用於治療咳喘病及肺動脈高壓的藥物組合物的製作方法

2023-07-29 01:36:36 2

專利名稱:用於治療咳喘病及肺動脈高壓的藥物組合物的製作方法
本發明涉及用於治療咳喘病和肺動脈高壓的藥物組合物，更具體而言，該組合物包括澤蘭提取物作為活性成分，而所述的咳喘疾病例如是慢性阻塞性肺疾病(COPD)、肺心病、慢性支氣管炎等久咳入絡所致的疾病。
慢性支氣管炎、COPD、肺心病等咳喘疾患以及此類疾病中涉及的肺動脈高壓發病率高、死亡率亦高。在根據衛生部統計的城市地區前10位死因順序中，呼吸系統疾病的發病率為9.254萬/10萬，在城市居第三位，而在農村則居首位。在我國北方、南方部分地區10萬≥15歲以上人群的進一步調查，COPD仍佔人群的3.17％，其中COPD疾病的23.4％繼發了肺心病。即使在諸如美國等的發達國家或地區，肺動脈高壓佔34歲以上男性人群的13.4％。呼吸系統疾病呈上升趨勢，可能與工業發展中的環境汙染有關，應作為我國的前車之鑑。這說明防治肺動脈高壓、慢性支氣管炎、COPD和肺心病等呼吸系統疾病的重要性、有十分重要的戰略意義。特別是尋找高效低毒、純天然藥物則更為重要。
目前防治慢性支氣管炎、COPD、肺心病、和肺動脈高壓的常用藥為抗炎藥、解痙藥、一氧化氮(NO)等。中藥有益氣養陰衝劑、固本咳喘片、氨茶鹼、雙黃蓮等。但是，仍尚無令人滿意的藥物。近年推出的NO的缺陷是半衰期短，而且停藥後2分鐘，肺動脈壓立即回升。某些膠原抑制劑如β氨基丙腈和順-4羥-L-脯氨酸酶等，因副作用大而不能廣泛應用。中醫中藥雖有一定療效，但尚不十分滿意或無成方推出。
因此，本發明的目的就在於尋找效果好、副作用小的高效低毒藥物用於上述疾病的治療。
令人驚奇的是，本發明的上述目的通過包括澤蘭水提取物的藥物組合物即可實現。該提取物的製備方法如下用水浸沒澤蘭，在98℃至沸騰的溫度下進行提取，然後按照本領域技術人員已知的方法進行後處理。
澤蘭拉丁名為Lycopus Lucydus Turcy，文獻記載其功用為活血、通經行水、為婦科調經用藥、用於經閉、產後腹痛、小便不利等症。其功能主治活血、行水。治經閉症瘕、產後瘀滯腹痛、身面浮腫、跌打損傷、金瘡、痛腫。《本經》中記載為「主乳婦內，中風餘疾，大腹水腫、身面四肢浮腫、骨節中水、金瘡、痛腫瘡膿」。《日華子本草》中記載為「通九竅、利關脈、養血氣，破宿血、清症瘕、產前產後百病……」。未曾記載或報導用於肺動脈高壓、慢性支氣管炎、COPD、肺心病等呼吸系統疾病防治。目前為止，未發現用澤蘭及其有效成份防治慢性支氣管炎、COPD、肺心病等咳喘病和肺動脈高壓。85版、95版藥典及有關中醫藥書藉、文獻尚無記載，也未見文獻報導。
經過我們的研究首次發現澤蘭有抗缺氧、抗自由基、降低羥脯氨酸、降低肺動脈高壓、改善肺血流及肺功能等作用。並基於此機理在國內外首次將澤蘭的水提取物用於治療肺動脈高壓、慢性支氣管炎、COPD、肺心病等咳喘病，打破了中醫藥認為澤蘭僅僅作為血藥，而只有氣藥才能治療呼吸系統疾病的傳統觀念。實驗表明慢性阻塞性肺疾病、肺心病等疾患有缺血、缺氧、血脈瘀阻、久咳入絡等症狀，因此採用血藥可收到良好的效果。
所述澤蘭的水提取物是如下製備的用水浸沒澤蘭，加熱至98℃-沸騰的溫度進行提取，然後按照本領域技術人員已知的方法進行後處理，由此得到粉末狀的提取物。其中水的用量沒有具體限制，只要其浸沒澤蘭即可，但優選為澤蘭量的6-10倍。所用的水最好為蒸餾水。
