一種用於治療肝臟疾病的中藥組合物及其製備方法
2023-08-11 11:37:31 2
專利名稱：一種用於治療肝臟疾病的中藥組合物及其製備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，涉及一種用於治療肝臟疾病的中藥組合物及其製備方法。
背景技術：
肝炎是目前世界上危害最為嚴重的傳染性疾病之一，且又與肝癌發生密切相關。據世界衛生組織的統計，目前，全球約有3.5億人為慢性肝炎患者或為無症狀病毒感染者。這些慢性肝炎的病人有轉為肝硬化，肝癌的高危險性，每年有100多萬人死於和肝炎、肝硬化及肝癌有關的疾病。我國是肝炎病高發地區，據統計，肝癌患者中有90％有肝炎病毒感染的背景，而目前肝癌已佔腫瘤致死率的第二位。
田基黃Herba Hyperici Japonici，本品始載於《生草藥性備要》，《植物名實圖考》稱地耳草。為藤黃科植物地耳草全草。原植物地耳草Hypericum japonicum Thumb.ex Murray。生于田野較溼潤處。廣布於長江流域極其以南各地。田基黃主產於江西、福建、廣東、廣西、四川、貴州等地。近十幾年國內外化學家們對其化學成分的提取、分離、鑑定；藥理作用；臨床應用等做了深一步研究並取得巨大進展。在化學成分上，提取並確定了近20種的新化合物結構。藥理方面進行了多方面的開發研究，如田基黃的抑菌作用；保肝作用；抑制腫瘤作用；對心血管系統作用等。在現代臨床研究中，田基黃提煉製成針劑用於臨床治療急、慢性肝炎等。
目前，田基黃的臨床應用還多以複方的形式與其他中藥配伍應用，與田基黃的臨床應用有關的中國專利目前有二十餘件，多為複方應用；中國專利200310104504.X公開了一種田基黃總黃酮粉針劑的製備方法。
目前對田基黃藥材及田基黃注射液的研究中，尚未見有關從田基黃中分離純化有效部位及單體，進行肝臟疾病治療方面活性篩選的研究報導及專利申請；本發明是針對田基黃的保肝活性，在藥理活性篩選的跟蹤指導下，從田基黃中分離純化出有保肝、抗肝炎、抗肝纖維化的有效部位——田基黃總黃酮，並從中分離鑑定了主要的四個單體化合物槲皮苷、異槲皮苷、田基黃雙呫噸酮C及田基黃雙呫噸酮D，其中田基黃雙呫噸酮C及田基黃雙呫噸酮D為首次發現的新化合物。
發明內容
本發明的目的在於提出一種從藥材田基黃中提取的能治療肝臟疾病的有效成分組合物及其製備方法，以及在治療急性和慢性病毒性肝炎、肝損傷的藥物中的應用。
本發明從中藥田基黃中提取具有治療肝臟疾病作用組合物的製備方法，步驟如下1、提取採用溶劑提取法，提取溶劑可以選用水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇或乙酸乙酯等有機溶劑或其幾種的混合溶劑，提取方法為超聲提取、滲漉提取或加熱回流提取，提取次數可以為1-3次。
2、萃取採用溶劑萃取法，可以將步驟1所得的提取物用水分散，再用有機溶劑萃取，有機溶劑可以選用氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯或丁醇等，優選乙酸乙酯，萃取次數可以為1-4次。
3、濃縮乾燥步驟2所得萃取液過0.22μm濾膜，濾液減壓濃縮至幹，得到有效成份田基黃總黃酮組合物。
採用以上的工藝步驟製得的總黃酮組合物，其中黃酮類重量含量為80～99.5％，且組合物中主要化學成分明確，含量固定，具有工藝簡潔，生產成本低的優點。
