羅漢果醇的提純製備方法
2023-07-20 19:12:36
專利名稱：羅漢果醇的提純製備方法
技術領域：
本發明屬於高純度物質的提純製備方法，具體說是一種羅漢果醇的提純製備方法。
背景技術：
羅漢果醇為葫蘆烷型四環三萜類化合物，目前僅局限分布在葫蘆科植物羅漢果Momordica grosvenori Swingle的乾燥果實中。其結構式如下圖所示 羅漢果醇為羅漢果屬植物的特徵性成分，高純度的羅漢果醇可作為化學對照品用於羅漢果藥材及含羅漢果製劑的鑑別及質量控制。羅漢果醇具有抗腫瘤等藥理作用，同時羅漢果醇可通過結構修飾合成高甜度的羅漢果苷，如羅漢果苷V、羅漢果苷IV等一系列甜味劑，因此製備羅漢果醇具有重要意義。
羅漢果醇雖然存在於羅漢果中，但含量低微，難以分離純化和大量製備。如直接從羅漢果中分離羅漢果醇，則工藝複雜，收率低，成本高，難以工業化生產。
經對現有技術文獻檢索發現，《農業與食品化學》(《J Agric Food Chem.》)於2002年11月，6710頁-6715頁，名稱為「羅漢果葫蘆烷型皂苷及其他三萜類成分對促癌劑12-O-十四醯基-佛波醇-13-乙酸酯誘導的早期EB病毒抗原的抑制作用」(「Inhibitory effects of cucurbitane glycosides and other triterpenoids fromthe fruit of Momordica grosvenori on epstein-barr virus early antigen induced bytumor promoter 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate」)公開了一種從羅漢果直接分離羅漢果醇的方法，羅漢果用99％的乙醇回流提取後得醇提物，醇提物用乙酸乙酯萃取，萃取物經大孔樹脂層析後再用製備型高效液相分離後得到羅漢果醇。這種方法收率非常低，不到十萬分之五，且操作繁瑣，成本高，不利於大量製備羅漢果醇。
發明內容
本發明的目的在於克服現有技術中的不足，提供一種羅漢果醇的提純製備方法，通過酸水解製備高純度羅漢果醇的簡便方法，具有純度高、得率高、工藝簡單、成本低等優點。
本發明是通過以下技術方案實現的，包括如下步驟(1)先將羅漢果粉碎，加入70％～95％的乙醇回流提取得醇浸膏。
(2)將步驟(1)中的醇浸膏懸浮於水，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯浸膏，取母液。
(3)母液中加入鹽酸溶液和乙酸乙酯，加熱進行酸水解；水解後分取乙酸乙酯層，用鹼液調節至中性，分離乙酸乙酯，減壓回收溶劑，得到含羅漢果醇的浸膏。
(4)將步驟(3)中的含羅漢果醇的浸膏進行矽膠柱層析(矽膠用量為浸膏重量的50～100倍)，氯仿洗脫，回收氯仿，棄去氯仿洗脫物；繼續用氯仿-甲醇(100∶2～100∶5)洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，得羅漢果醇粗品。
(5)取羅漢果醇粗品進行重結晶，即得純度大於95％以上的羅漢果醇。
其中中和用鹼可選用NaOH、碳酸鈉或氨水。
鹽酸水解時其濃度為5％～15％。
本發明所得化合物為白色鱗片狀結晶或白色針狀結晶。
本發明有益效果(1)通過用乙醇從羅漢果中提取總苷，然後通過酸水解，水解液用乙酸乙酯抽提得到苷元，然後將苷元通過一次矽膠柱層析的方法就可得到高純度羅漢果醇。採用上述方法分離製備的羅漢果醇，純度高，均在95％以上；工藝簡便、得率高，可達1％以上。
(2)採用乙醇加熱回流提取的方法，無毒副作用且溶劑可回收利用，同時也提高了提取的效率。
(3)採用乙酸乙酯萃取的方法既去除了提取物中大部分脂溶性成分(如油脂、蠟質、黃酮)，乙酸乙酯又可回收反覆使用，節約了成本。
(4)水解時加入乙酸乙酯，使水解後產生的目標產物羅漢果醇及時進入乙酸乙酯層，既避免了長時間與酸接觸可能產生的化學變化，同時又使水解和萃取兩步操作一步完成，大大簡化了工藝。同時加入乙酸乙酯萃取，也避免了水解液中大量糖分的幹擾，因而通過一次常壓矽膠柱層析即可得到純品。
(5)採用去雜後的水溶液進行酸水解，大大提高的羅漢果醇的收率。
具體實施例方式
