一種高效載釓脂質體製劑及其製備方法
2023-07-08 11:38:31 2
專利名稱：一種高效載釓脂質體製劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種診斷用順磁性釓造影劑的脂質體製劑，它具有高效載釓、緩慢釋 放等特點，可作為造影增強劑，用於診斷成像形式如MRI、CT、閃爍照相法中，進而用於腫瘤 的早期診斷。
背景技術：
腫瘤嚴重威脅著人類的健康與生命，全世界每年因惡性腫瘤死亡約600萬人，確 診約1000萬人。腫瘤治療面臨的關鍵問題是如何早期發現，診斷和治療。目前影像學已有 多種腫瘤診斷技術，如磁共振成像，X-射線成像，超聲波成像和核醫學成像等。其中造影劑 被用來增強影像的強度，通過改變組織局部磁場強度或弛豫時間，或通過造影劑生理、生化 特性來增強成像因素的差異，達到造影目的。磁共振造影劑用的最廣泛的就是順磁性金屬釓離子的螯合物，這些親水性螯合 物，如Gd-DTPA，Gd-DOTA, Gd-D03A_HP和Gd-DTPA-BMA分布於胞外，且被腎臟消除。游離的 釓具有高毒性，在體內分布於骨骼和肝臟，並可迅速導致肝臟壞死。所有的含釓造影劑都是 螯合物，螯合後能改變體內的分布以提高圖像對比度，同時改善其毒副作用。脂質體作為一種定向藥物載體，可以將藥物粉末或溶液包埋在類細胞結構的微粒 中改變藥物的體內分布，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒副作用，並且可做為藥物儲 庫，產生持久的治療作用。脂質體注入體內後，會被網狀內皮系統攝取而從血流中快速清 除，而納米脂質體由於其的小尺寸效應、表面效應可使其逃避網狀內皮系統的攝取而延長 藥物在體內的停留時間，進而達到病變部位。目前，國內外已有許多將順磁性金屬離子及其螯合物包被於脂質體中的報 道，已有技術主要可分兩類第一類是利用脂質體將所需要的診斷劑包裹在中心水性 腔內，因這些螯合物均是親水性的，極易從脂質膜中滲漏，包封率較低(參見Inter J Pharm，2006，312 105-112. UyenM Le，Zhengrong Cui，et al.Long-circulating gadolinium-encapsulated liposomes for potentialapplication in tumor neutron capture therapy)，而一些採取適合脂質體包裹水溶性藥物的方法如復乳法製備的多室 脂質體(參見 Acad J Sec Mil Med Univ. 2007,28(1) :87-90. ZHANG Wei, GENG Fang, et al. Preparation and characterization of pulmonary targeting DepoFoam loaded MRcontrast media :gadopentetate dimeglumine)，雖然包封率提高，但其粒徑較大，在微 米級範圍；第二類是將所需要的螯合物與疏水性「錨」基結合，使螯合物限定在脂質體膜上， 這類結合物已報導的有Hnatowich等人的DTPA- 二硬脂醯胺(參見J Nucl Med, 1981，22 810-814. Hnatowich D J, Friedman B, Clancy B, and Novak Μ. Labeling of Preformed Liposomes withGd_67and Tc-99m by Chelation)，Kabalka 等人的 DTPA-二硬脂醯酯(參 見Magn Reson Medl991，19 :406-415. Kabalka G W,Davis M A,et al. Gadolinium-labeled liposomes containingamphiphilic Gd-DTPA derivatives of varying chain length targeted MRI contrast