本發明提供的治療急性和慢性病毒性肝炎、肝損傷、肝纖維化等肝臟疾病的藥物組合物，其中含有上述從中藥田基黃提取純化得到的有效成份田基黃總黃酮，該總黃酮中黃酮類成分的重量含量為80％-99.5％。
化學成分及藥理活性篩選對以上所得到的田基黃總黃酮組合物，應用色譜層析技術，進一步從中分離鑑定了21種黃酮類化合物，經藥理活性跟蹤篩選出4個具有肝保護及抗肝纖維化的化合物，分別為槲皮苷、異槲皮苷、田基黃雙呫噸酮C及田基黃雙呫噸酮D，它們為總黃酮的主要成份。
其結構式分別如下所示 槲皮苷結構式異槲皮苷結構式
田基黃雙呫噸酮C結構式 田基黃雙呫噸酮D結構式上述組合物的藥理活性篩選如下一、田基黃總黃酮，對試驗性肝損傷的保護作用的動物驗證(一)硫代乙醯胺致小鼠急性肝損傷模型1、試驗動物昆明種小鼠，性別不限，體重19～22g，隨意進食及飲水，室溫(23±2℃)，自然光照。
2、試驗方法將小鼠隨機分成7組，除正常對照組外，其餘各組均以硫代乙醯胺(TAA)30mg/Kg，i.p，中毒後3h、6h、9h，連續給藥3次，最後一次給藥後24小時，即第二天取血，測定如下指標，同時稱肝重，並進行病理學檢查。結果見表1。
表1各組試藥對硫代乙醯胺致小鼠急性肝損傷模型各指標的影響(X±SD，n＝20)
*與NS對照組比較P＜0.05；P＜0.01結果與NS對照組比較，田基黃總黃酮可顯著降低硫代乙醯胺致小鼠急性肝損傷模型造成的肝損害。
(二)四氯化碳致大鼠急性肝中毒模型1、試驗動物成年SD大鼠，性別不限，體重在250～350g左右，餵飼普通顆粒飼料，隨意飲水。
2、試驗方法將大鼠隨機分成6組，除正常對照組外，其餘各組均以50％四氯化碳0.5ml/100g，皮下注射中毒，同時給藥一次，中毒後4h、8h各給藥一次，最後一次給藥後12小時，取血測定ALT，AST等指標的變化，處死動物稱肝重，並進行病理學檢查。結果見表2。
表2各組試藥對四氯化碳致大鼠急性肝損傷模型各指標的影響(X±SD，n＝20)
*與NS對照組比較P＜0.05；P＜0.01結果與NS對照組比較，田基黃總黃酮可顯著降低四氯化碳致大鼠急性肝中毒模型造成的肝損害。
(三)D-氨基半乳糖致大鼠肝中毒模型1、試驗動物成年SD大鼠，性別不限，體重在250～350g左右，餵飼普通顆粒飼料，隨意飲水。
2、試驗方法將大鼠隨機分成4組，除正常對照組外，其餘各組均以D-氨基半乳糖800mg/Kg，腹腔注射中毒，同時給藥一次，給藥後12小時，取血測定SGPT，TBIL等指標的變化，處死動物稱肝重，並進行病理學檢查。結果見表3。
表3各組試藥對D-氨基半乳糖致大鼠肝中毒模型各指標的影響(X±SD，n＝20)
*與NS對照組比較P＜0.05；P＜0.01結果與NS對照組比較，田基黃總黃酮可顯著降低D-氨基半乳糖致大鼠肝中毒模型造成的肝損害。
(四)四氯化碳誘導肝纖維化模型1、試驗動物雄性Wistar大鼠，試驗開始時體重100～150g，飼育22℃室溫，光照周期12h12h環境中，隨意進食及飲水。
2、試驗方法雄性Wistar大鼠，皮下注射0.3ml/100g體重CCl4(溶於花生油中，CCl4體積比為40％)，每周2次，注射12周形成肝纖維化，均為IV期。隨後將肝纖維化大鼠隨機分為以下各組生理鹽水對照組，各樣品組，陽性對照組。每日肌肉注射樣品1次，共8周。生理鹽水對照組每日肌肉注射0.2ml生理鹽水，共進行8周。於治療8周後從下腔靜脈採血作生化測定，然後處死動物，取右葉肝組織，用10％的中性甲醛溶液固定，用於組織學檢查。結果見表4
