用於疫苗的草肽的製作方法

2023-07-21 01:21:01 3

專利名稱：用於疫苗的草肽的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於預防或治療草過敏症的組合物。
背景技術：
T細胞抗原識別需要抗原呈遞細胞(APC)在其細胞表面上呈遞與主要組織相容性複合物(MHC)的分子締合的抗原片段(肽)。T細胞使用其抗原特異性T細胞受體(TCR) 來識別由APC呈遞的抗原片段。這樣的識別作為免疫系統的觸發器起作用來產生一系列應答以根除已被識別的抗原。生物體如人類的免疫系統對外部抗原的識別可在某些情況下造成疾病，其被稱作特應性疾患。後者的實例是過敏性疾病，包括哮喘、特應性皮炎和過敏性鼻炎。在這一組疾病中，B淋巴細胞產生對外源產生的抗原結合的IgE類抗體(在人類中)，所述抗原在本文稱為過敏原，因為這些分子引發過敏響應。過敏原特異性IgE的產生依賴於也被過敏原活化(並對其有特異性)的T淋巴細胞。藉助於諸如嗜鹼性粒細胞和肥大細胞等細胞對IgE 表面受體的表達，過敏原特異性的IgE抗體結合到這些細胞表面。過敏原對結合在表面的IgE分子的交聯造成這些效應細胞脫粒，導致炎症介質諸如組胺、5-羥色胺和脂質介質如硫橋白三烯(sulphidoleukotriene)的釋放。除了 IgE依賴性事件，某些過敏性疾病諸如哮喘的特徵為IgE獨立性事件。目前用提供症狀緩解或預防的劑來治療IgE介導的過敏性疾病。這種劑的實例是抗組胺劑、β 2激動劑和糖皮質類固醇。此外，通過包括過敏原成分或提取物的定期注射的去敏化程序來治療一些IgE介導的疾病。去敏化治療可誘導與IgE競爭過敏原的IgG響應， 或可誘導阻斷針對過敏原的IgE的合成的特定抑制性T細胞。這種形式的治療不是總有效， 並且具有激起嚴重副作用特別是一般過敏性休克的風險。這可以是致命的，除非立即意識到並用腎上腺素治療。將減少或消除針對特定過敏原的不想要的過敏-免疫應答而不改變對其它外來抗原的免疫反應性或觸發本身過敏響應的治療性處理將對過敏個體大有益處。普遍認為，草過敏原是包括哮喘、過敏性鼻炎和過敏性皮炎在內的人類和動物過敏性疾病的主要原因。存在於草花粉中的蛋白是尤其重要的。例如，約90%的乾草熱患者對草花粉過敏。乾草熱是一種形式的季節性過敏症的統稱，其特徵是打噴嚏、流鼻涕和眼睛發癢。術語「乾草熱」源於該形式的變應性疾病在「割乾草季節」中最為流行，該季節與許多草的花期相應，此時禾本植物釋放最大量的花粉。其在夏季尤其流行，通常從5月末到8 月末(在北半球)。在美國，據計算乾草熱對於成人是第五位的主要慢性病並是缺勤的主要原因，這導致每年失去或減少近4百萬個工作日，導致總生產力損失方面超過$7億的總損失。過敏症還是兒童中最常報導的慢性病症，對於40%以上的兒童，限制了其活動。每年，過敏症在美國導致了 17，000，000次以上的門診就診；這些過敏症就診的一半以上是因諸如乾草熱的季節性過敏症導致的。因此治療性或預防性治療將對患有草過敏症的人或處於患草過敏症的風險的人具有極大益處。發明概述通常將草花粉過敏原分組，在每一組中絕大多數物種表達至少一種花粉過敏原。 組的例子包括-組1草花粉過敏原，其包括，例如，來自黑麥草(Loliumperenne)的蛋白Lol ρ 1和來自貓尾草(Phleum pratense)的蛋白Phl ρ 1 ；和-組5草花粉過敏原，其包括，例如，來自黑麥草的蛋白Lolρ fe和蛋白Lol ρ 5b， 來自貓尾草的蛋白Wil P 5，和來自狗牙根(Cynodon dactylon)的蛋白Cyn d 5。本發明人已發現，來源於草物種的花粉中的主要過敏原的某些肽片段在使得個體對這些過敏原的去敏化中尤其有用。已篩選了本發明的多肽組合結合許多MHC II類分子的能力，和以極小的組胺釋放引起T細胞增殖的能力。因此可將本發明的組合物、產物、載體和製劑提供給個體以通過免疫耐受作用(tolerisation)來預防或治療過敏症。