金屬-結合性化合物及其用途的製作方法

2023-07-25 16:53:46 2

專利名稱：金屬-結合性化合物及其用途的製作方法
金屬-結合性化合物及其用途
本申請是中國申請00815718. 9的分案申請，該母案於2000年9月四日以國際申 請號PCT/US00/26952提交，於2002年5月15日進入中國國家階段，本分案採用了與該母 案一致的發明名稱。發明領域
本發明涉及減少由反應性氧類(R0Q所致分子、細胞和組織損傷的方法。本發明 還涉及某些化合物，尤其是某些肽和肽衍生物，它們與金屬離子、特別是Cu (II)結合。本發 明化合物與金屬離子的結合抑制ROS的生成和/或蓄積，和/或使得ROS所致損傷靶向化 合物本身(也就是說，本發明化合物可以充當犧牲性抗氧化劑)。
背景
反應性氧類(ROS)包括自由基(例如超氧化物陰離子和羥基、peroxyl與烷氧 基原子團)和非原子團類(例如單線態氧和過氧化氫)。ROS能夠導致廣泛的細胞和組 織損傷，據報導它們在各種疾病和疾患中扮演主要角色。的確，ROS在一百多種疾病和 病理條件中都有牽連，據推測ROS可能構成涉及所有人類疾病的共同致病機理。Mohs， J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol.，6，205-2 (1995)。關於描述 ROS、它們的生成、它們導 致細胞和組織損傷的機理和它們在大量疾病和障礙中的牽連，例如參見Manso，Rev. Port. Cardiol. ,11,997-999(1992) ；Florence, Aust. N Z J. Opthalmol. ,23,3-7(1992) ；Stohs, J.Basic Clin. Physiol. Pharmacol. ,6, 205-228(1995) ；Knight, Ann. Clin. Lab. Sci. ,25, 111-121(1995) ；Kerr et al. ,Heart & Lung，25，200—209(1996) ；Roth,Acta Chir. Hung., 36,302-305(1997)。
缺血/再灌注是世界上病患和病殘的主導原因。心血管缺血在美國是病患和死亡 的主導原因，其中肌體向心臟供氧的能力減小了。腦缺血是腦血管意外(中風)的前兆，它 在美國是死亡的第三大主導原因。缺血還發生在其他器官(例如腎、肝、肺和腸道)、所採集 的器官(例如為移植或研究(例如灌注器官模型)而採集的器官)，以及作為其中有血流中 斷的手術(例如開心手術和冠脈旁路術)的結果而發生。缺血不必限於一個器官；它也可 能是更加泛化的(例如在出血性休克中)。
作為缺氧的結果，在缺血期間發生細胞和組織損傷。不過，發生在缺血期間的 損傷一般輕於發生在缺血組織和器官的再灌注之後的嚴重損傷。例如參見Manso，Rev. Port.Cardiol. ,11,997-999(1992) ；Stohs, J.Basic Clin.Physiol.Pharmacol. ，6， 205-228(1995) ；Knight，Ann. Clin. Lab. Sci.，25，111-121 (1995) ；Kerr et al. , Heart & Lung, 25, 200-209 (1996) ；Roth, Acta Chir. Hung.，36，302-305 (1997)。據報導 ROS 對由缺 血組織和器官的再灌注所導致的嚴重損傷負責。例如參見Manso，Rev. Port. Cardiol.，11， 997-999(1992) ；Stohs, J. Basic Clin.Physiol. Pharmacol. ,6,205-228(1995) ；Knight, Ann.Clin. Lab. Sci.，25，111-121(1995) ；Kerr et al. , Heart & Lung,25，200—209(1996)； Roth, Acta Chir. Hung,36，302-305(1997)。
