一種硒化鎘量子點的生物合成方法
2023-07-17 01:10:36
一種硒化鎘量子點的生物合成方法
【專利摘要】本發明公開了一種硒化鎘量子點的生物合成方法，所述方法為：以亞硒酸鹽為Se源，以水溶性鎘鹽為Cd源，以巰基化合物為穩定劑，以大腸桿菌或酵母菌經發酵培養獲得的溼菌體為催化劑，在二水合檸檬酸三鈉的作用下，於大腸桿菌發酵培養基或酵母菌發酵培養基中，37℃培養1～6天，離心，棄去上清，收集沉澱，獲得硒化鎘量子點；本發明合成了尺寸可調且均一的、生物相容性好的、高發光CdSe量子點，並能夠應用於酵母菌的染色，該量子點表現出尺寸相關的發光性質，量子點的直徑大約在5nm左右，在高分辨透射電鏡下顯示出良好的單晶結構，量子產率達到了35％。
【專利說明】一種砸化鎘量子點的生物合成方法
(—)【技術領域】
[0001]本發明涉及一種量子點的合成方法，特別涉及一種硒化鎘量子點的生物合成方法。
(二）【背景技術】
[0002]納米技術是當前國際領域的熱點研究課題，近幾十年來，已經被應用於從疾病診斷到基因修復和靶向藥物治療等諸多研究方向，而其中最受關注的就是將量子點用於生物標記和染色等。
[0003]量子點的合成方法很多，目前為止，應用比較廣泛的就是金屬有機法（參見：QuL, Peng Z A,等，納米快報，I卷，2001，333 (2001))。和水相合成方法（參見：Su Y，He Y，等，生物材料，30卷，19(2009))。一般來說，化學合成的量子點存在一定的生物毒性，必須在其表面上修飾上生物分子,使其具有生物相容性才能應用於生物標記。近年來，已經有很多量子點採用生物方法合成，但是這些量子點大部分是在細胞內合成，收集所製備的量子點比較麻煩，需要通過細胞洗滌、細胞破壞和細胞碎片去除等過程，因此限制了量子點的後續的應用。 (三）
【發明內容】
[0004]本發明目的是提供一種高量子產率的，高發光性的硒化鎘量子點的生物合成方法。
[0005]本發明採用的技術方案是：
[0006]本發明提供一種硒化鎘量子點的生物合成方法，所述方法為：以亞硒酸鹽為Se源，以水溶性鎘鹽為Cd源，以巰基化合物為穩定劑，以大腸桿菌（優選大腸桿菌（E. coliK12 (DHlOB))或酵母菌（優選酵母菌（Saccharomyces cerevisiae (S288C))經發酵培養獲得的溼菌體為催化劑，在二水合檸檬酸三鈉的作用下，於大腸桿菌發酵培養基或酵母菌發酵培養基中，37°C培養I~6天，離心，棄去上清，收集沉澱，獲得硒化鎘量子點；所述Se源用量以Se物質的量計，所述Cd源用量以Cd物質的量計,所述Se與Cd物質的量之比為1:10. 7~32 ;所述穩定劑的加入量以Se物質的量計為2. 7~25g/mol，所述二水合檸檬酸三鈉的加入量以Se物質的量計為20~100g/mol,所述催化劑的加入量以溼菌體質量計,所述溼菌體質量以Se物質的量計O. I~3g/mmol。
[0007]進一步,所述大腸桿菌發酵培養基為M9培養基,所述酵母菌發酵培養基為察氏培養基；所述M9培養基終濃度組成：磷酸氫二鈉15g/L，磷酸二氫鉀7. 5g/L，氯化銨2. 5g/L，氯化鈉I. 25g/L，七水合硫酸鎂0.002mol/L，葡萄糖溶液2g/L，溶劑為水，pH自然；所述察氏培養基終濃度組成：蔗糖30g/L，硝酸鈉2g/L，磷酸氫二鉀lg/L，氯化鉀O. 5g/L，七水合硫酸鎂O. 5g/L，pH值7.0，溶劑為水。
