用於口服誘導對膳食蛋白的耐受性的非消化性寡糖的製作方法

2023-07-21 02:13:16

專利名稱：用於口服誘導對膳食蛋白的耐受性的非消化性寡糖的製作方法
技術領域：
本發明涉及包含非消化性寡糖和蛋白部分水解物的腸道組合物，其能夠誘導對膳食中的天然蛋白，特別是乳類蛋白(milk protein)的口服免疫耐受性。
背景技術：
在通常的營養獲取過程中，膳食蛋白經由胃腸道呈遞給免疫系統，而不會產生針對所攝營養物質的免疫反應。這種無應答性被稱作口服免疫耐受性或口服耐受性。口服免疫耐受性的誘導對於嬰兒尤其重要，嬰兒在出生後首次接觸膳食蛋白質，並且需要對其進行適應。如果在嬰兒體內沒有建立起口服免疫耐受性，則會發生食物過敏。食物過敏症患者所需食譜中應避免特定的食物蛋白。針對患有牛奶蛋白過敏症的嬰兒，市場上售有包含被廣泛水解的蛋白(蛋白廣泛水解物)或甚至僅含有游離胺基酸做為氮源的嬰兒配方奶粉，在這些配方奶粉中不存在變應原性蛋白或肽 。當嬰兒的父母一方或雙方患有特應性疾病，或嬰兒的一個或多個兄弟姐妹患有特應性疾病時，其對膳食蛋白產生過敏的風險較高。對於此類群體，除了優選母乳餵養以外，市場上還售有包含蛋白部分水解物(被部分水解的蛋白)的低變應原性配方奶粉。這些部分水解蛋白的變應原性降低。現已證明此方法可有效地防止改良配方奶粉中存在的天然蛋白質的致敏作用。通常，蛋白的水解程度低於用於已患有過敏症的嬰兒的廣泛水解蛋白。這些配方的優勢在於其不僅通過防止對所述蛋白的致敏而降低了產生變態反應的風險，而且還口服誘導了對完整蛋白質的免疫耐受性。這樣做的優點在於過後可在食譜中引入所述天然蛋白，而產生過敏反應的風險則降低了。EP 1557096中披露了包含低變應原性酪蛋白水解物和乳酸細菌益生菌株的嬰兒食品。為了誘導耐受性，首選乳清蛋白部分水解物。EP 2044851中披露了包含水解程度介於15%和25%之間的部分水解乳類蛋白的營養組合物並且其每IOOml中含有50至IOOOng TGF-^，初級預防用於針對膳食蛋白的變態反應以及預防特應性疾病在年輕哺乳動物中的發展。EP 0629350中披露了非變應原性乳清蛋白水解物的應用，據說其可以誘導牛奶蛋白耐受性。EP 0827697中披露了乳清的應用，其經過酶水解製備用於在易感哺乳動物中誘導對牛奶的口服耐受性的組合物。該乳清的變應原性蛋白的免疫檢測水平比未水解乳清低彡100倍。WO 00/42863中披露了用於在具有蛋白過敏症風險的嬰兒中誘導蛋白耐受性的低變應原性組合物，其包含廣泛水解的非變應原性蛋白作為基本成分和/或游離胺基酸作為基本成分，所述組合物包含至少一種變應原性蛋白的耐受原性肽做為活性成分。然而，現有技術中的低變應原性組合物通常僅僅通過避免潛在變應原的出現來發揮其作用，因此其僅起到了二級預防作用和/或其需要特殊成分比如益生菌或生長因子的存在。然而具有產生食物過敏症的風險或患有食物過敏症的個體仍需要改善免疫耐受性誘導作用的營養物質。因此，本發明的根本技術問題是提供能夠克服上述缺點的組合物、方法及方式，特別是使針對人體膳食蛋白的口服耐受性得到改善，特別是使針對人體膳食蛋白的初級過敏預防作用得到改善，特別是在具有產生食物過敏症風險的人體內。

發明內容
本發明的發明人發現當通過飲食伴隨服用非消化性寡糖時，乳類蛋白部分水解物誘導口服免疫耐受性的能力得到了顯著的協同性提高。人們發現在使用完整乳清蛋白進行皮內刺激後，用完整乳清蛋白敏化的小鼠出現了皮膚急性變態反應。當使用廣泛或部分水解乳清蛋白進行皮內刺激後，該反應得到減輕。如果在敏化之前通過口服乳清蛋白部分水解物或完整乳清蛋白對這些敏化小鼠進行預處理，則可觀察到對完整皮內乳清蛋白的急性皮膚反應有了顯著降低。當以口服乳清蛋白廣泛水解物作為預處理時，則沒有觀察到反應的降低。 令人驚訝的是觀察到，如果在使用乳清蛋白部分水解物進行預處理的過程中也用非消化性寡糖對小鼠進行預處理的話，則可以進一步協同性地降低急性皮膚反應。本發明，特別是非消化性寡糖用以加強蛋白部分水解物的作用的用途，甚至可完全消除急性皮膚反應。在使用單獨含有非消化性寡糖(以下也稱作ND0)的膳食進行預處理或使用乳清蛋白廣泛水解物和含有NDO的膳食進行預處理後，則沒有觀察到這種由於非消化性寡糖的存在而產生的對口服免疫耐受性誘導作用的加強和改善。因此，本發明提供了包含蛋白部分水解物(特別是乳清蛋白部分水解物)和非消化性寡糖(特別是低聚半乳糖、低聚果糖和/或糖醛酸寡糖)的組合物，其優選用於增強對膳食蛋白耐受性的誘導，尤其是增強對乳類蛋白、更特別的是對乳清蛋白耐受性的誘導，且其優選用於人體。將本發明的組合物用於嬰兒尤其有益，優選用於具有發生食物過敏症風險的嬰兒。此外，根據本發明還確定了乳清蛋白￠-乳球蛋白中特定肽的特定序列，如果作為預處理讓用完整乳清蛋白敏化的老鼠服用這些肽，這些肽可誘導對完整乳清蛋白的口服免疫耐受性。在預處理時伴隨使用非消化性寡糖可以協同增強這種作用。發明詳述因此，本發明解決其技術問題尤其通過提供了以下教導將非消化性寡糖用於增強本發明的蛋白部分水解物對膳食蛋白口服耐受性的誘導作用，優選地，所述蛋白部分水解物的特徵在於其所包含的肽中至少3wt%的肽的尺寸為5kDa或更高,且至少50wt. %的肽的尺寸小於5kDa。本發明解決所述技術問題還通過提供了以下教導將非消化性寡糖用於增強本發明的蛋白部分水解物對膳食蛋白的初級過敏預防作用的用途，優選所述蛋白部分水解物的特徵在於其所包含的肽中至少3wt. %的肽的分子量為5kDa或更高,且至少50wt. %的肽的分子量小於5kDa。優選地，用於增強蛋白部分水解物的口服耐受性誘導作用或用於增強蛋白部分水解物的初級過敏預防作用的非消化性寡糖與蛋白部分水解物一同包含於本發明的腸道組合物中。因此，本發明解決其技術問題還通過提供本發明的包含至少一種非消化性寡糖和至少一種蛋白部分水解物的腸道組合物，該組合物用於對膳食蛋白的口服耐受性的誘導，優選用於增強對膳食蛋白的口服耐受性的誘導，優選地，所述蛋白部分水解物的特徵在於其所包含的肽中至少3wt. %的肽的分子量為5kDa或更高，且其中至少50wt. %的肽的分子量小於5kDa。本發明解決其技術問題還通過提供包含至少一種非消化性寡糖和至少一種蛋白部分水解物的腸道組合物，該組合物優選用於預防食物過敏症或炎症性腸道疾病，所述蛋白部分水解物的特徵在於其所包含的肽中至少3wt. %的肽的分子量為5kDa或更高，且其中至少50wt. %的肽的分子量小於5kDa。本發明解決所述技術問題還通過提供了包含非消化性寡糖和至少一種蛋白部分水解物的腸道組合物，其中蛋白部分水解物為乳清蛋白部分水解物且其中所述非消化性寡糖為低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物，用於誘導對膳食蛋白的口服耐受性或用於預防食物過敏症或炎症性腸道疾病。本發明還特別通過提供腸道組合物解決其技術問題，其中所述蛋白部分水解物為乳清蛋白部分水解物，並且其中所述非消化性寡糖為低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物。