金屬離子、主要是過渡金屬離子能夠導致ROS的產生和蓄積。確切地說，從貯存部位釋放的銅和鐵離子是繼發於損傷的ROS產生的主要原因之一，這些損傷包括缺 血/再灌注損傷和由熱、冷、創傷、過量運動、毒素、輻射和感染引起的損傷。Roth，Acta Chir. Hung.，36，302-305 (1997)。據報導銅和鐵離子以及其他過渡金屬離子(例如釩 和鉻離子)催化 ROS 的產生。例如參見 Stohs，J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol. ,6, 205-228(1995) ；Halliwell et al. , Free Radicals In Biology And Medicine, pages 1-19(Oxford University 1989) ；Marx et al.，Biochem. J，236，397-400(1985) ；Quinlan et al.，J. Pharmaceutical Sci.，81，611-614(1992)。據報導其他過渡金屬離子(例如 鎘、汞和鎳離子)和其他金屬離子(例如砷和鉛離子)耗盡一些天然抗氧化劑防禦系統的 分子，由此導致ROS的蓄積增加。例如參見Mohs，J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol.， 6, 205-228 (1995) 0儘管據報導游離銅離子非特異性地與本質上任意蛋白質的氨基結 合(Gutteridge et al.，Biochim. Biophys. Acta, 759，38-41 (1983))，不過與蛋白質結 合的銅離子仍然能夠導致ROS的產生，後者至少損害與銅離子結合的蛋白質。例如參見 Gutteridge et al. ,Biochim. Biophys. Acta,759,38-41(1983) ；Marx et al. ,Biochem. J., 236,397-400(1985) ；Quinlan et al. ,J Pharmaceutical Sci.，81，611—614(1992)。
白蛋白已被描繪為細胞外抗氧化劑。例如參見Halliwell and Gutteridge, Arch. Biochem. Biophys. ,280,1-8 (1990) ；Das et al. , Methods Enzymo1., 233, .601-610(1994) ；Stohs, J Basic Clin.Physiol. Pharmacol.，6，205-228(1995)； Dunphy et al.，Am. J Physiol.，276，H1591-H1598 (1999))。白蛋白的抗氧化劑特性 歸因於白蛋白的若干生理功能，包括白蛋白結合金屬(特別是銅離子)、結合脂肪酸、 結合和轉運類固醇、結合和轉運膽紅素、清除HOCl等能力。例如參見Halliwell and Gutteridge,Arch.Biochem. Biophys. ,280,1-8(1990) ；Halliwell and Gutteridge,Arch. Biochem. Biophys. ,246,501-514(1986) ；Stohs, . . Basic Clin.Physiol. Pharmacol. ,6, 205-228(1995) ；Dunphy et al.，Am. J. Physiol.，276，H 1591-H1598 (1999))。白蛋白含 有若干金屬-結合性部位，其中一個位於N-末端。包括人、鼠和牛血清白蛋白在內的若干 白蛋白的N-末端金屬-結合性部位對Cu(II)和Ni(II)表現較高的親和性，人們已經鑑 別了參與這些金屬離子的高親和性結合的胺基酸。參見Laussac et al. , Biochem. ,23, 2832-2838(1984) ；Predki et al. , Biochem. J. ,287,211-215(1992) ；Masuoka et al., J. Biol. Chem.，268，21533-21537 (1993)。據報導在除高親和性N-末端部位以外的金 屬-結合性部位與白蛋白結合的銅產生自由基，後者在聽命於「寬鬆」金屬-結合性部位 位置的部位對白蛋白導致廣泛損傷，致使白蛋白被描繪為「犧牲抗氧化劑」。