本發明的藥物組合物包括該提取物作為活性成分，並任選地包括本領域已知的藥物學上可接受的載體。所述提取物在該組合物中的含量優選為大於80重量％，最優選為90重量％。
可用本領域已知的方法及輔料將上述組合物加工成片劑、膠囊劑、針劑等劑型。
另一方面，我們還從澤蘭的水提取物中進一步分離了其中的有效成份樺木酸和熊果酸，並首次發現它們有抗缺氧、降低血小板聚集、以及改善微循環的作用。
本發明的澤蘭提取物及其中的有效成分(樺木酸和熊果酸)對慢性支氣管炎、COPD、肺心病有較好的療效，並能改善臨床症狀、體徵；改善肺血流動力學；改善肺功能；提高氧分壓、降低二氧化碳分壓；降低血小板聚集。其有效率為80-86％。在治療上述病症時，本發明的澤蘭提取物的用量對於成人為相當於生藥20-40g/日(60kg體重)。
以下將通過實施例進一步闡明本發明，但應理解的是，本發明並僅局限於此。實施例1澤蘭提取物的製備將澤蘭1kg放入在一個適當的容器中，加入蒸餾水至浸沒澤蘭，然後加熱至沸騰進行提取。提取完成後，進行粗濾，然後減壓濃縮出浸膏、乾燥、粉碎，最後得到粉末狀的提取物180g。實施例2樺木酸和熊果酸的分離和鑑定用95％乙醇回流提取實施例1中製得的粉末100g，然後將由此得到的提取物吸附於60目矽膠上。待溶劑揮發後，將吸附有提取物的矽膠置於索氏提取器中，並依次用石油醚、氯仿和甲醇回流提取，分別得到石油醚部分、氯仿部分和甲醇部分。然後傾倒出殘渣，待甲醇完全揮發後用蒸餾水煮提，得到水提取部分。
石油醚部分進行矽膠柱層離，其中以石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑，並逐漸擴大乙酸乙酯的含量進行梯度洗脫，同時用薄層色譜進行鑑定。由62-66份(25％乙酸乙酯-石油醚洗脫)得到無色結晶狀物質。該結晶狀物質的熔點為299-300℃，Lieberman-Burchard反應呈陽性。元素分析實測值(％)C 76.37H 10.52，與分子式C30H48O3·CH3OH的計算值相同。IR(KBr)cm-13500，2970，2900，1690，1650，1385，1375，880。MS m/2456(M+)，438，423，411，248，207，189(100％)。與樺木酸標準品對照Rf相同，混合熔點不降低。由此確定此結晶狀物質為樺木酸。
並對氯仿部分進行分離。取500g的矽膠，滴加10％蒸餾水，攪拌後以氯仿為溶劑進行溼法裝柱，並用氯仿-丙酮為洗脫劑，其中逐漸加大丙酮的含量進行梯度洗脫。薄層條件為中性矽膠G薄層，以6％丙酮-氯仿展開，用磷鉬酸顯色。由34-55份得到結晶，在61-74份得到淡綠色粉末狀晶體。再以乙醇為溶劑進行重結晶，並用活性炭脫色，最後得到無色簇針狀晶體。該簇針狀晶體的熔點為270-272℃，Lieberman-Burchard反應呈陽性。元素分析的實測值(％)為C 78.35H 10.67(C30H48O3的值為C 78.95H 10.61)。IR(KBr)cm-13532，2956，2876，1718，1390，1380，1362(A區三個吸收峰)，1326，1286，1246(B區有三個吸收峰)。MS m/2456(M+)，438，410，248(％)，208，207，190，189，133。與熊果酸標準品對照Rf相同，混合熔點不降低。由此確定此結晶狀物質為熊果酸。實施例3澤蘭提取物對降低肺動脈高壓的作用1、材料和方法1.1動物Wister大鼠，購自中國醫學科學院動物中心，雌雄各半體重130-170g，設正常對照組、肺動脈高壓模型組、小劑量測試組、大劑量測試組、預防組、和陽性藥對照組共六組，每組6-8隻，隨機分組。