下面對本發明的實施例作詳細說明本實施例在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護範圍不限於下述的實施例。
實施例1本實施例1是在以下實施條件和技術要求條件下實施的1)羅漢果乾果100g，粉碎成極粗粉，加入600mL 70％的工業乙醇回流提取3h，濾過，濾液回收乙醇(可再次用於藥材提取)，得醇浸膏9.5g。
2)取醇浸膏，加入100mL的水懸浮，然後用50mL水體積的水飽和的乙酸乙酯萃取，分離乙酸乙酯層，減壓回收乙酸乙酯(可再次用於萃取)，得乙酸乙酯浸膏1.1g。
3)乙酸乙酯萃取後的水溶液加入鹽酸溶液使鹽酸的濃度達5％，然後加入乙酸乙酯100mL，加熱回流8h。冷卻至室溫，分取乙酸乙酯液，向乙酸乙酯液中加入NAOH溶液，調節pH至7後，分離乙酸乙酯層，減壓回收乙酸乙酯(可反覆使用)，得含羅漢果醇的浸膏1.9g。
4).將含羅漢果醇的浸膏進行矽膠柱層析(矽膠300-400目，用量95g；(柱直徑3.5cm，幹法裝柱，幹法上樣)，800mL氯仿洗脫，回收氯仿(可反覆使用)，棄去氯仿洗脫物；1500mL氯仿-甲醇(100∶2)洗脫，流速5mL/min，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得羅漢果醇粗品1.2g。
5)羅漢果醇粗品用甲醇重結晶1次，得羅漢醇針狀結晶950mg，經檢驗其純度為97.1％。
實施例2本實施例2是在以下實施條件和技術要求條件下實施的1)羅漢果乾果100g，粉碎成粗粉，加入800mL 95％的工業乙醇回流提取6h，濾過，濾液回收乙醇(可再次用於藥材提取)，得浸膏。重複上述操作，合併兩次提取所得浸膏，得醇浸膏17.2g。
2)取醇浸膏，加入200mL的水懸浮，然後用150mL的水飽和的乙酸乙酯萃取，分離乙酸乙酯層，回收乙酸乙酯(可再次用於萃取)，得浸膏。重複上述操作1次，合併兩次萃取所得浸膏，得乙酸乙酯浸膏2.2g。
3)乙酸乙酯萃取後的水溶液加入鹽酸溶液使鹽酸的濃度達15％，然後加入乙酸乙酯100mL，加熱回流4h。冷卻至室溫，分取乙酸乙酯液，向乙酸乙酯液中加入碳酸鈉溶液，調節pH至7後，分離乙酸乙酯層，減壓回收乙酸乙酯(可反覆使用)，得含羅漢果醇的浸膏2.7g。
4)將含羅漢果醇的浸膏進行矽膠柱層析(矽膠100-200目，用量為270g，柱直徑4.5cm，溼法裝柱，幹法上樣)，1000mL氯仿洗脫，回收氯仿(可反覆使用)，棄去氯仿洗脫物；1200mL氯仿-甲醇(100∶5)洗脫，流速8mL/min，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得羅漢果醇粗品1.7g。
5)取羅漢果醇粗品用丙酮重結晶1次，得鱗片狀羅漢果醇結晶1260mg，經檢驗其純度為99.1％。
實施例3本實施例3是在以下實施條件和技術要求條件下實施的1)羅漢果乾果100g，粉碎成極粗粉，加入750mL 80％的工業乙醇回流提取4h，濾過，濾液回收乙醇(可再次用於藥材提取)，得浸膏。重複上述操作1次，合併兩次提取所得浸膏，得醇浸膏13.0g。
2)取醇浸膏，加入100mL的水懸浮，然後用100mL的水飽和的乙酸乙酯萃取，分離乙酸乙酯層，減壓回收乙酸乙酯(可再次用於萃取)，得浸膏。重複上述操作1次，合併兩次萃取所得浸膏，得乙酸乙酯浸膏1.6g。
3)乙酸乙酯萃取後的水溶液加入鹽酸溶液使鹽酸的濃度達10％，然後加入乙酸乙酯100mL，加熱回流6h。冷卻至室溫，分取乙酸乙酯液，向乙酸乙酯液中加入氨水溶液，調節pH至7後，分離乙酸乙酯層，減壓回收乙酸乙酯(可反覆使用)，得含羅漢果醇的浸膏2.4g。
4)將含羅漢果醇的浸膏進行矽膠柱層析(矽膠200-300目，用量為192g，柱直徑3.5cm，溼法裝柱，溼法上樣)，1000mL氯仿洗脫，回收氯仿(可反覆使用)，棄去氯仿洗脫物；1600mL氯仿-甲醇(100∶3)洗脫，流速5mL/min，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得羅漢果醇粗品1.5g。
5)取羅漢果醇粗品用氯仿進行重結晶，即得高純度的羅漢果醇針狀結晶1126mg，經檢驗其純度為98.4％。
