條件離子源電噴霧離子源；掃描方式正離子掃描；才全測方式多反應衝企測；毛細管電壓(Kv):1.0;離子源溫度(°C):110;去溶劑溫度(°C):350;去溶劑流速(L/hr):700;本實驗的多反應監測(MRM)、駐留時間、錐孔電壓和碰撞能量參數見表l。表lACQUITYTQDMRM參數MRM駐留時間(sees)4#孔電壓(volts)碰撞能量[ev]黃體酮315.30>97.000.100復0020.00315.30〉109.000.10040.0025.00注315.30〉109.OO為定性離子對315.30〉97.OO為定量離子對根據其質譜峰定性，外標峰面積法定量。計算結果，試樣中孕激素黃體酮的計算公式(1)為Y一CxK—1000xm式中X-試樣中孕激素黃體酮的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);C-試樣處理液濃度(ng/mL);V-試樣定容體積，單位為克(mL);附-試樣質量，單位為克(g);試樣中孕激素黃體酮的含量按公式(1)進行計算，結果如下:9tableseeoriginaldocumentpage10實施例2，膏狀、乳狀化妝品中孕激素黃體酮精密度和回收率的檢測待測試樣為膏狀、乳狀樣品，準確稱耳又充分混勻後的樣品L000g2.000g(±0.01g)於100mL錐形瓶中，在水浴上餾除乙醇等揮發性有機溶劑，加入飽和氯化鈉溶液50mL,2。/。硫酸2.0mL，充分振蕩溶解後轉移至250mL分液漏鬥，以環己烷30mL分三次萃取，必要時離心分離，合併環己烷，減壓蒸餾除去環己烷，曱醇溶解殘留物，轉移到10mL具塞比色管中，用曱醇稀釋到刻度。充分混勻後，過0.22um濾膜，作為試樣處理液備用。稱fl黃體酮0.Olg(準確至0.OOOlg)於100ml容量jf瓦中，用少量曱醇溶解，最後用甲醇稀釋至刻度，此溶液作為黃體酮標準儲備液。lmL此溶液含黃體酮0.lmg，再逐漸稀釋為10.0、50.0、100、200、500ng/mL的標準4吏用液。檢測條件為液相條件色語柱ACQUITYUPLCBEHC18,2.lmmx50mm,1.7nm;柱溫30°C;流動相乙腈+0.2%甲酸水溶液(60+40);流速0.3mL/min;進樣量5|uL;質語條件離子源電噴霧離子源；掃描方式正離子掃描；才全測方式多反應4全測；毛細管電壓(Kv):1.0;離子源溫度(°C):110;去溶劑溫度(°C):350;去溶劑流速(L/hr):700;本實驗的多反應監測(MRM)、駐留時間、錐孔電壓和碰撞能量參數見表l。表lACQUITYTQDMRM參數MRM駐留時間(sees)錐孔電壓(volts)碰撞能量[ev]黃體酮315.30>97.000.10040.0020.00315.30〉109.000.10040.0025.00注315.30〉109.OO為定性離子對315.30〉97.OO為定量離子對根據其質i普峰定性，外標峰面積法定量。計算結果，試樣中孕激素黃體酮的計算公式(1)為Y_CxF_1000xm式中X-試樣中孕激素黃體酮的含量，單位為毫克每千克(mg/kg);C-試樣處理液濃度(ng/mL);V-試樣定容體積，單位為克(mL);附-試樣質量，單位為克(g);試樣中孕激素黃體酮的含量按公式(1)進行計算，結果如下:iitableseeoriginaldocumentpage12顯而易見，本領域的普通技術人員，可以用發明的這種通過超高效液相色譜質譜聯用儀(UPLC/MS/MS)對化妝品中孕激素黃體酮進行定性和定量4全測。上述實施例僅供說明本發明之用，而並非是對本發明的限制，有關
技術領域：
