一種hplc法分析分離左乙拉西坦的方法

2023-08-06 03:24:56

專利名稱：一種hplc法分析分離左乙拉西坦的方法
技術領域：
本發明屬涉及一種高效液相色譜法，尤其是一種分析分離左乙拉西坦及其對 映異構體的高效液相色譜法。左乙拉西坦為一種抗癲癇輔助藥，分子式為C8H14N202，化學名為(S)-a-乙 基-2-氧代-l-吡咯烷乙醯胺，其結構式為該分子中含1個手性碳原子，在通過定向合成目標化合物左乙拉西坦的過程中需 要控制其對映異構體的含量。對於左乙拉西坦的對映異構體雜質，在藥物合成過程當中是需要進行質量控 制的。含手性碳原子的對映異構體的分離一直是手性藥物合成和製劑過程中質量 控制的難點，實現左乙拉西坦及其對應異構體的分離在左乙拉西坦藥物的合成和 製劑過程的質量控制方面具有現實意義。本發明的目的在於提供一種分析分離左乙拉西坦及其對映異構體雜質的高 效液相色譜方法，從而實現左乙拉西坦與其對映異構體雜質的分離測定。申請人發現，以纖維素類手性柱，以正相混合溶劑(或者加入一定比例的胺) 為流動相，可以將左乙拉西坦及其對映異構體進行有效分離，從而可以準確控制 左乙拉西坦的質量。本發明的方法能簡單、快速、準確地分析分離左乙拉西坦及 其對映異構體雜質。進一步地，選用纖維素類手性柱OJ-H (DACEL250mmx4.6mm， 5pm)，可 以獲得更好的分析分離效果。OJ-H (DACEL250mmx4.6mm， 5pm)纖維素類手背景技術發明內容性柱是以對甲苯基甲酸酯鍵合纖維素為填料。進一步地，本發明的正相溶劑選用正己烷和異丙醇的混合溶劑。本發明的方法中的流動相選用體積比為卯io~95: 5正己烷和異丙醇的混 合溶劑。本發明的方法中的流動相中的胺選用二乙胺。本發明所述的分析分離方法，可按照以下方法實現(1) 取左乙拉西坦樣品適量，用無水乙醇溶解樣品，配製成每lmL含左乙 拉西坦0.1mg 0.5mg的樣品溶液。(2) 設置流動相流速為0.4 1.2mL/min，檢測波長為205 235 nm，最佳檢 測波長為210nm，色譜柱柱溫箱為20 40°C，色譜柱柱溫的最佳溫度為室溫o(3) 取(l)的樣品溶液2-50pL注入液相色譜儀，完成左乙拉西坦及其對映異 構體的分析與分離。其中高效液相色譜儀島津LC-10ATv; ， SPD-M10Avp， SCL-10Av/ ， DGU-12A;色譜柱OJ-H (DACEL4.6mmx250mm， 5pm)纖維素手性色譜柱；流動相正己烷-異丙醇=90 : 10;檢測波長210nm;流速1.0mL/min;柱溫室溫；進樣體積10pL。本發明採用纖維素類OJ-H (DACEL4.6mmx250mm， 5nm)手性色譜柱，能 夠有效的分析分離左乙拉西坦及其對映異構體；選擇流動相溶解樣品，確保了溶 液的穩定性；選擇進樣體積10pL，柱溫為室溫，提高了色譜峰的對稱性。本發 明解決了含左乙拉西坦及其對映異構體的原料及製劑的分析與分離問題，從而確 保了左乙拉西坦及其製劑的質量可控。