參見Marx et al. , Biochem. J. ,236,397-400(1985) ；Halliwell et al. , Free Radicals In Biology And Medicine, pages 1-19(Oxford University 1989) ；Halliwell and Gutteridge, Arch. Biochem. Biophys. ,280,1-8(1990) ；Quinlan et al. , J. Pharmaceutical Sci. , 81, 611-614(1992)。
儘管如此，使用白蛋白治療腦缺血的嘗試顯示出形形色色的結果。據報導白蛋 白在腦缺血的動物模型中是和不是神經保護劑。Compare Huh et al.，Brain Res. ,804, 105-113(1998)and Remmers et al. , Brain Res.，827，237-242 (1999)，with Little et al. , Neurosurgery,9,552-558(1981)and Beaulieu et al. , J. Cereb. Blood Flow. Metab., 18,1022-1031 (1998)ο5
在用於保藏切除心臟的心麻痺溶液中使用白蛋白也得到形形色色的結果。根據 Dunphy et al. ,Am. J. Physiol. ,276,H 1591-H1598 (1999)的報導，向用於保藏切除心臟的 標準心麻痺溶液中加入白蛋白沒有改善被該溶液灌注二十四小時的心臟的功能。當用含有 白蛋白和若干增強劑(胰島素、ATP、皮質酮和丙酮酸)的心麻痺溶液灌注時，心臟的確證明 有功能改善。這是一種協同效應，因為單獨的增強劑以及單獨的白蛋白都不顯著改善心臟 功能。使用含有白蛋白的心麻痺溶液改善心臟功能的早期報導也歸因於增強劑與白蛋白之 間的協同作用。參見 Dunphy et al. ,Am. J. Physiol. , 276,H1591-H1598 (1999)的最後一段 和其中引用的 Hisatomi et al.，Transplantation，52，754-755 (1991)。在另一項研究中， 被含有白蛋白的心麻痺溶液灌注的心臟與不含白蛋白的溶液相比，以劑量相關的方式增加 了再灌注損傷。Suzer et al.，Pharmacol. Res.，37，97-101 (1998)。基於他們和其他人的 研究，Suzer等得出結論，白蛋白尚未顯示有效的心保護作用。他們進一步認為，由於可能的 變態反應和與血液產品的使用有關的危險，在心麻痺溶液中使用白蛋白可能是不安全的。
最後，儘管白蛋白已被描繪為一種抗氧化劑，不過據報導它增強小神經膠質產生 超氧化物陰離子(Si et al. , GLIA,21,413-418(1997)) 0這種結果引起作者推測，在某些 障礙中從被破壞的血腦屏障漏出白蛋白加強小神經膠質產生超氧化物陰離子，這種超氧化 物陰離子產生增加對腦缺血/再灌注中的神經元損傷發病和一些神經變性疾病負責。
如上所述，若干白蛋白的N-末端金屬-結合性部位對Cu(II)和Ni(II)表現較 高的親和性。這些部位已經得到廣泛研究，並且已經鑑別了一般性氨基末端Cu(II)-與 Ni (II)-結合性(ATCUN)基序。例如參見 Harford and Sarkar, Acc. Chem. Res.，30， 123-130 (1997)。ATCUN基序可以被定義為存在於這樣的蛋白質或肽中，它具有N-末端游離 NH2、第三位組氨酸殘基和兩個間插肽氮。例如參見Harfordand Sarkar, Acc. Chem. Res.， 30,123-130 (1997) ο因而，ATCUN基序是由肽序列)(aa Xaa His所提供的，其中Xaa是任意 胺基酸，脯氨酸除外。例如參見 Harford and Sarkar，Acc. Chem. Res.，30，123-130 (1997)。 