脂質成分的測定方法和腎病的檢查方法
2023-07-09 20:59:56 2
專利名稱：脂質成分的測定方法和腎病的檢查方法
技術領域：
本發明涉及尿中脂質成分的測定方法和測定用試劑。本發明還涉及利用該測定方法的腎病檢查手段。
另外，在尿中出現的大型巨噬細胞是白血球的表面抗原CD14為陰性、25F9為陽性，與通常的巨噬細胞CD14陽性、25F9陰性有很大差異，而且，已知脂肪球、卵圓形脂肪體屬於大型巨噬細胞，測定其作為腎病的檢查是有用的(臨床病理、47卷、總會號73、1999)。
但是，這些測定中的任一種都是利用染色的鏡檢、使用單克隆抗體的螢光標識免疫染色的鏡檢或流式細胞測量法等進行的。這些方法，由於通過對每個檢體進行鏡檢或流式細胞測量法等進行檢查，因此操作煩雜，且對多個檢體的測定是困難的。
另外，由於尿中的脂質成分與血清中含有的脂質成分的量相比是微量的，因此需要敏感度好的脂質成分的測定方法。本發明者們進一步進行研究的結果是，著眼於與腎病相關的尿中脂肪球和卵圓形脂肪含有的脂肪顆粒，發現通過使用表面活性劑對其進行可溶化，可對其中含有的脂質成分進行測定，並完成了本發明的測定尿中含有的脂質成分的方法。另外，關於本發明中的「可溶化」的意思如後所述。
即，本發明是1.腎病的檢查手段，其特徵在於測定尿中含有的脂質成分。
2.前述1中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，通過使用與脂質成分作用的酶測定前述尿中含有的脂質成分。
3.前述2中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，前述與脂質成分作用的酶是1種或2種以上選自催化分解反應、脫氫反應、或氧化反應的酶。
4.前述1～3任一項中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，前述脂質成分是尿中的脂肪滴、脂肪體或脂肪球的至少任意之1或2以上中含有的脂質成分。
5.前述1～4任一項中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，前述脂質成分是1種或2種以上選自中性脂肪及其衍生物、磷脂及其衍生物、過氧化脂質、固醇類、脂肪酸、脂肪酸鹽、脂肪酸酯、脂肪醇、脂肪醛、糖脂、鞘脂、前列腺素、類胡蘿蔔素的脂質成分。
6.尿中含有的脂質成分的測定方法，其特徵在於使用使尿中的不溶性脂肪可溶化或分散達到均質的手段。
7.前述6中記載的測定方法，其特徵在於，使前述尿中的不溶性脂肪可溶化或分散達到均質的手段是使用表面活性劑。
8.前述6或7中記載的測定方法，其特徵在於，前述尿中含有的脂質成分是脂肪滴、脂肪體或脂肪球的至少任意之1或2以上中含有的脂質成分。
9.前述6～8任一項中記載的測定方法，其特徵在於，前述脂質成分是1種或2種以上選自中性脂肪及其衍生物、磷脂及其衍生物、過氧化脂質、固醇類、脂肪酸、脂肪酸鹽、脂肪酸酯、脂肪醇、脂肪醛、糖脂、鞘脂、前列腺素、類胡蘿蔔素的脂質成分。
10.前述6～9任一項中記載的測定方法，其特徵在於，前述脂質成分至少是固醇類或磷脂中的任一種。
11.前述6～10任一項中記載的測定方法，其特徵在於，前述表面活性劑是具有可溶化脂肪滴、脂肪體或脂肪球中至少任意之1或2以上作用的，可使脂肪滴、脂肪體或脂肪球任一中含有的脂質成分可溶化·分散·游離成為均質的物質。
12.前述6～11任一項中記載的測定方法，其特徵在於，前述表面活性劑是非離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、陰離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑、或配糖體。