enhancementagents for the liver)禾口 Volkmar 等人的DTPA-PLL-NGPE 多螯合聚合物(參見 Colloids andSurfaces B =Biointerfaces, 2000, 18,293-299. Weissig V, Babich J, Torchilin V. Long-circulatinggadolinium-loaded liposomes-potential use for magnetic resonance imaging of the blood pool),此類 方法製備的脂質體穩定性較好，釓螯合物或絡合物不易從脂質膜滲漏出來，但製備步驟比 較複雜，一些成分也較昂貴，並且一些水不溶性物質無法從肝臟中消除，而永久保留其中。儘管有許多順磁性釓造影劑的脂質體劑的報導，但其性能仍然難以滿足臨床應用 要求。這主要是由於其低的包封率，難以去除脂質體中游離的三價釓離子螯合物，及其存儲 時造影劑易洩露等原因引起的。—般來說，脂溶性藥物易於包裹進脂質體中，另一方面，對於水溶性藥物，通過藥 物所帶電荷同帶電脂類間的靜電作用或靠脂質體內外梯度主動載藥，水溶性藥物也可高包 封率的包入脂質體內水相中。然而對於一種水溶性的不帶電荷藥物，高包封的包入脂質體 並非易事。為了有效的將這種水溶性的藥物大量的包被於脂質體內水相中，Brandl M等人 (ChemPhys Lipids, 1997,87,65-72. Brandl Μ, Drechsler Μ, Bachmann D, and Bauer K H. Morphologyof semisolid aqueous phosphatidylcholine dispersions, a freeze fracture electron microscopy study.)提出了一種囊泡型磷脂凝膠(VPG)的概念，其是 當脂質濃度遠遠高於250mg/g或325mmol/L時製備的一種出具有獨特囊泡形態的凝膠狀物 質。VPG囊泡內水性介質的比率與囊泡外相比更高，即包封水性藥物的能力更強；在囊泡核 心及其周圍不存在濃度梯度，長期保存下仍能保證VPG內部載藥量的恆定；在應用前加入 過量的水性介質，並輕微攪拌，可使VPG轉變為小脂質體(SUV)分散體。本發明借鑑囊泡磷脂凝膠的製備原理，改進位備方法，通過薄膜分散-高壓均 質-真空濃縮的新型方法，製備了高載釓的脂質體製劑。其製備工藝簡單，脂質體對釓螯合 物的載釓量較高，粒徑較小，性能穩定，而且具有良好的緩釋效果，可有效診斷早期腫瘤。
發明內容
本發明的目的是製備一種高效載釓、納米粒徑的脂質體製劑，旨在將大量釓包入 脂質體中，通過釓造影劑的納米脂質體化，延緩其在體內的循環時間，提高造影效果。本發明公開的是由磷脂凝膠製備的高效載釓脂質體，研究了一種有效提高水溶性 藥物脂質體劑型包封率的方法，尤其適用於包裹釓螯合物。本發明的目的通過以下措施來實現一種高效載釓脂質體製劑，其特徵是以下述重量配比原料及輔料組成以金屬釓 的重量計的順磁性釓造影劑30 80份，卵磷脂250 500份，脂質體穩定劑50 200份， 緩衝溶液200 600份，所述的順磁性釓造影劑為金屬釓的三價離子的螯合物，其用量是以 金屬釓的重量為計算基準的。按比例稱取相應重量的卵磷脂、脂質體穩定劑溶於定量有機 溶劑中，減壓蒸乾溶劑，獲得脂類薄膜；加入緩衝溶液進行水合洗脫薄膜，水合溫度為30 500C，水合時間為2 4小時，獲得空白脂質體懸浮液；將所得空白脂質體懸浮液高壓均質， 壓力為40 90MPa，循環次數為6 15次，控制粒徑在20 200nm ；然後再轉入旋蒸中進 行減壓真空濃縮，除去水分直至磷脂濃度達到250mg/ml以上，獲得磷脂凝膠；按比例將磷 脂凝膠和造影劑混合，45°C下保溫5小時，獲得高效載釓脂質體製劑。進一步的，優選的，所述的高效載釓脂質體製劑，其特徵是以下述重量配比原料及輔料組成以金屬釓的重量計的順磁性釓造影劑40 60份，卵磷脂300 400份，脂質體 穩定劑100 200份，緩衝溶液200 600份。