本發明解決其根本問題還通過提供製備優選口服耐受性誘導作用增強的腸道組合物的方法，其中將至少一種本發明的蛋白部分水解物，優選將所含肽中至少3wt. %的肽的分子量為5kDa或更高且至少50wt. %的肽的分子量小於5kDa的蛋白部分水解物，和至少一種非消化性寡糖混合在一起，並獲得優選口服耐受性誘導作用增強的腸道組合物。本發明還涉及製備優選口服耐受性誘導作用增強的腸道組合物的方法，其中將至少一種P -乳球蛋白肽和至少一種非消化性寡糖混合在一起，並獲得優選口服耐受性誘導作用增強的腸道組合物。在本發明的一個優選實施方式中，還提出了餵養受試對象特別是嬰兒的方法，優選為治療特別是預防過敏症(優選食物過敏症)和/或特應性疾病(包括特應性溼疹和/或哮喘和/或鼻炎和/或皮炎)的方法，所述方法包括給有此需要的受試對象，特別是嬰兒，尤其是具有發生此類疾病的風險的嬰兒施用本發明的腸道組合物。因此，本發明的基礎包括非消化性寡糖可以用於改善(即增強)蛋白部分水解物的口服耐受性誘導作用這一驚人且有利的發現。特別地，本發明教導了使用非消化性寡糖來改善(即增強)蛋白部分水解物的口服耐受性誘導作用，並從而改善(即加強)蛋白部分水解物的初級過敏預防作用(即預防初級過敏的作用)。本發明具有的特別優勢在於其產生了口服耐受性和初級過敏預防作用，該作用至少與使用完整乳清蛋白誘導耐受性和預防過敏的作用同樣好且有效，然而，使用本發明的NDO和蛋白部分水解物的組合時，引發變態反應的風險要低得多。在本發明的背景下，增強即表示增加或提高，特別是從一個給定的可測基礎值到一個遠遠高於基礎值的可測值的顯著提高。在本發明的背景下，依照本發明的實施例I在測定蛋白口服耐受性的給定小鼠模型中測定蛋白部分水解物所誘導的口服耐受性的增強。因此，當非誘導口服耐受性的即髮型高反應性(ITH)數值為100%時，可用作基礎值的蛋白部分水解物誘導的口服耐受性的狀態可用35到90%的ITH數值來表示。
所述誘導口服耐受性顯著增強的特徵在於，當以非誘導口服耐受性的ITH值為100%時，其ITH數值為0到30%，優選0到25%，優選0到20%，優選0到10%，更優選為0%。因此，誘導口服耐受性的增強優選表示降低了誘導口服耐受性基礎值的至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%，優選100%，該基礎值表示為在上述小鼠模型中所測量的即髮型高反應性。ITH的相對數值可通過以下計算公式轉換為口服耐受性數值100減去ITH等於耐受性數值。因此，最優選地，蛋白部分水解物所誘導的口服耐受性的增強導致完全耐受，這表示對膳食蛋白60到100%耐受，優選90到100%耐受，優選95到100%耐受，最優選100%耐受。在本發明的背景下，依照本申請實施例I在給定小鼠模型中測定蛋白部分水解物的初級過敏預防作用的增強，以確定對蛋白的口服耐受性。因此，當以完全形成過敏狀態(fully developed allergy state)的即髮型高反應性(ITH)數值為100%時,可用作基礎值的蛋白部分水解產物的初級過敏預防作用的狀態可用35到90%的ITH數值來表示。所 述初級過敏預防作用(primaryallergy-prventing effect)顯著增強的特徵在於，當以完全形成過敏狀態的ITH值為100%時，其ITH數值為0到30%，優選0到25%，優選0到20%，優選0到10%，最優選0%。因此，初級過敏預防作用的增強優選表示降低了由蛋白部分水解物所產生的初級過敏預防作用的基礎值的至少15%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%且優選100%，所述基礎值表示為在上述小鼠模型中所測得的即髮型高反應性。因此，最優選地，蛋白部分水解物的初級過敏預防作用的增強導致初級過敏的完全防止，這表示對膳食蛋白90到100%耐受，優選95到100%耐受，最優選100%耐受。在本發明的背景下，基於初級過敏預防作用的初級過敏預防措施是指目的為部分地，優選完全地防止過敏症狀在危險甚至高危個體中的發生(development)和爆發的預防治療。在本發明的背景下，初級過敏預防作用是一種免疫系統調節作用。初級過敏預防作用不包括由在膳食中避免致敏食物成分所產生的二級過敏預防作用(secondaryallergy-preventing effect)。在本發明的背景下，術語「5kDa或更高」意為「至少5kDa」。在本發明的背景下，術語「低於5kDa」意為上限達到但不包括5kDa。在本發明的背景下，術語「口服耐受性(oral tolerance) 」優選表示口服免疫耐受性。本發明在一個優選實施方式中還涉及包含非消化性寡糖和至少一種蛋白部分水解物的腸道組合物，其中所述蛋白部分水解物為乳清蛋白部分水解物，優選3 -乳球蛋白部分水解物，並且其中所述非消化性寡糖為低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物。所述腸道組合物優選用於誘導對膳食蛋白的口服耐受性或預防食物過敏症或炎症性腸道疾病，或兼用於兩種目的。在優選的實施方式中，所述腸道組合物所包含的乳清蛋白部分水解物包含至少一種特定的哺乳動物乳類蛋白肽，優選為特定的乳清蛋白肽，更優選為特定的￠-乳球蛋白肽。乳清蛋白部分水解物可為天然或合成的，即可包含天然或合成肽。優選地，所述乳清蛋白部分水解物包含至少一種特定的￠-乳球蛋白肽，其由￠-乳球蛋白胺基酸序列的12到38個胺基酸組成，更優選由15到36個胺基酸組成，甚至更優選由18到34個胺基酸組成，最優選由18個胺基酸組成。所述特定的￠-乳球蛋白肽的尺寸優選低於5kDa，特別是0. I到4. 9kDa，優選為0. 5到4. 9kDa，更優選為2到4. 9kDa，最優選為大約2. 4kDa。不期望受理論限制，尺寸較小的肽被認為會產生較低的口服耐受誘導作用，原因是耐受性誘導表位被以欠佳的方式提呈給T細胞。另一方面，由於與肥大細胞上的兩個IgE分子交聯的機率隨尺寸的增大而升高，較大尺寸會增加發生變態反應的風險。所述至少一種￠-乳球蛋白肽優選包含選自由SEQ ID NO USEQ ID N02、SEQ IDNO 3和SEQ ID NO 4組成的組的序列，尤其是胺基酸序列。最優選地，所述腸道組合物包含含有2種、3種或優選4種肽的混合物，所述肽包含SEQ ID NOs I至4。所述肽中的每一種均可優選在其C-末端、其N-末端或兩端獨立地被可以為任意胺基酸的I到10個胺基酸，優選I到8個胺基酸，更優選I到5個胺基酸取代。所述特定的￠-乳球蛋白肽的分子低於5kDa，尤其為0. I到4. 9kDa，優選為0. 5到4. 9kDa，更優選為2到4. 9kDa，最優選為約2. 4kDa0 在另一優選實施方式中，用於本發明的乳清蛋白部分水解物由上述特定的￠-乳球蛋白肽組成。因此，本發明在一個優選實施方式中還涉及了包含非消化性寡糖和至少一種^ -乳球蛋白肽的腸道組合物，其中所述非消化性寡糖為低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物，而所述￠-乳球蛋白肽包含選自由SEQ IDNO USEQ ID NO 2,SEQ ID NO3和SEQ ID NO 4組成的組的序列，其中所述肽的分子量優選小於5kDa，用於預防食物過敏症或炎症性腸道疾病的。此外，本發明在一個優選實施方式中還涉及了包含非消化性寡糖和至少一種￠-乳球蛋白肽的腸道組合物，其中所述非消化性寡糖為低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物，而所述￠-乳球蛋白肽包含選自由SEQ ID NOUSEQ ID NO
2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4組成的組的序列，其中所述肽的分子量優選小於5kDa，用於誘導對膳食蛋白口服耐受性。令人驚訝的是，發現當將SEQ ID NOs I到4的肽的混合物作為預處理進行給藥時，對完整乳清蛋白敏化的小鼠顯示對完整皮內乳清蛋白的急性皮膚反應得到了顯著的降低。進一步觀察到當在用肽混合物進行預處理的過程中還用非消化性寡糖對小鼠進行預處理時，則急性皮膚反應得到了進一步的協同性降低。優選地，所述腸道組合物中至少一種特定的肽以每IOOml至少IOOmg的濃度存在，更優選每IOOml至少120mg,尤其是每IOOml至少150mg。本發明的蛋白部分水解物本發明的組合物包含蛋白部分水解物，在下文中也稱為「部分水解蛋白」。優選地，本發明的組合物不含完整的未水解蛋白。完整的未水解蛋白的過敏原性太高且可能引發不利的變態反應。在優選的實施方式中，本發明組合物可在蛋白部分水解物之外進一步包含廣泛水解的蛋白(也稱為蛋白廣泛水解物)和/或游離胺基酸。廣泛水解蛋白和/或游離胺基酸不會弓I發變態反應，但也不具備誘導口服耐受性的特性。優選地，蛋白部分水解物源自哺乳動物乳汁，更優選牛奶。在本發明中優選排除使用人乳蛋白。優選地，所述蛋白部分水解物包含或為哺乳動物乳類蛋白部分水解物。蛋白部分水解物包含或為乳清蛋白部分水解物。更優選地，所述蛋白部分水解物包含或為￠-乳球蛋白部分水解物和/或a-乳白蛋白部分水解物。在本發明的另一實施方式中，所述蛋白部分水解物包含或為豌豆、大豆和/或稻蛋白部分水解物。更優選地，所述蛋白部分水解物包含或為酪蛋白部分水解物。用於部分水解以獲得本發明的蛋白部分水解物的蛋白可以是含有蛋白質，優選乳類蛋白的任何組合物，且尤其優選乳類蛋白的溶液或分散液。優選地，用於部分水解的蛋白為乳清蛋白、酸性乳清蛋白、甜乳清蛋白、乳清蛋白濃縮物、乳清蛋白分離物、脫礦質化乳清粉或酪蛋白酸鹽。用於部分水解的水解酶可以來源於例如動物或植物(胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶、腸黏膜提取物、胰腺提取物、凝乳酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無花果蛋白酶)，細菌或真菌(來源於枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)、米麴黴(Aspergillus orysae)、溫特麴黴(/lsy e/v:tj7//w.V的絲氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶和來源於Aspergillus orizae、溫特麴黴、米黑毛黴(Mucor miehei)、微小毛黴(Mucor pusillus)、慄疫菌(Endothia parasitica)的酸性蛋白酶)或是它們的 組合物。在水解過程中，溶液或懸液中蛋白的濃度優選為重量的約5-20%(wt%)，並可在引入蛋白酶之前用巴斯德法將其消毒。酶/蛋白的比例可以為0.1-10%重量/重量，並且優選為約0. 25到4%。水解可在約35oC到65oC之間的溫度進行30分鐘到10小時，優選進行30分鐘到4小時，pH值在2. 5到11的範圍內，優選在4. 5到7. 0、8.0和8. 5的範圍。如有需要，可用例如檸檬酸、食品級HCl或NaOH、NH4OH, KOH、Ca(OH)2以2N的濃度單獨或以混合物調整並調控溶液的pH值。可用快速冷卻中止酶水解過程。然後，可在約70到110° C的溫度對蛋白水解物進行約0. I到10分鐘的熱處理，以將殘留的酶即蛋白酶滅活。通過離心和過濾淨化所得的蛋白水解物溶液，以分別除去不溶的和完整的蛋白，並回收清液。可以工業規模使用由不同材料(礦物、聚碸)製成的不同類型的膜(螺旋狀、管狀、扁平狀、箭纖維狀(allow fibbers))0根據酶的類型、水解條件和過濾法即所用膜類型的不同，在此步驟可獲得所需的蛋白部分水解物的肽尺寸分布。如有需要，可將回收的水解物清夜通過蒸發濃縮直到幹固體含量為例如10-50%，用於隨後的處理，或噴霧乾燥。本發明組合物優選包含蛋白水解程度為5到25%，更優選為7. 5到21%，最優選為10到20%的蛋白部分水解物。以現有潛在肽鍵的總數為100%，將水解程度定義為已經由酶促水解斷裂的肽鍵的百分數。具有上述水解程度的蛋白提供足夠的鏈長為2到30的肽。以下如果不做另外說明，肽的被％值(相對量)是基於與總的蛋白部分水解物的乾重有關的肽乾重。肽的大小和分子量分布可以用本領域技術人員已知的常規方法測定，例如HPLC或尺寸排阻色譜(SEC)，特別是高效尺寸排阻色譜。Gonzdlez-Telloetal，1994, Enzymatic hydrolysis of whey proteins II. Molecular weight range.Biotech. Bioeng，44，529-532 中公開了適合的方法。
在本發明的優選實施方式中，所述蛋白部分水解物的特徵在於其所含肽中至少3wt%的肽的尺寸為5kDa或更高,優選至少3. 5wt%的肽的尺寸為5kDa或更高,優選至少4wt%,更優選至少4. 5wt%的肽的尺寸為5kDa或更高。本發明的蛋白部分水解物的進一步特徵在於其中至少50wt%,優選至少55wt%,優選至少60wt%,優選至少70wt%的肽的尺寸小於 5kDa。更優選地,所述蛋白部分水解物所含肽中至少0. 5wt%,優選至少Iwt. %，優選至少1.5wt%且最優選至少2wt%的肽的尺寸大於20kDa。更優選地,所述蛋白部分水解物所含肽中至少0. 5wt%,優選至少Iwt. %,優選至少1. 5wt%,優選至少2wt%至最高3. 5wt%,優選最高
3.0wt%的肽的尺寸大於20kDa。在更加優選的實施方式中，所述蛋白部分水解物所含肽中至少5wt%，優選5到10wt%,優選6到10wt%的肽的尺寸為至少3kDa。優選地，本發明的蛋白部分水解物的特徵在於其中尺寸為2到<5kDa的肽的相對量與尺寸為至少5kDa的肽的相對量之間的比例為(5至1):1，優選為(4至1):1，優選(3至I) :1，優選(2至I) :1,優選1:1。在本發明的更優選的實施方式中，所述蛋白部分水解物所含肽中至少0. 5wt%，優選至少0. 6wt%，特別是0. 5到3. 0wt%,優選0. 5到2. 0wt%,優選0. 5至Ij1. 0wt%的肽的尺寸為 10 到 20kDa。優選地，本發明的蛋白部分水解物的特徵在於其中尺寸為5到IOkDa的肽的相對量與尺寸大於20kDa的肽的相對量之間的比例為(5至I) : (I至5)，優選為(3至I) : (I至3)，更優選為(2至I) : (I至2)，特別是1:1。在更優選的實施方式中，本發明的蛋白部分水解物的特徵尤其在於其肽的分子尺寸分布，其中尺寸大於20kDa的肽的重量相對量高於尺寸為10到20kDa的肽的相對量,尤其是高至少2倍。因此，在本發明的優選實施方式中，所述蛋白部分水解物的特徵在於其中尺寸為10到20kDa的肽的相對量與尺寸大於20kDa的肽的相對量的比例為1: (1.1到3)，優選為1:(1.1到2. 5)，優選為1:(1.5到2)。在本發明的更優選的實施方式中，本發明的蛋白部分水解物的特徵在於其中尺寸為10到20kDa的肽的相對量低於尺寸大於20kDa的肽的相對量，且低於尺寸為5到IOkDa的肽的相對量。因此，在特別優選的實施方式中，所述蛋白部分水解物的特徵在於其特殊的肽分布，特別是尺寸至少為5kDa的肽的分布，特別是在所述分布中尺寸大於20kDa的肽和尺寸為5到IOkDa的肽的量均高於尺寸為10到20kDa的肽的相對量，並且優選其中至少50wt%、最優選至少60wt%的肽的尺寸小於5kDa。在優選的實施方式中，所述蛋白部分水解物的特徵在於水解物中所含肽具備以下尺寸分布其中60至90wt%的肽的尺寸〈lkDa，5至20wt%的肽的尺寸為I到<2kDa，2至15wt%的肽的尺寸為2到20kDa。在優選的實施方式中，所述蛋白部分水解物的特徵在於水解物中所含肽具有以下尺寸分布85至90wt%的肽的尺寸〈lkDa, 6至10wt%的肽的尺寸為I到<2kDa, 2至6wt%的肽的尺寸為2到20kDa。
在優選的實施方式中，所述蛋白部分水解物的特徵在於水解物中所含肽具有以下尺寸分布85wt. % 為〈lkDa, 8wt. % 為 I 到 <2kDa, 4wt. % 為 2 到 <5kDa, lwt. % 為 5 到20kDa。在更優選的實施方式中，本發明的蛋白部分水解物為乳清蛋白部分水解物，更優選為3-乳球蛋白部分水解物。所述乳清蛋白部分水解物可包含或由上述天然肽組成。此夕卜，所述蛋白部分水解物可包含或由特定的和/或合成肽組成。優選地，所述肽為來自哺乳動物乳類蛋白，優選來自乳清蛋白，最優選來自P -乳球蛋白的特定肽。所述特定的P -乳球蛋白肽的分子量優選低於5kDa，尤其為0. I至4. 9kDa，優選為0. 5至4. 9kDa，更優選為2至4. 9kDa，最優選為大約2. 4kDa。優選地，所述特定P -乳球蛋白肽由12至38個￠-乳球蛋白肽胺基酸序列的胺基酸組成，更優選由15至36個胺基酸組成，甚至更優選由18至34個胺基酸組成，最優選由18個胺基酸組成。在特別優選的實施方式中，所述特定的￠-乳球蛋白肽包含選自由SEQ ID NO USEQ ID NO 2,SEQ IDNO 3和SEQ ID NO 4組成的組的序列。這些肽中的每一種肽在其C-末端、N-末端或兩端 都可以獨立地被可為任意胺基酸的I到10個胺基酸，優選I到8個胺基酸，更優選I到5個胺基酸取代。所述特定P -乳球蛋白肽的分子量優選低於5kDa，尤其為0. I至4. 9kDa，優選為0. 5至4. 9kDa，更優選為2至4. 9kDa，最優選為大約2. 4kDa。然而，在本發明的進一步的實施方式中也預見到，所述特定的￠-乳球蛋白肽並非乳清蛋白部分水解物的一部分，而特別來說是所使用的唯一蛋白質來源或者它們與除乳清蛋白部分水解物以外的成分(如游離胺基酸或廣泛水解蛋白)一起使用。通常，蛋白廣泛水解物中每IOOg蛋白質中的游離胺基酸含量大於10g。優選地，本文所用的術語「蛋白」包括肽與游離胺基酸。在本發明的優選實施方式中，所述腸道組合物優選包含基於總組合物的乾重的至少7wt%,更優選至少8wt%,優選至少9wt%,優選7到40wt%,更優選7到20wt%,特別是優選7到15wt%的蛋白部分水解物。在本發明的優選實施方式中，所述腸道組合物優選包含基於總組合物的乾重的最多40wt%，優選最多20wt%且最優選最多15wt%，優選8至15wt%，優選8至20wt%，優選8至40wt%或優選9至15wt%,優選9至20wt%或9至40wt%的蛋白部分水解物。本發明的蛋白部分水解物的特徵在於具有至少一個上述特徵或同時具有上述特徵中大多數或全部。本發明的廣泛水解蛋白涉及已水解且其中少於3wt%的肽的尺寸大於5kDa的蛋白。通常，廣泛水解蛋白已經通過蛋白酶水解和隨後在截斷值為5或3kDa的膜上過濾而進行的超濾步驟而獲得。實施例I和W00141581中第13頁第13行至第16頁第I行披露了獲得蛋白部分水解物的合適來源與方法。在本發明的背景下，所有以所示組合物整體的百分比(%)的形式給出的相對量加起來為所示組合物整體的100%。在本發明的背景下，術語「含有」、「包含」和「包括」以及它們的詞形變化在一個優選實施方式中以其非限制性含義使用，意指包括該術語後面的項目，但不排除未特別提及的項目。在本發明的背景下，術語「含有」、「包含」和「包括」以及它們的詞形變化在另一個優選實施方式中以其限制性含義使用，意指包括該術語後面的項目，且排除了未特別提及的項目，因而與術語「由……組成」及其詞形變化的含義相同。在提及本發明中特別是組合物或方法的要素時，不定冠詞「a」或「an」並不排除存在多於一個該要素的可能性，除非上下文清楚地要求有一個且只有一個該要素。因此不定冠詞「a」或「an」 一般意指「至少一個」。本發明的非消化性寡糖本發明的組合物包含非消化性寡糖。有利且最優選的是，所述非消化性寡糖溶於水(依據 L. Prosky et al, J. Assoc. Anal. Chem 71:1017-1023，1988 中所披露的方法)，且優選聚合度(DP)為2到200的寡糖。非消化性寡糖的平均DP優選低於200，更優選低於100，甚至更優選低於60，最優選低於40。非消化性寡糖在腸中並沒有被人上消化道(小腸和胃)中存在的消化酶作用而消化。非消化性寡糖通過人腸道微生物群來進行發酵的。例如，葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖和麥芽糊精均被認為是可消化的。寡糖原料可包括單糖比如葡萄糖、果糖、巖藻糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、葡萄糖醛酸和GalNac等，但在 本發明中這些並非寡糖的一部分。 本發明的組合物和方法中包含的非消化性寡糖優選包括非消化性寡糖的混合物。所述非消化性寡糖優選選自由低聚果糖如菊糖、非消化性糊精、低聚半乳糖如低聚反式半乳糖、低聚木糖、低聚阿拉伯糖、低聚阿拉伯半乳糖、低聚葡萄糖如低聚龍膽糖和環糊精、低聚葡萄甘露糖、低聚半乳甘露糖、低聚甘露糖、殼寡糖、糖醛酸寡糖、唾液酸寡糖如3-SL、6-SL、LSTa, LSTb, LSTc, DSLNT, S-LNH、DS-LNH和低聚巖藻糖如(未)硫酸化的巖藻多糖
0S、2-FL、3-FL、LNFP I、LNFP II、LNFP III、LNFP V、LNnFPI、LNDH 及其混合物所組成的組，更優選地為低聚果糖如菊糖、低聚半乳糖如3 -連接的低聚反式半乳糖、糖醛酸寡糖和低聚巖藻糖及其混合物，甚至更優選地為低聚反式半乳糖、菊糖和/或糖醛酸寡糖，最優選地為低聚反式半乳糖。當非消化性寡糖為混合物時，則用各參數的平均值來定義本發明。本發明優選提供了具有兩種不同的非消化性寡糖，S卩非消化性寡糖A和非消化性寡糖B的組合物。非消化性寡糖A和非消化性寡糖B優選含有不同類型的糖苷鍵、不同的聚合度和/或不同的單糖組成。根據本發明的優選實施方式，非消化性寡糖A中特定單糖的百分比比非消化性寡糖B中同一單糖的百分比至少高40%，優選至少高50%，更優選至少高75%，甚至更優選至少高90%。非消化性寡糖中單糖百分比的簡單計算方式可以為用非消化性寡糖中各單糖單位例如葡萄糖的數目除以該非消化性寡糖中單糖單位總數，並乘以100。如果非消化性寡糖為非消化性寡糖混合物，就必須考慮非消化性寡糖混合物中各單獨單糖單位的貢獻。非消化性寡糖混合物中單糖百分比的簡單測定方式可以為使混合物完全水解並測定各單糖的百分數。優選地，非消化性寡糖A包含至少40%(數量)的半乳糖，優選至少67%，更優選至少75%的半乳糖。優選地，非消化性寡糖B包含至少30%(數量)的果糖，更優選至少67%，甚至更優選至少80%的果糖。根據本發明的優選實施方式，非消化性寡糖A的平均DP比非消化性寡糖B的平均DP低至少5個單糖單位，優選至少10個單糖單位，甚至更優選至少15個單糖單位。優選地，非消化性寡糖A的平均DP為2-10，更優選為3-5。優選地，非消化性寡糖B的平均DP低於200，更優選11-60，甚至更優選20-30。可以優選包含有聚合度增高的非消化性寡糖。DP不同的非消化性寡糖A和B可以具有相同或不同的單糖組成。優選地，非消化性寡糖A和B具有不同的單糖組成和不同的DP。優選地,非消化性寡糖A和B累計重量中至少80wt%,更優選至少95%,最優選至少98%的DP低於60，更優選低於40，最優選低於20。DP較低可以有利地降低非消化性寡糖的粘稠度且增加其可發酵性。非消化性寡糖A和B累計重量中優選至少50wt. %，優選至少75wt. %的DP為2-8。在本發明更優選的實施方式中，非消化性寡糖A中至少一種糖苷鍵佔非消化性寡糖A中總糖苷鍵的百分比比寡糖B中同一糖苷鍵的百分比高出或低出至少40%，優選至少50%，甚至更優選至少75%。本發明中使用的術語「糖苷鍵」是指通過脫水反應而形成於兩個環狀單糖環之間的C-O-C鍵。糖苷鍵優選具有較高的多樣性。糖苷鍵的區別在於它們共價結合於單糖單位中不同編號位置的碳原子，和/或在於它們形成a或0鍵。非消化性寡糖中出現的不同糖苷鍵的例子有^ (I, 3)、a (1，4)、P (2，I)·、a (I, 2)和^ (I, 4)鍵。優選地，非消化性寡糖A中的糖苷鍵包含至少40%的P (I, 4)和/或P (I, 6)糖苷鍵，更優選至少75%。非消化性寡糖B中的糖苷鍵優選包含至少40%的P (2，I)糖苷鍵，更優選至少75%。優選地，非消化性寡糖A和B的單糖單位組成和糖苷鍵類型不同。優選地，非消化性寡糖A和B的糖苷鍵類型和DP不同。最優選地，非消化性寡糖A和B的糖苷鍵類型、單糖組成和DP都不相同。非消化性寡糖，特別是非消化性寡糖A和B的總單糖單位中優選至少60%，更優選至少75%,甚至更優選90%,最優選98%為選自由半乳糖(gal),果糖(fu)和葡萄糖(glu)組成的組中的單糖。非消化性寡糖A優選為選自由P -低聚半乳糖、a -低聚半乳糖和半乳聚糖組成的組中的單糖。依據更優選的實施方式，非消化性寡糖A為￠-低聚半乳糖。￠-低聚半乳糖有時也被稱為低聚反式半乳糖。優選地，非消化性寡糖A包含帶有P (1,4), ^ (1,3)和/或P (1,6)糖苷鍵和末端葡萄糖的低聚半乳糖。現有可用的低聚反式半乳糖為例如商品名為Vivinal GOS (Borculo Domolngredients, Zwolle, Netherlands), Bi2muno (Clasado),Cup-oligo (Nissin Sugar)和 01 igomate55 (Yakult)的產品。非消化性寡糖B優選為低聚果糖。在其他背景下，低聚果糖fructo-oIigosaccharide 也可以被稱為如果糖多聚體(fructopolysaccharides)、寡果糖(oligofructose)、聚果糖(polyfructose)、多果聚糖(polyfructan)、菊糖(inulin)、果糖膠(Ievan)和果聚糖(fructan),並且可以用來指含3 -連接的果糖單位的寡糖,該果糖單位優選由P (2，I)和/或P (2，6)糖苷鍵連接，且DP優選介於2和200之間。優選地，低聚果糖包含末端P (2，I)糖苷鍵連接的葡萄糖。優選地，低聚果糖含有至少7個￠-連接的果糖單位。在進一步優選的實施方式中，菊糖被用作非消化性寡糖B。菊糖是低聚果糖的一種，其糖苷鍵中至少75%為P (2，I)連接。典型地，菊糖的平均鏈長介於8和60個單糖單位之間。適用於本發明組合物的低聚果糖可商購，例如商品名為Raftiline HP(Orafti)的產品。其他合適的來源有 raftilose (Orafti)、fibrulose 和 fibruline (Cosucra)以及Frutafit 和 frutalose(Sensus)。作為非消化性寡糖A，最優選平均DP小於10、優選小於6的低聚反式半乳糖；作為非消化性寡糖B，最優選平均DP大於7，優選大於11，甚至更優選大於20的低聚果糖。如果本發明的腸道組合物包含非消化性寡糖A和B，非消化性寡糖A和非消化性寡糖B之間的重量比優選為1/99至99/1，更優選為1/19至19/1，甚至更優選為I至19/1。當非消化性寡糖A的DP低而非消化性寡糖B的DP相對較高時，這樣的重量比尤其具有優勢。優選地，寡糖A為低聚反式半乳糖，且寡糖B為低聚果糖。因此，根據本發明的一個實施方式，組合物包含非消化性寡糖A和B，其中非消化性寡糖A和B的區別在於i)對於基於寡糖A的總單糖單位的寡糖A的至少一種單糖的百分比，所述單糖比寡糖B中同一單糖的百分比高出至少40數量％ ;和/或ii)對於基於寡糖A的總糖苷鍵的寡糖A的至少一種糖苷鍵的百分比，所述糖苷鍵比寡糖B中同一糖苷鍵的百分比高出至少40% ;和/或iii)對於寡糖A的聚合度，寡糖A的聚合度比寡糖B的聚合度低至少5個單糖單位。在更優選的實施方式中，本發明的組合物進一步包含非消化性寡糖C。所述非消化性寡糖C包含糖醛酸寡糖。本發明中所用的術語糖醛酸寡糖是指這樣的寡糖在所述寡糖中存在的單糖單位中至少50數量％是選自由古羅糖醛酸、甘露糖醛酸、半乳糖醛酸、艾杜糖醒酸、核糖醒酸(riburonic acid)和葡萄糖醒酸組成的組中的一種。在優選實施方式中，所述糖醛酸寡糖包含基於糖醛酸寡糖中總糖醛酸單位至少50數量％的半乳糖醛酸。本發明中使用的糖醛酸寡糖優選通過果膠、果膠酸鹽、藻酸鹽、軟骨素、透明質酸、肝素、乙醯肝素、細菌碳水化合物、和/或唾液酸聚糖的降解而製備，更優選通過果膠和/或藻酸鹽的降解而製備，甚至更優選通過果膠的降解而製備，最優選通過多聚半乳糖醛酸。優選地，降解的果膠通過水解和/或3 -去除水果和/或植物果膠而製備的，更優選通過蘋果、柑橘和/或甜菜果膠而製備，甚至更優選通過經至少一種裂解酶降解蘋果、柑橘和/或甜菜果膠而製備。優選地，非消化性寡糖為半乳糖醛酸寡糖。優選地，本發明組合物包含基於所述組合物中糖醛酸寡糖總重的25wt. %和IOOwt. %之間，更優選介於50wt. %和IOOwt. %之間的DP為2到250的糖醛酸寡糖，更優選基於所述組合物中糖醛酸寡糖總重，DP為2到100，DP甚至更優選DP為2到50，最優選DP為2到20。在優選實施方式中，所述糖醛酸寡糖中至少一個末端己糖醛酸單位具有雙鍵。該雙鍵有效地保護了腸上皮細胞，使其不被病原菌附著。這對嬰兒來說是有利的。優選地，末端己糖醛酸單位之一包含C4-C5雙鍵。位於末端己糖醛酸單位的雙鍵可以通過例如裂解酶對果膠的酶促水解而獲得。糖醛酸寡糖可以由此衍生。糖醛酸寡糖可以被甲氧基化和/或醯胺化。在一個實施方式中，糖醛酸寡糖的特徵在於其甲氧基化的程度高於20%，優選高於50%，甚至更優選高於70%。本文所用的「甲氧基化程度」(也被稱為DE或「酯化度」)的意思是指糖醛酸寡糖中包含的游離羧酸基團已經被酯化比如甲基化的程度。優選地，本發明腸道組合物包含非消化性寡糖低聚反式半乳糖、低聚果糖和果膠降解產物。低聚反式半乳糖低聚果糖果膠降解產物的重量比優選為(20至2) :1: (I至3)，更優選為(12至7) :1:(1至2)。優選地，本發明涉及下述腸道組合物，其中非消化性寡糖選自由低聚果糖、低聚半乳糖和糖醛酸寡糖組成的組，其中糖醛酸寡糖優選為半乳糖醛酸寡糖。本發明腸道組合物優選包含基於所述組合物乾重0. 05至20wt. %的總非消化性寡糖，更優選0. 5至15wt. %,甚至更優選I至IOwt. %,最優選2. 0至IOwt. %的總非消化性寡糖。基於100ml，本發明的腸道組合物基於IOOml所述組合物優選包含0. 01至2. 5wt. %的總非消化性寡糖，更優選包含0. 05至I. 5wt. %，甚至更優選包含0. 25至I. 5wt. %的總非消化性寡糖。腸道組合物本發明涉及非消化性寡糖用於增強蛋白部分水解物誘導的對膳食蛋白的口服耐受性，優選在本發明的腸道組合物中，所述蛋白部分水解物的特徵在於其所含肽中至少 3wt%的肽的尺寸為5kDa或更高,且至少50wt. %的肽的尺寸小於5kDa。本發明涉及非消化性寡糖用於增強蛋白部分水解物對膳食蛋白的初級過敏預防作用，在本發明的腸道組合物中，所述蛋白部分水解物的特徵在於其所含肽中至少3wt%的肽的尺寸為5kDa或更高,且至少50wt. %的肽的尺寸小於5kDa。本發明涉及包含優選根據本發明的非消化性寡糖和至少一種蛋白部分水解物的腸道組合物，其中所述蛋白部分水解物為乳清蛋白部分水解物，且其中所述非消化性寡糖為低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物。優選地，所述腸道組合物的蛋白部分水解物的特點在於其所含肽中至少3wt%的肽的尺寸為5kDa或更高，且至少50wt. %的肽的尺寸小於5kDa。本發明的腸道組合物優選為營養組合物。優選地，所述腸道組合物用於口服。如以上所說明的，本發明的腸道組合物包含蛋白部分水解物和非消化性寡糖。在優選實施方式中，本發明的腸道組合物包含a)基於組合物乾重的至少5wt.%的乳清蛋白部分水解物或至少5wt.%的所述至少一種￠-乳球蛋白肽；和《基於組合物乾重至少1被％的低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖之和，其中優選低聚半乳糖低聚果糖半乳糖醛酸寡糖的重量比為(20-4) : (0. 5-2) : I。此外，本發明所述的腸道組合物還可進一步包含脂類(也稱為脂類組分)，特別是脂肪。本腸的腸道組合物優選包含作為脂類的植物脂類和/或海洋生物油類，如藻類油類、細菌油類、動物油類、植物油類或魚油類。在更優選的實施方式中，本發明的腸道組合物除非消化性寡糖之外還包含其他碳水化合物組分，如消化性碳水化合物，優選乳糖。在本發明的更優選實施方式中，所述腸道組合物除蛋白部分水解物以外還包含其他蛋白組分，如未水解的蛋白，或優選蛋白廣泛水解物。因此，在本發明的優選實施方式中，本發明的腸道組合物包含包括蛋白部分水解物在內的蛋白組分，包括非消化性寡糖在內的碳水化合物組分，脂質組分，和任選的液態溶劑，如水。本發明的組合物優選包含基於總蛋白乾重的至少50wt.%的動物性乳類來源的蛋白組分，更優選至少90wt.%。優選地，本發明的組合物包含均基於總蛋白乾重的至少50wt. %牛奶來源性蛋白，更優選至少90wt. %。優選地，本發明的組合物包含源於糖巨肽(glycomacropeptide) dl濃度降低的酸乳清和/或甜乳清的蛋白。通常，分子量為8000Da的糖巨肽(GMP)是源自酪蛋白的乳清蛋白，其含有K-酪蛋白中第106-169個胺基酸殘基，並且通過腎素(凝乳酶)的水解作用從K-酪蛋白中釋放出來。優選地，本發明的腸道組合物包含源自￠-酪蛋白、￠-乳球蛋白和/或a-乳白蛋白的蛋白質。在本發明的另一實施方式中，所述蛋白為跳ii、大ii和/或稻蛋白。優選地，本發明的腸道組合物包含乳清蛋白部分水解物和酪蛋白部分水解物。酪蛋白部分水解物和乳清蛋白部分水解物優選以酪蛋白乳清的重量比為10:90到90:10存在，更優選為20:80到80:20。本發明的腸道組合物優選包含酪蛋白水解物和乳清蛋白水解物兩者，這是因為牛酪蛋白的胺基酸組成與人乳蛋白的胺基酸組成更為近似，並且乳清蛋白更加易於消化並以更高的比例存在於人乳中.本發明的腸道組合物優選包含基於總熱量的5到25%的蛋白，優選7至25%，優選 5至20%，優選5至16%，優選5至12%的蛋白。總熱量數值可以根據可消化的碳水化合物、脂肪和蛋白的量來計算。基於100ml，本發明的腸道組合物優選包含基於IOOml本發明的組合物0.5至
2.5wt. %白勺蛋白質，更優選0. 05至I. 5wt. %,甚至更優選I至3wt. %。本發明中所用的術語「蛋白」指的是蛋白、肽和游離胺基酸的總和。本發明的腸道組合物中，每IOOml即食組合物優選包含0. 5到6. Og蛋白，更優選
I.0到3. 0g，甚至更優選I. 0到2. 5g蛋白。本發明的腸道組合物優選包含基於總組合物乾重至少7. Owt. %的蛋白，更優選至少8. Owt. %,最優選至少9. Owt. %或至少10. Owt. %的蛋白。優選地，本發明的腸道組合物包含基於總組合物乾重最多40wt. %的蛋白，更優選最多15wt%，優選最多20wt%的蛋白。基於本發明腸道組合物乾重的蛋白wt. %可以依據Kjeldahl法通過測量總氮量來計算，優選對於酪蛋白，所用換算因數為6. 38，對於酪蛋白以外的其他蛋白，則使用6. 25作為換算因數。本發明的腸道組合物優選包含基於本發明腸道組合物總蛋白乾重至少50wt. %，優選至少80wt. %，尤其是90wt. %，更優選100%的本發明蛋白部分水解物。本發明腸道組合物中每IOOg蛋白優選包少於IOg,更優選少於7g的游離胺基酸。相對較低的胺基酸含量可以產生低滲透壓，並可因此防止胃腸道/消化系統的紊亂，如腹瀉。低游離胺基酸含量還進一步具有減少苦味的作用；游離胺基酸賦予配方奶粉苦味。此外，與肽相比，腸道對游離胺基酸的吸收較差。因此，優選限制本發明腸道組合物中游離胺基酸的量。本發明腸道組合物優選還包含脂質組分和蛋白組分且優選包含消化性碳水化合物組分，所述脂質優選為脂肪，其優選提供了 30到60%的總熱量，所述蛋白組分優選提供5到20%，更優選5到15%的總熱量，而消化性碳水化合物成分優選提供25到75%的總熱量。優選地，本發明的組合物所包含的脂質組分提供35到50%的總熱量，蛋白組分提供6到12%的總熱量，而消化性碳水化合物組分則提供40到60%的總熱量。熱量總量由來源於蛋白、脂質和消化性碳水化合物的熱量總和決定。
本發明的組合物不是人母乳。優選地，本發明的腸道組合物不包含活的或死的益生菌，特別是雙歧桿菌或乳酸菌。優選地，本發明的腸道組合物不包含生長因子和/或細胞因子。優選地，本發明的腸道組合物不含TGF，特別是TGF-3。本發明中的組合物優選包含其他組分，如維他命和/或礦物質，其優選符合有關嬰兒配方奶粉的國際規定。在一個實施方式中，本發明的腸道組合物為幹形式，例如粉末，其經水溶液優選用水重溶後適合用來製備液態組合物。優選地，所述腸道組合物為粉末，優選用水重溶。為了滿足嬰兒對熱量的需求，在本發明的腸道組合物中，每IOOml液體優選包含50到200卡路裡，更優選每IOOml液體包含60到90卡路裡，甚至更優選每IOOml液體包含60到75卡路裡。這種熱量密度確保了水與熱量消耗之間的比例為最佳。本發明的組合物的滲透壓優選介於150和420m0smol/l之間，更優選介於260和320m0smol/l之間。低滲透壓的目的在於降低胃腸壓力。壓力可誘發脂肪細胞的形成。優選地，本發明的腸道組合物為液體形式，優選用Brookfield粘度計在20° C且剪切率為lOOs—1的條件下所測得的粘稠度低於35mPa. s，更優選低於6mPa. S。適合地，本發明的腸道組合物的形式為粉末狀，優選可用水將其重溶從而形成液體或濃縮液形式，濃縮液應在水中稀釋。當本發明的腸道組合物為液體形式時，優選的日服用體積為每天約80到2500ml，更優選每天約450到1000ml。應用本發明所述的腸道組合物優選用於嬰兒，即為嬰兒營養組合物。因此，優選在生命的頭三年給受試對象服用本發明的腸道組合物。優選地，本發明的組合物為嬰兒配方奶粉或後續配方奶粉(follow-on-formula)，或為幼兒奶粉，以用於年長於嬰兒的人群。在本發明所述用途的一個實施方式中，所述腸道優選營養組合物用於餵養或將該組合物用於餵養年齡在0到36個月的受試對象。本發明的腸道組合物被有利地施用於0到24個月的人，更優選0到18個月的人，最優選0到12個月的人。優選地，本發明的腸道組合物用於預防食物過敏症。優選地，本發明的腸道優選營養組合物提供人體日常所需的營養，組合物特別用於施用於人尤其是哺餵給人，尤其是包括較大幼兒(toddler)在內的嬰幼兒，優選具有發生過敏特別是具有產生過敏症狀的風險的人群。在本發明中，術語「耐受性」應理解為特定的免疫無應答狀態。體液(抗體)和細胞介導(淋巴細胞)的免疫應答途徑都可被耐受性誘導抑制。口服耐受性的破壞被認為是食物過敏的根本原因。口服免疫耐受性是指預先通過口服途徑施用抗原而產生的對針對該抗原的細胞和/或體液免疫反應的特異抑制，其很可能已演變為對食物蛋白的超敏反應的預防。由於口服免疫耐受性是受外源性抗原驅使的持續的天然免疫事件，其具有極大的免疫學意義。由於持續接觸黏膜的抗原具有進入內部環境的特權，它們代表了在異體組分和自體組分之間的界限。口服免疫耐受性已演變為將通過自然途徑獲得進入身體的途徑的外部物質當作內部組分，而不會產生危險信號，且所述外部物質隨後成為自體的一部分。口服免疫耐受性的失效可歸咎於幾種基於免疫學疾病的發病和發展，所述疾病包括食物過敏症和炎症性腸道疾病，特別是克羅恩病和潰瘍性結腸炎。在本發明中誘導或獲得了耐受性，在此過程中可以通過操控免疫系統產生針對外部抗原的耐受性。獲得或誘導的耐受性指的是免疫系統對外界抗原的適應，其特徵在於淋巴組織對給定抗原的特異無反應性，而在其他條件下，該抗原則極有可能誘導細胞介導的免疫或體液免疫。本發明的腸道組合物優選用於誘導優選人特別是嬰兒的口服耐受性，優選用於誘導免疫耐受性，最優選用於誘導口服免疫耐受性。因此，在本發明的優選實施方式中，用於誘導口服耐受性的本發明的腸道組合物尤其可用於預防，優選初級預防食物過敏，優選牛奶過敏和/或特應性疾病的發展，如特應性溼疹、過敏性鼻炎、特應性皮炎或哮喘。本發明的腸道組合物優選用於誘導耐受性，優選用於誘導人體口服耐受性，特別是針對具有產生過敏症的風險，尤其是具有產生食物過敏症的風險，尤其是食物過敏症的症狀的嬰兒。在進一步優選的實施方式中，本發明的腸道組合物為低致敏性腸道組合物。在本發明具有優選的實施方式中，本發明的腸道組合物優選用於預防或治療炎症性腸道疾病。經本文鑑定適合併經設計用於本發明的用途的所有組合物和物質均應被認為也適合併經設計用於治療方法或餵養受試對象的方法，特別是有需要的人類受試對象。進一步優選的實施方式為從屬權利要求的主體。下面還將通過非限制性實施例進一步說明本發明。實施例1:在蛋白過敏症小鼠模型中，非消化性寡糖協同增強了部分水解蛋白誘導針對蛋白的口服耐受性的能力。乳清獲自國際DMV(費赫爾，荷蘭)。乳清蛋白部分水解物(PWH)由達能專業營養研究中心(Danone Research Centre for Specialised Nutrition)按照以下具體條件通過酶促水解產生。將19. 5kg溫度為12 ° C的脫礦質水(以下稱為「demi水」)放入容器中，並將其與 4.1kg 脫礦質乳清(Deminal, Friesland Foods Domo)和1. 41kg 的lactalisNutr1-whey800 (DMV Campina)混合 30 分鐘。將溶液於78° C熱處理2分鐘。熱處理後，將產物冷卻至60° C。將15. 6g Ca (OH)2U. 84g Mg (OH)2,16.1g KOH 和 15. 25g NaOH 溶解於 235ml 脫礦質水中以得到鹼性溶液。在水解池中裝入12kg經過熱處理的乳清溶液並攪拌。將溫度保持在58° C。用所述鹼性溶液將水解池中的pH值調節至7. 75。將16. 8g鹼性蛋白酶(Alcalase)和3. 8g風味蛋白酶(Flavourzyme)混合併快速加入到發酵罐中。用所述鹼性溶液將PH值調節至7. 75。進行水解180分鐘。用快速降溫結束酶解過程並將溶液冷凍。用尺寸排阻高壓液相色譜法分析所得肽以進一步鑑定pWH。尺寸分布如下85wt.% 為〈lkD，8wt. % 為 I 到 <2kDa, 4wt. % 為 2 到 20kDa。3到4周大的無病原體雌性C3H/He0uJ小鼠購自Charles River實驗室(馬斯垂克，荷蘭)，並飼以不含牛奶蛋白的標準小鼠食物(AIN-93G soy, Special DietsServices, ffitham, Essex, UK)。
對小鼠飼以對照組飼料(下表I)並在第0、7、14、21和28天用含有勻漿於PBS (0. 5ml, Cambrex Bio Science,韋爾維耶，比利時)中且混合有作為佐劑的10 ii g霍亂毒素(Quadratech Diagnostics,埃普瑟姆,英國)的乳清蛋白(每隻動物20mg)的鈍頭針口服敏化。未敏化小鼠則只接受霍亂毒素。在使用乳清蛋白敏化之前，用作為對照的PBS或50mg pWH對小鼠進行口服預處理(從第-7天到第-2天，每天進行)。為了研究包含非消化性寡糖的飼料對PWH誘導口服耐受性的影響，小鼠被飼以飼料(包含總和為2wt. %的反式半乳糖寡糖(來源為Vivinal-GOS)、低聚長鏈果糖(F0S，來源為RaftilinHP)和半乳糖醛酸寡糖(A0S，果膠溶解產物)的AING-93G soy)(下表I)。表I:小鼠飼料
g/ IOkg食物飼料#飼料# __Pl (對照)__P2 (GFA)_
碳水化合物___
_玉米澱粉__4769,820__4719,708_
糊精化玉米澱粉__1549,488__1549,488_
___1163,892__1163,892_
纖維來源(纖維素)__600,000__480,000_
___36,108__
_葡萄糖__34,512__
GOS/FOS___216,000_
_AOS___24,000_
_蛋白質___
_大豆蛋白__2400,000__2400,000_
L-半胱氨酸__36,000__36,000_
權利要求
1.腸道組合物，其包含非消化性寡糖和至少一種蛋白部分水解物，其中所述蛋白部分水解物為乳清蛋白部分水解物，並且其中所述非消化性寡糖為低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物。
2.如權利要求I所述的腸道組合物，其用於誘導對膳食蛋白的口服耐受性或用於預防食物過敏症或炎症性腸道疾病。
3.如權利要求I或2所述的腸道組合物，其中所述乳清蛋白部分水解物為￠-乳球蛋白部分水解物。
4.如權利要求I至3中任一項所述的腸道組合物，其中所述乳清蛋白部分水解物為天然的或合成的。
5.如權利要求I至4中任一項所述的腸道組合物，其中所述乳清蛋白部分水解物包含至少一種￠-乳球蛋白肽，所述￠-乳球蛋白肽包含選自如下的序列SEQ ID NO USEQ IDNO 2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4，其中，所述肽的分子量優選小於5kDa。
6.腸道組合物，其包含非消化性寡糖和至少一種￠-乳球蛋白肽，其中所述非消化性寡糖為低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物，所述3 -乳球蛋白肽包含選自如下的序列SEQ ID NO I、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4，其中，所述肽的分子量優選小於5kDa，用於預防食物過敏症或炎症性腸道疾病。
7.腸道組合物，其包含非消化性寡糖和至少一種￠-乳球蛋白肽，其中所述非消化性寡糖為低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物，所述3 -乳球蛋白肽包含選自如下的序列SEQ ID NO I、SEQ ID NO 2、SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4，其中，所述肽的分子量優選小於5kDa，用於誘導對膳食蛋白的口服耐受性。
8.如權利要求5至7中任一項所述的腸道組合物，其中所述至少一種￠-乳球蛋白肽可在其C-末端和/或N-末端獨立地被I至10個任意胺基酸取代。
9.如權利要求I至4中任一項所述的腸道組合物，其中所述乳清蛋白部分水解物的特性在於,其所含肽中至少3wt%的肽的尺寸為5kDa或更高，且至少50wt%的肽的尺寸小於5kDa0
10.如權利要求I至4或9中任一項所述的腸道組合物，其中所述乳清蛋白部分水解物中肽的尺寸分布為60至90%〈lkDa，5至20%為I至<2kDa，2至16%為2至<5kDa，0. 6至3%為5至20kDa(基於蛋白部分水解物中存在的肽的乾重)。
11.如權利要求I至4、9或10中任一項所述的腸道組合物，其中所述乳清蛋白部分水解物的特性在於，尺寸為2至<5kDa的肽的相對量(wt%)與尺寸為至少5kDa的肽的相對量之間的比例為(5至I): 1，優選為(4至I): I。
12.如權利要求I至11中任一項所述的腸道組合物，其中所述組合物包含蛋白組分、月旨類組分和消化性碳水化合物，並且其中存在的所述蛋白組分的含量為基於所述組合物總熱量的5%至25%。
13.如權利要求I至12中任一項所述的腸道組合物，其中所述組合物包含基於組合物總乾重的0. 05至20wt%的非消化性寡糖。
14.如權利要求I至13中任一項所述的腸道組合物，其包含 a)基於所述組合物乾重，至少5wt%的乳清蛋白部分水解物或基於所述組合物乾重的至少5wt. %的至少一種P -乳球蛋白肽；和 b)基於所述組合物乾重，至少1被％的低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖之和，其中低聚半乳糖低聚果糖半乳糖醛酸寡糖的重量比為(20-4) : (0. 5-2) : I。
15.如權利要求I至14中任一項所述的腸道組合物，其為嬰兒配方奶粉或後續配方奶 粉。
16.用於製備如權利要求I至15中任一項所述的口服耐受性誘導作用增強的腸道組合物的方法，其中將至少一種乳清蛋白部分水解物或至少一種P-乳球蛋白肽和至少一種非消化性寡糖混合在一起，並獲得口服耐受性誘導作用增強的組合物，其中所述非消化性寡糖為低聚半乳糖、低聚果糖和半乳糖醛酸寡糖的混合物。
全文摘要
本發明提供了含有部分水解的蛋白和非消化性寡糖的嬰兒營養品，用於誘導對天然膳食蛋白的口服耐受性。
文檔編號A23L1/308GK102984958SQ201180027538
公開日2013年3月20日 申請日期2011年6月1日 優先權日2010年6月4日
發明者利昂·馬蒂厄·約翰內斯·克尼佩爾斯, 伊莉莎白·卡塔裡娜·阿德裡安娜·馬裡亞·范埃施, 約翰·加森 申請人:N.V.努特裡奇亞