浙貝乙素及其衍生物在製備鎮咳祛痰平喘藥物中的應用的製作方法

2023-07-05 03:14:31

專利名稱：浙貝乙素及其衍生物在製備鎮咳祛痰平喘藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及浙貝乙素及其衍生物在鎮咳祛痰平喘藥物中的用途。
背景技術：
湖北貝母為百合科貝母屬植物湖北貝母(Fritillaria Hupehensis Hsiao et K.C.Hsia)的乾燥鱗莖，微苦、涼，入肺、心經，具有清熱潤肺、化痰止咳及散結之功效。1991年湖北貝母被部頒中藥材標準收載，現已收載於《中華人民共和國藥典》(2000年版)中，發展成為僅次於浙貝母的第二大主流品種。
現代藥理學研究表明，總生物鹼是湖北貝母的生物活性有效部位，總生物鹼有舒張離體氣管平滑肌、鎮咳、平喘作用，湖北貝母生物鹼含量及生物活性較川貝、浙貝高[參見熊瑋，郭小玲，何嘉琅.湖北貝母藥理作用的初步研究(J).中草藥，1986，17(3)115-118.]。
浙貝乙素是湖北貝母中的主要生物鹼，其含量達0.3％，另外，貝母屬植物中的另一主要生物鹼浙貝甲素與浙貝乙素為酮和醇的關係，浙貝甲素很容易轉變為浙貝乙素，兩者含量之和佔總生物鹼含量的80％以上。藥效學實驗表明浙貝乙素具有優良的鎮咳、祛痰、平喘之功效的結論，整體效果明顯。

發明內容
本發明的目的是以浙貝乙素為先導化合物，在一系列浙貝乙素衍生物中篩選出鎮咳、祛痰、平喘活性優良的單體，為將其開發成為一種天然、高效、低毒的鎮咳、祛痰、平喘藥物打下基礎。
本發明的目的是通過如下措施來達到合成一系列浙貝乙素衍生物並鑑定，對浙貝乙素及其衍生物進行了鎮咳、祛痰、平喘實驗，篩選出活性優良的單體。
本發明提供的浙貝乙素3位衍生物具有以下通式 其中R為 或 即本發明對浙貝乙素的3位進行結構改造和結構修飾，合成了3β-乙醯化浙貝乙素、3-氧化浙貝乙素、3β-苯甲醯化浙貝乙素、3β-丙醯化浙貝乙素、3β-丁醯化浙貝乙素、3β-丁氧羰基化浙貝乙素等6個浙貝乙素衍生物，並鑑定了它們的結構。
對浙貝乙素及其如上所述6個3位衍生物進行鎮咳、祛痰、平喘活性實驗。結果表明3β-乙醯化浙貝乙素、3β-丙醯化浙貝乙素和3β-苯甲醯化浙貝乙素鎮咳活性強於浙貝乙素；3β-乙醯化浙貝乙素、3β-苯甲醯化浙貝乙素和氧化浙貝乙素祛痰活性強於浙貝乙素；3β-乙醯化浙貝乙素和氧化浙貝乙素平喘活性強於浙貝乙素。因此，3β-乙醯化浙貝乙素具有很強的鎮咳、祛痰、平喘活性，遠遠強於浙貝乙素，整體效果明顯，是一種很有開發前途的高效鎮咳、祛痰、平喘藥物。


圖1顯示由浙貝乙素製備3β-乙醯化浙貝乙素。
圖2顯示由浙貝乙素製備3-氧化浙貝乙素。
圖3顯示由浙貝乙素製備3β-苯甲醯化浙貝乙素。
圖4顯示由浙貝乙素製備3β-丙醯化浙貝乙素。
圖5顯示由浙貝乙素製備3β-丁醯化浙貝乙素。
圖6顯示由浙貝乙素製備3β-丁氧羰基化浙貝乙素。
具體實施例方式實施例1浙貝乙素衍生物的製備一、實驗材料1浙貝乙素 上步提取所得2吡啶 分析純，天津(香港)新通精細化工有限公司3無水K2CO3分析純，天津市東麗區天大化學試劑廠4無水MgSO4CuSO4NaHCO3分析純，上海虹光化工廠5乙酸乙酯 三氯甲烷 丙酮 分析純，上海恆麗精細化工有限公司6苯甲醯氯 分析純，北京市昌平石鷹化工廠7正丁醇 分析純，河南焦作市化工廠8乙酸酐、丙酸酐 中國醫藥集團上海化學試劑公司9丁酸酐 Fluka Chemie GmbH CH-9471 Buchs10氯甲酸丁酯 Geel，Belgium.USA.
