金線蓮苷及其衍生物及製備方法和用途的製作方法

2023-07-14 22:10:06

專利名稱：：金線蓮苷及其衍生物及製備方法和用途的製作方法
技術領域：
：本發明屬於醫藥
技術領域：
，涉及蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制劑，具體涉及金線蓮苷及其衍生物和其製備方法，並涉及金線蓮苷及其衍生物在治療糖尿病和高血脂等疾病中的應用。
背景技術：
：糖尿病是一種與遺傳因素相關聯的全身性慢性分泌性代謝疾病，是體內胰島素的絕對或相對不足而引起糖、脂肪、蛋白質的代謝紊亂，隨著患糖尿病時間的延長，體內代謝紊亂如得不到很好的控制，可導致視網膜病變、高血壓、腎臟病變、冠心病、下肢血管病變、腦血管病變、神經病變等慢性併發症，最終發生失明、下肢壞疽、尿毒症、腦中風或心肌梗死，甚至危及生命。據世界衛生組織統計，在全世界，1985年診斷患糖尿病的人數為3000萬，1995年上升到1.35個億，預測在2025年將有3億人患病。金線蓮(化r^3J/7oe"oc^7/')為蘭科開唇蘭屬植物花葉開唇蘭(^oec/ocr力y/iAyrox6"r^y/)的乾燥全草，是多年生珍稀中草藥。我國南方廣西、廣東、海南、貴州、四川、雲南等省都有其豐富的藥材資源，民間用藥較廣。金線蓮在民間素有"金草"、"神藥"、"烏人參"等美稱，在浙江、福建一帶的產地，其鮮草售價高達360~500元/公斤。
發明內容我們在國家自然科學基金(NSFC30400585)及囯家中醫藥管理局中藥研究專項基金(04-05ZQ03)的資助下，在降血糖活性的指導下，對金線蓮降血糖的活性成分進行了系統的研究，分離到主要活性成分kinsenoside(4(必-^-D-吡喃葡萄糖氧基-丁酸(K)內酯，在本專利申請中稱為"金線蓮苷"。)。金線蓮苷我們對金線蓮苷進行了降血糖的活性研究，並從體外蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性等方面探討了相關的降血糖機制。結果顯示受試化合物金線蓮苷具有顯著的抗高血糖活性，對高血糖的逆轉具有劑量依賴性。體外PTP1B抑制活性篩選結果表明金線蓮苷對PTP1B有顯著的抑制作用，呈顯著的劑量相關性，抑制作用與體外抗高血糖活性相平行。且對PTP家族其餘酶抑制作用較小，表現出對PTP1B的高度專一性抑制。金線蓮苷作為PTP1B特異抑制劑，用於治療II型糖尿病和肥胖症，值得進一步研究和開發。另外，kinsenoside使血清超氧化物岐化酶活力和清除羥自由基能力顯著增強，過氧化產物丙二醛減少，活性因子NO含量明顯降低；胰腺組織病理切片檢査揭示了金線蓮苷通過胰島0細胞形態和功能的恢復發揮降血糖作用；口服葡萄糖耐量試驗中金線蓮苷使高血糖大鼠和正常大鼠對外源性葡萄糖的耐受能力明顯改善。急性毒性試驗中，金線蓮苷給藥達400mg/kg劑量組小鼠仍無不良反應，毒性極低。另外，金線蓮苷還具有較強的保肝、降脂作用，而其差向異構體GoodyerosideA(4(i)-々-D-吡喃葡萄糖氧基-丁酸(內酯)則不具有抗高血糖及降脂作用，表明金線蓮苷的4C5)構型是其抗高血糖及降脂作用藥效基團。本發明的目的是提供蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制劑金線蓮苷及其衍生物、類似物，同時提供合成這些衍生物和類似物的方法。本發明的另一個目的是以本發明所提供的化合物在治療糖尿病和高血脂等疾病中的應用。本發明提供的化合物具有以下結構式其中R為氫原子、30碳以下烷基、-CH2C00R,(其中Ri為氫原子或30碳以下烷基)、-CH2CH2COOR2(其中R2為氫原子或30碳以下烷基)、或-QUr(其中Ar為帶各種取代基的苯環、吡啶環、喹啉環、^^喃環、吡唂環或噻吩環等芳香環或芳雜環，其中Ar上取代基可以為氫原子或30碳以下烷基、滷素、羥基、氨基、醚基、脂肪胺基、芳香胺基、羧基等)。