上述的順磁性釓造影劑為金屬釓的三價離子與螯合劑的螯合物，其用量是以 金屬釓的重量為計算基準的，下同；所述順磁性釓造影劑選自Gd-DTPA(釓噴酸葡胺)、 Gd-DTPA-BMA (釓雙胺)、Gd-D03A_HP(釓替醇)、Gd-DOTA (Dotarem)，優選 Gd-DTPA, Gd-DTPA-BMA。所述順磁性釓造影劑可採用市售產品，如德國Bayer Schering Wiarma公司的 釓噴酸葡胺注射液或Amersham Health公司的釓雙胺產品，或者採用李鐵福等人(「MRI 順磁性造影劑Gd-DTPA的合成」，化學試劑，2004，沈(3)，ppl90_191) ^ Tatjana, N等 入("Paramagnetic liposomescontaining amphiphilic bisamide derivatives of Gd-DTPA with aromatic side chain groups aspossible contrast agents for magnetic resonance imaging」，Eur Biophys J (2006) 35 :136-144)文獻報導的方法進行製備；所述的卵磷脂選自蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂或氫化蛋黃卵磷 脂；所述脂質體穩定劑選自膽固醇、硬脂胺、磷脂酸或維生素E，優選膽固醇或維生素 E ；所述緩衝溶液選自pH為6. 8或7. 4的磷酸鹽緩衝溶液、注射用生理鹽水。根據上述製備方法，通過改變磷脂凝膠中磷脂濃度可改變脂質體對釓螯合物的包 封率和載釓量。(所述載釓量是指脂質體的載釓濃度，由加入的總釓濃度乘包封率計算得 出。)本發明所用的有機溶劑是氯仿、氯仿與甲醇混合溶劑(體積比為1 1 3 1)、 乙醇其中的一種。所用的緩衝溶液選自PH為6. 8或pH7. 4的磷酸鹽緩衝溶液，注射用生理 鹽水。本發明所述的採用高壓均質機優化的壓力參數為60 80MPa，循環次數為8 12次。本發明所述高效載釓脂質體製劑是凝膠狀製劑。本發明提供了一種高效載釓脂質體製劑，該脂質體由診斷用釓造影劑、卵磷脂、脂 質體穩定劑作為組分製備而成。本發明提供的脂質體具有如下特點(1)載釓量高；(2)粒 徑小；C3)有良好的緩釋效果；(4)穩定性好，儲存三月幾無藥物洩露。
圖1為載釓脂質體製劑的透射電鏡照片。圖2為載釓脂質體製劑粒徑分布圖。圖3為載釓脂質體製劑的體外緩釋曲線(▲釓噴酸葡胺注射液；·載釓脂質 體)。
具體實施例方式通過下面實施例說明本發明的具體實施方式
，但本發明的保護範圍，不局限於此。實施例1
稱取大豆卵磷脂10g、膽固醇2. 5g、維生素E 0. 2g原料溶於300ml氯仿中，45°C 恆溫減壓下旋轉蒸發去除溶劑形成脂質薄膜；加入IOOOml磷酸鹽緩衝液(pH7. 4)進行水 合洗脫薄膜3. 5h，製得空白脂質體；將空白脂質體進行高壓均質，50MI^下均質15次，用 0. 22微米濾膜過濾除菌後，室溫下進行真空濃縮至20ml，即得磷脂凝膠。取Iml磷脂凝膠 與ImlO. 8mmol/ml的Gd-DTPA混合，45°C保溫5小時。分裝、封口。用動態光散射雷射粒度分析儀測定其體積平均粒徑為107. Onm，其透射電鏡圖片 與粒徑分布圖見圖1和圖2，其在PBS(pH = 7.4)中的體外緩釋曲線見圖3，在此例中改變 卵磷脂濃度測得的包封率與載釓量結果見表1。表1磷脂濃度對脂質體包封率和載釓量的影響