11PCC 北京百靈威化學技術有限公司12高效矽膠H板 青島海洋化工廠分廠二、實驗方法(一)乙醯化(1)2g浙貝乙素溶於5ml無水吡啶中，再加入乙酸酐5ml，放置24h。
(2)反應液移入分液漏鬥中，加飽和CuSO4溶液3.3ml，片刻再加飽和NaHCO3溶液至無氣泡產生，再加乙酸乙酯反覆萃取，至水層無生物鹼。
(3)合併乙酸乙酯層，用無水MgSO4乾燥，放置24h。
(4)過濾除去MgSO4，並將乙酸乙酯層回收，上矽膠柱，反覆分離至純化合物。
(二)氧化(1)2g浙貝乙素溶於40mlCH2Cl2中，加2gPCC，攪拌，薄層跟蹤至反應完全。
(2)傾出CH2Cl2溶液，瓶中殘渣用CH2Cl2洗至無生物鹼。
(3)溶液回收至小體積。
(4)柱層析法分離產物至純化合物。
(三)苯甲醯化(1)0.1g浙貝乙素溶於20ml無水吡啶中，冰浴中加入11ml苯甲醯氯，室溫放置，薄層跟蹤。
(2)反應完全後，將溶液倒入碎冰中，加10ml飽和CuSO4溶液，片刻，加飽和NaHCO3溶液至無氣泡，用氯仿萃取至水層無生物鹼。
(3)合併氯仿層，無水MgSO4乾燥，放置24h，過濾去MgSO4，回收至小體積，上矽膠柱，反覆分離至純化合物。
(四)丙醯化(1)浙貝乙素2g溶於5ml無水吡啶中，加5ml丙酸酐，放置，薄層跟蹤。
(2)反應完全後，加2.5ml飽和CuSO4溶液，片刻，再加飽和NaHCO3溶液至無氣泡產生。
(3)EtOAC反覆萃取，至水層無生物鹼，合併EtOAC層，用無水MgSO4乾燥，放置24h，濾去MgSO4，回收至小體積，上矽膠柱，反覆分離至純化合物。
(五)丁醯化(1)浙貝乙素2g溶於5ml無水吡啶中，加5ml丁酸酐，放置，薄層跟蹤。
(2)反應完全後，加2.5ml飽和CuSO4溶液，片刻，再加飽和NaHCO3溶液至無氣泡產生。
(3)EtOAC反覆萃取，至無生物鹼，合併EtOAC層，用無水MgSO4乾燥，放置24h，濾去MgSO4，回收至小體積，上矽膠柱，反覆分離至純化合物。
(六)丁氧羰基化浙貝乙素(1)浙貝乙素2g溶於20ml無水吡啶中，冰浴中逐漸加入氯甲酸丁酯43ml，30-40℃放置，薄層跟蹤。
(2)反應完全後，加2.5ml飽和CuSO4溶液，片刻，再加飽和NaHCO3溶液至無氣泡產生。
(3)EtOAC反覆萃取，至無生物鹼，合併EtOAC層，用無水MgSO4乾燥，放置24h，濾去MgSO4，回收至小體積，上矽膠柱，反覆分離至純化合物。
實施例2浙貝乙素衍生物的結構鑑定一、乙醯化浙貝乙素(PE-D1)乙醯化浙貝乙素，無色針晶(丙酮)，mp179.5-181.5℃；FAB(+)-MS m/z472(M+H)+；1H-NMR譜圖顯示有四個甲基信號和一個羥基同碳質子信號，δ0.74的單峰顯示H-19位於較高場，說明C6位有酮基存在，對H-19產生屛蔽作用；δ0.98(3H，s，H-21)C20-CH3為單峰且位於低場說明C20有羥基，δ1.04(3H，d，J＝7Hz，H-27)說明C25-CH3為直立-構型，δ1.98(3H，S)為乙醯基的甲基峰，δ4.64(1H，m，W1/2＝24Hz)為C3的羥基同碳質子，而浙貝乙素C3-Hδ3.582，此苷化位移說明乙醯化位置在C3-OH。13C-NMR譜圖顯示有29個碳原子信號，其DEPT實驗表明其有4個伯碳，11個仲碳，10個叔碳，2個季碳，1個酮基碳原子，1個酯羰基碳原子。通過與浙貝乙素的碳譜數據比較，發現C3δ72.9比浙貝乙素C3δ70.9低場2ppm，而C2δ26.5比浙貝乙素C2δ30.5高場4ppm，C4δ26.1比浙貝乙素C2δ30.1高場4ppm，此苷化位移說明乙醯化位置在C3-OH無疑。