通過使用預測肽-MHC相互作用的計算機模擬分析和MHC II類結合分析，選擇作為 MHC II類-結合T細胞表位的本發明的肽。通過同源性來鑑定另外的表位。在體外T細胞響應分析的基礎上對本發明的肽和肽組合進行進一步選擇。然而，本發明的肽組合通過靶向多種不同MHC分子而提供對人類人群覆蓋面廣泛的效力。因此，以本發明的肽配製的疫苗將具有廣泛的應用。本發明人的工作產生了具有以下特徵的肽組合-該組合結合許多不同MHCII類分子-該組合在草過敏個體中顯著刺激細胞因子釋放-該組合的肽不引起顯著的組胺釋放。從廣泛分析的草表位序列中選擇肽組合物以鑑定在草過敏個體中具有特別良好的MHC結合性質和細胞因子響應特徵的核心肽。該組合可包括三個這樣的肽的核心，其中每一個選自最普遍的草，貓尾草、黑麥草和狗牙根。該組合可包括四種這樣的肽的核心，這些肽中的每一種選自在肽的相互組合中表現為特別有效的肽。以這種方式提供肽的核心組，其包括代表三種最普遍的草的多肽的核心組，優選同一組合中的四種或多種不同的單獨的多肽提供各種MHC結合表位，並從而構建冗餘性以允許MHC的多態性性質。提供本發明的核心組，優選具有特別良好的MHC結合性質和細胞因子響應特徵的四種或多種不同的單獨的多肽提供了多種T細胞表位，允許為了誘導免疫耐受性而募集寬泛範圍的T細胞特異性。因此，本發明的組合物具有超越使用單獨多肽的有利額外作用。本發明人也已證明通過細胞因子響應測量，本發明的組合物能夠提供對多態性研究群體的極高覆蓋。因此，本發明提供了適用於通過免疫耐受作用預防或治療草花粉過敏症的組合物，該組合物包括
(a)多月太 Tim07B(KIPAGELQIIDKIDA)、Tim IOB (KYTVFETALKKAITAMSE)、Tim 04A (WGAIffRIDTPDKL), Tim 07G (FKVAATAANAAPANDK)、或其任何一種的變體中的至少一種；(b)多肽 BerO 1 (SGKAFGAMAKKGQED)、Ber02 (FIPMKSSWGA)、 Ber02C (KSSffGAIffRIDPKKPLK)和 Ber 02B(KDSDEFIPMKSSWGAIWR)、或其任何一種的變體中的至少一種；和(c)多肽 Bio04A (LKKAVTAMSEAEK)、Rye09B (PEVKYAVFEAALTKAIT)、 Bio02A (KYDAYVATLTEALR)、Bio03A (KFIPTLVAAVKQAYAAKQ)、Rye 08A (ETYKFIPSLEAAVKQAY)、 Rye 05C (NAGFKAAVAAAANAPPK)、或其任何一種的變體中的至少一種，其中所述變體是I)長度為最多30個胺基酸的較長的多肽，其包括(a)、(b)或(c)中指定的相應多肽的序列，或II)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括與(a)、(b)或(c)中指定的相應多肽的序列具有至少65%同源性的序列，該序列能夠使得免疫耐受所述相應多肽；或III)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括(a)、(b)或(c)中指定的相應多肽的序列中至少9個連續胺基酸的序列，或與所述至少9個連續胺基酸具有至少65%同源性的序列，所述至少9個連續胺基酸的序列或同源性序列能夠使得免疫耐受所述相應的多肽。