表4各組試藥對四氯化碳致大鼠慢性肝中毒模型各指標的影響(X±SD，n＝20)(連續11周後)
*與NS對照組比較P＜0.05；P＜0.01結果與NS對照組比較，田基黃總黃酮可顯著降低四氯化碳致大鼠慢性肝中毒模型造成的肝損害。
(二)田基黃雙呫噸酮C及田基黃雙呫噸酮D對肝纖維化模型的影響藥物配製a.根據藥物溶解度用DMSO稀釋配製成濃度為10mg/mL；b.0.45um濾過膜濾過；c.4℃保存復甦HSC-T6細胞株，其表型為活化的HSC每2-3天換液、傳代，所用培養液為DMEM+FCS(滅活的10％小牛)+PS(100u/mL的青黴素和鏈黴素)試驗方法取對數生長期HSC5×103/孔接種於96孔板，37℃，5％CO2，24小時把培養液換成無血清的DMEM，37℃，5％CO2，24小時加入不同濃度的藥物，使其終濃度為(3.125、6.25、12.5、25、50、100ug/mL)，37℃，5％CO2，48小時加入顯色劑KIT-8 10uL/孔，37℃，5％CO2，60分鐘，測定OD值結果如表5、6、7、8
表5田基黃雙呫噸酮C不同時間不同濃度作用於HSC細胞OD值
表6田基黃雙呫噸酮C不同時間不同濃度作用於L02細胞OD值
表7田基黃雙呫噸酮D不同時間不同濃度作用於HSC細胞的OD值
表8田基黃雙呫噸酮D不同時間不同濃度作用於L02細胞的OD值
藥劑學研究本發明的藥物組合物含有治療有效量的田基黃總黃酮，以及含有一種或多種藥學上可接受的載體。
本發明的藥物組合物可用於製備治療急性和慢性病毒性肝炎、肝損傷、肝纖維化的藥物。
上文所述藥學上可接受的載體是指藥學領域常規的藥物載體，例如稀釋劑、賦形劑如水等，填充劑如澱粉、蔗糖等；粘合劑如纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮；溼潤劑如甘油；崩解劑如瓊脂、碳酸鈣和碳酸氫鈉吸收促進劑如季銨化合物；表面活性劑如十六烷醇；吸附載體如高嶺土和皂粘土；潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂、和聚乙二醇等。另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。
本發明組合物可以通過口服、鼻吸入、直腸或腸胃外給藥的方式施用於需要這種治療的患者。用於口服時，可將其製成常規的固體製劑如片劑、粉劑、粒劑、膠囊等，製成液體製劑如水或油懸浮劑或其它液體製劑如糖漿、酏劑等；用於腸胃外給藥時，可將其製成注射用的溶液、水或油性懸浮劑等。優選的形式是片劑、包衣片劑、膠囊、栓劑、鼻噴霧劑和注射劑、注射用凍乾粉針劑、膠囊劑、滴丸劑等。
本發明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學領域的常規生產方法製備。例如使活性成分與一種或多種載體混合，然後將其製成所需的劑型。
本發明的藥物組合物製劑中含有重量比為0.1％-99.5％的總黃酮活性成分，優選含有重量比為0.5％-95％的總黃酮活性成分。
具體實施例方式
下面的實施例可以使本專業技術人員更全面地理解本發明，但不以任何方式限制本發明。