Cu(II)和Ni(II)與四個氮結合，這四個氮是由ATCUN基序的三個胺基酸所提供的(游離 NH2的氮、兩個肽氮和組氨酸的咪唑氮)，呈略微扭曲的正方平面構型。例如參見Harford and Sarkar, Acc. Chem. Res.，30，123-130 (1997)。組成 ATCUN 基序的三個胺基酸的側鏈基 團能夠參與Cu(II)和Ni(II)的結合，接近這三個N-末端胺基酸的胺基酸也可以影響這些 金屬離子的結合。例如參見 Harford and Sarkar，Acc. Chem. Res.，30，123-130 (1997) ；Bal et al.，Chem. Res. Toxicol.，10,906-914(1997)。例如，人血清白蛋白的 N-末端金屬-結 合性部位的序列是Asp AlaHis Lys [SEQ ID NO :1]，N-末端Asp和Lys殘基的游離側鏈羧 基據報導參與Cu(II)和Ni(II)的結合，除了由Asp Ala His所提供的四個氮以外。參見 Harford and Sarkar,Acc. Chem. Res. ,30,123-130(1997) ；Laussac et al. ,Biochem. ,23, 2832-2838(1984) ；and Sadler e al.，Eur.J. Biochem.，220，193-200(1994)。
在除白蛋白以外的其他天然存在的蛋白質中已經發現了 ATCUN基序，並且已經合 成了包含ATCUN基序的非天然存在的肽和蛋白質。例如參見Harford and Sarkar, Acc. Chem. Res. ,30,123-130 (1997) ；Bal et al. , Chem Res. Toxicol. ,10,906-914 (1997)； Mlynarz,et al. ,Speciation 98 :Abstracts,http://www. jate.u_szeged.hu/ spec98/ abstr/mlynar. htmL·含有ATCUN的肽和蛋白質的Cu (II)與Ni (II)配合物據報導表現超 氧化物歧化酶(SOD)活性。參見 Cotelle e al.，J. Inorg. Biochem.，46，7-15 (1992) ；Uedaet al.，J. Inorg. Biochem.，55，123-130(1994)。儘管報導了它們的 SOD 活性，不過這些配 合物仍然產生損害DNA、蛋白質和其他生物分子的自由基。參見Harford and Sarkar,Acc. Chem. Res. ,30,123-13((1997) ；Bal et al. , Chem. Res. Toxicol. ,10,915-21(1997) ；Ueda et al. , Free Radical Biol. Medl8,929-933(1995) ；Ueda et al. , J. Inorg. Biochem. ,55, 123-130(1994) ； Cotelle et al. ,J. Inorg Biochem.，46，7-15 (1992)。其結果是，假設銅和 鎳的體內副作用至少有一部分可歸因於Cu(II)和Ni(II)與含有ATCUN的蛋白質的結合， 導致損害性自由基的產生。參見Harforc and Sarkar，Acc. Chem. Res.，30，123-130 (1997)； Bal et al. , Chem. Res. Toxicol. , 10,915-921 (1997) ； Cotelle et al. ,J. Inorg. Biochem., 46，7-15 (1992) · Cf. Koch et al.，Chem. &Biol.，4，54960 (1997)。由含有 ATCUN 的肽的 Cu(II)配合物所產生的損害效應已被開發用於體外殺死癌細胞和體內產生抗腫瘤作用。參 見 Harfordand Sarkar, Acc. Chem. Res.，30，123-130 (1997)。
發明概述
本發明提供減少由反應性氧類(R0Q所致哺乳動物損傷的方法。該方法包含對該 動物給以有效量的具有通式P1-P2的金屬-結合性肽或其生理學上可接受的鹽。