本發明還包括適用於通過免疫耐受作用預防或治療草花粉過敏症的組合物，該組合物包括至少四種不同的選自以下的多肽(a) TimO7B (KIPAGELQIIDKIDA)或其變體；(b) BerOl(SGKAFGAMAKKGQED)或其變體；(c) Bio04A (LKKAVTAMSEAEK)或其變體；(d) Rye09B (PEVKYAVFEAALTKAIT)或其變體；(e) BerO2 (FIPMKSSffGA)或其變體；(f) Ber02C (KSSffGAIffRIDPKKPLK)或其變體；(g) Bio03A (KFIPTLVAAVKQAYAAKQ)或其變體；和(h) Bio02A (KYDAYVATLTEALR)或其變體；其中所述變體是I)長度為最多30個胺基酸的較長的多肽，其包括(a)至(h)中指定的相應多肽的序列，或II)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括與(a)至(h)中指定的相應多肽的序列具有至少65%同源性的序列，該序列能夠使得免疫耐受所述相應多肽；或III)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括(a)至(h)中指定的相應多肽的序列中至少9個連續胺基酸的序列，或與所述至少9個連續胺基酸具有至少65%同源性的序列，所述至少9個連續胺基酸的序列或同源性序列能夠使得免疫耐受所述相應的多肽。本發明的組合物通常能夠使得群體中一組草花粉過敏性個體的至少50%或至少 60%免疫耐受，和/或包括至少一種另外的多肽，最多總共14種多肽，其中所述另外的多肽(a)包括與以下所描述的SEQ ID NO :1至73的任何一種中的至少9個或更多個連續胺基酸具有至少65%序列同一性的序列；和(b)長度為9至30個胺基酸。本文提及的序列的描述
SEQ ID NO :1至73提供如表2至4列出的本發明的多肽序列。SEQ ID NO. 1至27 對應於來自組1草過敏原的肽。SEQ ID NO. 28至73對應於來自組5過敏原的肽。發明詳述本發明涉及可用於免疫耐受作用的肽。這樣的肽可來源於本文所描述的任何草過敏原或是如以下所描述的其變體。與基於肽免疫作用的去敏化方法相關的困難是如何選擇過敏原的適當的大小和區域以作為用於免疫作用的肽的基礎。選擇的肽的大小是關鍵的。如果肽過小，疫苗可能不會有效誘導免疫應答。如果肽過大，或如果將全抗原導入到個體中，存在誘導有害反應的風險，比如過敏性反應，這可能是致命的。已經選擇本發明的肽以保留T細胞特異性，而同時尺寸足夠小以不具有顯著的三級結構，這將使其能夠保留完整分子的IgE結合表位的構象。因此本發明的多肽不會引起細胞上鄰近特異性IgE分子的顯著性交聯且因此不會導致顯著的組胺釋放，所述細胞比如肥大細胞和嗜鹼性粒細胞。本發明的優勢是肽能夠寬泛地靶向主要組織相容性複合物(MHC)分子的能力。T 細胞受體(TCR)的特異性是高度可變的。如抗體分子一樣，通過細胞內的基因重組事件產生了可變性。TCR識別與由主要組織相容性複合物(MHC)的基因編碼的分子結合的短肽形式的抗原。這些基因產物是同樣的分子，產生用於移植的「組織類型」，且還被稱為人類白細胞抗原分子(HLA)，這些術語可被互換地使用。單獨的MHC分子具備肽結合溝，由於它們的形狀和電荷其只能夠結合有限的一組肽。被一個MHC分子結合的肽可能不一定被其它MHC 分子結合。當蛋白分子諸如抗原或過敏原被抗原呈遞細胞諸如B淋巴細胞、樹突細胞、單核細胞和巨噬細胞吸收時，該分子在細胞中被酶促降解。降解過程產生所述分子的肽片段，如果它們具有合適的大小、電荷和形狀，則可能結合到某些MHC分子的肽結合溝之內，並隨後展示在抗原呈遞細胞表面上。如果肽/MHC複合物以足夠數量呈遞在抗原呈遞細胞表面上， 則它們可能活化帶有合適的肽/MHC特異性T細胞受體的T細胞。由於MHC的多態性質，遠系繁殖群體諸如人類中的個體將在其細胞表面上表達不同組合的MHC分子。由於不同MHC分子可基於肽的大小、電荷和形狀而結合來自同一分子的不同肽，不同個體將展示與其MHC分子結合的不同庫的肽。鑑定遠系繁殖群體諸如人類中的通用MHC-結合肽表位比在近親繁殖的動物(諸如實驗小鼠的某些品系)中更困難。基於個體之間MHC的差異表達以及其帶來的肽結合與呈遞的固有差異，不太可能鑑定可用於人類去敏化治療的單種肽。