一種抗氧化型黃鯽發酵液的製備方法

2023-07-09 11:39:16 3

一種抗氧化型黃鯽發酵液的製備方法
【專利摘要】一種抗氧化型黃鯽發酵液的製備方法，其特徵在於步驟：1）魚肉發酵培養基製備：將魚糜與水按照料液比0.5~1.1g：0.5~1.1mL混合，按照裝液體積加入質量分數1.5~2.5%葡萄糖，然後調節混合漿液pH至中性，將混合漿液按照每250mL錐形瓶中分裝70~100mL，然後118~125℃滅菌20~40min備用；2）按魚肉發酵培養基的混合漿液體積，以體積分數1.0~3.0%的比例接入納豆芽孢桿菌種子液，混勻，在25~45℃下發酵，搖床轉速120~160rpm，發酵時間20~36h；3）發酵結束後將發酵混合物過濾或者離心分離，得到發酵液，在不高於-20℃冰箱中凍藏或者乾燥後保藏。本發明以黃鯽為原料，採用納豆芽孢桿菌純種發酵方式製備，大大提高了黃鯽發酵液的抗氧化性，製得的黃鯽發酵液能有效地抑制脂質的氧化，可以替代化學合成型抗氧化劑，具有天然、安全無毒的特點，且成本低廉。
【專利說明】一種抗氧化型黃鯽發酵液的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種抗氧化型黃鯽發酵液的製備方法。
【背景技術】
[0002]脂質氧化是食品加工者和消費者所關心的主要問題之一，因為脂質氧化作用會影響食品的風味、質地和感官，甚至還會生成一些有毒、有害物質(Rajapakse N, MendisEj Byun H G，et al.Purification and in vitro antioxidative effects of giantsquid muscle peptideson free radical-mediated oxidative systems[J].J NutrBiochem, 2005，16:562 - 569.)。自由基與脂質氧化有關，一些自由基如:羥自由基、超氧陰離子自由基非常不穩定，能夠與人體內化學物質發生反應導致細胞DNA，蛋白質和脂質發生氧化損傷。雖然化學合成型抗氧化劑能夠有效地抑制脂質的氧化，但因為存在對人體健康潛在的化學毒性，所以化學抗氧化劑的使用受到嚴格控制，只能在某些食品中添加(Winata A,Lorenz K.Antioxidantpotential of 5-N pentadecylresorcinol[J].J FoodProcess Pres, 1996, 20:417 - 429;Park P J，Jung W K，Nam K S，et al.Purificationand characterization of antioxidative peptides fromprotein hydrolysate oflecithin-free egg yolk[J].JAm Oil Chem Socj 2001, 78:651 - 656.) 0 尋找高效、天然的抗氧化劑代替化學合成型抗氧化劑引起高度重視，水產品及其加工副產物富含蛋白質，釆用商業蛋白酶水解法製備抗氧化型寡肽是近年來最為活躍的一個研究領域。與商業蛋白酶水解法相比較，生物發酵法歷史更悠久，已證實水產蛋白發酵產物具有多種生物活性(Ichimura Tj Hu Jj Aita D Qj et al.Angiotensin 1-converting inhibitoryenzymeactivity and insulin secretion stimulative activity of fermented fishsauce [J].J BiosciBioeng，2003，96:496-499;Rajapakse Nj Mendis E，Jung W K，etal.Purification of a radicalscavenging peptide from fermented mussel sauceand its antioxidant properties[J].Food ResInterj 2005,38:75-82;Sachindra NM，Bhaskar N.1n vitro antioxidant activity of liquor fromfermented