的普通技術人員，在不脫離本發明範圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，因此所有等同的技術方案也應屬於本發明的範疇，本發明的專利保護範圍應由各權利要求限定。權利要求1、一種通過超高效液相色譜質譜聯用儀(UPLC/MS/MS)對化妝品中孕激素黃體酮的測定方法，其特徵在於，所述測定方法包括如下步驟待測試樣為溶液狀樣品準確稱取充分混勻後的樣品1.000g～2.000g(±0.01g)於10mL具塞比色管中，在水浴上餾除乙醇等揮發性有機溶劑，用甲醇稀釋到10mL，充分混勻後，濾膜過濾後獲得試樣處理液；待測試樣為膏狀、乳狀樣品準確稱取充分混勻後的樣品1.000g～2.000g(±0.01g)於100mL錐形瓶中，在水浴上餾除乙醇等揮發性有機溶劑，加入飽和氯化鈉溶液50mL，2％硫酸2.0mL，充分振蕩溶解後轉移至250mL分液漏鬥，以環己烷30mL分三次萃取，必要時離心分離，合併環己烷，減壓蒸餾除去環己烷，甲醇溶解殘留物，轉移到10mL具塞比色管中，用甲醇稀釋到刻度，濾膜過濾後獲得試樣處理液；稱取孕激素黃體酮標準品，用甲醇溶解並定容，作為黃體酮儲備液，然後進一步用甲醇稀釋為具有濃度梯度的標準使用液；利用超高效液相色譜質譜聯用儀(UPLC/MS/MS)對標準使用液和試樣處理液進行定性和定量檢測；計算結果，試樣中孕激素黃體酮的計算公式為式中X-試樣中孕激素黃體酮的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；C-試樣處理液濃度(ng/mL)；V-試樣定容體積，單位為克(mL)；m-試樣質量，單位為克(g)；2、根據權利要求l所述的一種化妝品中孕激素黃體酮的測定方法，其特徵在於水浴上餾除乙醇等揮發性有機溶劑，很好的解決了試樣液中一些有機溶劑的殘存，避免了其對色鐠峰的影響。3、根據權利要求1所述的一種化妝品中孕激素黃體酮的測定方法，其特徵在於添加飽和氯化鈉水溶液50mL,2。/。硫酸水溶液2mL,充分振蕩溶解，能夠有效的去除油脂等大分子類物質，防止乳化，從而保證樣品的回收率。4、根據權利要求1所述的一種化妝品中孕激素黃體酮的測定方法，其特徵在於採用環己烷30mL分三次萃耳又，環己烷30mL和三次萃耳又，為最佳萃取條件。5、根據權利要求1所述的一種化妝品中孕激素黃體酮的測定方法，其特徵在於採用曱醇作為定容液，很好的保證了在質語條件下，標準液和試樣液保持了相同的介質溶液，從而達到最優的離子化條件。6、根據權利要求1所述的一種化妝品中孕激素黃體酮的測定方法，其特徵在於所述利用超高效液相色譜質語聯用儀(UPLC/MS/MS)對試樣處理液進行定性和定量4全測的液相條件為色i普柱ACQUITYUPLCBEHC18,2.lmmx50mm,1.7,柱溫30°C流動相乙腈+0.2%甲酸水溶液(60+40)流速0.3mlVmin進樣量5pL此條件下具有4艮好的分離效旲。7、根據權利要求1所述的一種化妝品中孕激素黃體酮的測定方法，其特徵在於所述利用超高效液相色譜質語聯用儀(UPLC/MS/MS)對試樣處理液進行定性和定量^r測的質語條件為離子源電噴霧離子源；掃描方式正離子掃描；-險測方式多反應4全測；毛細管電壓(Kv):1.0;離子源溫度(°C):110;去溶劑溫度(°C):350;去溶劑流速(L/hr):700;本實驗的多反應監測(M腿)、駐留時間、錐孔電壓和碰撞能量參數見表l。表lACQUITYTQDMRM參數tableseeoriginaldocumentpage4注315.30〉109.OO為定性離子對315.30〉97.OO為定量離子對此條件下，黃體酮具有很好的色語峰形和較高的質語靈敏度8、根據權利要求1所述的一種化妝品中孕激素黃體酮的測定方法，其特徵在於利用較為適用的超高效液相色i普質語聯用儀(UPLC/MS/MS)對樣品中孕激素黃體酮進行定性和定量檢測。全文摘要本發明涉及一種通過超高效液相色譜質譜聯用儀(UPLC/MS/MS)對化妝品中孕激素黃體酮的測定方法。待測試樣經餾除乙醇等揮發性有機溶劑後，加入飽和氯化鈉和2％硫酸水溶液，充分振蕩溶解，環己烷萃取後減壓蒸餾，甲醇定容、過濾後得到試樣處理液；準確稱取黃體酮標準品，用甲醇溶解、稀釋為具有濃度梯度的標準使用液；利用液質聯用儀(UPLC/MS/MS)對標準使用液和試樣處理液進行定性、定量檢測；然後便可計算出結果。採用本發明的方法檢測化妝品中黃體酮的含量，快速有效，相對平均偏差小於5.0％，由此可見，本發明的方法，為化妝品中孕激素黃體酮的檢測，提供了一種可靠的便於實施的方法，能夠滿足研究和生產中的需要。文檔編號G01N30/00GK101451981SQ20081024673公開日2009年6月10日申請日期2008年12月30日優先權日2008年12月30日發明者薇宋申請人:譜尼測試科技(北京)有限公司