一種24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的組合物製劑和純化工藝的製作方法

2023-08-10 23:50:41

專利名稱：：一種24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的組合物製劑和純化工藝的製作方法
技術領域：
：本發明公開了一種24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的提純工藝和其製劑，更進一步本發明公開了一種使用重結晶技術從谷維素原料中提純環木菠蘿烯醇阿魏酸酯的工藝。
背景技術：
：隨著現代社會生活和工作的節奏逐漸加快，現代人的亞健康狀態不容樂觀。據統計患有植物神經失調症、更年期綜合症、原發性痛經、經前緊張症等由於植物神經機能障礙，導致交感神經與副交感神經失去平衡，非器質性疾病的發病率呈逐年上升的趨勢。植物神經失調症通常由精神創傷及長期緊張、疲勞引起，導致大腦皮質的功能減弱、引起過渡興奮與迅速疲憊而發病。更年期綜合症多是指婦女絕經後體內雌、孕激素水平降低引起的心血管、神經、內分泌系統功能紊亂，導致功能性子宮出血、陣發性潮熱和出汗、外陰及陰道萎縮、骨質疏鬆等症狀及性格變化。原發性痛經由於其高發病率而引起人們的關注，在病情嚴重但仍然堅持工作的患者當中，容易導致生產能力下降，發生事故的可能性上升,工作質量下降等。發性痛經指生殖器官沒有器質性病變，在行經前後或在行經期間出現腹痛、腰酸、下腹墜脹或者其他不適，影響生活和工作。好發於1525歲及初潮後的6個月2年內。經前緊張症是指婦女經前期產生煩躁、易怒、頭痛、失眠、乳房脹痛、腹脹等一組以焦慮為主要臨床表現的臨床症候群。經前期緊張發生率高，表現複雜，直接影響廣大婦女的身心健康。谷維素是目前用於治療上述疾病的有效藥物之一，谷維素具有降低血清膽固醇活性，也具有預防脂質過氧化作用。在遮光劑中作抗氧化劑，在化妝品中作防腐劑，用於治療皮膚炎、老年皮膚乾燥症、及防止皮膚乾燥.安全評價谷維素無遺傳損傷和致癌活性.同時具有降低血脂、降低肝臟脂質、防止脂質氧化、抗氧化等多種生理功能。現有谷維素藥物多是從米糠等初步提純獲得，組分中普遍含多種阿魏酸酯類物質。因谷維素成分複雜，包括有多種甾醇類阿魏酸酯和三萜醇類阿魏酸酯，因此谷維素成分的提純對谷維素相關藥物生產，藥物品質控制有著重要的意義。市場上現有的谷維素藥物大都是通過從米糠油中純化製成藥劑，目前針對谷維素單一組分的純化提取尚沒有文獻和研究公開報導。歐洲專利申請EP503650公開了一種通過水解Y-谷維素獲得阿魏酸酯類物質的方法，但此法成本偏高，同時對谷維素的利用率偏低，得率僅在22%左右。申請號為971961328的中國專利申請公開了一種從谷維素脂肪物質獲取谷維素濃縮品的方法，利用該方法可以獲得60%-90%的濃縮物，但未涉及到高純度的谷維素進一步分離純化獲得單一組分的問題。申請號為02135610.6的中國專利申請公開了一種用溶劑萃取提純得到60-70%純度谷維素的方法，所獲得的谷維素用於藥物純度偏低，沒有進一步研究單獨成分的提取。文獻"米糠功能因子Y-谷維醇的研究"(中國糧油學報2000，15(6):14-18)研究了利用單純的高效液相色譜法提純谷維素獲得環木菠蘿烯醇阿魏酸酯的方法，其不足之處是利用單純的高效液相法成本較高，該方法可以使用於實驗室或者小批量樣品生產分析環境，但是不適合進行規模工業化生產。文獻"從米糠油及其植物油脂肪酸衍生物中提取谷維素的方法"(日本食品科技，1986，23:270-27)報導了一種四部法，包括液液萃取，柱層析，結晶和再結晶，從米糠油皂腳中提取谷維素。但作者沒有說明最後谷維素純度和產率。這種工藝局限性在於液液萃取時，必須進行重複萃取，增加萃取工序數量，降低谷維素產率，同時該文獻沒有討論提純谷維素單一組分24-亞甲基拜木菠蘿醇阿魏酸酯的問題。文獻"米糠谷維素提取純化方法研究進展"(糧食與油脂，2007.11,1-5)綜合分析了現在常用的從米糠等原料中生產谷維素的技術方案，但是沒有進一步就24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的提純工藝進行研究。
發明內容本發明克服了目前
技術領域：