取PE-D1 100mg，5％NaOH-MeOH 70℃水浴上回流4h，冷後鹼化，用C6H6萃取生物鹼白色珊瑚狀結晶，mp213℃～214℃，[α]D-62.5(c0.5，MeOH)，HR-MS測得分子式C27H43NO3分子量429.3234(計算值429.6433)。IR(KBr)cm-13410，1055(OH)，2950，1463～1445(-CH3，-CH2-)，2750(反式喹喏裡西啶)，1705(C＝O)。FAB-MS m/z579(M+H+Triethanolamine)+，430[M+H]+，428[M-H]+。1H-NMR譜圖顯示有三個甲基信號δ0.76、δ1.03(3H，s，H-21)C20-CH3，δ1.07(3H，d，J＝7Hz，H-27)，δ3.582(1H，m，W1/2＝24Hz)為C3的羥基同碳質子。13C-NMR譜圖顯示有27個碳原子信號，其DEPT實驗表明含有3個伯碳，11個仲碳，10個叔碳，2個季碳和1個酮基碳原子。以上理化常數和波譜數據與文獻報導[3]的浙貝乙素一致，與浙貝乙素標準品作混合熔點測定，熔點不下降，薄層層析對比分析，Rf值相同，斑點重疊。
綜上所述，所合成的浙貝乙素衍生物為3β-乙醯基浙貝乙素(3β-acetyl-peminine)。
二、氧化浙貝乙素(PE-D2)氧化浙貝乙素，無色針晶(丙酮)，mp177.5-179.5℃；FAB(+)-MS m/z428(M+H)+；1H-NMR譜圖顯示有三個甲基信號和一個羥基同碳質子信號，δ0.91的單峰顯示H-19相對於浙貝乙素位於較低場，說明C3位有酮基存在，對H-19產生去屛蔽作用；δ0.99(3H，s，H-21)C20-CH3為單峰且位於低場說明C20有羥基，δ1.02(3H，d，J＝7Hz，H-27)說明C25-CH3為直立-構型。13C-NMR譜圖顯示有27個碳原子信號，其DEPT實驗表明其有3個伯碳，11個仲碳，9個叔碳，2個季碳，2個酮基碳原子。通過與浙貝乙素的碳譜數據比較，發現C2δ38.1比浙貝乙素C2δ30.5低場，C4δ37.2比浙貝乙素C2δ30.1高場4ppm。
綜上所述，所合成的浙貝乙素衍生物為3-氧化浙貝乙素。
三、苯甲醯化浙貝乙素(PE-D3)苯甲醯化浙貝乙素，無色簇晶(丙酮)，mp133.5-135.5℃；FAB(+)-MS m/z534(M+H)+；1H-NMR譜圖顯示有三個甲基信號和一個羥基同碳質子信號，δ0.83的單峰顯示H-19位於較高場，說明C6位有酮基存在，對H-19產生屛蔽作用；δ1.02(3H，s，H-21)C20-CH3為單峰且位於低場說明C20有羥基，δ1.08(3H，d，J＝7Hz，H-27)說明C25-CH3為直立-構型，δ4.92(1H，m)為C3的羥基同碳質子，而浙貝乙素C3-Hδ3.582，此苷化位移說明苯甲醯化位置在C3-OH，δ8.02(2H，d J＝7.2Hz)，δ7.55(1H，m)，7.42(2H，m)為單取代苯環上氫質子峰。13C-NMR譜圖顯示有34個碳原子信號，其DEPT實驗表明其有3個伯碳，16個仲碳，10個叔碳，3個季碳，1個酮基碳原子，1個酯羰基碳原子。通過與浙貝乙素的碳譜數據比較，發現C3δ73.6比浙貝乙素C3δ70.9低場2.7ppm，而C2δ26.7比浙貝乙素C2δ30.5高場4.2ppm，C4δ26.4比浙貝乙素C2δ30.1高場4.3ppm，此苷化位移說明苯甲醯化位置在C3-OH。