本發明進一步提供減少由ROS所致組織或器官損傷的方法，該組織或器官已從動 物體內取出。該方法包含使該組織或器官與含有有效量的肽P1-P2或其生理學上可接受的 鹽的溶液接觸。
本發明還提供在有相應需要的動物體內降低金屬濃度的方法。該方法包含對該動 物給以有效量的具有通式P1-P2的金屬-結合性肽或其生理學上可接受的鹽。
本發明還提供藥物組合物，其包含藥學上可接受的載體和肽P1-P2或其生理學上 可接受的鹽。
另外，本發明提供用於減少由ROS所致組織或器官損傷的試劑盒，該組織或器官 已從動物體內取出。該試劑盒包含一個盛有肽P1-P2的容器。
式P1-P2 中
P1 是 Xaa1 Xaa2 His 或 Xaa1 Xaa2 His Xaa3 ；
P2 是(XaEi4) n。
Xaa1是甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、纈氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、異亮氨酸(Ile)、 絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)、天冬氨酸(Asp)、天冬醯胺(Asn)、穀氨酸(Glu)、穀氨醯胺 (Gin)、賴氨酸(Lys)、羥賴氨酸(Hylys)、組氨酸(His)、精氨酸(Arg)、鳥氨酸(Orn)、苯丙 氨酸(Wie)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)、半胱氨酸(Cys)、甲硫氨酸(Met)或α -羥甲基絲 氨酸(HMS)。) 優選為Asp、Glu、Arg或HMS。更優選地，Xaa1是Asp或Glu。最優選地， Xaa1 是 Asp0
Xaa2 是 Gly、Ala、β-Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Thr、Asp、Asn、Glu、Gln、Lys、Hylys、 His、Arg、Orn> Phe> Tyr> Trp> Cys> Met 或 HMS0 Xaa2 優選為 Gly、Ala、Val、Leu、lie、Thr> ^51~、4811、]^仏見8或圓5。更優選地，Xagi2是々1&、Val、Thr、Ser或HMS。進而更優選地， Xaa2 是 Ala、Thr 或 HMS。最優選地，Xaa2 是 Ala。
Xaa3 是 Gly、Ala、Val、Lys、Arg、Orn、Asp、Glu、Asn、Gln 或 Trp,優選為 Lys0
) 是任意的胺基酸。
最後，η是0-100，優選為0_10，更優選為0_5，最優選為0。
在優選的實施方式中，P1胺基酸至少有一個是D-胺基酸，若存在β -Ala則該氨基 酸除外。優選地，該D-胺基酸是)(aai、His或二者皆是。最優選地，除β-Ala以外的所有 P1胺基酸都是D-胺基酸。在另一種優選的實施方式中，P1胺基酸除β-Ala以外至少有一 個是D-胺基酸，P2胺基酸至少有50 %也是D-胺基酸。最優選地，所有P2胺基酸都是D-胺基酸。
在另一種優選的實施方式中，P1和/或P2胺基酸至少有一個是被取代的，(a)取 代基增加肽的親脂性，而不改變P1與金屬離子結合的活性，(b)取代基保護肽不受蛋白酶的 作用，而不改變？工與金屬離子結合的活性，或者(C)取代基是非肽類金屬-結合性官能團， 它提高肽與金屬離子結合的活性。
本發明提供另一種減少由ROS所致動物損傷的方法。該方法包含對該動物給以有 效量的金屬-結合性肽(MBP)，該肽連接有非肽類金屬-結合性官能團。金屬-結合性肽 MBP可以是任意的金屬-結合性肽，而不僅僅是PfP2。
本發明進一步提供另一種減少由ROS所致組織或器官損傷的方法，該組織或器官 已從動物體內取出。該方法包含使該組織或器官與含有有效量的金屬-結合性肽MBP的溶 液接觸，其中該肽連接有非肽類金屬-結合性官能團。
本發明提供另一種在有需要的動物體內降低金屬濃度的方法。該方法包含對該動 物給以有效量的金屬-結合性肽MBP，該肽連接有非肽類金屬-結合性官能團。