如以下所討論的，本發明通過提供基於一種以上的肽的組合物，即肽組合，而解決該問題。這些組合以肽的核心組為基礎，這些肽當被單獨檢驗時，實驗上鑑定為在草過敏性患者中表現出令人驚奇地強的響應，且當以組合來提供時，響應尤其強。當肽的這些核心亞組被包括在草肽疫苗中時具有有利的性質。核心組可包括至少一種來源於貓尾草的肽，至少一種來源於黑麥草的肽和至少一種來源於狗牙根的肽，每種肽顯示了特別良好的單獨的響應特性。將這些肽包括在組合中允許覆蓋三種最普遍的草，並且如以下所進一步討論地，通過同源性另外擴及覆蓋其它的草。另外，核心組可包括至少四種肽，該肽選自在檢驗的組中具有高等級的單獨響應
9特性且被進一步證明當一起組合來提供時為草疫苗提供最優響應特性的肽。這樣的肽組合優選地包括至少一種來源於組I草過敏原的肽或其變體和至少一種來源於組V草過敏原的肽或其變體。草過敏原分類為組I草過敏原和組V草過敏原是技術人員所熟知的，且在本文中被進一步討論。優選的組I草過敏原是狗牙根過敏原，Cyn d 1。優選的組V過敏原是黑麥草過敏原，Lol ρ 5。在一些實施方案中，本發明涉及包括至少一種來源於Cyn dl的肽或其變體和至少一種來源於Lol ρ 5的肽或其變體。基於Cyn d 1 肽和Lol ρ 5肽或它們的變體的組合的組合物在以下被進一步討論。本發明的優選的肽可包括SEQ ID NO :1至73的任何一個中所示的序列，可由SEQ ID NO 1至73的任何一個中所示的序列組成，或可基本上由SEQ ID NO 1至73的任何一個中所示的序列組成。這些特定肽的變體也可被使用。變體可包括作為SEQ ID N0:1至 73的任何一個的片段或SEQ ID NO :1至73的任何一個的同源物的序列，可由作為SEQ ID NO :1至73的任何一個的片段或SEQ ID NO :1至73的任何一個的同源物的序列組成，或可基本上由作為SEQ ID NO :1至73的任何一個的片段或SEQ ID NO :1至73的任何一個的同源物的序列組成。這樣本發明提供了適用於通過免疫耐受作用預防或治療草花粉過敏症的組合物， 該組合物包括(a)多肽 Tim07B(KIPAGELQIIDKIDA)、Tim IOB (KYTVFETALKKAITAMSE)、Tim 04A (WGAIffRIDTPDKL), Tim 07G (FKVAATAANAAPANDK)、或其任何一種的變體中的至少一種；(b)多肽 BerO 1 (SGKAFGAMAKKGQED)、Ber02 (FIPMKSSWGA)、 Ber02C (KSSffGAIffRIDPKKPLK)和 Ber 02B KDSDEFIPMKSSWGAIWR、或其任何一種的變體中的至少一種；(c)多肽 Bio04A (LKKAVTAMSEAEK)、Rye09B (PEVKYAVFEAALTKAIT)、 Bio02A (KYDAYVATLTEALR)、Bio03A (KFIPTLVAAVKQAYAAKQ)、Rye 08A (ETYKFIPSLEAAVKQAY)、 Rye 05C (NAGFKAAVAAAANAPPK)、或其任何一種的變體中的至少一種，其中所述變體是I)長度為最多30個胺基酸的較長的多肽，其包括(a)、(b)或(c)中指定的相應多肽的序列，或II)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括與(a)、(b)或(c)中指定的相應多肽的序列具有至少65%同源性的序列，該序列能夠使得免疫耐受所述相應多肽；或III)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括(a)、(b)或(c)中指定的相應多肽的序列中至少9個連續胺基酸的序列，或與所述至少9個連續胺基酸具有至少65%同源性的序列，所述至少9個連續胺基酸的序列或同源性序列能夠使得免疫耐受所述相應的多肽。a)至C)的其它優選的變體是i)具有9至30個胺基酸的長度且包括由以下組成的區域的多肽-a)至c)的對應序列中的任何一種，或-與a)至c)的對應序列中的任何一種具有至少65 %同源性的序列，該序列能夠使個體免疫耐受a)至c)的序列中的任何一種，或 ii)具有9至30個胺基酸的長度且包括由代表以下任何一種的序列組成的區域的多肽