所存無法獲得谷維素中高純度24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯組分和其實際藥用等的問題，使用重結晶等過程克服了單純的高效液相製備高純度24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的高成本代價。所公開的工藝將現行標準的谷維素藥物原料，通過現代分離精製手段，去除大部分谷維素原料中的非24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的成分，使24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的百分含量由原來的40%提高到80%以上(含80%)，並將其製備成合適的劑型。當改進大規模生產工藝時，除分離效率(純度和產品產量)外，主要考慮可生產性(時間、能量和人力資源需求)、環境與健康有關問題、單元操作/過程投資(設備和溶劑回收)。本發明所公開的工藝滿足了以上要求。而且，採用本發明的製備方法，產率高(約1%)，成本低，具有極廣闊的應用前景。24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的結構如下4本發明提供了一種24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的製備方法，包括以下歩驟取市售谷維素樣品，用純化溶液溶解，靜置析出結晶，過濾，乾燥。其中的純化溶液選自乙酸乙酯、內酮、甲醇、乙醇、正丁醇。進一步的，本發明的製備方法包括以下歩驟取24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯含量大於70%的谷維素，用純化溶液溶解，靜置析出結晶，過濾，乾燥。重複以上重結晶過程1-20次。其中，純化溶液選自乙酸乙酯或丙酮；重結晶過程的重複次數優選2-10次。優選地，純化溶液的加入量是溶質的l-30倍，優選5-20倍，最優選5-10倍。採用以上製備方法製備的24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯，其純度大於80%，優選大於90%。通過色譜法對市售谷維素藥物原料和本發明獲得的24-亞甲基環木菠蘿烯醇阿魏酸酯的百分含量進行了對比。表l市售谷維素藥物原料和本發明獲得的24-亞甲基環木菠蘿烯醇阿魏酸酯的百分含量對照市售谷維素本發明含量(％)藥物原料含量(％)甾醇類阿魏酸酯其中谷ffi醇阿魏酸酯6800.5菜油甾醇阿魏酸酯101200.5豆甾醇阿魏酸酯1200.2三萜醇類阿魏酸酯其中環木菠蘿醇阿魏酸酯8100i環木菠蘿烯醇酯阿魏酸酯2530M24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯.35408099.924-甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯0.20.500.2由上述試驗數據表明，本發明工藝從純度上獲得了很好的控制，使谷維素原料中的主要成分24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的含量可以被精確的控制，對未來的藥理研究、製劑研究以及質量研究奠定良好的基礎。大量試驗表明，本發明由於含有高純度的24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯，其在活性方面比多種成分混雜的谷維素更具有優勢。另一方面，本發明還提供了一種藥物製劑，含有24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯和藥學上可接受的載體，其中24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的純度為80%以上，優選90%以上。本發明的藥物製劑可以是片劑、膠囊劑、散齊U、顆粒劑、丸劑等口服製劑或注射劑，特別是非油溶媒的供靜脈注射用的製劑。本發明的靜脈用注射劑含有24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯和表面活性劑，所述的表面活性劑可以是陰離子、陽離子或非離於表面活性劑，包括但不限於聚氧乙烯山梨醇酯類，例如，聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯、聚乙二醇、十二垸基硫酸鈉、十二烷基磺酸鈉、十二烷基硫酸鋰、鵝去氧膽酸、脫氧膽酸鈉、甘脫氧膽酸鈉，N-月桂基肌氨酸、氯化十六烷基吡啶、磷脂。優選的表面活性劑為吐溫、聚乙二醇或其混合物。其中的吐溫可以是吐溫20、40、60、80;聚乙二醇可以是聚乙二醇200、400、600、800、1000、2000、4000、8000或其混合物，優選聚,乙二醇200、400、800或其混合物；最優選是吐溫80、聚乙二醇400或其混合物。