取PE-D3 100mg，5％NaOH-MeOH 70℃水浴上回流4h，冷後鹼化，用CHCl3萃取生物鹼，與標準品浙貝乙素作混合熔點測定，熔點不下降，薄層層析對比分析，Rf值相同，斑點重疊。
綜上所述，所合成的浙貝乙素衍生物為3β-苯甲醯基浙貝乙素。
四、丙醯化浙貝乙素(PE-D4)丙醯化浙貝乙素，無色方晶(丙酮)，mp172-174℃；FAB(+)-MS m/z486(M+H)+；1H-NMR譜圖顯示有四個甲基信號和一個羥基同碳質子信號，δ0.74的單峰顯示H-19位於較高場，說明C6位有酮基存在，對H-19產生屛蔽作用；δ0.98(3H，s，H-21)C20-CH3為單峰且位於低場說明C20有羥基，δ1.03(3H，d，J＝7Hz，H-27)說明C25-CH3為直立-構型，δ1.08(3H，t，J＝6Hz，H-3』)，δ2.25(2H，qart)為丙醯基的甲基峰，δ4.65(1H，m)為C3的羥基同碳質子，而浙貝乙素C3-Hδ3.58，此苷化位移說明丙醯化位置在C3-OH。13C-NMR譜圖顯示有30個碳原子信號，其DEPT實驗表明其有4個伯碳，12個仲碳，10個叔碳，2個季碳，1個酮基碳原子，1個酯羰基碳原子。通過與浙貝乙素的碳譜數據比較，發現C3δ72.7比浙貝乙素C3δ70.9低場1.8ppm，而C2δ26.6比浙貝乙素C2δ30.5高場4.1ppm，C4δ26.1比浙貝乙素C2δ30.1高場4ppm，此苷化位移說明丙醯化位置在C3-OH。
取PE-D4 100mg，5％NaOH-MeOH 70℃水浴上回流4h，冷後鹼化，用CHCl3萃取生物鹼，與浙貝乙素標準品作混合熔點測定，熔點不下降，薄層層析對比分析，Rf值相同，斑點重疊。
綜上所述，所合成的浙貝乙素衍生物為3β-丙醯基浙貝乙素。
五、丁醯化浙貝乙素(PE-D5)丁醯化浙貝乙素無色稜晶(丙酮)，mp128-130℃；FAB(+)-MS m/z500(M+H)+；1H-NMR譜圖顯示有四個甲基信號和一個羥基同碳質子信號，δ0.75的單峰顯示H-19位於較高場，說明C6位有酮基存在，對H-19產生屛蔽作用；δ0.99(3H，s，H-21)C20-CH3為單峰且位於低場說明C20有羥基，δ1.04(3H，d，J＝7Hz，H-27)說明C25-CH3為直立-構型，δ0.91(3H，t，J＝5.8Hz，H-4』)為丁醯基的甲基峰，δ2.22(3H，t，H-2』)為丁醯基的亞甲基峰，δ4.66(1H，m)為C3的羥基同碳質子，而浙貝乙素C3-Hδ3.582，此苷化位移說明乙醯化位置在C3-OH。13C-NMR譜圖顯示有31個碳原子信號，其DEPT實驗表明其有4個伯碳，13個仲碳，10個叔碳，2個季碳，1個酮基碳原子，1個酯羰基碳原子。通過與浙貝乙素的碳譜數據比較，發現C3δ72.6比浙貝乙素C3δ70.9低場1.7ppm，而C2δ26.6比浙貝乙素C2δ30.5高場4.1ppm，C4δ26.1比浙貝乙素C2δ30.1高場4ppm，此苷化位移說明乙醯化位置在C3-OH。
取PE-D5 100mg，5％NaOH-MeOH 70℃水浴上回流4h，冷後鹼化，用CHCl3萃取生物鹼，與浙貝乙素標準品作混合熔點測定，熔點不下降，薄層層析對比分析，Rf值相同，斑點重疊。
綜上所述，所合成的浙貝乙素衍生物為3β-丁醯基浙貝乙素。