shrimpbiowaste[J].Bioresour Technol.2008, 99:90139016;Wang Y K，He H L，Chen X Lj etal.Production of novel angiotensin I converting enzyme inhibitory peptidesbyfermentation of marine shrimp Acetes chinensis with Lactobacillus fermentumSM 605[J].Appl Microbiol Biotechnol，2008，79:785 - 791.)，而且生物發酵法成本低，更適合大批量生產活性物質。
[0003]以捕獲量大的海產低值小雜魚黃鯽為原料，製備黃鯽蛋白抗氧化型發酵液，相關此類研究還尚未見報導。

【發明內容】

[0004]本發明所要解決的技術問題是提供一種抗氧化型黃鯽發酵液的製備方法，釆用安全性高的納豆芽孢桿菌純種發酵方式進行製備，大大提高了黃鯽發酵液的抗氧化性，製得的黃鯽發酵液純天然、安全無毒，且成本較低。
[0005]本發明解決上述技術問題所採用的技術方案為:一種抗氧化型黃鯽發酵液的製備方法，其特徵在於包括以下步驟:
[0006]I)魚肉發酵培養基製備:將魚糜與蒸懼水按照料液比0.5"?.1g:0.5"?.1mL混合，按照魚糜質量加入質量分數1.5^2.5%葡萄糖，然後調節混合漿液pH值至中性，每250mL錐形瓶分裝7(Tl00mL混合漿液，然後118~125°C下滅菌2(T40min。
[0007]2)發酵:根據魚肉發酵培養基的混合漿液體積，以體積分數1.0-3.0%的比例接入納豆芽孢桿菌種子液，混勻，在25~45°C下發酵，搖床轉速12(Tl60rpm，發酵時間20~36h ；
[0008]3)發酵結束後將發酵混合物過濾或者離心分離，得到發酵液，在不高於-20°C冰箱中凍藏或者採取噴霧乾燥方式乾燥後保藏。
[0009]作為改進，所述步驟I)的魚糜是將黃鯽去除魚頭和內臟，清洗後將魚體切成小塊，然後用高速組織搗碎機搗碎得到的，魚糜與蒸餾水的料液比為Ig:lrnL。
[0010]再改進，所述步驟I)的調節混合漿液pH值至中性是採用5.5飛.5mol/L氫氧化鈉和5.5飛.5mol/L鹽酸進行調節的。
[0011]最後，所述步驟2)的納豆芽孢桿菌種子液的製備過程為:
[0012]a、先配製種子液培養基:酵母提取物4.5~5.5g/L,蛋白腖9~llg/L, NaCl 9^11g/L，調節pH至7.1-7.3,按照每 250mL錐形瓶中加入45~55mL種子培養基分裝，然後118~125°C加熱滅菌15~25min。
[0013]b、用接種環從斜面保存的納豆芽孢桿菌的菌苔上挑取2環納豆芽孢桿菌，接入到種子液培養基中，培養溫度25~45°C，搖床轉速12(Tl60rpm，培養20~36h，得到納豆芽孢桿菌種子液。
[0014]與現有技術相比，本發明的優點在於:本發明以黃鯽為原料，採用安全性高的納豆芽孢桿菌純種發酵方式製備抗氧化型黃鯽發酵液，大大提高了黃鯽發酵液的抗氧化性，製得的黃鯽發酵液中含有大量抗氧化型胺基酸、疏水性胺基酸，能夠有效地抑制脂質的氧化，本發明的抗氧化型黃鯽發酵液可以替代化學合成型抗氧化劑，具有天然、安全無毒的特點，且成本低廉。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是本發明的製備方法的工藝流程圖；
[0016]圖2是黃鯽蛋白納豆芽孢桿菌發酵液和未發酵樣品的DPPH自由基清除能力比較，其中HA—滅菌魚糜；HAG—滅菌的魚肉培養基，HAGF—滅菌魚肉培養基且經納豆芽孢桿菌發酵，圖中數據用平均值土標準差表示(n=3)，不同字母表示差異顯著(P〈0.05)；
【具體實施方式】
[0017]以下結合附圖實施例對本發明作進一步詳細描述。
[0018]一種抗氧化型黃鯽發酵液的製備方法，工藝流程見圖1，具體步驟為:
[0019]1、魚肉發酵培養基製備
[0020]採用手工去除黃鯽魚頭和內臟，將魚體切成小塊，然後用高速組織搗碎機搗碎得到魚糜，將魚糜與蒸餾水按照1:1 (w/v)混合，按照魚肉質量加入2% (質量分數)葡萄糖，用6mol/L氫氧化鈉和6mol/L鹽酸調節混合眾液pH值(7.0左右)，將混合眾液按照85.9mL/250mL錐形瓶分裝，然後121°C滅菌30min，備用。