1.2方法1.2.1肺動脈高壓大鼠模型複製(1)常壓缺氧肺動脈高壓大鼠模型採用自製常壓缺氧艙，艙內充以氧氮混合氣體，氧濃度為10±0.5％，每日缺氧6小時，每周6天，共3周，對照置於室內艙外相同條件飼養。
(2)野百合鹼誘發的肺動脈高壓大鼠模型將野百合鹼配成2％溶液，實驗各組大鼠50mg/kg一次性肩胛區皮下注射，正常對照組注入等量生理鹽水，觀察周期為45天。
1.2.2給藥劑量、途徑和時間缺氧性肺動脈高壓分以下六組(1)小劑量測試組自實驗開始後第10天起每日以25g/kg體重的劑量在進艙前一次灌胃給藥實施例1中得到的澤蘭提取物，並缺氧飼氧。
(2)大劑量測試組自實驗開始後第10天起，每日以50g/kg體重的劑量分別在進艙前和出艙後分兩次灌胃給藥實施例1中得到的澤蘭提取物，並缺氧飼養。
(3)預防給藥組自實驗開始當日起，每日按50g/kg體重的劑量分別在進艙前和出艙後分兩次給藥實施例1中得到的澤蘭提取物，並缺氧飼養。
(4)陽性藥對照組自實驗開始第10天起，每日按50g/kg體重的劑量給予氨茶鹼，3g/kg體重的劑量給予麥迪黴素，它們分兩次分別在進艙前和出艙後給予，並缺氧飼氧。
(5)肺動脈高壓模型組缺氧飼養，不給藥，(6)正常對照組給予等量生理鹽水，不缺氧，常規飼養。
1.2.3測定方法(1)肺動脈壓測量參照孫波等的方法(孫波，劉文列，右心導管測定大鼠肺動脈壓的實驗方法，中國醫學科學院學報19846466)，將聚乙烯動脈插管經頸外靜脈向近心端插入，插管另一端的換能器連接於生理記錄儀上，依次經上腔靜脈、右心房、右心室進入肺動脈，分別描述並計算右心室和肺動脈的壓力。
(2)右心肥大指標測定游離心臟，剪去心房，以室間隔為界將心室剪為右心室和左心室加室間隔兩部分，分別稱重，並計算右心室/體重(RV/BW)和右心肥大指數值(RVHI，即右心室重/左室+室間隔重)，以RVHI＞0.33作為判斷右心肥大的指標。
(3)丙二醛(MDA)測定參照OhKawa等介紹的硫代巴比妥酸(TBA)法(Ohkawa H.等人，Assay for lipidperoxidation in animal tissuesby thiobarbituric acid reaction，Anal.Biochem.1979 95351)測定肺組織中的MDA含量。
(4)羥脯氨酸(HYP)測定；肺組織中HYP含量測定採用Switzer氏法進行。
(5)病理觀察常規製作切片，HE染色。
(6)超微結構觀察常規製作超薄切片，透射電鏡觀察。
1.2.4統計學處理實驗數據用均數±標準差(X±S)表示，t檢驗直線相關分析。2、結果2.1本發明的澤蘭提取物對缺氧性肺動脈高壓的防治效果2.1.1血液動力學觀察不同劑量的澤蘭提取物和陽性藥均能明顯降低右心室壓和肺動脈壓，使肺血管阻力降低，而且右心肥大程度明顯減輕(見表1)。