本發明的注射劑還可任選地進一步包括賦形劑、抗氧劑、PH調節劑、防腐劑、等滲劑等其它藥學上可接受的輔料。其中賦型劑可選自但不限於是甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、氯化鈉、水解明膠、右旋糖酐、蔗糖、甘氨酸、聚乙烯吡咯烷酮等中的一種或幾種；優選為甘露醇或葡萄糖。防腐劑可以選自但不限於是苯酚、甲酚、三叔丁醇、苯甲醇、尼泊金中的一種或幾種。穩定劑可以選自但不限於亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、硫脲、維生素C、叔丁基對羥基茴香醚、二丁基苯酚、沒食子酸丙酯、生育酚、抗壞血酸棕櫚酸酯、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二鈉中的一種或幾種。PH調節劑ra調節劑可以是藥學可接受敗有機酸、有機鹼、無機酸、無機鹼，包括但不限於鹽酸、枸櫞酸、酒石酸、磷酸、偏磷酸、聚偏磷酸、碳酸、硫酸、硝酸、醋酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、枸橡酸鈉、枸櫞酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、碳酸胺、磷酸氨二鈉、磷酸氫二鉀、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、1，2-已二胺、碳酸鈉、酒石酸鈉鉀、偏磷酸鉀、聚偏磷酸鉀、偏磷酸鈉中的一種或幾種。本發明的提供的注射劑可以是水溶性注射液、輸液、凍乾粉針劑，優選水溶性注射液和凍乾粉針劑，最優選凍乾粉針劑。本發明的注射劑可以採用本領域所有可實現的注射劑製備方法製備得到。根據最終利用用途的不同，本發明所獲得的晶體可用於製備治療疾病的藥物，或者用於功能食品添加劑，用量和品質血據具體用途而定。實施例l取谷維素lkg，用8kg左右丙酮加熱溶解，室溫靜置析出結晶，過濾，乾燥。再將乾燥的結晶重複以上的過程10次。得24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的含量達到99%以上。實施例21.色譜條件與系統適用性試驗以十八垸基矽烷鍵合矽膠為填充劑；甲醇一乙腈(40:60)為流動相；流速為1.5ml/min;檢測波長為327nm;靈敏度為0.005AUFS。理論塔板數按計算，應不低於2000。2.供試品溶液製備精密稱取市售谷維素原料、本發明各10mg，至10ml量瓶中，加水溶解並定容，搖勻，即為供試品溶液。3.測定精密吸取供試品溶液IOW，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以面積歸一化法檢査各個組分的百分含量。4.測定結果表2測定結果供試品24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯含量(％)市售谷維素原料36本a明提純品99.2說明本發明工藝非常有效的提高了2,4-亞甲基環木菠蘿烯醇阿魏酸酯含量實施例3處方注射用本發明凍乾粉針1000瓶(含本發明18mg/瓶)本發明提純品18g聚乙二醇400250g吐溫80250g10%甘露醇6000g注射用水加至_5000ml共凍幹成^誦支處方中以本發明原料為主藥，(^:溫80為增溶劑，聚乙二醇犯0為助溶劑，甘露醇為支撐劑，注射用水為凍幹溶劑。製劑過程稱取處方量的本發明提純品、吐溫-80、PEG-400、甘露醇和80%處方量的注射用水，攪拌使之溶解至溶液澄清，室溫攪拌.20分鐘，用0.45nm微孔濾膜粗濾，濾液加注射用水至全量，再用0.22ixm微孔濾膜除菌過濾。對所得濾液進行可見異物、pH及含量檢驗。將洗淨、滅菌後的西林瓶、膠塞及精濾液傳入灌裝間，根據含量確定分裝體積進行灌裝同時半加塞。將分裝好樣品的西林瓶裝入凍幹盤，放入凍幹箱中，凍幹，凍幹完畢，將膠塞完全壓入西林瓶中，最後通大氣，取出凍幹的樣品。即得本發明的注射用凍乾粉針。實施例4本發明原料對去勢合併慢性應激致小鼠更年期綜合症的影響雌性ICR小鼠96隻，按體重隨機分成19籠，每籠5-6隻，隨機抽10隻作為假手術組，其餘86隻小鼠全部作為模型動物，小鼠腹腔麻醉，去除雙側卵巢(假手術組只切開，不去除卵巢)，縫合後注射用青黴素辨抗感染4d。術後第四天開始按如下順序給予小鼠慢性不可預見應激，(l)電擊足部36V交流電，每隔lmin剌激一次，持續10s，共15次；(2)冰水遊泳4°C，5min;(3)熱刺激:45°C，5min;(4)搖晃:140次/min，1.5hr;(5)夾尾:距尾根處lcm，lmin;(6)禁水24hr;,(7)禁食24hr;.(8)晝夜顛倒24hr;每種剌激3次。慢性應激後模型小鼠隨機分為7組(每組10隻)①模型組，②尼爾雌醇組(0.25mg/kg/d)，③本發明原料I組(25mg/kg);④本發明原料II組(50mg/kg);⑤本發明原料III組(100mg/kg);⑥;谷維素組(100mg/kg);⑦谷維素組(200mg/kg)。每日按20ml/kg體積灌胃給藥兩次(假手術組及模型組只給溶媒)，連續16d。末次給藥45min後，小鼠眼眶取血，分離血清，測定E2、FSH;之後迅速斷頭取腦，取子宮、腎上腺稱重，計算臟器指數。結果進行統計學處理(t檢驗)。結果造模後，模型組子宮指數顯著降低(代0.01);與模型組比—較，陽性藥尼爾雌齒和谷維素(200mg/kg/d)組子宮重量及指數均明顯升高(代O.Ol)，灌胃給予本發明原料後，高劑量組(100mg/kg/d)和中劑量組(50mg/kg/d)子宮指數顯著升高(代O.01)，詳見表3。表3對更年期模型小鼠子宮、腎上腺指數的影響(Z士SD)tableseeoriginaldocumentpage9與模型組比較*P<0.05，**P<0.01;與假'手術組比較厶P0.05,AAP<0.01。實施例7取市售的谷維素油溶注射液進行刺激性試驗，結果表明注射部位及其周圍組織輕微紅腫、出現硬結，組織切片檢査可見血管擴張明顯，管周有炎性滲出物，表明在實驗條件下谷維素油溶注射液對肌肉注射部位產生明顯的刺激作用。實施例2製得的凍幹'粉針進行動物血管的刺激性。取健康、耳緣無損傷家兔6隻，按體重隨機分為兩組，即試驗組和氯化鈉注射液對照組。以臨床成人用谷維素油溶注射液劑量為依據設計家兔給藥劑量，從家兔左側耳緣靜脈緩慢推注給藥，對照組給予等容積氯化鈉注射液，連續給予5天。試驗結果表明，與氯化鈉注射液組相比，靜脈推注給予用本發明原料製備的凍乾粉針，給藥期間及末次給藥24小時後，肉眼觀察未見血管及周圍組織紅腫，組織切片檢査可見兔耳靜脈結構清晰，個別血管擴張明顯，管壁厚薄均勻，內壁平滑，管周無炎性滲出物。表明實驗條件下用本發明原料製備的凍乾粉針對家兔耳緣靜脈無明顯刺激作用。權利要求1.一種供注射用的藥物組合物，含有24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯和表面活性劑。2.根據權利要求1的藥物組合物，其中的表面活性劑選自吐溫、聚乙二醇或其混合物。3.根據權利要求1或2的藥物組合物，其中24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的純度大於80%。4.根據權利要求1-3中任一項權利要求的藥物組合物，其中的表面活性劑選自吐溫80、聚乙二醇400或其混合物。5.—種從谷維素中提純24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯的方法，其特徵是包括將粗品用純化溶液溶解，靜置析出結晶的步驟，其中的純化溶液選自丙酮或乙酸乙酯。6.根據權利要求5的方法，其中的純化溶液為乙酸乙酯。7.根據權利要求5的方法，其中的純化溶液為丙酮。8.根據權利要求5-7中任一項權利要求的方法，其中包括將結晶過濾、乾燥的步驟。9.根據權利要求8的方法，包括將權利要求8中的結晶、過濾、乾燥的步驟重複l-20次。10.根據權利要求9的方法，其中權利要求8中的結晶、過濾、乾燥的步驟重複1-IO次。11.根據權利要求4-IO中任一項的方法，純化溶液的加入量為溶質的l-30倍。12.根據權利要求11的方法，純化溶液的加入量為溶質的5-20倍。13.根據權利要求12的方法，純化溶液的加入量為溶質的5-10倍。全文摘要本發明公開了一種24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯組合物及製劑，和24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯提純方法，應用該提純方法的24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯純度可達到80％以上。本發明公開的組合物含有24-亞甲基環木菠蘿醇阿魏酸酯和表面活性劑，其中的表面活性劑選自吐溫80、聚乙二醇400或其混合物。同時本發明還公開了組合物的注射劑，尤其是注射用凍乾粉針劑。文檔編號A61P25/00GK101590008SQ200810113430公開日2009年12月2日申請日期2008年5月29日優先權日2008年5月29日發明者樂何,郝守祝申請人:北京世紀博康醫藥科技有限公司