當所述的R、K或R2為30碳以下烷基時，優選甲基、乙基或丙基。本發明所提供的金線蓮苷的衍生物、類似物其可藥用鹽的結構式如(I)所其中R=H時的化合物本專利中稱為金線蓮苷；R=-CH3時的化合物本專利中稱為化合物KD1;R=-CH2CH3時的化合物本專利中稱為化合物KD2;R=-CH2C00H時的化合物本專利中稱為化合物KD3;R=-CH2CH2COOH時的化合物本專利中稱為化合物KD4;R=-CH2ph時的化合物本專利中稱為化合物KD5;R=-CH2-p-hydroxyl-ph時的化合物本專利中稱為化合物KD6;R=-CH廣p-carboxyl-ph時的化合物本專利中稱為化合物KD7;R=-CH2-p-C00H-CH=CH-ph時的化合物本專利中稱為化合物KD8;R=-CH2-2-thiophene時的化合物本專利中稱為化合物KD9;R=-CH2-2-[(5，-COOH)-U-iiophene]時的化合物本專利中稱為化合物KDlO。製備本發明所述化合物是以金線蓮苷為起始原料，經Ac20/吡啶保護葡萄糖基上羥基，通過LDA/HMPA/THF/低溫條件與R-X反應，進一步在NaOCH3/CH3OH/低溫/無水條件脫去葡萄糖基上保護基三步反應製得。其合成路線如下formulaseeoriginaldocumentpage8本發明提供了新的金線蓮苷及其衍生物、類似物，同時提供了適合於實用的製備方法。本發明實驗表明，金線蓮苷及其衍生物在抑制蛋白酪氨酸磷酸酶IB(PTPIB)活性以及在製備治療糖尿病和高血脂藥物中的應用的前景。圖1為本發明提供的化合物之結構式。具體實施例方式實施例l金線蓮苷(化合物l)的提取分離與純化l公斤金線蓮乾燥全草經粉碎後用甲醇加熱回流提取6次，每次2h,過濾，回收溶劑。粗提物加適量水懸浮，依次用石油醚、乙酸乙醋、正丁醇萃取，萃取液濃縮成浸膏得正丁醇部分500g。正丁醇部分IOg經反覆的矽膠柱色譜，以氯仿-甲醇梯度洗脫，再經SephadexLH-20凝膠柱結合重結晶，得到金線蓮苷l580金線蓮苷無色針晶，易溶於甲醇、水，難溶於氯仿、丙酮、乙醇。熔點151.0-153。C，Molish反應陽性。IRv隨cm":3400(v0H),2926、2908(vCH),1769，889。酸水解與標準品共薄層檢出葡萄糖。FAB(-)-MS:m/z264([M-H]+,355-Gly)，D16-62.8°(c0.64，H20)。'H-NMR(inPyr):S2.71(1H，dd，/=18.0Hz，/=2.5Hz，H-3),2.89(1H，dd，/=18.0Hz,</-6.3Hz，H-3),3.18(1H，m,H-5，),3.27(1H，dd，/=8.0Hz，/=6.1Hz,H-2，)，3.29(1H，m，H-4，)，3.34(1H，m，H-3，)，3.65(1H,dd,/=l1.2Hz，《/=3.7Hz，H-6，)，3.86(1H,dd，</=10.3Hz,/=4.7Hz，H-5)，4.36(1H,dd,1.7Hz，/=2,3Hz，H-6，)，4.40(1H,dd，/=10.3Hz，1.5Hz,H-5),4.50(1H，m,H-4),4.77(1H,d,■/=7.9Hz，H-1')。13C-NMR(inMeOD):337.0(C-3),62.7(C-6，)，71.4(C-4')，74.8(C-2，)，75.3(C—5),76.0(C-4),77.9(C-5，)，78.1(C-3，)，103.6(C-1，)，179.0(C-1)。將金線蓮苷於甲醇中培養單晶，進行X-衍射結構分析，確定4位手性碳為R構型，結構如下圖所示。