一種中藥製劑護肝滴丸的質量檢測方法
2023-07-29 00:21:36
一種中藥製劑護肝滴丸的質量檢測方法
【專利摘要】本發明涉及一種中藥製劑護肝滴丸的質量檢測方法，包括對護肝滴丸中有效成分柴胡皂苷a、五味子醇甲含量的測定以及對護肝滴丸中五味子、豬膽粉和茵陳的鑑別。檢測步驟為：一、以柴胡皂苷a為對照品，採用高效液相色譜法測定護肝滴丸處方中是否含有柴胡成分；二、以五味子醇甲為對照品，採用高效液相色譜法測定護肝滴丸中是否含有五味子成分；三、以五味子乙素為對照，採用薄層色譜法鑑別護肝滴丸中是否含有五味子成分；四、以豬去氧膽酸為對照品，採用薄層色譜法鑑別護肝滴丸中是否含有豬膽粉成分；五、以綠原酸為對照品，採用薄層色法鑑別護肝滴丸中是否含有茵陳成分。本發明可以對護肝滴丸的質量進行有效、可靠的控制，該方法科學、可行、可靠。
【專利說明】一種中藥製劑護肝滴丸的質量檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種質量檢測方法，具體涉及一種中藥製劑護肝滴丸的質量檢測方法，屬於生物【技術領域】。
【背景技術】
[0002]護肝滴丸為柴胡、茵陳、板藍根、五味子、豬膽粉、綠豆六味中藥材，對柴胡、茵陳、板藍根、五味子、綠豆等有效成分的提取，將各提取物與豬膽粉、聚乙二醇混合均勻製備成滴丸劑，每丸重40mg，該藥品的外觀為棕黑色至黑色的滴丸；氣微，味苦。本製劑的特點是溶散時限短、生物利用度高，經過適宜的方法提取藥材中的有效成分及純化去除雜質後，降低了每次的服用劑量，方便患者服用。
[0003]護肝片是我公司70年代自主研發的新藥，於80年代初上市。經過三十年的臨床應用，證明其用於急、慢性肝炎和早期肝硬化具有良好的臨床效果，自上市伊始至今得到社會廣泛公認，已入選國家基本藥物，為了更好的發揮護肝片組方的治療優勢，我公司於2003年立項對護肝片進行二次開發，即開發護肝滴丸項目，該產品為護肝片的升級產品，是一種滴丸劑2003年國家科委將護肝滴丸列入「863」 二次開發項目(課題編號:2003AA2Z3245)。
[0004]原劑型為浸膏片，收載於2005版中華人民共和國藥典一部，其功能主治為疏肝理氣、健脾消食，具有降低轉氨酶作用，用於慢性肝炎及早期肝硬化的治療。之所以改為滴丸齊U，是因滴丸劑有比片劑更多的優點。護肝滴丸在提取工藝、劑型選擇、質量控制等方面有顯著的改進。藥理實驗表明護肝滴丸與原劑型比較在保肝降酶、對纖維化肝硬化、脂肪肝及提高肝合成蛋白功能等作用都好於護肝片。臨床試驗結果顯示護肝滴丸在治療病毒性肝炎、早期肝硬化、酒精性慢性肝炎、酒精性脂肪肝、藥物性肝炎方面都有很好的療效，總體上好於護肝片的療效。
[0005]然而，現有技術中尚未有針對護肝滴丸的有效的質量檢測方法。
【發明內容】
[0006]本發明為了對護肝滴丸的質量進行有效、可靠的控制，對其成品質量的檢測檢驗方法進行了大量的研究工作，通過大量的實驗研究，本發明提供了中藥製劑護肝滴丸的質量檢測方法，該方法科學、可行、可靠。
[0007]本發明的技術方法如下:
[0008]一種中藥製劑護肝滴丸的質量檢測方法，按以下步驟進行:一、以柴胡皂苷a為對照品，採用高效液相色譜法測定護肝滴丸處方中是否含有柴胡成分；二、以五味子醇甲為對照品，採用高效液相色譜法測定護肝滴丸中是否含有五味子成分；三、以五味子乙素為對照，採用薄層色譜法鑑別護肝滴丸中是否含有五味子成分；四、以豬去氧膽酸為對照品，採用薄層色譜法鑑別護肝滴丸中是否含有豬膽粉成分；五、以綠原酸為對照品，採用薄層色法鑑別護肝滴丸中是否含有茵陳成分，即完成護肝滴丸的質量檢測。
[0009]進一步的，護肝滴丸中有效成份含量的測定[0010](I)檢測柴胡成分
[0011]色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B ;檢測過程中在0-50分鐘期間，流動相A:B以(25 — 90:75 — 10)進行梯度洗脫，在50-55分鐘期間，以流動相A:B以(90:10)進行洗脫；檢測波長為210nm ;理論板數按柴胡皂苷a峰計算不低於10000 ；
[0012]對照品溶液的製備:取柴胡皂苷a對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每Iml含柴胡皂苷a0.3-0.5mg的溶液，搖勻，即得；
[0013]供試品溶液的製備:取護肝滴丸10-100丸，精密稱定，水浴熔融後攪拌均勻，放冷，精密稱定0.2-1.0g,加水飽和的正丁醇10-50ml使溶解，轉移至分液漏鬥中，用氨試液10-30ml分次洗滌容器，加入分液漏鬥中，搖勻，棄去氨試液，正丁醇液蒸乾，殘渣加乙醚IOml分次洗滌，乙醚液離心，棄去乙醚溶液，不溶物及殘渣加甲醇使溶解，定量轉移至25ml量瓶中，加甲醇適量洗滌容器，洗液併入量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；用0.45 y m的微孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液；