圖l實施例l，正己垸-異丙醇二90:10的HPLC圖； 圖2實施例2，正己垸-異丙醇二95:5的HPLC圖；圖3實施例3，正己垸-異丙醇=92.5:7.5的HPLC圖4實施例4，正己烷-異丙醇-二乙胺=90:10:0.1的HPLC圖。
具體實施例方式
實施例1
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATv/ ， SPD-M10Av; ， SCL-10Av; ， DGU-12A; 色譜柱OJ-H (DACEL4.6mmx250mm， 5pm);
流動相正己烷-異丙醇=90 : 10;
流速1.0mL/min; 柱溫室溫； 進樣體積10pL。 檢測波長210nm;
實驗步驟
分別稱取左乙拉西坦及其對映異構體各5mg，置於25mL容量瓶中，加無水 乙醇溶解並稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。並分別稱取左乙拉西坦其對 映異構體各5mg，分別置於2個25mL容量瓶中，加無水乙醇溶解並稀釋置刻度， 搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖l，圖中l號峰為左乙拉西坦，2號峰為異構體，可以看 出在該條件下左乙拉西坦主峰可以和異構體完全分離開來，且左乙拉西坦主峰在 9.25min左右。
實施例2
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATv/ ， SPD-M10Av; ， SCL-10Av/ ， DGU-12A; 色譜柱OJ-H (DACEL4.6mmx250mm， 5nm);
流動相正己垸-異丙醇=95 : 5;
流速1.0mL/min; 檢測波長210nm;柱溫室溫； 進樣體積10pL。
實驗步驟
分別稱取左乙拉西坦及其對映異構體各5mg，置於25mL容量瓶中，加無水 乙醇溶解並稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。並分別稱取左乙拉西坦其對 映異構體各5mg，分別置於2個25mL容量瓶中，加無水乙醇溶解並稀釋置刻度， 搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖2，圖中l號峰為左乙拉西坦，2號峰為異構體，可以看 出在該條件下左乙拉西坦主峰可以和異構體基線分離開，且左乙拉西坦主峰在 19.06min左右。
實施例3
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATv; ， SPD-M10A甲，SCL-10Ayp， DGU-12A;
色譜柱OJ-H (DACEL4.6mmx250mm， 5nm);
流動相正己烷-異丙醇=92.5 : 7.5;
流速1.0mL/min;
檢測波長210nm;
柱溫室溫；
進樣體積lOpL。
實驗步驟
分別稱取左乙拉西坦及其對映異構體各5mg，置於25mL容量瓶中，加無水 乙醇溶解並稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。並分別稱取左乙拉西坦其對 映異構體各5mg，分別置於2個25mL容量瓶中，加無水乙醇溶解並稀釋置刻度， 搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖3，圖中l號峰為左乙拉西坦，2號峰為異構體，可以看 出在該條件下左乙拉西坦主峰可以和異構體基線分離開來，且左乙拉西坦主峰在 16.26min左右。實施例4
儀器與條件
高效液相色譜儀島津LC-10ATvp, SPD-M10Ayp， SCL-10Av; ， DGU-12A;
色譜柱OJ國H (DACEL4.6mmx250mm， 5pm);
流動相正己烷-異丙醇-二乙胺=卯10 : 0.1;
流速1.0mL/min;
檢測波長210nm;
柱溫室溫；
進樣體積lOpL。
實驗步驟
分別稱取左乙拉西坦及其對映異構體各5mg，置於25mL容量瓶中，加無水 乙醇溶解並稀釋置刻度，搖勻，作為混合樣品溶液。並分別稱取左乙拉西坦其對 映異構體各5mg，分別置於2個25mL容量瓶中，加無水乙醇溶解並稀釋置刻度， 搖勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記 錄色譜圖。結果見附圖4，圖中l號峰為左乙拉西坦，2號峰為異構體，可以看 出在該條件下左乙拉西坦主峰可以和異構體基線分離開來，且左乙拉西坦主峰在 9.75min左右。
權利要求
1. 一種高效液相色譜法分析分離左乙拉西坦及其對映異構體的方法，其特徵在於採用以纖維素類手性柱，以含有或不含有有機鹼的正相混合溶劑為流動相。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述纖維素類手性柱為OJ-H(DACEL250mmx4.6mm， 5|im)。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於採用正相色譜法。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的正相混合溶劑為正己垸和異 丙醇的混合溶劑。
5. 根據權利要求3所述的方法，其特徵在於所述的正己垸和異丙醇的體積比為 95 : 5~90 : 10。
6. 根據權利要求1所述的分離分析方法，所述的有機鹼選自選乙二胺、二乙胺或三乙胺。
7. 根據權利要求6所述的方法，其特徵在於所述的有機鹼為二乙胺。
8. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的二乙胺的加入量為 0.1%~0.5%。
9. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於包括以下步驟(1) 取左乙拉西坦樣品適量，用無水乙醇溶解樣品，得到lmL含左乙拉西坦 0.1mg 0.5mg的樣品溶液。(2) 設置流動相流速為0.4 1.2mL/min,檢測波長為210nm，色譜柱柱溫箱 為室溫。(3) 取步驟(l)的樣品溶液2-50pL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。
全文摘要
本發明公開了一種左乙拉西坦及其對映異構體分析與分離測定方法，採用纖維素類手性柱，以含有或不含有胺的正相混合溶劑為流動相的正相色譜法進行分離，用該方法可以快速的分離分析左乙拉西坦以及含左乙拉西坦製劑的對映異構體雜質。
文檔編號G01N30/06GK101532996SQ200810101629
公開日2009年9月16日 申請日期2008年3月10日 優先權日2008年3月10日
發明者牟淑慧 申請人:北京德眾萬全醫藥科技有限公司