六、丁氧羰基化浙貝乙素(PE-D6)丁氧羰基化浙貝乙素，無色針晶(丙酮)，mp66-68℃；FAB(+)-MS m/z530(M+H)+；1H-NMR譜圖顯示有四個甲基信號和一個羥基同碳質子信號，δ0.70的單峰顯示H-19位於較高場，說明C6位有酮基存在，對H-19產生屛蔽作用；δ0.95(3H，s，H-21)C20-CH3為單峰且位於低場說明C20有羥基，δ1.00(3H，d，J＝7.0Hz，H-27)說明C25-CH3為直立-構型，δ0.87(3H，t，J＝7.4Hz)為丁氧羰基的甲基峰，δ4.04(2H，t，J＝5.0Hz)為丁氧羰基的亞甲基峰，δ4.46(1H，m)為C3的羥基同碳質子，而浙貝乙素C3-Hδ3.582，此苷化位移說明乙醯化位置在C3-OH。13C-NMR譜圖顯示有29個碳原子信號，其DEPT實驗表明其有4個伯碳，14個仲碳，10個叔碳，2個季碳，1個酮基碳原子，1個碳酸酯羰基碳原子。通過與浙貝乙素的碳譜數據比較，發現C3δ76.8比浙貝乙素C3δ70.9低場5.9ppm，而C2δ26.5比浙貝乙素C2δ30.5高場4ppm，C4δ26.1比浙貝乙素C2δ30.1高場4ppm，此苷化位移說明乙醯化位置在C3-OH。
取PE-D6 100mg，5％NaOH-MeOH 70℃水浴上回流4h，冷後鹼化，用CHCl3萃取生物鹼，與浙貝乙素標準品作混合熔點測定，熔點不下降，薄層層析對比分析，Rf值相同，斑點重疊。
綜上所述，所合成的浙貝乙素衍生物為3β-丁氧羰基化浙貝乙素。
實施例3浙貝乙素衍生物鎮咳活性實驗實驗材料昆明種小鼠 華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供樣品溶液分別精密稱取浙貝乙素及6個衍生物3β-乙醯化浙貝乙素(乙醯化)、氧化浙貝乙素(氧化)、3β-苯甲醯化浙貝乙素(苯甲醯化)、3β-丙醯化浙貝乙素(丙醯化)、3β-丁醯化浙貝乙素(丁醯化)、3β-丁氧羰基化浙貝乙素(丁氧羰基化)各適量，滴加適量稀HCl溶解，用蒸餾水定容，樣品溶液pH值大約在4-5之間。
陽性對照磷酸可待因(北京中順製藥廠)實驗原理採用濃氨水引咳法，濃氨水為一種較強的刺激物，小鼠吸入後，呼吸道受刺激。反射性的引起咳嗽，能抑制咳嗽中樞或降低呼吸道感受器敏感性藥物均有鎮咳作用。
實驗方法和結果取體重18-22g小白鼠120隻，雌雄各半，隨機分成12組，按表1(i.g)給藥1小時後，置於倒置的500ml燒杯內，用1mL注射器吸取0.2ml濃氨水注入燒杯內放的一個棉球中，觀察咳嗽潛伏期和3分鐘內咳嗽次數。
表1浙貝乙素及其衍生物的鎮咳活性咳嗽次數分組 動物數 劑量(mg/kg) 途徑 咳嗽潛伏期(秒)(3分鐘內)陰性 100i.g 46±26.8 18.0±9.8陽性 1030 i.g 82.7±43.0*7.7±4.9*浙貝乙素 103i.g 30.6±14.7 14.8±8.03β-乙醯化浙貝乙素 103i.g 92.8±43.0*8.5±7.0*3β-丙醯化浙貝乙素 103i.g 62.4±46.8*8.4±4.73β-丁醯化浙貝乙素 103i.g 57.1±41.0、 10.6±6.03β-苯甲醯化浙貝乙素 103i.g 25.1±12.1 7.6±3.8*3-氧化浙貝乙素 103i.g 44.7±19.8 10.9±5.33β-丁氧羰基化浙貝乙素 103i.g 71±41.2 12.0±10.2陽性組磷酸可待因 陰性組不含樣品的蒸餾水與陰性對照*P ＜0.05結果分析3β-乙醯化浙貝乙素與陰性比較有差異，鎮咳活性明顯強於浙貝乙素。3β-丙醯化浙貝乙素和3β-苯甲醯化浙貝乙素亦有一定的鎮咳活性，強於浙貝乙素。
實施例4浙貝乙素衍生物祛痰活性實驗實驗材料昆明種小鼠 華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供樣品溶液分別精密稱取浙貝乙素及6個衍生物3β-乙醯化浙貝乙素(乙醯化)、氧化浙貝乙素(氧化)、3β-苯甲醯化浙貝乙素(苯甲醯化)、3β-丙醯化浙貝乙素(丙醯化)、3β-丁醯化浙貝乙素(丁醯化)、3β-丁氧羰基化浙貝乙素(丁氧羰基化)各適量，滴加適量稀HCl溶解，用蒸餾水定容，樣品溶液pH值大約在4-5之間。
陽性對照愈創木酚甘油醚(吉林省恆和維康藥業有限公司，產品批號20030901)
酚紅 (天津市化學試劑研究所，20020408)實驗原理利用酚紅能部分地從氣管排泌的特點，在祛痰藥物的影響下，隨著支氣管分泌量的增加，由呼吸道黏膜排出的酚紅也增多，用分光光度計測出酚紅的排泌量，從而得知藥物祛痰作用的強弱。
酚紅標準曲線的制定精密稱取酚紅粉末0.0025g，置於50ml容量瓶中，用蒸餾水溶解並定容，配製成50ug/ml的溶液，再分別精密吸取0.30ml、0.50ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml該溶液於10ml容量瓶中並定容，用WFZ800-D3B紫外分光光度計測定各自的吸光度。
表2酚紅標準曲線的制定酚紅(μl/ml)1.5 2.5 510 15A值 0.0490.0840.1560.3060.456以吸收度值(A)對酚紅的含量(X)回歸，得回歸方程為A＝0.0306x+0.0042，γ＝0.9997由於吸收度值(A)對酚紅含量(X)有直線關係，因此在本次實驗中直接用吸收度值(A)來替代酚紅含量作為祛痰作用的強弱的指標。
實驗方法取體重22～26g的小鼠120隻，雌雄各半，隨機分成12組，實驗前禁食不禁誰12小時，按表3(i.g)給藥。給藥後30分鐘，腹腔注射0.5％酚紅溶液0.5ml，30分鐘後鍾後處死小鼠，儘量不損傷氣管，仰臥固定於手術板，剪開頸正中皮膚，分離氣管，小心地剔除氣管周圍的組織，然後剪取甲狀軟骨至氣管分叉處的氣管段，取出氣管後，放入已盛有2.00ml 0.5％的NaHCO3試管中，穩定洗出液的pH，於4000rpm離心20分鐘WFZ800-D3B紫外分光光度計上以433nm波長，測定洗出液的吸收度值(A)。
表3浙貝乙素及其衍生物的祛痰活性分組 動物數 劑量(mg/kg) 途徑 A值陰性 100 i.g0.0852±0.0338陽性 1030 i.g0.1874±0.0922***浙貝乙素 103 i.g0.0964±0.02933β-乙醯化浙貝乙素 103 i.g0.1502±0.0509***3β-丙醯化浙貝乙素 103 i.g0.1268±0.06933β-丁醯化浙貝乙素 103 i.g0.1077±0.05013β-苯甲醯化浙貝乙素 103 i.g0.2145±0.0613***3-氧化浙貝乙素 103 i.g0.1361±0.0296***3β-丁氧羰基化浙貝乙素 103 i.g0.1187±0.0587陽性組愈創木酚甘油醚 陰性組；不含樣品的蒸餾水與陰性對照***P＜0.005結果分析3β-乙醯化浙貝乙素與陰性比較有差異，祛痰活性明顯強於浙貝乙素。3β-苯甲醯化浙貝乙素和氧化浙貝乙素亦有很強的祛痰活性，強於浙貝乙素。
實施例5浙貝乙素衍生物平喘活性實驗實驗材料豚鼠SD種 華中科技大學同濟醫學院實驗動物中心提供樣品溶液 分別精密稱取浙貝乙素及6個衍生物3β-乙醯化浙貝乙素(乙醯化)、氧化浙貝乙素(氧化)、3β-苯甲醯化浙貝乙素(苯甲醯化)、3β-丙醯化浙貝乙素(丙醯化)、3β-丁醯化浙貝乙素(丁醯化)、3β-丁氧羰基化浙貝乙素(丁氧羰基化)各適量，滴加適量稀HCl溶解，用蒸餾水定容，樣品溶液pH值大約在4-5之間。
陽性對照 氨茶鹼注射液(天津市金耀胺基酸有限公司 產品批號0305072)引喘液2％的氯化乙醯膽鹼和0.1％組胺的等量混合液實驗原理具有支氣管收縮作用的藥物如組胺、乙醯膽鹼等，以氣霧法給予豚鼠吸入，可引起豚鼠呼吸急促、喘息，甚至窒息，從而導致動物抽搐而跌倒，這種藥物性豚鼠哮喘模型可用於觀察藥物的平喘作用(主要是支氣管擴張作用)。如引喘潛伏期延長，發生抽搐的動物數減少，經統計處理有顯著性意義，即可認為該藥具有平喘作用。
實驗方法與結果
取200-250g的豚鼠(幼年豚鼠)，雌雄均可，逐一測定引喘潛伏期，挑選合格者。將豚鼠放入一個與420型超聲霧化儀相連的有機玻璃盒內，420型超聲霧化儀以53Kpa(400mmHg)的恆壓噴入2％的氯化乙醯膽鹼和0.1％組胺的等量混合液15秒，密切注意豚鼠的反應，觀察6分鐘之內豚鼠出現喘息性抽搐的潛伏期即引喘潛伏期(從噴霧開始到出現喘息性抽搐性的時間)與發生抽搐的動物數。如見到豚鼠跌倒應立即將其取出，以免死亡，並記錄引喘潛伏期，若引喘潛伏期大於150秒則認為不敏感而不予選用，次日將合格的豚鼠按體重隨機分組，每組6隻，將12組豚鼠分別按下表給予待測樣品和對照品，用藥30分鐘後，以同樣條件引喘並測定引喘潛伏期與發生抽搐動物數的變化。
表4浙貝乙素及其衍生物的平喘活性用藥前後分組 動物數 劑量(mg/kg)途徑潛伏期差值(秒)陰性6 0 i.p -5.6±7.5陽性6 125i.p 74.8±23.0***浙貝乙素6 3 i.p 18.5±9.7***3β-乙醯化浙貝乙素 6 3 i.p 45.6±21.2***3β-丙醯化浙貝乙素 6 3 i.p -3.2±2.93β-丁醯化浙貝乙素 6 3 i.p 7.0±8.43β-苯甲醯化浙貝乙素6 3 i.p 3.6±10.43-氧化浙貝乙素 6 3 i.p 12.0±8.6***3β-丁氧羰基化浙貝乙素 6 3 i.p 8.8±13.5陽性組氨茶鹼注射液 陰性組不含樣品的蒸餾水與陰性對照***P＜0.005結果分析3β-乙醯化浙貝乙素與陰性比較有差異，平喘活性明顯強於浙貝乙素。氧化浙貝乙素亦有很強的平喘活性，強於浙貝乙素。
權利要求
1.具有下述通式的浙貝乙素3位衍生物， 其中R為 或
2.權利要求1所述化合物在製備鎮咳祛痰平喘藥物中的應用。
3.3β-乙醯化浙貝乙素在製備鎮咳祛痰平喘藥物中的應用。
4.3β-乙醯化浙貝乙素在製備鎮咳藥物中的應用。
5.3β-丙醯化浙貝乙素在製備鎮咳藥物中的應用。
6.3β-苯甲醯化浙貝乙素在製備鎮咳藥物中的應用。
7.3β-乙醯化浙貝乙素在製備祛痰藥物中的應用。
8.3β-乙醯化浙貝乙素或3-氧化浙貝乙素在製備平喘藥物中的應用。
9.3β-乙醯化浙貝乙素、3β-苯甲醯化浙貝乙素或3-氧化浙貝乙素在製備祛痰藥物中的應用。
10.浙貝乙素在製備鎮咳祛痰平喘藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了浙貝乙素及其衍生物在鎮咳祛痰平喘藥物中的用途。在浙貝乙素的一系列3位衍生物中，3β－乙醯化浙貝乙素具有很強的鎮咳、祛痰、平喘活性，遠遠強於浙貝乙素，整體效果明顯，是一種很有開發前途的高效鎮咳、祛痰、平喘藥物。
文檔編號A61P11/00GK1739529SQ20041006075
公開日2006年3月1日 申請日期2004年8月23日 優先權日2004年8月23日
發明者吳繼洲, 張勇慧, 阮漢利, 皮慧芳 申請人:華中科技大學同濟醫學院