[0021]2、種子液製備
[0022]先配製種子液培養基:酵母提取物5g/L，蛋白腖10g/L，NaCl 10g/L，調節pH 7.2，按照每250mL錐形瓶中加入50mL種子培養基分裝，然後121°C加熱滅菌20min。
[0023]納豆芽孢桿菌(Natto Bacillus 20443，購於中國微生物菌種保存中心)按照菌種使用說明書進行活化處理，然後用營養瓊脂試管斜面加液體石蠟法4°C保存。用接種環從斜面保存菌種挑取2環納豆芽孢桿菌，接入到種子液培養基中，培養溫度37°C，搖床轉速150rpm，培養24h，得到納豆芽孢桿菌種子液。
[0024]3、黃鯽蛋白抗氧化型發酵液的製備
[0025]根據魚肉發酵培養基的混合漿液體積，以2% (體積分數)比例接入納豆芽孢桿菌種子液，混勻，37°C下發酵，搖床轉速150rpm，發酵時間24h。
[0026]4、發酵液分離及保存
[0027]發酵結束後將黃鯽蛋白發酵混合物過濾或者離心分離，棄去殘渣，得到淡黃色帶有香氣的發酵液，_20°C冰箱中凍藏或者採取噴霧乾燥方式保藏。
[0028]下面通過實驗數據對本發明做進一步說明:
[0029]1、發酵工藝參數優化
[0030]在生物發酵中，一些參數，如:接種量、發酵溫度、發酵時間、搖床轉速、料液比等均會影響發酵最終產物生成。在前期單因素研究基礎上，選擇葡萄糖加入量(％，w/v)，裝液量(250mL錐形瓶)和液料比(蒸懼水:魚糜,ν/w)三個因素進行三水平的Box-Behnken響應面分析試驗(見表1)，以發酵液的DPPH自由基清除率為響應值，建立數學模型(見公式1)，其中I是變量，β ^為常數項，β j, β jj和β ij分別是模型中一次項、二次項和交互項。響應面
試驗結果見表2，方差分析結果見表
【權利要求】
1.一種抗氧化型黃鯽發酵液的製備方法，其特徵在於包括以下步驟: 1)魚肉發酵培養基製備:將魚糜與蒸懼水按照料液比0.5"?.1g:0.5"?.1mL混合,按照魚肉質量加入質量分數1.5^2.5%葡萄糖，然後調節混合漿液pH值至中性，將混合漿液按照每250mL錐形瓶分裝7(Tl00mL，然後118~125°C下滅菌2(T40min，備用； 2)發酵:根據魚肉發酵培養基的混合漿液體積，以體積分數1.0-3.0%的比例接入納豆芽孢桿菌種子液，混勻，在25~45°C下發酵，搖床轉速12(Tl60rpm，發酵時間20~36h ； 3)發酵結束後將發酵混合物過濾或者離心分離，得到發酵液，在不高於-20°C冰箱中凍藏或者採取噴霧乾燥方式乾燥後保藏。
2.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述步驟I)的魚糜是將黃鯽去除魚頭和內臟，清洗後將魚體切成小塊，然後用高速組織搗碎機搗碎得到的，魚糜與蒸餾水的料液比為 Ig:lmL。
3.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述步驟I)的調節混合漿液PH值至中性是採用5.5^6.5mol/L氫氧化鈉和5.5^6.5mol/L鹽酸進行調節的。
4.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述步驟2)的納豆芽孢桿菌種子液的製備過程為: a、先配製種子液培養基:酵母提取物4.5~5.5g/L，蛋白腖9~llg/L，NaCl 9~llg/L，調節pH至7.1~7.3，按照每250mL錐形瓶中加入45~55mL種子培養基分裝，然後118~125°C加熱滅菌15~25min。 b、用接種環從斜面保存的納豆芽孢桿菌的菌苔上挑取2環納豆芽孢桿菌，接入到種子液培養基中，培養溫度25~45°C，搖床轉速12(Tl60rpm，培養20~36h，得到納豆芽孢桿菌種子液。
【文檔編號】A23L3/3472GK103798911SQ201210461827
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年11月15日 優先權日:2012年11月15日
【發明者】宋茹, 韋榮編 申請人:浙江海洋學院