[0008]進一步，所述亞硒酸鹽以0.01mol/L亞硒酸鹽水溶液的形式加入，所述亞硒酸鹽為 Na2SeO3 或 K2SeO3。[0009]進一步，所述水溶性鎘鹽以0.04mol/L水溶性鎘鹽水溶液的形式加入，所述水溶性鎘鹽為 CdCl2、Cd(NO3)2 或 CdSO4。
[0010]進一步，所述巰基化合物為硫代蘋果酸（MSA)、穀胱甘肽（GSH)、L-半胱氨酸(L-cys)、巰基乙酸或巰基丙酸，優選MSA、GSH或L-cys。
[0011]進一步，所述Se與Cd物質的量之比為1:10. 7~21。
[0012]進一步，所述穩定劑的加入量以Se物質的量計為21~25g/mol，所述二水合檸檬酸三鈉的加入量以Se物質的量計為60~80g/mol,所述催化劑的加入量以溼菌體質量計，所述溼菌體質量以Se物質的量計O. I~3g/mmol。
[0013]進一步，所述合成方法先將催化劑接種至大腸桿菌發酵培養基或酵母菌發酵培養基中，再加入Se源、Cd源、穩定劑、二水合檸檬酸三鈉進行生物合成反應；所述大腸桿菌發酵培養基為M9培養基，所述酵母菌發酵培養基為察氏培養基，具體優選為：先將大腸桿菌經LB培養基種子培養後的溼菌體接種至M9培養基或將酵母菌經YPD種子培養基培養後的溼菌體接種至察氏培養基中，37°C培養至0D_ = O. 6，過濾，去沉澱獲得大腸桿菌溼菌體或酵母菌溼菌體；然後將大腸桿菌溼菌體接種至M9培養基或將酵母菌溼菌體接種至察氏培養基，在磁力攪拌下，加入Se源、Cd源、穩定劑、二水合檸檬酸三鈉進行生物合成反應，製成硒化鎘量子點。
[0014]進一步，所述催化劑按如下方法之一製備：（I)將大腸桿菌接種至LB培養基，37°C培養至0D_ = O. 6，得到種子液，離心，去除上層清液，沉澱接種至M9培養基，37°C培養至OD600 = O. 6，離心，棄上清，得到大腸桿菌溼菌體；所述LB培養基終濃度組成為：酵母膏5g/L，蛋白腖10g/L，氯化鈉10g/L，pH值7. 0，溶劑為水；所述M9培養基終濃度組成：磷酸氫二鈉15g/L，磷酸二氫鉀7. 5g/L，氯化銨2. 5g/L，氯化鈉I. 25g/L，七水合硫酸鎂0.002mol/L,葡萄糖溶液2g/L，pH自然，溶劑為水；（2)將酵母菌接種至YPD培養基，37°C培養至OD6tltl =O. 6，得到種子液，離心，去除上層清液，沉澱接種到察氏培養基，37°C培養至OD6tltl = O. 6，離心，棄上清，得到酵母菌溼菌體；所述YH)培養基終濃度組成：酵母膏10g/L，蛋白腖20g/L，葡萄糖20g/L，pH值7.0，溶劑為水；所述察氏培養基終濃度組成：蔗糖30g/L，硝酸鈉2g/L，磷酸氫二鉀lg/L，氯化鉀O. 5g/L，七水合硫酸鎂O. 5g/L，pH值7. 0，溶劑為水。
[0015]進一步，所述硒化鎘量子點的生物合成方法按如下步驟進行：將大腸桿菌經種子培養獲得的溼菌體接種至M9培養基或將酵母菌經種子培養獲得的溼菌體接種至察氏培養基，在磁力攪拌下，加入Se源、Cd源、巰基化合物和二水合檸檬酸三鈉，37°C培養4~6天，離心，取沉澱，獲得CdSe量子點；所述巰基化合物為硫代蘋果酸、穀胱甘肽或L-半胱氨酸；所述Se與Cd物質的量之比為1:10. 7~21 ;所述巰基化合物的加入量以Se物質的量計為21~25g/mol，所述二水合檸檬酸三鈉的加入量以Se物質的量計為60~80g/mol，所述催化劑的加入量以溼菌體質量計，所述溼菌體質量以Se物質的量計O. I~3g/mmol。