本發明還提供藥物組合物，它包含藥學上可接受的載體和金屬-結合性肽MBP，其 中該肽連接有非肽類金屬-結合性官能團。
本發明還提供用於減少由ROS所致組織或器官損傷的試劑盒，該組織或器官已從 動物體內取出。該試劑盒包含一個盛有金屬-結合性肽MBP的容器，該肽連接有非肽類金 屬-結合性官能團。
本發明還提供另外一種減少由反應性氧類(R0Q所致動物損傷的方法。該方法包 含對該動物給以有效量的式P3-L-P3的金屬-結合性肽二聚體，其中每個P3可以是相同或 不同的，而且是能夠與金屬離子結合的肽，L是通過它們的C-末端胺基酸連接這兩個P3肽 的化學基團。在優選的實施方式中，這兩個P3肽之一是P1,或二者皆是。
本發明進一步提供減少由ROS所致組織或器官損傷的方法，該組織或器官已從動 物體內取出。該方法包含使該組織或器官與含有有效量的式P3-L-P3的金屬-結合性肽二 聚體的溶液接觸。
本發明還提供在有相應需要的動物體內降低金屬濃度的方法。該方法包含對該動 物給以有效量的式P3-L-P3的金屬-結合性肽二聚體。
本發明還提供藥物組合物，其包含藥學上可接受的載體和式P3-L-P3的金屬-結合 性肽二聚體。
另外，本發明還提供用於減少由ROS所致組織或器官損傷的試劑盒，其中該組織 或器官已從動物體內取出。該試劑盒包含一個盛有式P3-L-P3的金屬-結合性肽二聚體的 容器。
另外，本發明提供具有式P1-P2的肽或其生理學上可接受的鹽，其中除β "Ala以外 的P1胺基酸至少有一個是D-胺基酸。
進一步由本發明所提供的是具有式P1-P2的肽或其生理學上可接受的鹽，其中P1和/或&胺基酸至少有一個是被取代的，(a)取代基增加肽的親脂性，而不改變P1與金屬離 子結合的活性，(b)取代基保護肽不受蛋白酶的作用，而不改變P1與金屬離子結合的活性， 或者(C)取代基是非肽類金屬-結合性官能團，它提高肽與金屬離子結合的活性。
另外，本發明提供具有式P1-P2的肽，其中P1定義同上，P2是包含金屬-結合性部位 的序列的肽序列。確切地說，P2可以具有下列序列之一 OCaa4)m Xaa3His Xaa2Xaa5, (Xaa4) m His Xaa2Xaa5, (Xaa4)m Xaa5Xaa2HisXaa3 或(Xaa4)m Xaa5Xaa2His,其中 Xaa5 是具有游離側 鏈NH2的胺基酸，m是0-5。
本發明還提供金屬-結合性肽MBP，該肽連接有非肽類金屬-結合性官能團。
最後，本發明提供具有通式P3-L-P3的金屬-結合性肽二聚體。
更具體地，本發明涉及
1.減少由反應性氧類(R0Q所致動物損傷的方法，包含對該動物給以有效量的具 有下式的肽
P1-P2,
其中
P1 是
Xaa1Xaa2His 或
Xaa1Xaa2His Xaa3 ；
P2 是(XaEi4)n;
敘％是甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、天 冬醯胺、穀氨酸、穀氨醯胺、賴氨酸、羥賴氨酸、組氨酸、精氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、 色氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸或α-羥甲基絲氨酸；
)(皿2是甘氨酸、丙氨酸、β-丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、 天冬氨酸、天冬醯胺、穀氨酸、穀氨醯胺、賴氨酸、羥賴氨酸、組氨酸、精氨酸、鳥氨酸、苯丙氨 酸、酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸或α-羥甲基絲氨酸；
& 3是甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸、天冬氨酸、穀氨酸、天冬 醯胺、穀氨醯胺或色氨酸；
) 是任意的胺基酸；
η 是 0-100 ；
或其生理學上可接受的鹽。
2.項1的方法，其中) 是天冬氨酸、穀氨酸、精氨酸或α -羥甲基絲氨酸。