2.1.2病理觀察正常對照組大鼠肺泡結構正常，肺泡壁薄，相鄰肺泡壁緊密相貼。缺氧模型組大鼠肺有瀰漫性增生性病變，肺泡壁明顯增厚，肺泡壁內有血性滲出物，周圍有大量炎性細胞浸潤，部分肺泡閉塞。小劑量測試組大鼠肺泡壁增厚明顯減輕，血管及支氣管周圍有少量淋巴細胞浸潤。大劑量測試組大鼠肺泡壁稍增厚，少許淋巴細胞浸潤。預防組大鼠大部分肺泡結構正常，散在肺泡壁輕度增厚和周圍淋巴細胞浸潤。陽性藥組大部分肺泡壁增厚，但較模型組減輕，間質細胞增多，肺泡壁充血。
2.1.3超微結構觀察正常對照鼠未見明顯異常。缺氧模型對照組肺泡I型上皮細胞，肺泡毛細血管內皮細胞肺泡間質細胞結構較模糊，其線粒體腫脹，嵴減少，部分線粒體及內質網發生空泡化(水腫)，間質I型膠原纖維增多，使肺泡間隔變厚。大劑量測試組肺泡上皮細胞、肺泡毛細血管內皮細胞及氣血屏障無明顯病損。小劑量測試組肺泡上皮細胞、肺泡毛細血管內皮細胞及肺間質細胞的線粒體較多發生腫脹、空泡化，內質網擴大。預防組無明顯病變，但少數線粒體，內質網空泡化。陽性藥對照組肺泡上皮細胞多數線粒體腫脹，嵴溶解，空泡化，內質網擴張，內皮細胞，肺間質細胞亦見上述明顯病變，間質I型膠原及纖維增多。
2.1.4對肺組織丙二醛含量的影響澤蘭提取物可以降低肺組織MDA，降低脂質過氧化(見表1)。
2.1.5羥脯氨酸含量測定澤蘭可降低肺組織羥脯氨酸含量(見表1)。
2.2澤蘭提取物對野百合鹼誘發的肺動脈高壓的防治作用2.2.1對肺血流動力學影響各治療組右心室壓和肺動脈壓顯著降低，肺血管阻力下降，右心肥大程度減輕，肺組織MDA和羥脯氨酸含量降低(見表2)。
2.2.2病理改變正常對照組大鼠肺組織結構正常。模型組大鼠肺泡壁充血、增厚、融合，正常肺泡結構破壞，有大量的中性分葉核細胞浸潤，小動脈壁增厚。小劑量測試組肺泡壁稍增厚、充血，周圍有淋巴細胞浸潤。大劑量測試組變化基本同小劑量組。預防給藥組大鼠僅少部分肺泡壁輕度增厚，充血，無其它異常。陽性藥組大鼠肺泡壁輕度充血、增厚，支氣管周圍有大量的淋巴細胞浸潤，小動脈壁增厚。
2.2.3超微結構改變模型組肺泡上皮細胞、毛細血管內皮細胞及肺泡間質線粒體大部分腫脹，嵴減少，空泡化，內質網擴大，肺泡上皮細胞表面附有少量壞死，肺間質疏鬆，有小水泡出現。陽性藥對照組肺泡上皮、支氣管上皮細胞及肺泡毛細血管內皮細胞的大多數線粒體腫脹，空泡化，部分內質網擴張，未見壞死。
小劑量測試組肺組織結構欠清晰，但未見壞死，內皮細胞及間質細胞中部分線粒體腫脹，空泡化，內質網擴大，病變比大劑量組明顯廣泛，但比陽性藥組及模型組輕。預防組肺泡上皮細胞、肺毛細血管內皮細胞及間質細胞部分線粒體腫脹，空泡化，內質網擴大。3、結論由表1和2的結果可以看出，本發明的澤蘭提取物有降低缺氧性肺動脈高壓和野百合鹼誘發的肺動脈高壓的作用，並對它們具有明顯的防治效果，預防組下降30％，治療組下降26.8％。而且還能顯著降低平均肺動脈壓和右心室壓，降低肺血管阻力，減輕右心肥厚程度，預防組和治療組分別下降21.3％和16.6％。
另外，本發明的澤蘭提取物可降低肺組織MDA，減輕脂質過氧化；並降低肺組織羥脯氨酸含量。
澤蘭提取物的小劑量組、大劑量組和預防給藥組大鼠平均肺動脈壓mPAP與肺組織MDA含量呈顯著正相關(r分別為0.91、0.92和0.93，P＜0.01)，而且與肺組織HYP的含量亦呈正相關(r分別為0.87、0.87和0.89，P＜0.01)。