[0016]本發明的有益結果主要體現在：本發明在大腸桿菌或酵母菌作用下合成了尺寸可調且均一的、生物相容性好的、高發光CdSe量子點，並能夠應用於酵母菌的染色，該量子點表現出尺寸相關的發光性質，量子點的直徑大約在5nm左右，在高分辨透射電鏡下顯示出良好的單晶結構，量子產率達到了 35% ;本發明方法合成的量子點具有天然的生物相容性，而且反應條件溫和、操作方便，成本低廉，屬於「綠色」合成化學。(四）【專利附圖】
【附圖說明】
[0017]圖I為實施例1製備的CdSe量子點的螢光發射光譜圖和紫外吸收光譜圖，A為以MSA為穩定劑製備的CdSe量子點的螢光發射光譜圖，B為以MSA為穩定劑製備的CdSe量子點的紫外吸收光譜圖，C為以GSH為穩定劑製備的CdSe量子點的螢光發射光譜圖，D為以GSH為穩定劑製備的CdSe量子點的紫外吸收光譜圖，E為以L-cys為穩定劑製備的CdSe量子點的螢光發射光譜圖，F為以L-cys為穩定劑製備的CdSe量子點的紫外吸收光譜圖。
[0018]圖2為實施例2製備的CdSe量子點的螢光發射光譜圖和紫外吸收光譜圖，a為以MSA為穩定劑製備的CdSe量子點的螢光發射光譜圖，b為以MSA為穩定劑製備的CdSe量子點的紫外吸收光譜圖，c為以GSH為穩定劑製備的CdSe量子點的螢光發射光譜圖，d為以GSH為穩定劑製備的CdSe量子點的紫外吸收光譜圖，e為以L-cys為穩定劑製備的CdSe量子點的螢光發射光譜圖，f為以L-cys為穩定劑製備的CdSe量子點的紫外吸收光譜圖。
[0019]圖3為實施例3製備的CdSe量子點的螢光顯微鏡成像，A為大腸桿菌作為催化劑製備的CdSe量子點的螢光顯微鏡成像，B為和酵母菌作為催化劑製備的CdSe量子點的螢光顯微鏡成像。
[0020]圖4為實施例3製備的CdSe量子點的高分辨透射電鏡成像。
[0021]圖5為實施例3製備的CdSe量子點的紅外成像。
[0022]圖6為實施例3製備的CdSe量子點的雷射掃描共聚焦顯微鏡成像，A為螢光成像，B為明場成像，C為疊加成像。
(五）【具體實施方式】
[0023]下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述，但本發明的保護範圍並不僅限於此：
[0024]實施例1 :
[0025]將大腸桿菌（E. coli K12 (DHlOB)，北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司提供)接種至LB培養基，37°C培養至0D_ = O. 6，得到種子液，將其離心分離，去除上層清液，獲得大腸桿菌溼菌體。取Iml大腸桿菌溼菌體接種至M9培養基，37°C培養至0D_ = O. 6，得到第二代大腸桿菌溼菌體，用於量子點的製備。
[0026]LB培養基（500ml):酵母膏2. 5g，蛋白腖5g，氯化鈉5g，用NaOH調pH至7.0左右，溶劑為水。
[0027]M9培養基（500ml):磷酸氫二鈉15g，磷酸二氫鉀7. 5g，氯化銨2. 5g，氯化鈉
I.25g，Iml (lmol/L)七水合硫酸鎂水溶液，葡萄糖2g/L，pH自然，溶劑為水。