實施例2全乙醯化金線蓮苷(化合物2)的合成金線蓮苷(0.5g,2mmol)溶於IOml的無水吡啶中，攪拌溶解後，力口5ml的醋酸酐，室溫反應7h後，TLC跟蹤檢測，將反應液倒入60ml的飽和CuS04中，用乙酸乙酯萃取(50mlx2),合併有機層，0.5MHC1(20ml)洗滌，飽和氯化鈉洗滌，無水Na2S0,乾燥過夜。減壓蒸除溶劑，矽膠柱純化的得白色固體(即全乙醯化金線蓮苷)780mg。實施例3化合物3-1~3-10的合成全乙醯化金線蓮苷(0.5g,1.2mmol)溶於IOml的無水THF中，反應體系金線蓮苷達到-25。C,加入lml二異丙基胺基鋰(LDA),加入CH3-Br,化學當量為l:l,反應lh後加入2ml六甲基磷酸三胺(HMPA),減壓蒸除溶劑，慢慢滴加20ml的冰水。快速用用乙酸乙酯萃取(50mlx2),合併有機層，無水Na2S0,乾燥過夜。減壓蒸除溶劑，矽膠柱純化的得化合物3-l(白色固體，358mg)。用相同方法製備得化合物3-2(白色固體，374mg),化合物3-3(白色固體，390mg)，化合物3-4(白色固體，402mg)，化合物3-5(白色固體，420mg),化合物3-6(白色固體，431mg)，化合物3-7(白色固體，443mg)，化合物3-8(白色固體，452mg),化合物3-9(白色固體，417mg),化合物3-10(白色固體，435mg)。實施例4化合物KD1~KD10的合成化合物3-l0.5g溶於20ml的無水甲醇中，攪拌溶解後，加入O.3gNaOCH3，10'C反應6h,TLC跟蹤檢測，減壓蒸除溶劑和醋酸，矽膠柱純化的得化合物KD1。化合物KD2-KD10用相同方法製備。化合物KD1(R=-CH3,白色固體，358mg)，&NMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)1.17(3H,d,/=7.2Hz，3-CH3)，2.76(1H,m,3-H)，3.41(1H，m,4-H),4.30(1H,m，5-H)，4.54(1H,m,5-H)，5.01(1H，m,l，-H),3.403.81(6H,m,2，-H6，H)。13CNMR(100MHz，CD3OD):S(ppm)178.2(C-2),42.7(C-3)，12.8(3-￡H3),66.8(C-4)，72.4(C-5)，102.1(C-1，)，74.2(C-2，)，76.9(C-3，),71.6(C-4，)，77.2(C-5，)，62.5(C-6，)。根據以上數據，鑑定該化合物為3-甲基金線蓮苷(即化合物KDl)。化合物KD1化合物KD2(R-—CH2CH3，白色固體，269mg),'HNMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)0.91(3H:t,戶7.5Hz，3-CHCH2)，1.78(2H,m，3-CH2CHQ，3.41(1H,m,4-H),4.30(1H，m,5-H),4.54(1H，m，5誦H)，5.01(1H,m,l，-H)，3.403.81(6H,m,2'-H6，H)。13CNMR(100MHz,CD3OD):S(ppm)178.8(C-2)，49.7(C墨3),11.5(3-CH2￡H3)，22.2(3-￡H2CH3),64.8(C-4),72.8(C-5),102.1(C國1'),74.3(C-2，)，76.8(C-3，)，71.7(C-4，)，77.1(C-5，)，62.3(C-6，)。根據以上數據，鑑定該化合物為3-乙基金線蓮苷(即化合物KD2)。