13.前述6～12任一項中記載的測定方法，其特徵在於，前述表面活性劑是2種以上並用。
14.前述1中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於是利用前述6～13任一項中記載的方法。
15.權利要求1中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，是在前述2或3記載的檢查手段中，進一步利用前述6～13任一項中記載的方法。
16.前述1～3、14或15任一項中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，至少與尿中脂蛋白類或尿中脫輔基蛋白類中的任意之1或2以上的測定組合進行。
17.前述1～3、14～16任一項中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，與尿中含有的白血球的表面抗原的測定或檢出組合進行。
18.尿中脂質成分測定用試劑，是將前述6～13任一項中記載的測定方法中必須的試劑試劑盒化或以單獨產品構成的。
本發明是腎病的檢查手段，其特徵在於測定尿中含有的脂質成分。這裡，手段是指為達到目的的方法和/或介質。
另外，作為測定尿中微量的脂質成分的方法，本發明者們發現，通過使用足夠的表面活性劑，使尿中的不溶性脂肪可溶化或分散達到均質化，可進行尿中脂質成分的測定。
通過本發明的尿中含有的脂質成分的測定方法測定的尿中的脂質成分，主要是脂肪滴、脂肪體和/或脂肪球中含有的脂質成分，而且是1種或2種以上選自中性脂肪及其衍生物、磷脂及其衍生物、過氧化脂質、固醇類、脂肪酸、脂肪酸鹽、脂肪酸酯、脂肪醇、脂肪醛、糖脂、鞘脂、前列腺素、類胡蘿蔔素的脂質成分。
在本發明的尿中含有的脂質成分的測定方法中使用的酶，可以是1種或2種以上選自催化分解反應、脫氫反應、或氧化反應的酶。
在本發明的尿中含有的脂質成分的測定方法中使用的表面活性劑，可以是具有可溶化或分散脂肪滴、脂肪體或脂肪球進行均質化作用的，可使脂肪滴、脂肪體或脂肪球任一中含有的脂質成分可溶化·分散·游離成為均質的物質。表面活性劑可以2種以上組合使用，且可以是非離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、陰離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑或配糖體。
本發明的腎病檢查手段的特徵在於利用前述本發明的尿中含有的脂質成分的測定方法，測定的脂質成分可以是尿中的脂肪滴、脂肪體和/或脂肪球中含有的脂質成分，而且可以是1種或2種以上選自中性脂肪及其衍生物、磷脂及其衍生物、過氧化脂質、固醇類、脂肪酸、脂肪酸鹽、脂肪酸酯、脂肪醇、脂肪醛、糖脂、鞘脂、前列腺素、類胡蘿蔔素的脂質成分。
本發明的腎病的檢查手段，可以是前述本發明的尿中含有的脂質成分的測定方法與尿中脂蛋白和/或尿中脫輔基蛋白的測定或尿中含有的白血球的表面抗原的測定或檢出組合進行。
另外，本發明提供將前述尿中含有的脂質成分的測定方法中必須的試劑試劑盒化或以單品構成的尿中脂質成分測定用試劑。
另外，作為新的測定方法，可列舉特徵在於使尿中不溶性脂肪可溶化或分散達到均質中，包含使用充分的表面活性劑，和使用與脂質成分作用的酶的尿中脂質成分的測定方法。