實施例1田基黃乾燥藥材5.0Kg，用60％乙醇溶液50升回流提取2次，每次2小時，合併兩次提取液，減壓濃縮得到浸膏620g，用2升水分散後，調節pH值至5～6，以乙酸乙酯30升分三次萃取，合併三次萃取液，加入無水硫酸鈉脫水後，過0.45μm過濾，濾液減壓濃縮至幹，得到田基黃總黃酮120克。
實施例2取上述田基黃總黃酮組合物10g，與50g矽膠混合拌樣，加到已裝好的矽膠柱頂端，以氯仿∶甲醇系統梯度洗脫，TLC跟蹤，分別合併氯仿∶甲醇(15∶1、5∶1)部分，經柱層析純化後得到田基黃雙呫噸酮C 0.4g、田基黃雙呫噸酮D 0.7g，槲皮苷3.6g及異槲皮苷4.7g。
實施例3片劑田基黃總黃酮 60g乳糖 187g玉米澱粉 50g硬脂酸鎂 3g製備方法將田基黃總黃酮、乳糖和澱粉混合，用水均勻溼潤，把溼潤後的混合物過篩並乾燥，再過篩，加入硬脂酸鎂，然後將混合物壓片，每片重300mg，田基黃總黃酮含量為60mg。
實施例4安瓿劑田基黃總黃酮10g氯化鈉 9g製備方法將田基黃總黃酮和氯化鈉溶解於適量的注射用水中，過濾所得溶液，在無菌條件下裝入安瓿瓶中，每支含田基黃總黃酮10mg實施例5注射用凍乾粉針劑田基黃總黃酮 10g甘露醇20g製備方法將田基黃總黃酮和甘露醇溶解於適量的注射用水中，過濾所得溶液，在無菌條件下裝入西林瓶中，凍幹，每支含田基黃總黃酮10mg。
權利要求
1.一種用於治療肝臟疾病的中藥組合物，其特徵在於含有從中藥田基黃提取、純化得到的有效部位田基黃總黃酮，總黃酮中黃酮類成分的重量含量為80～99.5％。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於所述總黃酮成分主要為槲皮苷、異槲皮苷、田基黃雙呫噸酮C及田基黃雙呫噸酮D。
3.一種如權利要求1所述的藥物組合物的製備方法，其特徵在於採用以下步驟(1)提取採用溶劑提取法，提取溶劑選用水、甲醇、乙醇、丙酮、丁醇或乙酸乙酯或其幾種的混合溶劑，提取方法為超聲提取、滲漉提取或加熱回流提取，提取次數為1-3次；(2)萃取採用溶劑萃取法，將步驟(1)所得的提取物用水分散，再用有機溶劑萃取，有機溶劑選用氯仿、二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯或丁醇，萃取次數可以為1-4次。(3)濃縮乾燥步驟(2)所得萃取液過0.22μm濾膜，濾液減壓濃縮至幹，得到有效成份田基黃總黃酮組合物。
4.根據權利要求2所述的藥物組合物，其特徵在於還含有一種或多種藥學上可接受的載體組成片劑、注射劑、注射用凍乾粉針劑、膠囊劑、滴丸劑。
5.根據權利要求4所述的藥物組合物，其特徵在於總黃酮活性成份的重量含量為0.1％-99.5％。
全文摘要
本發明屬醫藥技術領域，具體涉及一種用於治療肝臟疾病的中藥組合物及其製備方法。該中藥組合物是從中藥田基黃中提取、純化製得的有效部位，其中黃酮類成分的含量為80～99.5％。該黃酮類成分主要為槲皮苷、異槲皮苷、田基黃雙呫噸酮C及田基黃雙呫噸酮D。上述組合物的製備方法是以田基黃藥材為原料，經乙醇提取、濃縮、調節pH值、乙酸乙酯萃取得到總黃酮有效部位，具有工藝簡單、總黃酮轉移率高的優點。本發明所述的中藥組合物可用於肝部疾病如急性和慢性病毒性肝炎、肝纖維化、肝損傷的治療。
文檔編號A61K9/19GK1660307SQ200410099268
公開日2005年8月31日 申請日期2004年12月29日 優先權日2004年12月29日
發明者張衛東, 傅芃, 李慧梁, 張川, 蘇娟, 柳潤 申請人:中國人民解放軍第二軍醫大學