化合物KD2化合物KD3(H=—CH2COOH,白色固體，261mg)，NMR(400MHz，CD3OD):'HNMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)2.93(1H，m,3-CH2COOH).2.68(1H，m，3-CH2COOH).2.95(1H,m，3-H)，3.46(1H，m,4-H),4'31(1H,m，5-H)，4.56(1H,m,5隱H),5.04(1H,m，l，-H)，3.403.80(6H，m，2，-H6，H)。13CNMR(lOOMHz,CD3OD):S(ppm)177.5(C-2),48.4(C-3)177.1(3-CH2￡OOH),32.0(3-￡H2COOH)，64.1(C國4)，72.6(C-5)，102.1(C-1，)，74.3(C-2，)，76.8(C-3，),71.7(C-4，)，77.1(C-5，),62.3(C-6，)。根據以上數據，鑑定該化合物為3-羧甲基金線蓮苷(即化合物KD3)。化合物KD3化合物KD4(R-—CH2CH2COOH，白色固體，257mg)，'HNMR(400MHz，CDsOD):1!!NMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)1.92(2H,m,3-CH2CFbCOOH)，2.35(2H,m,3-CH2纖COOH)，2.63(1H,m，3-H)，3.45(1H，m,4-H),4.30(1H,m,5-H)，4.57(1H，m，5-H),5.02(1H,m，l，-H)，3.403.81(6H,m,2，-H6，H)。l3CNMR(lOOMHz,CD3OD):S(ppm)178.8(C-2),46.7(C-3),178.2(3-CH2CH2￡OOH),8.6(3-￡H2CH2COOH),31.0(3-CH2￡H2COOH),64.7(C-4),72.1(C-5),102.9(C陽1')，74.2(C-2，)，76.7(C-3，)，71.5(C-4，),77.8(C-5，)，62.9(C-6，)。根據以上數據，鑑定該化合物為3-羧乙基金線蓮苷(即化合物KD4)。化合物KD4化合物10)5(11=-01211,白色固體，250mg)，)HNMR(400MHz，CDsOD):1!!NMR(400MHz:CD3OD):S(ppm)3.20(1H，m，3-CH2ph),2.96(1H，m,3-CH2ph),7.29-7.41(5H,m，3-CH2Eh),2.98(1H，m，3-H)，3.49(1H，m，4-H),4.33(1H，m，5-H),4.58(1H,m,5-H)，5.01(1H，m，l，-H),3.403.82(6H,m,2，-H6，H)。13CNMR(100MHz，CD3OD):S(ppm)177.3(C-2),55.7(C陽3),138.6,128.7，128.9，125.4(3-CH2C6H5),32.6(3-￡H2C6H5)，64.5(C-4),72.3(C-5),102.0(C-1，)，74.6(C-2，)，76.3(C-3，)，71.9(C-4，)，77.0(C-5，)，62.0(C-6，)。根據以上數據，鑑定該化合物為3-節基金線蓮苷(即化合物KD5)。化合物KD5formulaseeoriginaldocumentpage12化合物KD6(1^p-hydroxyl-ph-CH2-,白色固體，243mg)，NMR(400MHz,CD3OD):JHNMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)3.21(1H，m,3-CH2phOH),2.92(1H，m，3-Q^phOH),7.13(2H,d,聲7.8Hz,3-CH2EllOH)，6.75(2H，d，《/=7.8Hz,3-CH2eJiOH),3.01(1H,m，3-H)，3.45(1H,m，4-H),4.34(1H，m，5-H)，4.59(1H,m,5-H)，5.02(1H,m，l，-H),3.403.81(6H,m,2'-H6'H)。"C雨R(濯MHz，CD3OD):S(ppm)177.5(C-2),55.8(C-3),155.7,115.7,130.6,131.2(3-CH2￡6H40H),32.8(3-￡H2C6H40H),64.3(C國4),72.8(C-5)，102.9(C-1，)，74.0(C-2，)，76.2(C-3，)，71.5(C-4，)，77.2(C-5，)，62.7(C-6，)。根據以上數據，鑑定該化合物為3_羥苄基金線蓮苷(即化合物KD6)。化合物KD6化合物KD7(R-p-carboxyl-ph—CH2-，白色固體，238mg)，！HNMR(400MHz,CD3OD):&NMR(400MHz,CD3OD):6(ppm)3.28(1H,m，3-CH2phCOOH),2.90(1H,m,3-CH2phCOOH),7.04(2H，d,^8.4Hz，3-CH2EhCOOH)，8.19(2H，d，^8.4Hz，3-CH2EhCOOH),3.05(1H,m，3-H)，3.48(1H，m,4-H)，4.32(1H，m，5-H),4.52(1H，m,5國H)，5.05(1H,m，l,-H)，3.403.80(6H，m，2，-H~6，H)。l3C畫R(lOOMHz，CD3OD):S(ppm)177.2(C-2)，55.7(C-3)，143.2，128.1,130.2，127.9(3-CH2QH4COOH)，32.6(3-￡H2C6H4COOH)，64.7(C-4)，72.5(C-5)，102.8(C-1，)，74.3(C-2，)，76.3(C-3，)，71.4(C-4，)，77.6(C-5，)，62.3(C-6，)。根據以上數據，鑑定該化合物為3-羧苄基金線蓮苷(即化合物KD7)。formulaseeoriginaldocumentpage14化合物KD7化合物KD8(i^p-COOH-CH=CH-Ph—CH2-,白色固體，232mg)，NMR(400MHz,CD3OD):NMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)3.21(1H，m，3-￡H2phCH=CHCOOH),2.94(1H,m,3-CH2CH=CHCOOH),6.75(2H,d,月.lHz，3-CH2EhCH=CHCOOH),7.68(2H，(y=8.1Hz，3-CH2ehCH=CHCOOH)，7.61(1H，cU=16.2Hz，3-CH2phCH=CHCOOH)，6.35(1H,d,/=16.2Hz，3-CH2phCH=CHCOOH)，3.02(1H,m,3國H),3.46(1H，m，4-H)，4.31(lH,m,5-H),4.54(1H，m,5-H)，5.01(1H,m，l，-H)，3.403.81(6H,m,2，-H6，H)。13CNMR(100MHz,CD3OD):S(ppm)177.1(C-2)，55.2(C-3)，137.7,128.3，128.9,132.8(3-CH2￡6H4CH=CHCOOH),145.1(3-CH2C6H4￡H=CHCOOH),117.3(3-CH2C6H4CH=￡HCOOH)，172.1(3-CH2C6H4CH=CICOOH),32.8(3-￡H2C6H4CH=CHCOOH)，64.4(C-4)，72.2(C國5)，102.3(C-1，)，74.0(C-2，)，76.5(C-3，)，71.6(C-4，)，77.2(C-5，),62.5(C-6，)。根據以上數據，鑑定該化合物為3-羧乙烯節基金線蓮苷(即化合物KD8)。formulaseeoriginaldocumentpage14化合物KD8化合物KD9(1^-CH2-2，-thiophene,白色固體，241mg)，'HNMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)3..01(1H,m,3-CH2C4Hd).2.75(1H,m,3-CH2C4H3S).6.80-7.45(5H,m,3-CH2C4H2S),2.99(1H，m，3隱H),3.45(1H，m,4-H),4.32(1H,m，5-H),4.55(1H，m，5-H),5.02(1H,m,l，-H)，3.403.82(6H,m,2'-H6，H)。13CNMR(lOOMHz,CD3OD):S(ppm)177.2(C-2),56.2(C-3),143.1，126.6,126.4,124.8(3-CH2￡4H3S)，23.7(3-￡H2C4H3S),64.2(C-4),72.8(C-5),102.1(C-1，)，74.1(C-2，),76.5(C-3，)，71.5(C-4，)，77.5(C-5，)，62.1(C-6，)。根據以上數據，鑑定該化合物為3-蓬吩基金線蓮苷(即化合物KD9)。化合物KD9化合物KDl0(R=-CH2-2，-[(5，-COOH)-thiophene]，白色固體，228mg)。'HNMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)3..02(1H,m，3-CH2C4HiSCOOH),2.76(1H,m,3-CH2C4H3SCOOH)，6.92(1H，d，■7=6.4Hz，3-CH2C4i^S),7.93(lH,d，^6.4Hz，3-CH2C4H2S)，2.98(1H，m，3-H),3.43(1H，m，4-H)，4.30(1H，m，5-H),4.54(1H，m，5-H),5.03(1H,m,l，-H)，3.403.82(6H，m,2'-H6，H)。13C畫R(lOOMHz，CD3OD):S(ppm)177.0(C-2),56.1(C-3),151.0，124.7，133.2,131.5(3-CH2￡4H2SCOOH)，163.4(3-CH2C4H2S￡OOH)，23.5(3-￡H2C4H2SCOOH),64.5(C-4)，72.7(C-5)，102.3(C-1，),74.2(C-2')，76.8(C-3，)，71.4(C-4，)，77.4(C-5，)，62.0(C-6，)。根據以上數據，鑑定該化合物為3-羧噻吩基金線蓮苷(即化合物KD10)。(OOH化合物5化合物6化合物7化合物8Reagentsandconditions:(a)DMF，P0C13,80°C,(b)ethanediol，NH2_NH2/KOH，180°C(c)NBS,(phCO2)2,CCl4,20h,reflux化合物6:噻吩10g(0.12mol)溶於30ml的DMF中，攪拌溶解後，慢慢滴加10.8ml的三氯氧化磷，一小時滴加完畢。80'C反應10h。減壓蒸除溶劑的，純化得化合物6。化合物7:化合物6(10g，0.09mol)溶於30ml的中乙二醇中，攪拌溶解後，加入適量NH2-NH2和KOH,回流4小時，TLC跟蹤檢測，減壓蒸除溶劑，重結晶，矽膠柱純化得化合物7。化合物8:2-甲基噻吩lOg(O.lmol)溶於40ml的中CCU,中，攪拌溶解後，加入17.8g((Umol)溴代琥珀醯亞胺，lg過氧化苯甲醯。回流反應20h。TLC跟蹤檢觀!l，減壓蒸除溶劑，矽膠柱純化的得化合物8。NMR(400MHz,CD3OD):S(ppm)4.97(2H，s,2-CH2Br),6.84(1H，d，7=6.8Hz，3-H),6.95(1H，t，J-6.8Hz,4-H),7.45(1H,d,J二6.8Hz，5-H).13CNMR(100MHz，CD3OD):S(ppm)139.4(C-2)，27.1(2-￡H2Br),126.1(C-3)，127.3(C-4)，125.7(C-5)。根據以上數據，鑑定該化合物為2-溴甲基噻吩(即化合物8)。5、Z21化合物8實施例6中間體化合物10的合成化合物7化合物9化合物IOReagentsandconditions:(a)AC20/AlCl3,CH3CHC1240-45。C(b)NaOCl,70-80°C(c)NBS，(PhC02)2,CC14，20h,reflux化合物9:2-甲基噻吩10g(O.lmol)溶於30ml的CH3CHC12中，攪拌溶解後，加入11ml的醋酸酐，lg三氯化鋁。40-45'C反應3h後加入次氯酸鈉2.6g70-8(TC反應5h,TLC跟蹤檢測，減壓蒸除溶劑和醋酸。矽膠柱純化的得化合物9。化合物10:化合物9(10g,0.08mol)40ml的中CCU，中，攪拌溶解後，加入17.8g(0.1mol)溴代琥珀醯亞胺，lg過氧化苯甲醯。回流反應20h。TLC跟蹤檢測，減壓蒸除溶劑，矽膠柱純化得化合物10。'HNMR(400MHz，CD3OD):5(ppm)4.92(2H,s,2-CH2Br).6.92(1H,d,/=6.8Hz，3-H)，7.93(1H,d,J-6.8Hz，4-H).'3CNMR(lOOMHz，CD3OD):S(ppm)147.3(C-2),27.6(2-￡H2Br)，127丄I(C-3),134,5(C-4),I32.7(C-5),162.7(5-￡OOH)。根據以上數據，鑑定該化合物為2-溴甲基-5-羧基噻吩(即化合物IO)。1化合物io實施例7STZ誘導的大鼠體內抗高血糖活性實驗取雄性wistar大鼠，適應性餵養3d,禁食過夜後採用腹腔注射50mgkg-1鏈脲黴素(STZ)建立糖尿病模型，7化後測定血糖值，選取血糖高於11.l咖ol-L—1者作為高血糖實驗大鼠。將高血糖大鼠隨機分組，模型對照組、陽性對照組、給藥組、正常對照組，每組8隻。模型建立後第3日，郎血糖明顯升高時開始灌胃給藥，單體金線蓮苷及KDl-lO用蒸餾水配製成5mg/ml,參考文獻值及預試驗結果，給藥組劑量為15mg.kg-i體重，模型對照組給予同體積生理鹽水，陽性對照組給予每曰給予60mgkg—'鹽酸二甲雙胍，正常對照組常規餵養。糖尿病模型大鼠具有典型的"三多一少"症狀，連續4周，每日觀察記錄體重、飲食、飲水、墊料，隔曰檢測尿糖水平，每三天定時檢測血糖值。實驗結果造模大鼠腹腔注射STZ72h後，與正常大鼠相比血糖明顯升高。給藥4周後，給藥各組血糖值與模型對照組比較有顯著性差異。飼餵過程中也發現該組大鼠的"三多一少，，症狀明顯得到改善。所有化合物中，化合物KD10(即3-羧噻吩基金線蓮苷)降血糖活性最優。tableseeoriginaldocumentpage18注(D*p<0.05與正常對照組比有顯著性差異△P<0.05與模型對照組比有顯著性差異實施例8PTP1B抑制活性實驗蛋白質酪氨酸磷酸化是細胞代謝、信號傳導及細胞周期調控的重要調節步驟。蛋白質酪氨酸磷酸酶PTP1B是一種在體內廣泛表達的胞內蛋白質酪氨酸磷酸酶，在調節胰島素敏感性和能量代謝的過程中起著重要作用。PTP1B被認為是治療II型糖尿病胰島素抵抗的一個重要的潛在靶點，通過抑制PTP1B可增加胰島素和痩蛋白的活性為尋找n型糖尿病、肥胖的治療提供了光明前景。THE^ZtMZ^KB^1PTP1BDrugDiscoveryKit(Cattt:AK-822LotT5388)比色法測定純化的PTPIB的活性。實驗結果受試化合物對PTP1B酶的活性均有較高的抑制作用，化合物KD10(即3-羧噻吩基金線蓮苷)的抑制活性最強，與其具有較高的降血糖活性相平行。金線蓮苷及KD1-KD10抑制PTP1B酶活性樣品IC50(MmolI/')KD19.26KD28.65KD37.12KD47.65KD510.96KD69.64KD76.61KD8536KD91.95KD100.97金線蓮苷5.14實施例9金線蓮苷及其化合物KD1KD10LDs。