[0028]取0.015g第二代大腸桿菌溼菌體移入一單頸燒瓶中，加入到45ml的M9培養基中，隨後在不斷磁力攪拌下加入4ml0. 04mol · F1CdCl2水溶液，400mg 二水合檸檬酸三鈉，40mg MSA, I. 5ml0.01mol · F1Na2SeO3水溶液，在37°C下培養5天，然後通過離心分離收集得到蛋白質包裹的CdSe量子點，所獲得CdSe量子點的螢光發射光譜和紫外吸收光譜譜圖見圖I中A、B所示。
[0029]同樣條件下，將40mg MSA, I. 5ml0.01mol · F1Na2SeO3 水溶液改為 122. 805mg GSH,
O.5ml0.01mol · F1Na2SeO3溶液，所獲得螢光發射光譜和紫外吸收光譜譜圖見圖I中C、D所
/Jn ο[0030]同樣條件下，將40mg MSA, I. 5ml0.01mol · I 1Na2SeO3 水溶液改為 96. 83mg L-cys,
O.5ml0.01mol Q-1Na2SeO3溶液，所獲得螢光發射光譜和紫外吸收光譜譜圖見圖I中E、F所示。[0031]在大腸桿菌體系中，從三種不同穩定劑包裹的CdSe量子點的螢光發射光譜可以看出，在相同的反應時間下，三種穩定劑合成的CdSe量子點螢光發射峰對應的波長不同，螢光強度不同，而MSA為穩定劑包裹的CdSe量子點的螢光發射峰對應的波長最長，螢光強度也最強，說明培養相同的時間，以MSA為穩定劑合成的CdSe量子點的粒徑較大，所得產物濃度高。
[0032]從三種不同穩定劑包裹的CdSe量子點的紫外吸收光譜可以看出，隨著培養時間的延長，紫外吸收峰位置發生紅移，而GSH包裹的CdSe量子點的紅移較明顯，表明隨著時間延長，該穩定劑包裹的量子點的粒徑增長比較快，由此可見，隨著培養時間的延長，量子點的粒徑在逐漸增加，而以GSH為穩定劑時，培養相同的時間，量子點粒徑增長最快。
[0033]參照實施例3實驗方法得出結論，三種不同穩定劑包裹的CdSe量子點的粒徑大約在5nm左右，具有良好的單分散性，呈現出近似球形的結構，量子產率在35%左右。
[0034]實施例2 ：
[0035]將酵母菌（Saccharomyces cerevisiae (S288C),北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司提供)接種至YPD培養基，37°C培養至0D_ = O. 6，得到種子液，將其離心分離，去除上層清液，獲得酵母菌溼菌體，取Iml酵母菌溼菌體接種到察氏培養基，37°C繼續培養至0D_=O. 6，得到第二代酵母菌溼菌體，用於量子點的製備。
[0036]Yro培養基（500ml):酵母膏5g，蛋白腖10g，葡萄糖10g，用NaOH調pH至7.0左右，溶劑為水；
[0037]察氏培養基（500ml):蔗糖15g，硝酸鈉lg，磷酸氫二鉀O. 5g，氯化鉀O. 25g，七水合硫酸鎂O. 25g，用NaOH調pH至7.0左右，溶劑為水。
[0038]取0.015g第二代酵母菌溼菌體，移入一單頸燒瓶中，加入到45ml的察氏培養基(組成同上）中，隨後在磁力攪拌下加入4ml0. 04mol · F1CdCl2水溶液，400mg 二水合朽1檬酸三鈉，IOOmg MSA, O. 5ml0.01mol · F1Na2SeO3水溶液，其中在37°C下培養5天，然後通過離心分離收集得到的蛋白質包裹的CdSe量子點。所獲得CdSe量子點螢光發射光譜和紫外吸收光譜譜圖見圖2中a、b所示。
[0039]同樣條件下，將IOOmg MSA，O. 5ml0.01mol · F1Na2SeOjK溶液，改為 122. 805mg GSH,
O.5ml0.01mol · F1Na2SeO3溶液，得到的蛋白質包裹的CdSe量子點，螢光發射光譜和紫外吸收光譜譜圖見圖2中C、d所示。
[0040]同樣條件下，將IOOmg MSA, O. 5ml0.01mol · I 1Na2SeOjjC溶液，改為 96. 83mg L-cys,
O.5ml0.01mol · F1Na2SeO3溶液，得到的蛋白質包裹的CdSe量子點，螢光發射光譜和紫外吸收光譜譜圖見圖2中e、f所示。
[0041]在酵母菌體系中，從三種不同穩定劑包裹的CdSe量子點的螢光發射光譜可以看出，培養相同時間，三種穩定劑合成的CMSe量子點突光發射峰對應的波長不同，突光強度不同，而MSA為穩定劑包裹的CdSe量子點的螢光發射峰對應的波長最長，螢光強度也最強，說明培養相同的時間，以MSA為穩定劑合成的CdSe量子點的粒徑較大，所得產物濃度高。
[0042]從三種不同穩定劑包裹的CdSe量子點的紫外吸收光譜可以看出，隨著培養時間的延長，紫外吸收峰位置發生紅移，而GSH包裹的CdSe量子點的紅移較明顯，表明隨著時間延長，該穩定劑包裹的量子點的粒徑增長比較快，由此可見，隨著培養時間的延長，量子點的粒徑在逐漸增加，而以GSH為穩定劑時，培養相同的時間，量子點粒徑增長最快。
[0043]參照實施例3實驗方法得出結論，三種不同穩定劑包裹的CdSe量子點的粒徑大約在5nm左右，具有良好的單分散性，呈現出近似球形的結構，量子產率在35%左右。
[0044]實施例3 ：
[0045](I)大腸桿菌溼菌體的配置方法如實施例1所述，取0.0015g第二代大腸桿菌溼菌體移入一單頸燒瓶中，加入到45ml的M9培養基（組成同實施例1)中，隨後在不斷攪拌下加入4ml0. 04mol · F1CdCl2水溶液,400mg 二水合梓檬酸三鈉,40mg MSA,
I.5ml0.01mol · IT1Na2SeO3水溶液,在37°C下培養5天,過濾,棄去沉澱,上層清液加入同等體積的無水乙醇，離心，得到CdSe量子點，在真空乾燥箱中進行烘乾，將乾燥後的CdSe量子點進行高分辨透射電鏡成像（圖4所示），紅外成像（圖5所示）。
[0046](2)將大腸桿菌經LB培養基種子培養後的溼菌體接種至M9培養基（培養方法同實施例1)，獲得含大腸桿菌的培養液；將步驟（I)經過提取、烘乾得到的CdSe量子點加入到含有大腸桿菌的50ml的培養液中，37°C培養2天，經過離心獲得溼菌體，用M9培養基洗滌之後，進行螢光顯微鏡成像（圖3中A所示）。
[0047](3)將酵母菌經YPD種子培養基培養後的溼菌體接種至察氏培養基中（培養方法同實施例2)，獲得含酵 母菌的培養液；按照步驟（2)方法，將含酵母菌的培養液50ml，37°C培養2天，經過離心獲得溼菌體，用察式培養基洗滌之後，進行螢光顯微鏡成像（圖3中B所示），雷射掃描共聚焦顯微鏡成像（圖6所示，A為螢光成像，B為明場成像，C為螢光成像與明場成像的疊加成像）。
[0048]高分辨透射電鏡結果顯示，CdSe量子點具有很好的單分散性，呈現出近似球形的結構,粒徑大約在5nm左右。
[0049]紅外成像結果表明，CdSe量子點在3415，1657，1578，1385cm^處均有明顯的吸收峰，3415CHT1處為N-H的伸縮振動的吸收峰，1657CHT1，1578cm^處的吸收峰分別為醯胺I譜帶和醯胺II譜帶的特徵吸收峰，1385cm—1處的吸收峰為C-N伸縮振動，由於這些吸收峰的存在，進一步證明了蛋白質的存在，而我們選用的培養基中，並不含外源蛋白，所以量子點外面的蛋白質即為微生物自身分泌的蛋白質包裹在其外面。
[0050]螢光顯微成像結果顯示，大腸桿菌呈現綠色螢光，表明量子點已經進入到微生物的體內。
[0051]雷射掃描共聚焦顯微鏡成像表明，酵母菌呈現出綠色的螢光，表明量子點已進入到酵母菌體內，酵母菌的細胞質和細胞核均被標記上綠色螢光，所以，我們合成的量子點具有很好的生物相容性，不需要將量子點進一步修飾，即可應用於生物染色，這對量子點在生物標記和生物染色方面的應用具有極大的優勢。
[0052]實施例4 ：
[0053]第二代大腸桿菌溼菌體的製備方法如實施例1。取0.0025g第二代大腸桿菌溼菌體移入一單頸燒瓶中，加入到45ml的M9培養基中，隨後在磁力攪拌下力卩入4ml0. 04mol · F1CdCl2水溶液，200mg 二水合檸檬酸三鈉，96. 83mg GSH,ImlO.0lmol · F1Na2SeO3水溶液，在37°C下培養5天，然後通過離心分離收集得到蛋白質包裹的CdSe量子點。
[0054]參照實施例3得出結論，GSH包裹的CdSe量子點表現出良好的尺寸效應，量子點的粒徑大約在4nm左右，單分散性好，量子產率在30%左右。
[0055]實施例5 ：
[0056]第二代酵母菌溼菌體的製備方法如實施例2。取0.0075g第二代酵母菌溼菌體移入一單頸燒瓶中，加入到45ml的M9培養基中，隨後在磁力攪拌下加入4ml0. 04mol -F1CdCl2水溶液，500mg 二水合朽1 檬酸三鈉，122. 805mg L-cys, O. 5ml0.01mol · F1Na2SeO3 水溶液，在37°C下培養5天，然後通過離心分離收集得到蛋白質包裹的CdSe量子點。
[0057]參照實施例3得出結論，L-cys包裹的CdSe量子點發光性能良好，具有尺寸相關的特性，量子點的粒徑大約在5nm左右，單分散性好，量子產率在30%左右。
【權利要求】
1.一種硒化鎘量子點的生物合成方法，其特徵在於所述方法為:以亞硒酸鹽為Se源，以水溶性鎘鹽為Cd源，以巰基化合物為穩定劑，以大腸桿菌或酵母菌經發酵培養獲得的溼菌體為催化劑，在二水合檸檬酸三鈉的作用下，於大腸桿菌發酵培養基或酵母菌發酵培養基中，37°C培養I~6天，離心，棄去上清，收集沉澱，獲得硒化鎘量子點；所述Se源用量以Se物質的量計,所述Cd源用量以Cd物質的量計,所述Se與Cd物質的量之比為1:10.7~32 ;所述穩定劑的加入量以Se物質的量計為2.7~25g/mol，所述二水合檸檬酸三鈉的加入量以Se物質的量計為20~lOOg/mol，所述催化劑的加入量以溼菌體質量計，所述溼菌體質量以Se物質的量計0.1~3g/mmol。
2.如權利要求1所述硒化鎘量子點的生物合成方法，其特徵在於所述大腸桿菌發酵培養基為M9培養基,所述酵母菌發酵培養基為察氏培養基。
3.如權利要求1所述硒化鎘量子點的生物合成方法，其特徵在於所述亞硒酸鹽以0.01mol/L亞硒酸鹽水溶液的形式加入，所述亞硒酸鹽為Na2SeO3或K2Se03。
4.如權利要求1所述硒化鎘量子點的生物合成方法，其特徵在於所述水溶性鎘鹽以0.04mol/L水溶性鎘鹽水溶液的形式加入，所述水溶性鎘鹽為CdCl2、Cd(NO3)2或CdS04。
5.如權利要求1所述硒化鎘量子點的生物合成方法，其特徵在於所述巰基化合物為硫代蘋果酸、穀胱甘肽、L-半胱氨酸、巰基乙酸或巰基丙酸。
6.如權利要求1所述硒化鎘量子點的生物合成方法，其特徵在於所述Se與Cd物質的量之比為1:10.7~21。
7.如權利要求1所述硒化鎘量子點的生物合成方法，其特徵在於所述穩定劑的加入量以Se物質的量計為21~25g/mol,所述二水合檸檬酸三鈉的加入量以Se物質的量計為60~80g/mol,所述催化劑的加入量以溼菌體質量計,所述溼菌體質量以Se物質的量計0.1 ~3g/mmol0
8.如權利要求1所述硒化鎘量子點的生物合成方法，其特徵在於所述合成方法先將催化劑接種至大腸桿菌發酵培養基或酵母菌發酵培養基中，再加入Se源、Cd源、穩定劑、二水合檸檬酸三鈉進行生物合成反應；所述大腸桿菌發酵培養基為M9培養基，所述酵母菌發酵培養基為察氏培養基。
9.如權利要求1所述硒化鎘量子點的生物合成方法，其特徵在於所述催化劑按如下方法之一製備:(I)將大腸桿菌接種至LB培養基，37°C培養至0D_ = 0.6，得到種子液，離心，去除上層清液，沉澱接種至M9培養基，37°C培養至0D_ = 0.6,離心，棄上清，得到大腸桿菌溼菌體；所述LB培養基終濃度組成為:酵母膏5g/L，蛋白腖10g/L，氯化鈉10g/L，pH值7.0，溶劑為水；所述M9培養基終濃度組成:磷酸氫二鈉15g/L，磷酸二氫鉀7.5g/L，氯化銨2.5g/L，氯化鈉1.25g/L，七水合硫酸鎂0.002mol/L,葡萄糖2g/L，溶劑為水；(2)將酵母菌接種至YPD培養基，37°C培養至OD6tltl = 0.6，得到種子液，離心，去除上層清液，沉澱接種到察氏培養基，37°C培養至OD6tltl = 0.6，離心，棄上清，得到酵母菌溼菌體；所述YPD培養基終濃度組成:酵母膏10g/L，蛋白腖20g/L，葡萄糖20g/L，pH值7.0，溶劑為水；所述察氏培養基終濃度組成:蔗糖30g/L，硝酸鈉2g/L，磷酸氫二鉀lg/L，氯化鉀0.5g/L，七水合硫酸鎂0.5g/L，pH值7.0，溶劑為水。
10.如權利要求9所述硒化鎘量子點的生物合成方法，其特徵在於所述方法按如下步驟進行:將大腸桿菌經發酵培養獲得的溼菌體接種至M9培養基或將酵母菌經發酵培養獲得的溼菌體接種至察氏培養基，在磁力攪拌下，加入Se源、Cd源、巰基化合物和二水合檸檬酸三鈉，37°C培養4~6天，離心，取沉澱，獲得CdSe量子點；所述巰基化合物為硫代蘋果酸、穀胱甘肽或L-半胱氨酸；所述Se與Cd物質的量之比為1:10.7~21 ;所述巰基化合物的加入量以Se物質的量計為21~25g/mol，所述二水合檸檬酸三鈉的加入量以Se物質的量計為60~80g/mol，所述催化劑的加入量以溼菌體質量計，所述溼菌體質量用量以Se物質的量計0.1~3g/mmo lo
【文檔編號】C12R1/19GK104031941SQ201410223675
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年5月23日 優先權日:2014年5月23日
【發明者】王平, 包海峰 申請人:杭州師範大學