實施例4本實施例4是在以下實施條件和技術要求條件下實施的1)羅漢果乾果100g，粉碎成極粗粉，加入800mL 70％的工業乙醇回流提取4h，濾過，濾液回收乙醇(可再次用於藥材提取)，得浸膏。加入500mL 70％的工業乙醇回流提取2h，濾過，濾液回收乙醇(可再次用於藥材提取)，得浸膏。合併兩次提取所得浸膏，得醇浸膏12.5g。
2)取醇浸膏，加入100mL的水懸浮，然後用100mL的水飽和的乙酸乙酯萃取，分離乙酸乙酯層，減壓回收乙酸乙酯(可再次用於萃取)，得浸膏。重複上述操作1次，合併兩次萃取所得浸膏，得乙酸乙酯浸膏1.5g。
3)乙酸乙酯萃取後的水溶液加入鹽酸溶液使鹽酸的濃度達10％，然後加入乙酸乙酯100mL，加熱回流6h。冷卻至室溫，分取乙酸乙酯液，向乙酸乙酯液中加入氨水溶液，調節pH至7後，分離乙酸乙酯層，減壓回收乙酸乙酯(可反覆使用)，得浸膏含羅漢果醇的浸膏2.2g。
4)將含羅漢果醇的浸膏進行矽膠柱層析(矽膠300-400目，用量為150g，柱直徑3.5cm，溼法裝柱，溼法上樣)，750mL氯仿洗脫，回收氯仿(可反覆使用)，棄去氯仿洗脫物；1000mL氯仿-甲醇(100∶4)洗脫，流速5mL/min，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得羅漢果醇粗品1.4g。
5)取羅漢果醇粗品用氯仿-甲醇溶液(1∶1)進行重結晶，即得高純度的羅漢果醇鱗片狀結晶1105mg，經檢驗其純度為99.4％。
權利要求
1.一種羅漢果醇的提純製備方法，其特徵在於，包括如下步驟(1)先將羅漢果粉碎，加入乙醇回流提取得醇浸膏。(2)將步驟(1)中的醇浸膏懸浮於水，乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯浸膏，取母液。(3)母液中加入鹽酸溶液和乙酸乙酯，加熱進行酸水解；水解後分取乙酸乙酯層，用鹼液調節至中性，分離乙酸乙酯，減壓回收溶劑，得到含羅漢果醇的浸膏。(4)將步驟(3)中的含羅漢果醇的浸膏進行矽膠柱層析，氯仿洗脫，回收氯仿，棄去氯仿洗脫物；繼續用氯仿-甲醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，得羅漢果醇粗品。(5)取羅漢果醇粗品進行重結晶，即得純度大於95％以上的羅漢果醇。
2.如權利要求1所述的羅漢果醇的提純製備方法，其特徵在於，步驟(1)所述的乙醇，其質量百分比濃度為70％～95％。
3.如權利要求1所述的羅漢果醇的提純製備方法，其特徵在於，步驟(3)所述的鹽酸溶液水解時，其質量百分比濃度為5％～15％。
4.如權利要求1所述的羅漢果醇的提純製備方法，其特徵在於，步驟(3)所述的鹼液為NaOH溶液或碳酸鈉溶液或氨水。
5.如權利要求1至4任一所述的羅漢果醇的提純製備方法，其特徵在於，步驟(4)所述的矽膠柱層析，其矽膠用量為浸膏重量的50～100倍。
6.如權利要求1至4任一所述的羅漢果醇的提純製備方法，其特徵在於，步驟(4)所述的氯仿-甲醇，其配比比例為100∶2～100∶5。
全文摘要
一種羅漢果醇的提純製備方法，屬於高純度物質的提純製備方法。本發明包括步驟(1)先將羅漢果粉碎，加入乙醇提取得醇浸膏；(2)醇浸膏懸浮於水，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯浸膏，取母液；(3)母液中加入鹽酸溶液和乙酸乙酯，加熱進行酸水解；水解後分取乙酸乙酯層，用鹼液調節至中性，分離乙酸乙酯，減壓回收溶劑，得到含羅漢果醇的浸膏；(4)將浸膏進行矽膠柱層析，氯仿洗脫，回收氯仿；再用氯仿－甲醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，得羅漢果醇粗品；(5)取羅漢果醇粗品進行重結晶，即得純度大於95％以上的羅漢果醇。通過酸水解製備高純度羅漢果醇的簡便方法，具有純度高、得率高、工藝簡單、成本低等優點。
文檔編號C07J75/00GK101033244SQ20071003912
公開日2007年9月12日 申請日期2007年4月5日 優先權日2007年4月5日
發明者李曉波, 王夢月 申請人:上海交通大學