[0014]陰性樣品溶液的製備:按《中華人民共和國藥典》一部護肝片處方的配比取除柴胡以外的其他藥材，按照護肝滴丸的製法製備成滴丸，按照「供試品溶液的製備」方法製備，作為陰性樣品溶液。
[0015]測定法:分別吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性供試品溶液各20 yl，注入液相色譜儀，測定，即得；
[0016]合格標準:每丸含柴胡以柴胡阜苷a (C42H68O13)計,不得少於0.05mg ;
[0017](2)檢測五味子成分
[0018]色譜條件與系統適用性試驗:用十八烷基鍵合矽膠為填充劑；體積比為63:37的甲醇:水為流動相；檢測波長為250nm ;流速為0.8ml/min ;柱溫25°C;理論板數按五味子醇甲峰計算不低於2000 ；
[0019]對照品溶液的製備:取五味子醇甲對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每Iml含
0.1-0.5mg的溶液，即得；
[0020]供試品溶液的製備:取護肝滴丸10-100丸，精密稱定，水浴熔融後攪拌均勻，放冷，精密稱定0.2-0.5g，加適量硅藻土，分散均勻，加環己烷回流提取1-3次，每次20-50ml、30分鐘，濾過，用環己烷適量洗滌容器和濾器，洗液與濾液合併，蒸乾，殘渣加甲醇適量使溶解，轉移至IOml量瓶中，用甲醇適量洗滌容器，洗液併入量瓶中，並加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 ii m的微孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液；
[0021]陰性樣品溶液的製備:按護《中華人民共和國藥典》一部護肝片處方的配比取除五味子以外的其他藥材，按照護肝滴丸的製法製備成滴丸，按照「供試品溶液的製備」方法製備，作為陰性樣品溶液。
[0022]測定法:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0023]合格標準:每丸含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)計,不得少於0.038mg ；
[0024]更進一步的，本發明護肝滴丸的鑑別方法如下:
[0025](I)五味子的鑑別
[0026]供試品溶液的製備:取護肝滴丸20-60丸，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，冷凍2小時，濾過，濾液置水浴上蒸乾，殘渣加環己烷10-50ml，超聲20-40分鐘，濾過，藥渣備用，濾液置水浴上蒸乾，殘渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作為供試品溶液；
[0027]對照品溶液的製備:另取五味子乙素對照品，加甲醇製成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；
[0028]陰性供試品溶液的製備:按《中華人民共和國藥典》一部護肝片處方的配比稱取除五味子以外的其他藥材，按照護肝滴丸的製備方法製成滴丸，按「供試品溶液的製備」方法製備成陰性供試品溶液；
[0029]取上述供試品溶液、對照品溶液、陰性供試品溶液各2-5 yl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以體積比為9:1的甲苯和醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾乾，置254nm的紫外光燈下檢視；
[0030]鑑別護肝滴丸處方中含有五味子的條件為:置254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無幹擾；，表明供試品中含有五味子成分；
[0031](2)豬膽粉的鑑別
[0032]供試品溶液的製備:取鑑別步驟(I)中獲得的環己烷提取後的藥渣，揮盡環己烷，加質量分數為10%氫氧化鈉溶液10ml，120°C加熱4-6小時，放冷後用鹽酸調節pH值2_3，移至離心管中，離心，棄去上清液，沉澱加甲苯5ml充分攪拌，離心，分取上清液，沉澱再同法操作2次,合併上清液,置水浴上蒸乾,殘洛加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；
[0033]對照品溶液的製備:另取豬去氧膽酸，加乙醇製成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。
[0034]陰性供試品溶液的製備:按《中華人民共和國藥典》一部護肝片處方的配比稱取除豬膽粉以外的其他藥材，按照護肝滴丸的製備方法製成滴丸，按「供試品溶液的製備」方法製備成陰性供試品溶液；
[0035]吸取上述供試品溶液5-10 ill，對照品溶液3-5 ill，陰性供試品溶液5-10 ill分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為8-12:5:5:3:1的異辛烷、乙醚、冰醋酸、正丁醇和水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以質量分數為10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；
[0036]鑑別護肝滴丸處方中含有豬膽粉的條件為:置365nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無幹擾；，表明供試品中含有豬膽粉成分。
[0037](3)茵陳的鑑別
[0038]供試品溶液的製備:取護肝滴丸10-30丸，加丙酮20_40ml，超聲處理3_40分鐘，冷藏12小時，濾過，濾液置水浴上蒸乾，殘渣用水5-6ml分兩次轉移至預先處理的DlOl型大孔樹脂柱(柱長15cm，內徑Icm)上，用水50ml洗脫，棄去水洗液，再用體積分數為20%的乙醇40-60ml洗脫，流速為每分鐘0.5ml，收集洗脫液，置水浴上蒸乾，殘渣用甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。
[0039]對照品溶液的製備:取綠原酸對照品，加甲醇製成每Iml含0.3mg的溶液，作為對照品溶液。
[0040]陰性供試品溶液的製備:按《中華人民共和國藥典》一部護肝片處方的配比稱取除茵陳以外的其他藥材，按照護肝滴丸的製備方法製成滴丸，按「供試品溶液的製備」方法製備成陰性供試品溶液；
[0041 ] 吸取上述對照品溶液1-3 ill、供試品溶液2-5 ill與陰性供試品溶液2-5 U I分別點於同一聚醯胺薄膜(5cmX7cm)上，以冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾乾。
[0042]鑑別護肝滴丸處方中含有茵陳的條件為:置365nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無幹擾；，表明供試品中含有茵陳成分。
[0043]本發明的優點:本發明針對護肝滴丸通過採用高效液相色譜法與薄層色譜法提供了一種有效的質量檢測方法，本發明可以有效的檢測中藥製劑護肝滴丸中的有效成分柴胡、五味子、豬膽粉、茵陳，從而控制護肝滴丸的質量。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0044]圖1為柴胡皂苷a檢測色譜圖；
[0045]圖2為五味子醇甲檢測色譜圖；
[0046]圖3為本發明中五味子254nm紫外光燈下薄層色譜圖；
[0047]圖4為本發明中豬膽粉日光下薄層色譜圖；
[0048]圖5為本發明中豬膽粉365nm紫外光燈下薄層色譜圖；
[0049]圖6為本發明中茵陳365nm紫外光燈下薄層色譜圖。
【具體實施方式】
[0050]下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但實施例僅是範例性的，並不對本發明的範圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和範圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明的保護範圍內。
[0051]實施例1本發明護肝滴丸中有效成份含量的測定
[0052](I)檢測柴胡成分
[0053]色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B ;檢測過程中在0-50分鐘期間，流動相A:B以(25 — 90:75 — 10)進行梯度洗脫，在50-55分鐘期間，以流動相A:B以(90:10)進行洗脫；檢測波長為2IOnm ;理論板數按柴胡皂苷a峰計算不低於10000 ；
[0054]對照品溶液的製備取柴胡皂苷a對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每Iml含柴胡皂苷a0.4mg的溶液，搖勻，即得。
[0055]供試品溶液的製備取護肝滴丸100丸，精密稱定，水浴熔融後攪拌均勻，放冷，精密稱定0.5g，加水飽和的正丁醇20ml使溶解，轉移至分液漏鬥中，用氨試液20ml分次洗滌容器，加入分液漏鬥中，搖勻，棄去氨試液，正丁醇液蒸乾，殘渣加乙醚IOml分次洗滌，乙醚液離心，棄去乙醚溶液，不溶物及殘渣加甲醇使溶解，定量轉移至25ml量瓶中，加甲醇適量洗滌容器，洗液併入量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。用微孔濾膜(0.45 u m)，取續濾液，即得。
[0056]測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各20 U 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0057]試驗結果如表1、圖1所示:[0058]表1柴胡皂苷a含量測定結果
【權利要求】
1.一種中藥製劑護肝滴丸的質量檢測方法，其特徵在於，所述的質量檢測方法，按以下步驟進行:一、以柴胡皂苷a為對照品，採用高效液相色譜法測定護肝滴丸處方中是否含有柴胡成分；二、以五味子醇甲為對照品，採用高效液相色譜法測定護肝滴丸中是否含有五味子成分；三、以五味子乙素為對照，採用薄層色譜法鑑別護肝滴丸中是否含有五味子成分；四、以豬去氧膽酸為對照品，採用薄層色譜法鑑別護肝滴丸中是否含有豬膽粉成分；五、以綠原酸為對照品，採用薄層色法鑑別護肝滴丸中是否含有茵陳成分，即完成護肝滴丸的質量檢測。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，所述護肝滴丸的有效成份含量的測定步驟如下: (1)檢測柴胡成分 色譜條件與系統適用性試驗:用十八烷基鍵合矽膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以水為流動相B ;檢測過程中在0-50分鐘期間，流動相A:B以(25 — 90:75 — 10)進行梯度洗脫，在50-55分鐘期間，以流動相A:B以(90:10)進行洗脫；檢測波長為2IOnm ;理論板數按柴胡皂苷a峰計算不低於10000 ； 對照品溶液的製備:取柴胡皂苷a對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每Iml含柴胡皂苷a0.3-0.5mg的溶液，搖勻，即得； 供試品溶液的製備:取護肝滴丸10-100丸，精密稱定，水浴熔融後攪拌均勻，放冷，精密稱定0.2-1.0g，加水飽和的正丁醇10-50ml使溶解，轉移至分液漏鬥中，用氨試液10-30ml分次洗滌容器，加入分液漏鬥中，搖勻，棄去氨試液，正丁醇液蒸乾，殘渣加乙醚IOml分次洗滌，乙醚液離心，棄去乙醚溶液，不溶物及殘渣加甲醇使溶解，定量轉移至25ml量瓶中，加甲醇適量洗滌容器，洗液併入量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；用0.45 y m的微孔濾膜，取續濾液作為供試品溶液； 陰性樣品溶液的製備:按《 中華人民共和國藥典》一部護肝片的處方配比取除柴胡以外的其他藥材，按照護肝滴丸的製法製備成滴丸，按照「供試品溶液的製備」方法製備，作為陰性樣品溶液； 測定法:分別吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性供試品溶液各20 yl，注入液相色譜儀，測定，即得； 合格標準:每丸含柴胡以柴胡皂苷a (C42H68O13)計，不得少於0.05mg ； (2)檢測五味子成分 色譜條件與系統適用性試驗:用十八烷基鍵合矽膠為填充劑；體積比為63:37的甲醇:水為流動相；檢測波長為250nm ;流速為0.8ml/min ;柱溫25°C;理論板數按五味子醇甲峰計算不低於2000 ； 對照品溶液的製備:取五味子醇甲對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每Iml含，0.1-0.5mg的溶液，即得； 供試品溶液的製備:取護肝滴丸10-100丸，精密稱定，水浴熔融後攪拌均勻，放冷，精密稱定0.2-0.5g，加適量硅藻土，分散均勻，加環己烷回流提取1-3次，每次20-50ml、30分鐘，濾過，用環己烷適量洗滌容器和濾器，洗液與濾液合併，蒸乾，殘渣加甲醇適量使溶解，轉移至IOml量瓶中，用甲醇適量洗滌容器，洗液併入量瓶中，並加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 ii m的微孔濾膜，取續濾液 作為供試品溶液；陰性樣品溶液的製備:按《中華人民共和國藥典》一部護肝片處方的配比取除五味子以外的其他藥材，按照護肝滴丸的製法製備成滴丸，按照「供試品溶液的製備」方法製備，作為陰性樣品溶液； 測定法:分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性供試品溶液各10 i!l，注入液相色譜儀，測定，即得； 合格標準:每丸含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)計,不得少於0.038mgo
3.根據權利要求1所述的質量檢測方法，其特徵在於，所述的檢測方法中還包括護肝滴丸的鑑別方法，步驟如下: (1)五味子的鑑別 供試品溶液的製備:取護肝滴丸20-60丸，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，冷凍2小時，濾過，濾液置水浴上蒸乾，殘渣加環己烷10-50ml，超聲20-40分鐘，濾過，藥渣備用，濾液置水浴上蒸乾，殘渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作為供試品溶液； 對照品溶液的製備:另取五味子乙素對照品，加甲醇製成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液； 陰性供試品溶液的製備:按《中華人民共和國藥典》一部護肝片處方的配比稱取除五味子以外的其他藥材，按照護肝滴丸的製備方法製成滴丸，按「供試品溶液的製備」方法製備成陰性供試品溶液； 取上述供試品溶液、對照品溶液、陰性供試品溶液各2-5 yl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以體積比為9:1的甲苯和醋酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾乾，置254nm的紫外光燈下檢視； 鑑別護肝滴丸處方中含有五味子的條件為:置254nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無幹擾，表明供試品中含有五味子成分； (2)豬膽粉的鑑別 供試品溶液的製備:取鑑別步驟(1)中獲得的環己烷提取後的藥渣，揮盡環己烷，加質量分數為10%氫氧化鈉溶液10ml，120°C加熱4-6小時，放冷後用鹽酸調節pH值2-3，移至離心管中，離心，棄去上清液，沉澱加甲苯5ml充分攪拌，離心，分取上清液，沉澱再同法操作2次，合併上清液，置水浴上蒸乾，殘渣加乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液； 對照品溶液的製備:另取豬去氧膽酸，加乙醇製成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液； 陰性供試品溶液的製備:按《中華人民共和國藥典》一部護肝片處方的配比稱取除豬膽粉以外的其他藥材，按照護肝滴丸的製備方法製成滴丸，按「供試品溶液的製備」方法製備成陰性供試品溶液； 吸取上述供試品溶液5-10 u 1，對照品溶液3-5 yl，陰性供試品溶液5-10 u I分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為8-12:5:5:3:1的異辛烷、乙醚、冰醋酸、正丁醇和水的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以質量分數為10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰； 鑑別護肝滴丸處方中含有豬膽粉的條件為:置365nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無幹擾；，表明供試品中含有豬膽粉成分； (3)茵陳的鑑別 供試品溶液的製備:取護肝滴丸10-30丸，加丙酮20-40ml，超聲處理3_40分鐘，冷藏12小時，濾過，濾液置水浴上蒸乾，殘渣用水5-6ml分兩次轉移至預先處理的DlOl型大孔樹脂柱(柱長15cm，內徑Icm)上，用水50ml洗脫，棄去水洗液，再用體積分數為20%的乙醇40-60ml洗脫，流速為每分鐘0.5ml，收集洗脫液，置水浴上蒸乾，殘渣用甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液； 對照品溶液的製備:取綠原酸對照品，加甲醇製成每Iml含0.3mg的溶液，作為對照品溶液； 陰性供試品溶液的製備:按《中華人民共和國藥典》一部護肝片處方的配比稱取除茵陳以外的其他藥材，按照護肝滴丸的製備方法製成滴丸，按「供試品溶液的製備」方法製備成陰性供試品溶液； 吸取上述對照品溶液1-3 U 1、供試品溶液2-5 u I與陰性供試品溶液2-5 u I分別點於同一聚醯胺薄膜(5cmX 7cm)上，以冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾乾； 鑑別護肝滴丸處方中含有茵陳的條件為:置365nm的紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無幹擾；，表明供試品中含有茵陳 分。
【文檔編號】G01N30/88GK103808842SQ201410022711
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年1月17日 優先權日:2014年1月17日
【發明者】關彥玲, 曲文華 申請人:黑龍江葵花葯業股份有限公司