3.項1的方法，其中& 2是甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、絲 氨酸、天冬醯胺、甲硫氨酸、組氨酸或α-羥甲基絲氨酸。
4.項1的方法，其中) 是賴氨酸。
5.項1的方法，其中) 是天冬氨酸、穀氨酸、精氨酸或α -羥甲基絲氨酸，Xaa2 是甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、天冬醯胺、甲硫氨酸、組氨酸 或α-羥甲基絲氨酸， 是賴氨酸。
6.項5的方法，其中) 是天冬氨酸或穀氨酸，Xm2是丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸、蘇 氨酸、絲氨酸或α-羥甲基絲氨酸。
7.項6的方法，其中) 是丙氨酸、蘇氨酸或α -羥甲基絲氨酸。
8.項7的方法，其中) 是天冬氨酸，Xaa2是丙氨酸。
9.項1的方法，其中η是0-10。
10.項9的方法，其中η是0_5。
11.項10的方法，其中η是0。
12.項1的方法，其中P2包含金屬-結合性序列。
13.項12的方法，其中P2包含下列序列之一
(Xaa4)m Xaa3His Xaa2Xaa5,
(Xaa4)m His Xaa2Xaa5,
(Xaa4)m Xaa5Xaa2His Xaa3 或
(Xaa4)m Xaa5Xaa2His,
其中) 是具有游離側鏈NH2的胺基酸，m是0-5。
14.項13的方法，其中Xaa5是Orn或Lys0
15.項1的方法，其中P1胺基酸除β-丙氨酸以外至少有一個是D-胺基酸。
16.項15的方法，其中) 是D-胺基酸，His是D-胺基酸，或者) 和His都是D-胺基酸。
17.項16的方法，其中除β-丙氨酸以外的所有P1胺基酸都是D-胺基酸。
18.項15的方法，其中P2胺基酸至少有50%是D-胺基酸。
19.項16的方法，其中P2胺基酸至少有50%是D-胺基酸。
20.項17的方法，其中P2胺基酸至少有50%是D-胺基酸。
21.項1-20中任一項的方法，其中該動物是需要該肽的，因為需要再灌注該動物 的缺血組織或器官。
22.項21的方法，其中該動物患有腦血管缺血，缺血組織位於動物大腦中。
23.項21的方法，其中該動物患有心血管缺血，缺血組織位於動物心臟中。
24.項21的方法，其中該肽是在再灌注之前、與再灌注同時、在再灌注之後或其組 合的情況下給藥的。
25.項1-20中任一項的方法，其中該動物是需要該肽的，因為神經病學創傷的緣故。
26.項1-20中任一項的方法，其中該動物是需要該肽的，因為它患有神經變性疾病。
27.項1-20中任一項的方法，其中該肽是預防性給藥的。
28.項27的方法，其中將該肽對表現可能的腦血管缺血或可能的心血管缺血症狀 的正在接受診斷的動物給藥。
29.項27的方法，其中在手術之前、手術期間、手術之後或其組合的情況下將該肽 對動物給藥。
30.項四的方法，其中該手術是開心手術或向動物移植器官的手術。
31.項27的方法，其中在放射療法之前、放射療法期間、放射療法之後或其組合的 情況下將該肽對動物給藥。
32.項1-20中任一項的方法，其中至少一個P1胺基酸是被取代的，(a)取代基增 加肽的親脂性，而不改變P1與金屬離子結合的活性，(b)取代基保護肽不受蛋白酶的作用，而不改變P1與金屬離子結合的活性，或者(C)取代基是非肽類金屬-結合性官能團，它提 高肽與金屬離子結合的活性。
33.項32的方法，其中該動物是需要該肽的，因為需要再灌注該動物的缺血組織 或器官。
34.項33的方法，其中該動物患有腦血管缺血，缺血組織位於動物大腦中。
35.項33的方法，其中該動物患有心血管缺血，缺血組織位於動物心臟中。
36.項33的方法，其中該肽是在再灌注之前、與再灌注同時、在再灌注之後或其組 合的情況下給藥的。
37.項32的方法，其中該動物是需要該肽的，因為神經病學創傷的緣故。
38.項32的方法，其中該動物是需要該肽的，因為它患有神經變性疾病。
39.項32的方法，其中該肽是預防性給藥的。
40.項39的方法，其中將該肽對表現可能的腦血管缺血或可能的心血管缺血症狀 的正在接受診斷的動物給藥。
41.項39的方法，其中在手術之前、手術期間、手術之後或其組合的情況下將該肽 對動物給藥。
42.項41的方法，其中該手術是開心手術或向動物移植器官的手術。
43.項39的方法，其中在放射療法之前、放射療法期間、放射療法之後或其組合的 情況下將該肽對動物給藥。
44.項32的方法，其中P1具有下式之一
權利要求
1.不具有結合的金屬離子的線性金屬-結合肽或其生理上可接受的鹽在製備用於減 少有需要的動物中由反應性氧類所致損傷的藥物中的用途，其中所述肽具有下式Pi-P2' 其中 P1是Xaa1Xaa2His ；或 Xaa1Xaa2His Xaa3 ； Xaa1是天冬氨酸； Xaa2是丙氨酸； Xaa3是賴氨酸；P2是胺基酸數為0-10的任意胺基酸序列。
2.權利要求1的用途，其中動物因為再灌注動物中缺血性組織或器官的需要而需要所 述肽或其生理上可接受的鹽。
3.權利要求2的用途，其中所述動物患有腦血管缺血，並且所述缺血性組織位於所述 動物腦部。
4.權利要求2的用途，其中所述動物患有心血管缺血並且缺血性組織位於所述動物的 心臟中。
5.權利要求1的用途，其中所述動物需要肽或其生理上可接受的鹽以治療創傷。
6.權利要求1的用途，其中所述動物需要肽或其生理上可接受的鹽以治療神經變性疾病。
7.權利要求1-6中任一項的用途，其中所述肽的至少一個胺基酸是D-胺基酸。
8.不具有結合的金屬離子的線性金屬-結合肽或其生理上可接受的鹽在製備用於減 少從動物中摘除的器官或組織中的由反應性氧類所致損傷的藥物中的用途，其中所述肽具 有下式Pi-P2' 其中 P1是Xaa1Xaa2His ；或 Xaa1Xaa2His Xaa3 ； Xaa1是天冬醯胺； Xaa2是丙氨酸； Xaa3是賴氨酸；P2是胺基酸數為0-10的任意胺基酸序列。
9.權利要求8的用途，其中所述肽的至少一個胺基酸是D-胺基酸。
10.不具有結合的金屬離子的線性金屬-結合肽或其生理上可接受的鹽在製備用於減 少有需要的動物中的金屬離子濃度的藥物中的用途，其中所述肽具有下式Pi-P2' 其中 P1是Xaa1Xaa2His ；或 Xaa1Xaa2His Xaa3 ； Xaa1是天冬氨酸； Xaa2是丙氨酸； Xaa3是賴氨酸；P2是胺基酸數為0-10的任意胺基酸序列。
11.權利要求10的用途，其中所述肽的至少一個胺基酸是D-胺基酸。
12.藥物組合物，包括藥用載體和不具有結合的金屬離子的線性金屬-結合肽或其生 理上可接受的鹽，其中所述肽具有下式Pi-P2' 其中 P1是Xaa1Xaa2His ；或 Xaa1Xaa2His Xaa3 ； Xaa1是天冬氨酸； Xaa2是丙氨酸； Xaa3是賴氨酸；P2是胺基酸數為0-10的任意胺基酸序列。
13.權利要求12的藥物組合物，其中所述肽的至少一個胺基酸是D-胺基酸。
14.試劑盒，包括裝有不具有結合的金屬離子的線性金屬-結合肽或其生理上可接受 的鹽的容器，其中所述肽具有下式Pi-P2' 其中 P1是Xaa1Xaa2His ；或 Xaa1Xaa2His Xaa3 ； Xaa1是天冬氨酸； Xaa2是丙氨酸； Xaa3是賴氨酸；P2是胺基酸數為0-10的任意胺基酸序列。
15.權利要求14的試劑盒，其中所述肽的至少一個胺基酸是D-胺基酸。
全文摘要
本發明提供減少由反應性氧類(ROS)所致動物損傷的方法。本發明還提供減少動物體內金屬濃度的方法。這些方法包含對該動物給以有效量的金屬-結合性化合物，本申請對此有進一步描述。本發明進一步提供減少由ROS所致組織或器官損傷的方法，該組織或器官已從動物體內取出。該方法包含使該組織或器官與含有有效量的本發明金屬-結合性化合物的溶液接觸。本發明進一步提供新穎的金屬-結合性化合物、包含該金屬-結合性化合物的藥物組合物和包含盛放本發明金屬-結合性化合物的容器的試劑盒。
文檔編號A61K38/00GK102038932SQ20101058077
公開日2011年5月4日 申請日期2000年9月29日 優先權日1999年10月1日
發明者C.傑拉爾德.柯蒂斯, 萬尼爾.M.克魯克, 戴維.巴奧, 愛德華.勞, 納加拉加.K.R.拉奧, 詹姆斯.V.溫克勒 申請人:Dmi生物科學公司