的測定金線蓮苷LDs。的測定普通級昆明小鼠12隻，20±2g，雌雄各半，適應性餵養後禁食12小時，隨即分配到三個劑量組考察金線蓮苷的口服急性毒性，每組雌雄各半。按參考劑量10mg/kg的10倍設計小鼠急性毒性的低劑量進行預試驗，三個劑量組分別為100mg/kg、200mg/kg、飾g/kg，灌胃，觀察一周內動物的飲食，活動，毛澤及存亡等情況。灌胃給藥後動物外觀和行為表現正常，三個劑量組均無任何毒性反應，無一中毒死亡。結果表明在有效參考劑量的40倍時無任何毒性反應，認為金線蓮苷毒性級別非常低或無毒，口服安全，不再提高劑量做毒性試驗。化合物KD1KD10LDs。的測定按金線蓮苷LD5。的測定相同方法進行測定,結果表明在有效參考劑量的40倍時無任何毒性反應，認為化合物KD1KD10毒性級別均非常低或無毒，口服安全。因此，金線蓮苷及其化合物KD1-KD10毒性級別均非常低或無毒，口服安全。實施例10化合物KD10(即3-羧蓬吩基金線蓮苷)片劑製備及方法主要藥用原料包括活性物質化合物KD10,藥用片劑的稀釋劑，片劑粘合劑和崩解劑，潤滑劑。稀釋劑可選擇微晶纖維素、澱粉、羥甲基澱粉鈉、苷氨酸中的一種或多種；粘合劑可選擇澱粉漿、PVP膠漿、明膠漿中的一種；潤滑劑可選擇的滑石粉、硬脂酸鎂中的一種。片劑穩定性好，患者可按醫囑，將藥帶回家服用，保證治療的持續性。取化合物KD105g，澱粉35g，微晶纖維素35g,羥甲基澱粉鈉6g，甘氨酸20分別研細，過80目篩，等量的加法混合均勻，用澱粉漿(5W製成軟材，用30目篩濾制粒，置7(TC條件下乾燥，再用40目篩濾整粒後加入硬脂酸鎂O.3g，混合均勻，壓片，分裝，即得。權利要求1.具有以下結構式的化合物其中R為氫原子；30碳以下烷基；-CH2COOR1，其中R1為氫原子或30碳以下烷基；-CH2CH2COOR2，其中R2為氫原子或30碳以下烷基；或-CH2Ar，其中Ar為帶各種取代基的苯環、吡啶環、喹啉環、呋喃環、吡咯環或噻吩環等芳香環或芳雜環，其中Ar上取代基可以為氫原子或30碳以下烷基、滷素、羥基、氨基、醚基、脂肪胺基、芳香胺基、羧基等。2.根據權利要求l所述的化合物，其特徵在於，當所述的R、^或R2為30碳以下烷基時，優選甲基、乙基或丙基。3.含有權利要求1或2所述化合物的藥物組合物。4.權利要求l或2所述的化合物在製備用於治療糖尿病藥物中的應用。5.權利要求1或2所述的化合物在製備用於治療高血脂藥物中的應用。6.權利要求1或2所述的化合物在製備蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)選擇性抑制劑中的應用。7.—種藥物組合物，它由權利要求1或2所述化合物和一種或多種可藥用載體組合而成。8.權利要求l或2所述的化合物的製備方法，其特徵在於通過Ac20/吡啶保護葡萄糖基上羥基，通過LDA/HMPA/THF/低溫條件與R-X反應，進一步在NaOCH3/CH訓/低溫/無水條件脫去葡萄糖基上保護基。全文摘要本發明公開了一種蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制劑金線蓮苷及其衍生物，並提供了其製備方法和用途，這些化合物具有較強的降血糖活性和較高的抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)活性及較低的毒性，從而可用於治療糖尿病和高血脂等疾病。文檔編號A61P3/06GK101434625SQ20081023682公開日2009年5月20日申請日期2008年12月12日優先權日2008年12月12日發明者張勇慧申請人:華中科技大學