磷脂濃度(mg/ml)包封率(％ )載釓量(mg/ml)25030. 919. 430037. 723. 735045. 628. 640051. 732. 5實施例2稱取蛋黃磷脂Mg、膽固醇4g、維生素E 0. 6g原料溶於300ml氯仿與甲醇(體積 比1 1)中，35°C恆溫減壓下旋轉蒸發去除溶劑形成脂質薄膜；加入1500ml生理鹽水進 行水合洗脫薄膜池，製得空白脂質體；將空白脂質體進行高壓均質，SOMPa下均質10次，用 0. 22微米濾膜過濾除菌後，室溫下進行真空濃縮至20ml，即得磷脂凝膠。取Iml磷脂凝膠 與 ImlO. 6mmol/ml 的 Gd-DTPA-BMA 混合，45°C保溫 5 小時。分裝、封口。實施例3稱取氫化大豆磷脂15g、膽固醇2g、維生素E 0.4g原料溶於300ml無水乙醇中， 40°C恆溫減壓下旋轉蒸發去除溶劑形成脂質薄膜；加入IOOOml磷酸鹽緩衝液(pH6. 8)進 行水合洗脫薄膜3h，製得空白脂質體；將空白脂質體進行高壓均質，90MPa下均質6次，用 0. 22微米濾膜過濾除菌後，室溫下進行真空濃縮至20ml，即得磷脂凝膠。取Iml磷脂凝膠 與ImlO. 4mmol/ml的Gd-DTPA混合，45°C保溫5小時。分裝、封口。
權利要求
1.一種高效載釓脂質體製劑，其特徵是以下述重量配比原料及輔料組成以金屬釓的 重量計的順磁性釓造影劑30 80份，卵磷脂250 500份，脂質體穩定劑50 200份，緩 衝溶液200 600份；所述的順磁性釓造影劑為金屬釓的三價離子的螯合物，其用量是以 金屬釓的重量為計算基準的。按比例稱取相應重量的卵磷脂、脂質體穩定劑溶於定量有機 溶劑中，減壓蒸乾溶劑，獲得脂類薄膜；加入緩衝溶液進行水合洗脫薄膜，水合溫度為30 500C，水合時間為2 4小時，獲得空白脂質體懸浮液；將所得空白脂質體懸浮液高壓均質， 壓力為40 90MPa，循環次數為6 15次，控制粒徑在20 200nm ；然後再轉入旋蒸中進 行減壓真空濃縮，除去水分直至磷脂濃度達到250mg/ml以上，獲得磷脂凝膠；按比例將磷 脂凝膠和造影劑混合，45°C下保溫5小時，獲得高效載釓脂質體製劑。
2.根據權利要求1所述的高效載釓脂質體製劑，其特徵是以下述重量配比原料及輔料 組成以金屬釓的重量計的順磁性釓造影劑40 60份，卵磷脂300 400份，脂質體穩定 劑100 200份，緩衝溶液200 600份。
3.根據權利要求1 2所述的高效載釓脂質體製劑，其特徵在於所述順磁性釓 造影劑選自Gd-DTPA (釓噴酸葡胺)、Gd-DTPA-BMA (釓雙胺)、Gd-D03A_HP (釓替醇)、 Gd-DOTA (Dotarem)，優選 Gd-DTPA, Gd-DTPA-BMA0
4.根據權利要求1 2所述的高效載釓脂質體製劑，其特徵在於所述卵磷脂選自蛋 黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂其中的一種或幾種。
5.根據權利要求1 2所述的高效載釓脂質體製劑，其特徵在於所述脂質體穩定劑 選自膽固醇、硬脂胺、磷脂酸、維生素E，優選膽固醇、維生素E。
6.根據權利要求1 2所述的高效載釓脂質體製劑，其特徵在於所述緩衝溶液選自 pH為6. 8或7. 4的磷酸鹽緩衝溶液、注射用生理鹽水。
7.根據權利要求1所述的高效載釓脂質體製劑，其特徵在於所述有機溶劑可以是氯 仿、氯仿與甲醇混合溶劑(體積比為1 1 3 1)、乙醇其中的一種。
8.根據權利要求1所述的高效載釓脂質體製劑，其特徵在於其採用高壓均質機壓力 參數為60 80MPa，循環次數為8 12次。
9.根據權利要求1 8所述的高效載釓脂質體製劑，其特徵在於所述高效載釓脂質 體製劑是凝膠狀製劑。
全文摘要
本發明涉及一種可用於人體或動物體的診斷的組合物——高效載釓脂質體製劑及其製備方法。所述脂質體製劑是由如下重量百分比的組分製備的以金屬釓的重量計的順磁性釓造影劑30～80份；卵磷脂250～500份；脂質體穩定劑50～200份；緩衝溶液200～600份。本發明採用一種磷脂凝膠方法製備載釓脂質體，此種方法製備的脂質體載釓量高，有效延緩造影劑在體內的停留時間，而且儲存穩定性好。
文檔編號A61K49/18GK102078624SQ201010607578
公開日2011年6月1日 申請日期2010年12月23日 優先權日2010年12月23日
發明者徐雲龍, 戎麗娜, 趙崇軍, 錢秀珍 申請人:華東理工大學