這裡，使之可溶化，或使之可溶化或分散達到均質化是指，使在尿中不溶的脂質成分在尿中穩定且均質地存在。即，使用使脂質成分可溶化，或使之可溶化或分散達到均質化的尿，即使採用尿的任一部分進行脂質的測定，脂質成分以幾乎相同的濃度存在。另外，作為其它意思，使脂質成分可溶化或，使之可溶化或分散達到均質化是指，通過表面活性劑的作用，脂質通過與酶反應達到可定量的狀態，可以是任一種意思，或者是兩方面的意思。脂質成分的測定，可使用後述公知的方法。
作為尿中的脂質成分，是以脂肪滴、脂肪體和/或脂肪球中含有的物質為主要測定對象。在血清中，脂質雖然以可溶化的狀態存在，但在尿中，多數為用顯微鏡可看到的程度的粒子。對於這些形成不溶性脂肪塊的物質，用本發明可通過酶反應定量其脂質成分量。
(作為對象的脂質成分)作為本發明測定對象的尿中的脂質成分，是1種或2種以上選自例如，中性脂肪及其衍生物、磷脂及其衍生物、過氧化脂質、固醇類、脂肪酸、脂肪酸鹽、脂肪酸酯、脂肪族醇、脂肪族醛、糖脂、鞘脂、前列腺素、類胡蘿蔔素等的脂質成分，其濃度或含量通過使用與脂質成分作用的酶測定。脂質成分中特別重要的對象是固醇類和/或磷脂。
(測定試樣的處理)尿試樣可以是尿本身，也可以是將尿離心分離得到的尿沉渣部分或上清部分。本發明的脂質成分的測定方法不僅可以不對尿試樣做任何處理直接測定，也可以離心分離尿，分離尿沉渣部分，測定該部分的脂質成分。
(表面活性劑的添加)本發明是使尿試樣中含有的脂質成分，在表面活性劑的存在下，與脂質成分作用的酶作用進行測定的。表面活性劑只要是具有可使尿中不溶性脂肪可溶化或分散達到均質作用的物質都可以，對此沒有特別的限制，但是優選具有使脂肪滴、脂肪體或脂肪球可溶化作用，使這些中含有的脂質成分可溶化·分散·游離達到均質的物質。另外，也可單獨通過超聲波處理或與表面活性劑組合處理，使脂質成分可溶化·分散·游離達到均質。
在本發明的具體例中，作為非離子表面活性劑可列舉屈立通X-100，但並不特別限於這些物質。本領域技術人員，按照本發明公開的結果，通過反覆進行單純的試驗進行效果比較，可得到在尿中含有的脂質成分的測定中有效的，可使不溶性脂肪可溶化或分散達到均質的表面活性劑。除了非離子表面活性劑以外，當然也可適當使用陽離子、陰離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑或配糖體。另外，也可通過並用2種以上的表面活性劑，達到更確實地使之可溶化或分散的均質化效果。
表面活性劑的添加量，一般為0.1～5w/v％，但是考慮到脂質成分的可溶化或分散的均質化程度，可通過適當增量·減量進行選擇。由於作為處理條件的溫度·時間等，依存於脂質成分與酶的反應條件，優選選擇作為測定對象的脂質成分和酶的更合適的條件，這可通過單純的反覆試驗來決定。另外，優選作為預處理添加預表面活性劑，進行脂質成分的可溶化或分散均質化處理。此時，在10～40℃的溫度，進行數秒至數分鐘左右的處理是充分的。當然，該表面活性劑處理，也可與酶反應處理同時進行。處理可進行適當的階段處理，更優選自動化條件或一次處理。
(使用酶的脂質成分的定量)如上所述通過添加表面活性劑可溶化或分散均質化的尿中脂質成分的測定，可進行使用酶的脂質成分的定量方法，該方法只要是公知的方法就可以，對此沒有特別的限制。可列舉例如，HPLC法、氣相色譜法、電泳法、化學方法、使用酶的方法。其中，使用酶的方法，從操作性、敏感度等方面優選使用。本發明的脂質成分的測定方法，如下述具體例所示，利用1種或2種以上選自催化分解反應、脫氫反應、或氧化反應的酶，可進行脂質成分的測定。尿中的脂質成分，與血清中的脂質成分相比僅以微量存在，通過使用酶可進行高敏感度的測定。
具體地說，作為測定中性脂肪的例子，使用脂肪酶將中性脂肪分解為甘油和脂肪酸，通過酶反應測定生成的甘油。通過酶反應對甘油的測定，可使用使甘油激酶與甘油-3-磷酸脫氫酶作用，測定從輔酶NAD向NADH的轉化速度的方法，測定使甘油激酶和甘油磷酸氧化酶作用生成的過氧化氫的方法，使甘油激酶和甘油-3-磷酸脫氫酶和甘油磷酸氧化酶作用通過循環反應測定甘油的高敏感度測定法，使甘油脫氫酶作用的測定方法等。
測定磷脂時，可使用使磷脂酶和甘油磷酸膽鹼二酯酶作用，生成甘油-3-磷酸，該甘油-3-磷酸可使用與中性脂肪同樣的測定方法，其他的用酶測定磷脂可使用公知的方法。
在測定作為生物體中代表性固醇的膽固醇時，已知使膽固醇氧化酶作用，生成過氧化氫，通過過氧化物酶測定該過氧化氫的測定方法，或使膽固醇脫氫酶作用，測定從輔酶NAD向NADH的轉化速度或轉化量的方法，另外，使用同樣的膽固醇脫氫酶，通過使用輔酶NADH和硫NAD兩種輔酶的在平衡增幅反應中更高敏感度地測定膽固醇的方法(特開平08-70894號公報)。另外，還報告了在將通過膽固醇氧化酶等轉換的氧化型輔酶再生為還原型輔酶的第二脫氫酶的還原型基質存在下，以膽固醇為基質進行循環反應的測定方法(特開平11-18797號公報)。
在膽固醇的脂肪酸酯的情況下，通過使膽固醇酯酶等分解酶作用，轉化為游離膽固醇，可用上述方法測定。
對於脂肪酸，可使用測定醯基輔酶A合成酶和醯基輔酶A氧化酶作用生成的過氧化氫的方法。
對於前列腺素，可使前列腺素脫氫酶作用測定。
對於糖脂質，使糖脂質分解脂肪酶和其他脂肪酶作用，可測定生成的甘油。
在鞘脂質的情況下，可使鞘脂質分解脂肪酶作用進行測定。
在脂蛋白的情況下，對於脂蛋白中含有的脂質成分可適當使用上述方法進行測定。
另一方面，關於脫輔基蛋白的測定，可使用抗原抗體反應進行測定，例如，在脫輔基B蛋白中，使用抗脫輔基B蛋白抗體，免疫比濁法、粒子凝集免疫測定法，酶免疫測定法等公知的測定法是適用的。作為其他的脫輔基蛋白的例子，有脫輔基A-I、脫輔基A-II、脫輔基C、脫輔基E、脫輔基LP(a)等。另外，根據脫輔基蛋白的種類的脂質成分也可使用公知的方法進行測定。
脂質成分的測定法，並不限於上述列舉的方法，根據已知的脂質成分的測定方法可進行適當的變更·追加。
在本發明中提供，將上述本發明的尿中脂質成分測定方法中必要的試劑試劑盒化或以單獨產品構成的尿中脂質成分測定用試劑。本發明的尿中脂質成分測定用試劑中含有使尿中不溶性脂肪可溶化或分散均質化的表面活性劑、和定量脂肪成分的試劑。另外，也可以是使載體中含有測定中必要的試劑的形成的簡單型的測定用設備。
(腎病檢查手段)本發明課題解決手段的另一方面是以測定尿中含有的脂質成分為特徵的腎病的檢查手段。以前，為檢出腎病的尿中脂肪粒等的檢查是通過顯微鏡觀察等煩雜的手段進行的。在本發明，發現使用上述本發明的簡便的尿中脂質成分的測定方法得到的尿中含有的脂質、和尿中脂蛋白和/或尿中脫輔基蛋白類的測定結果，顯示與腎疾病有明顯關聯性，因此完成了本發明的使用尿中脂質成分的測定方法的簡便的腎病檢查手段。另外，將尿中脂質成分的量記分化，通過分數可判定被檢者的腎病程度。
在本發明的腎病檢查手段中，可利用上述尿中脂質成分的測定方法。作為測定對象的尿中含有的脂質成分，主要含在尿中的脂肪滴、脂肪體和/或脂肪球中。因此，將尿中脂肪滴、脂肪體和/或脂肪球中含有的脂質成分中的至少1種或2種以上選自中性脂肪及其衍生物、磷脂及其衍生物、過氧化脂質、固醇類、脂肪酸、脂肪酸鹽、脂肪酸酯、脂肪族醇、脂肪族醛、糖脂、鞘脂、前列腺素、類胡蘿蔔素的脂質成分作為對象。
在實驗例中，雖然測定了腎病患者的膽固醇值和磷脂值，這些與正常人相比是具有明顯差的高值，從該結果可判定，定量尿中含有的脂質成分、至少是膽固醇和/或磷脂，在腎病的發現中是有用的。
另外，在本發明，除了尿中脂質的測定，與尿中脂蛋白和/或尿中脫輔基蛋白類的測定組合是本發明的優選方案，可獲得更優選的判斷。
這樣本發明提供，測定尿中的1種或2種以上的脂質、以及尿中脂蛋白和/或脫輔基蛋白類等脂質成分，通過解析其結果，可進行腎病的檢出和判斷其程度的腎病檢查手段。
本發明公開了，為判定腎病的檢出和障礙程度，除了該尿中脂質成分的測定，組合進行尿中含有的白血球的表面抗原的測定或檢出的方法。特別是只對於尿中脂質成分顯示高值(將脂質，和脂蛋白類和/或脫輔基蛋白類的測定結果記分化)的試樣，可導入進行尿中含有的白血球的表面抗原的測定或檢出的方法。通過該組合，可更好地進行腎病的檢查。即，通過與尿中的脂質成分的測定合併，組合尿中含有的白血球表面抗原的測定或檢出，可更好地進行腎病的檢出和其程度的判定。
在組合尿中脂質成分的測定和尿中含有的白血球表面抗原的測定或檢出進行腎病的檢查時，在使用尿的一部分測定上述脂質、和脂蛋白類和/或脫輔基蛋白類，同時，將一部分通過離心分出尿沉渣成分，通過公知的鏡檢或流式細胞測量法等可測定檢出白血球的表面抗原，例如，CD14、CD16、25F9等。另外，可使用尿沉渣組分的一部分，測定脂質、和脂蛋白和/或脫輔基蛋白類，用剩餘的一部分可用鏡檢或流式細胞測量法等可測定檢出白血球的表面抗原。另外，可將尿的一部分通過離心分離分出尿沉渣，測定檢出白血球表面抗原，另一方面，將尿的一部分單獨或組合使用凍結溶解和/或表面活性劑處理等，經由使尿中細胞破壞的步驟進行尿檢體的脂質、和脂蛋白和/或脫輔基蛋白類的測定。
隨時組合解析本發明的腎病檢查手段中包括的，從尿中脂質的測定，和尿中脂蛋白和/或尿中脫輔基蛋白類的測定，或這些與尿中含有的白血球的表面抗原的測定或檢出中得到的結果，可更好地進行腎病判斷。可以適宜地選定用作解析的測定結果。例如，可將膽固醇和磷脂的比作為指標，其比可與CD14的測定檢出結果組合。尿中含有的白血球表面抗原的測定檢出結果也可以是組合多個結果。(實施例)下面列舉實施例對本發明進行進一步說明，但本發明並不限於這些實施例。(實施例1)分別對正常人的尿和腎病患者的尿測定膽固醇濃度。尿預先與10％屈立通X-100以9∶1的比例混合，作為尿檢體。
膽固醇的測定是，調製下述組成的2種測定試劑，對於尿檢體10μL，加入250μL的試劑-1，在37℃反應5分鐘後，加入100μL的試劑-2，添加後，求出從第1分鐘到第3分鐘在波長415nm的1分鐘左右的吸收光度變化量，求出膽固醇的濃度。其結果如表1所示。試劑-1PIPES 20mmol/LKCL 150mmol/L屈立通X-100 0.3w/v％膽酸鈉 0.3w/v％硫NAD 1.25mmol/L牛血清白蛋白0.1w/v％膽固醇脫氫酶3U/ml膽固醇酯酶 5U/mlpH 7.0試劑-2CHES175mmol/L屈立通X-100 0.3w/v％膽酸鈉 0.3w/v％β-NADH 3.5mmol/LpH 9.1(實施例2)對於實施例1調製的尿檢體，測定磷脂濃度。磷脂的測定是，調製下述組成的2種測定試劑，對於尿檢體10μL，加入250μL的試劑-1，在37℃反應5分鐘後，加入100μL的試劑-2，添加後，求出從第1分鐘到第3分鐘在波長546nm的1分鐘左右的吸收光度變化量，求出磷脂的濃度。其結果如表1所示。試劑-1HEPES 50mmol/LCaCl21.0mmol/L屈立通X-100 0.2w/v％甘油-3-磷酸脫氫酶 1.5U/ml磷脂酶A12.0U/ml磷脂酶A22.0U/ml甘油磷酸膽鹼磷酸二酯酶 0.6U/ml
NADH0.5mM苯酚0.05％抗壞血酸氧化酶 3U/LpH 8.0試劑-2磷酸緩衝液 20mmol/L甘油-3-磷酸氧化酶 200U/mlPOD 10U/ml4-氨基安替比林 2.0mMpH 7.5從該結果可判定，腎病患者尿中膽固醇和磷脂的濃度是比正常人明顯高的值，至少通過測定尿中膽固醇和/或磷脂，可檢查腎病。(表1)正常人和腎病患者尿中膽固醇和磷脂
(實施例3)測定122例尿檢體(IgA腎病[IgAN]51例，糖尿病性腎病[DMN]10例，腎小球硬化症[Nephroscrelosis]9例，膜性腎病[MN]6例，膜性增殖性腎小球腎炎[MPGN]7例，急性進行性腎病[RPGN]12例，微小變化型腎變病症候群[MCN]3例，巢狀腎小球硬化症[FGS]12例，慢性腎衰竭[CFR]5例，正常7例)中的磷脂、游離膽固醇、膽固醇、脫輔基A1的濃度。
其結果如
圖1～5所示。這些任一個脂質關聯標記物在上述任意的疾病組與正常尿相比都顯示明顯的高值，由此可知，通過測定尿中脂質成分，可進行腎病的檢查、診斷。另外，其它的用途是測定崛田等報告的油紅0陽性顆粒(尿中的脂肪球)的個數(5mL)中(Takashi Oda，Osamu Hotta et al.kidney International，Vol.53，1190-1200，(1998))。
尿中的脂肪球，在IgAN、RPGN、FGS顯示特別高的值，但是相反，在MCN等與正常尿沒有變化。與其相比，可判定用本發明的方法，不僅對IgAN、RPGN、FGS，對其它腎病也可敏感度良好地檢出，確認本發明是有用的。
另外，膽固醇的測定是實施例1所示的方法，磷脂的測定是實施例2所示的測定方法，游離膽固醇的測定可用實施例1所示試劑-1中除去膽固醇酯酶外與實施例1同樣的操作進行。
脫輔基A1的測定，可使脫輔基A-I免疫試劑·ND[コクサイ]進行測定。
將尿預先與10％屈立通X-100以9∶1的比例混合，作為尿檢體。對於尿檢體10μL，以160μL的第1試劑，40μL的第2試劑的比例測定以外，按照說明書進行操作。(實施例4)使用從定期接受健康檢查者採取的尿檢體175例，按照實施例1中記載的方法測定尿中膽固醇，求出正常人尿中的膽固醇參照值。健康正常人血清中的膽固醇值通常為130～250mg/dL，與此相對，尿中膽固醇值為血清膽固醇值的1000分之1以下，為0.01～0.25mg/dL。
作為對照，使用市售的血清膽固醇測定試劑盒進行測定，但是對於任何檢體也不能測定膽固醇。由此可知，尿中膽固醇的測定，必須使用本發明實施例1中記載的方法等的高敏感度測定方法。
產業上的可利用性本發明提供了可更簡便確實地測定尿中含有的脂質成分的方法，利用該方法，發現了腎病與尿中含有的脂質成分量的相關性，為檢出腎病，發現尿中脂質、和尿中脂蛋白類和/或尿中脫輔基蛋白類等的測定是極其有效的。另外，提供了在該尿中脂質成分的測定中，通過解析多個脂質成分、和脂蛋白類和/或脫輔基蛋白類的測定結果，或通過與尿中含有的白血球的表面抗原的測定組合，更確實地檢查腎病程度的手段。
權利要求
1.腎病的檢查手段，其特徵在於測定尿中含有的脂質成分。
2.權利要求1中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，通過使用與脂質成分作用的酶測定前述尿中含有的脂質成分。
3.權利要求2中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，前述與脂質成分作用的酶是1種或2種以上選自催化分解反應、脫氫反應、或氧化反應的酶。
4.權利要求1～3任一項中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，前述脂質成分是尿中的脂肪滴、脂肪體或脂肪球的至少任意之1或2以上中含有的脂質成分。
5.權利要求1～4任一項中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，前述脂質成分是1種或2種以上選自中性脂肪及其衍生物、磷脂及其衍生物、過氧化脂質、固醇類、脂肪酸、脂肪酸鹽、脂肪酸酯、脂肪族醇、脂肪族醛、糖脂、鞘脂、前列腺素、類胡蘿蔔素的脂質成分。
6.尿中含有的脂質成分的測定方法，其特徵在於使用使尿中的不溶性脂肪可溶化或分散達到均質的手段。
7.權利要求6中記載的測定方法，其特徵在於，使前述尿中的不溶性脂肪可溶化或分散達到均質的手段是使用表面活性劑。
8.權利要求6或7中記載的測定方法，其特徵在於，前述尿中含有的脂質成分是脂肪滴、脂肪體或脂肪球的至少任意之1或2以上中含有的脂質成分。
9.權利要求6～8任一項中記載的測定方法，其特徵在於，前述脂質成分是1種或2種以上選自中性脂肪及其衍生物、磷脂及其衍生物、過氧化脂質、固醇類、脂肪酸、脂肪酸鹽、脂肪酸酯、脂肪族醇、脂肪族醛、糖脂、鞘脂、前列腺素、類胡蘿蔔素的脂質成分。
10.權利要求6～9任一項中記載的測定方法，其特徵在於，前述脂質成分至少是固醇類或磷脂中的任一種。
11.權利要求6～10任一項中記載的測定方法，其特徵在於，前述表面活性劑是具有可溶化脂肪滴、脂肪體或脂肪球中至少之1或2以上作用的，可使脂肪滴、脂肪體或脂肪球任一中含有的脂質成分可溶化·分散·游離成為均質的物質。
12.權利要求6～11任一項中記載的測定方法，其特徵在於，前述表面活性劑是非離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、陰離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑、或配糖體。
13.權利要求6～12任一項中記載的測定方法，其特徵在於，前述表面活性劑是2種以上並用。
14.權利要求1中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於是利用權利要求6～13任一項中記載的方法。
15.權利要求1中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，是在權利要求2或3記載的檢查手段中，進一步利用權利要求6～13任一項中記載的方法。
16.權利要求1～3、14或15任一項中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，至少與尿中脂蛋白類或尿中脫輔基蛋白類中的任意之1或2以上的測定組合進行。
17.權利要求1～3、14～16任一項中記載的腎病的檢查手段，其特徵在於，與尿中含有的白血球的表面抗原的測定或檢出組合進行。
18.尿中脂質成分測定用試劑，是將權利要求6～13任一項中記載的測定方法中必須的試劑試劑盒化或以單獨產品構成的。
全文摘要
本發明的課題是提供簡便的腎病檢查手段，提供在該檢查手段中利用的尿中脂質成分的測定方法。本發明的課題的解決手段是，提供了測定尿中含有的脂質成分的方法，是特徵在於包括使用使尿中不溶性脂肪可溶化的充分的表面活性劑，和使用在脂肪成分作用的酶的脂質成分的測定方法和測定用試劑。另外，通過測定尿中含有的脂質成分，進一步除了該測定，通過組合進行尿中脂蛋白類和/或尿中脫輔基蛋白類的測定、或尿中含有的白血球表面抗原的測定，提供了簡便的腎病檢查手段。
文檔編號C12Q1/25GK1398350SQ01804716
公開日2003年2月19日 申請日期2001年2月7日 優先權日2000年2月8日
發明者堀田修, 白波瀨泰史, 日裹久英 申請人:國際試藥株式會社