進一步分析可以看出，對缺氧性肺動脈高壓的作用，預防組和大劑量測試組優於小劑量測試組和陽性藥組。而小劑量測試組優於陽性藥組，但比大劑量測試組病變重。
對野百合鹼誘發的肺動脈高壓的作用，大劑量測試組效果最佳，其次為預防組、小劑量組和陽性藥組。
表1澤蘭提取物對缺氧性肺動脈高壓的作用(X±S)
***與對模型組相比p＜0.001#與陽性一藥相比p＜0.051Kpa＝7.5mmHg
表2澤蘭提取物對野百合鹼誘發的肺動脈高壓的作用(X±S)
***與對模型組相比p＜0.001#與陽性一藥相比p＜0.05，1Kpa＝7.5mmHg實施例4用實施例2中分離出的樺木酸和熊果酸進行與實施例3類似的實驗，得到類似的結果，這表明樺木酸和熊果酸也同樣具有降低缺氧性肺動脈高壓和野百合鹼誘發的肺動脈高壓的作用。實施例5一男性患者，60歲，病程為7年，臨床確診為慢性支氣管炎(喘息型)。治療前咳嗽、咯痰、伴喘息，活動後加重；伴呼吸困難、胸悶、乏力等症狀。PaO2為76mmHg，PaCo2為39.1mmHg。肺功能示氣道阻力增加，流速/容量曲線下降。每日給藥實施例1製得的澤蘭提取物20g，一個月後臨床症狀體徵好轉5項。血氣分析PaO2升至91.1mmHg，PaCO2降低至34.5mmHg。停服其它抗菌素及平喘藥後，症狀未復發。繼續服藥三個月後，症狀體徵好轉達8項，活動後也無喘息。血氣分析PaO2為93mmHg，PaCO2為35.2mmHg，而肺功能1秒率亦有好轉。實施例6一男性患者，年齡為72歲，已咳嗽、咳痰30年，近10年加重，而且最近3年因劇咳致呼吸暫停，每周頻繁發作，診斷為COPD。每日服用實施例1的澤蘭提取物40g，一個月後咳嗽明顯減少，呼吸暫停發作次數減少。繼續服藥2個月後，症狀體徵進一步減輕，呼吸暫停偶發1次。
權利要求
1.一種藥物組合物，其包括作為活性成分的澤蘭水提取物以及藥物學上可接受的載體。
2.如權利要求
1所述的藥物組合物，其中，所述提取物是通過在98℃-沸騰的溫度下用水提取澤蘭、然後進行後處理而製得的。
3.如權利要求
1或2所述的藥物組合物，其中，所述澤蘭提取物中的有效成分為樺木酸。
4.如權利要求
1或2所述的藥物組合物，其中，所述澤蘭提取物中的有效成分為熊果酸。
5.如權利要求
1或2所述的藥物組合物，其為片劑、膠囊或針劑。
6.如權利要求
1所述的組合物在製備治療肺動脈高壓的藥物中的應用。
7.如權利要求
1所述的組合物在製備治療咳喘病的藥物中的應用。
8.如權利要求
7所述的應用，其中，所述咳喘病包括慢性阻塞性肺疾病、肺心病、慢性支氣管炎。
專利摘要
本發明涉及用於治療慢性支氣管炎、COPD、肺心病等咳喘病和肺動脈高壓的藥物組合物，其包括澤蘭水提取物以及藥物學上可接受的載體。所述提取物是通過在98℃-沸騰的溫度下用水提取澤蘭、然後進行後處理而製得的。本發明的組合物具有良好的社會效益和經濟效益，有廣闊的應用前景。
文檔編號A61K31/19GKCN1103600SQ99125594
公開日2003年3月26日 申請日期1999年12月7日
發明者朱明娟, 應榮多, 馮菊仙 申請人:中國醫學科學院血液學研究所導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan