一種以醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法
2023-07-04 18:15:01 1
一種以醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法
【技術領域】 [0001] 本發明屬於微生物培養基的製備領域，特別設及一種W醬香型白酒糟製備單細胞微生 物培養基的方法。
[0002] 技術背景
[0003] 白酒糟是白酒固態發酵和固態蒸饋傳統釀造工藝的下腳料，其中殘存許多未能完 全利用的營養成分，特別是富含微生物生長的所需的生長因子，而醬香型白酒丟糟因醬香 型白酒固態發酵獨特生產工藝導致其粗蛋白明顯高於其它香型白酒丟糟，經測量，粗蛋白 含量可高達23%。因此本發明考慮使用主要原料為醬香型白酒丟糟。目前白酒糟的利用主要 有生產化工產品;培養食用菌;釀醋W及生產飼料等，其利用率及附加值尚有待於進一步提 高，而且白酒丟糟保管不當還易汙染環境。
[0004] 我國是一個傳統釀酒大國，酒糟資源非常豐富，然而酒糟的深度利用率卻非常低， 白酒丟糟，尤其是醬香型白酒丟糟的資源化利用的潛力還很大。限制酒糟資源利用的主要 制約因素有W下兩個方面:一是鮮酒糟酸度大(抑小於4)，水分含量高巧5%~60%)，易腐敗變 質，不易於運輸和儲藏。二是在釀造過程中滲合了大量的稻殼，在乾物質中稻殼佔乾物質重 量的36%左右，體積佔50%左右，粗纖維含量高達18%W上。
[0005]
【發明內容】
[0006] 本發明的目的在於提供一種W醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法。該方法 變廢為寶，工藝簡單、成本低，易於操作，適合規模化生產。
[0007] 本發明的一種W醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法，包括： (1) 將新鮮醬香型白酒糟直接加水並用固鹼調節pH，在適宜溫度下分步進行酶解;新鮮 醬香型白酒糟與水的質量體積比為Ig : 8~12ml，充分混勻，進行一級酶解，酶解完成後於 90~95°C，10~15min滅酶;然後進行二級酶解，酶解完成後於90~95°C，10~15min滅酶，過濾得 到水解液； (2) 將上述水解液濃縮至膏狀，或繼續乾燥至固體； (3) 將上述水解產物等量替代或部分替代細菌基本培養基中的蛋白腺，配置成培養基， 接種後進行細菌培養，培養18~24h後測定菌體的生物量(OD值）。
[000引步驟(1)中酶包括鹼性蛋白酶（IXlO5IVg)和木瓜蛋白酶（IXlO5IVg);其添加量依 次為500~2500U/g幹酒糟、250~2000U/g幹酒糟酶解順序依次為鹼性蛋白酶和木瓜蛋白酶或 木瓜蛋白酶和鹼性蛋白酶。
[0009]步驟(1)中的固鹼為氨氧化鋼、氨氧化鍾或氨氧化巧。
[0010] 步驟（1)中調節抑包括鹼性蛋白酶酶解抑7.0~13.0，木瓜蛋白酶酶解抑6.0~7.0。
[0011] 步驟(1)中適宜溫度為鹼性蛋白酶40~55 °C，木瓜蛋白酶50~55 °C。
[0012] 步驟(1)中酶解時間為鹼性蛋白酶酶解2~4h、木瓜蛋白酶^化。
[0013] 步驟(2)中所述步驟(2)中水解液濃縮至膏狀條件為低溫濃縮，溫度小於80°C，濃 縮至水分含量為40~50%，得到膏狀物；或繼續乾燥，乾燥溫度為70~90°C，真空度為0.008~ 0.0 l 2MPa，乾燥至含水量低於5%即可。
[0014] 步驟(3)中水解產物替代培養基中蛋白腺的比例依次為0%、50%、100%。
[0015] 步驟（3 )中基本培養基為牛肉膏蛋白腺培養基：牛肉膏3.Og、蛋白腺10.Og、 船(：120.0邑、水1000.01111、抑7.0~7.2。
[0016] 步驟(3)中的細菌為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌和蘇雲金芽抱杆 困。
[0017] 步驟(3)中接種量為0.5%~3%。
[0018] 本發明利用白酒工業下腳料醬香型白酒糟為原料製備新型細菌培養基，用酒糟的 酶解產物替代蛋白腺，既降低了使用蛋白腺作為培養基氮源的成本，又防止了酒糟對環境 的汙染，提高了酒糟的使用價值，變廢為寶。本發明生產出的氮源佔原材料總氮的48~61%， 乾燥後的含氮量4.0%~6.5%。在經等質量替代和部分替代氮源蛋白腺後，等質量替代的或部 分替代蛋白腺後菌體的生物量增加了 1.5~3.2倍。醬香型酒糟不僅可W替代蛋白腺作為細 菌培養中的氮源，而且有利於降低培養基成本，又為解決白酒固態酒糟汙染多提供了一條 途徑，故本發明及其方法具有潛在很好的推廣價值。
[0019] 下面結合實施例對本發明做進一步說明。
[0020]
【附圖說明】
[0021] 圖1為醬香型白酒糟酶解後代替或部分代替培養基中的蛋白腺培養細菌的結果。
[0022]
【具體實施方式】 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，運些實施例僅用於說明本發明而不 用於限制本發明的範圍。次外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之後，本領域技術人員可 W對本發明作改動或是修改，運些等價形式同樣落於本發明申請所附權利要求書所限定的 範圍。
[0023] 實施例1醬香型白酒糟水解物的製備包括W下步驟： (1) 將新鮮醬香型白酒糟直接加水並用固鹼調節pH，在適宜溫度下分步進行酶解;新鮮 醬香型白酒糟與水的質量體積比為Ig : 8~12ml(例lg:8ml、lg: IOmUlg: 12ml)充分混勻， 進行一級酶解，酶解完成後於90~95°C，10~15min滅酶;然後進行二級酶解，酶解完成後於90 ~95 °C，10~15min滅酶，過濾得到水解液； (2) 將上述水解液濃縮至膏狀，或繼續乾燥至固體； 步驟（1)中酶包括鹼性蛋白酶（1 X IO5IVg)和木瓜蛋白酶（1 X 105IVg);其添加量依次 為 500 ~2500U/g 幹酒糟（例 100011八、15001]八、20001]八）、250~20001]八幹酒糟（例5001]/邑、 lOOOU/g、2000U/g)酶解順序依次為鹼性蛋白酶和木瓜蛋白酶或木瓜蛋白酶和鹼性蛋白酶。
[0024] 步驟(1)中的鹼為氨氧化鋼、氨氧化鍾或氨氧化巧。
[0025] 步驟（I)中調節pH包括鹼性蛋白酶酶解抑7.0~13.0(例pH7.0、P朋.0、pHl 1.0)，木 瓜蛋白酶酶解抑6.0~7.0(例抑6.0、pH7.0)。
[0026] 步驟（1)中適宜溫度為鹼性蛋白酶40~55 °C (例45 °C、50 °C、55 °C )，木瓜蛋白酶50~ 55°C (例 50°C、55°C)。
[0027] 步驟（1)中酶解時間為鹼性蛋白酶酶解2~4h(例化、3h、4h)、木瓜蛋白酶1~3h(例 化、化、化）。
[00巧]步驟（2)中水解液濃縮至膏狀條件為低溫濃縮，溫度小於80°C(例60°C、7(rC、80 °C )，濃縮至水分含量為40~50%(例40%、45%、50%)，得到膏狀物;或繼續乾燥，乾燥溫度為70~ 90°(：(例70°(：、80°(：、90°(：)，真空度為0.008~0.0121?曰（例0.008 1化、0.010 1化、0.012 MPa)，乾燥至含水量低於5%即可。
[0029] 實施例2醬香型白酒糟水解物替代氮源蛋白腺培養大腸桿菌 將得到的醬香型白酒糟水解物替代培養基中氮源蛋白腺設置處理如下:CK(牛肉膏蛋 白腺培養基）水解物替代量50%、100%共3個處理，培養基pH統一調至7.2,250mlS角瓶裝 50ml試驗培養基，121°C滅菌20min。取已經活化的大腸桿菌種子培養液(30°C、170r/min，培 養18h)按照1%接種至滅菌的S角瓶中30°C、170r/min，培養24h後將培養液稀釋10倍後測吸 光值。得到相應吸光值，結果:CK吸光值為0.186; 50%替代量吸光值為0.281; 100%替代量吸 光值為0.2375。50%替代量的吸光值是CK的1.5倍;100%替代量的吸光值是CK的1.2倍。
[0030] 實施例3醬香型白酒糟水解物替代氮源蛋白腺培養枯草芽抱桿菌 將得到的醬香型白酒糟水解物替代培養基中氮源蛋白腺設置處理如下:CK(牛肉膏蛋 白腺培養基）水解物替代量50%、100%共3個處理，培養基pH統一調至7.2,250mlS角瓶裝 50ml試驗培養基，12rC滅菌20min。取已經活化的枯草芽抱桿菌種子培養液(30°C、170r/ min,培養1她)按照1%接種至滅菌的S角瓶中30°C、170r/min，培養24h後將培養液稀釋10倍 後測吸光值。得到相應吸光值，結果:CK吸光值為0.193; 50%替代量吸光值為0.566; 100%替 代量吸光值為0.482。50%替代量的吸光值是CK的3.2倍;100%替代量的吸光值是CK的2.5倍。
[0031] 表1醬香型白酒糟不同方法水解後的胺基酸組成及含量
【主權項】
1. 一種以醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法法，包括： (1) 將新鮮醬香型白酒糟直接加水並用固鹼氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鈣調節PH，在 適宜溫度下分步進行酶解;新鮮醬香型白酒糟與水的質量體積比為lg : 8~12ml，充分混 勻，進行一級酶解，酶解完成後於90~95°C ,10~15min滅酶;然後進行二級酶解，酶解完成後 於90~95°C，10~15min滅酶，過濾得到水解液； (2) 將上述水解液濃縮至膏狀，或繼續乾燥至固體； (3) 將上述水解產物等量替代或部分替代細菌基本培養基中的蛋白腖，配置成培養基， 接種後進行細菌培養，培養18~24h後測定菌體的生物量(OD值）。2. 根據權利要求1所述的一種以醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法，其特徵在 於:所述步驟(1)中酶包括鹼性蛋白酶（lXl〇 5U/g)和木瓜蛋白酶（lX105U/g);其添加量依 次為500~2500U/g幹酒糟、250~2000U/g幹酒糟酶解順序依次為鹼性蛋白酶和木瓜蛋白酶或 木瓜蛋白酶和鹼性蛋白酶。3. 根據權利要求1所述的一種以醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法，特徵在於： 所述步驟（1)中調節pH和適宜溫度包括鹼性蛋白酶酶解pH 7.0~13.0，適宜溫度為40~55 °C ; 木瓜蛋白酶酶解PH6.0~7.0，適宜溫度為50~55 °C。4. 根據權利要求1所述的一種以醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法，特徵在於： 所述步驟(1)中酶解時間為鹼性蛋白酶酶解2~4h、木瓜蛋白酶1~3h。5. 根據權利要求1所述的一種以醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法，特徵在於： 所述步驟(2)中水解液濃縮至膏狀條件為低溫濃縮，溫度小於80°C，濃縮至水分含量為40~ 50%，得到膏狀物;或繼續乾燥，乾燥溫度為70~90°C，真空度為0.008~0.012MPa，乾燥至含水 量低於5%即可。6. 根據權利要求1所述的一種以醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法，特徵在於： 所述步驟(3 )中水解產物替代培養基中蛋白腖的比例依次為0%、50%、100%。7. 根據權利要求1所述的一種以醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法，特徵在於： 所述步驟（3 )中基本培養基為牛肉膏蛋白腖培養基：牛肉膏3.0g、蛋白腖10.0g、NaCl 20.0gd)C1000.0ml、pH7.0~7.2。8. 根據權利要求1所述的一種以醬香型白酒糟製備新型細菌培養基的方法，其特徵在 於:所述步驟(3)中的細菌為大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和蘇雲金芽孢桿菌。9. 根據權利要求1所述的一種以醬香型白酒糟製備細菌培養基的方法，其特徵在於:所 述步驟(3)中接種量為0.5%~3%。
【專利摘要】本發明屬於生物培養基製備領域。本發明涉及一種新型細菌培養基製備方法，包括：(1)將新鮮醬香型白酒糟加水後酶解；過濾得到濾液；(2)將上述濾液濃縮至膏狀或繼續乾燥；(3)將上述濃縮物以不同比例替代細菌培養基中的蛋白腖，進行典型細菌培養驗證。本發明的突出優點是以釀酒副產物白酒糟為原料酶解後以不同比例替代蛋白腖作為氮源培養細菌，既節約了蛋白腖，又防止白酒糟汙染環境，同時提升了白酒糟的使用價值。經濃縮物不同比例替代蛋白腖作為氮源，培養受試菌18～24h，其生物量(OD值)普遍高於純蛋白腖為氮源時的生物量。本發明在微生物培養基氮源的生產領域具有良好的應用前景。
【IPC分類】C12R1/445, C12R1/125, C12R1/19, C12R1/07, C12N1/20
【公開號】CN105713861
【申請號】CN201610149407
【發明人】胡承, 文章, 李克亞
【申請人】四川大學