-a)至C)的序列中的任何一種的片段，或-a)至C)的序列中的任何一種的片段的同源物，所述序列能夠使個體免疫耐受a)至C)的序列中的任何一種，且具有至少9個胺基酸的長度，且其中所述同源物與a)至c)的序列中的任何一種中的任何9個連續胺基酸具有至少65%的同源性；其中任選地，四個多肽中無一是由a)至c)的任何一個所定義的同一原始序列的變體。因而組合物至少包括三種多肽，第一多肽是a)的多肽或其變體，第二多肽是b)的多肽或其變體，第三多肽是c)的多肽或其變體。這樣，例如組合物可包括Tim07B的變體、 BerOUP Rye09B的變體。優選地，以上組合物除核心三種多肽之外包括a)、b)或c)或其任何一個的變體的第四多肽。組合物可包括a)、b)或c)或其變體的四種、五種、六種、七種、八種或以上的多肽。在一些方面，組合物可包括a)或其變體的兩種、三種、四種或更多種多肽。在另外的方面，組合物可包括b)或其變體的兩種、三種、四種或更多種多肽。在其它的方面，組合物可包括c)或其變體的兩種、三種、四種、五種、六種或更多種多肽。這些選擇以組合物包括a)或其變體的至少一種多肽、b)或其變體的至少一種多肽為條件。選自組a)、b)和c) 的三種多肽的優選的組合是多肽Tim07B或其變體、多肽BerOl或其變體、和多肽Bio04A或其變體。組合物可包括至少兩種選自組a)或其變體的多肽，至少兩種選自組b)或其變體的多肽和至少兩種選自組c)或其變體的多肽。優選的組合物可包括多肽Tim07B或其變體、和至少兩種、三種或四種選自組b)或其變體的多肽。該優選的組合物可包括兩種或三種選自組c)或其變體的多肽，優選地包括 Bio04A或其變體。另一個優選的組合物可包括多肽Tim07B或其變體、和至少兩種、三種或四種選自組c)或其變體的多肽。該優選的組合物可包括兩種或三種選自組b)或其變體的多肽，優選地包括BerOl或其變體。基於a)至c)的以上所有組合物可包括選自SEQ ID NO 1至74的任何一個或其變體、且先前根據a)至c)未選擇的另外的多肽。本發明還提供了適宜於通過免疫耐受作用預防或治療草花粉過敏症的組合物，該組合物包括至少四種不同的選自以下的多肽(a) TimO7B (KIPAGELQIIDKIDA)或其變體；(b) BerOl(SGKAFGAMAKKGQED)或其變體；(c) Bio04A (LKKAVTAMSEAEK)或其變體；(Cl)RyeO9B(PEVKYAVFEAALTKAIT)或其變體；(e) BerO2 (FIPMKSSffGA)或其變體；(f) Ber02C (KSSffGAIffRIDPKKPLK)或其變體；(g) Bio03A (KFIPTLVAAVKQAYAAKQ)或其變體；和OOBioO2A(KYDAYVATLTEALR)或其變體；其中所述變體是I)長度為最多30個胺基酸的較長的多肽，其包括(a)至(h)中指定的相應多肽的序列，或
II)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括與(a)至(h)中指定的相應多肽的序列具有至少65%同源性的序列，該序列能夠使得免疫耐受所述相應多肽；或III)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括(a)至(h)中指定的相應多肽的序列中的至少9個連續胺基酸的序列，或與所述至少9個連續胺基酸具有至少65%同源性的序列，所述至少9個連續胺基酸的序列或同源性序列能夠使得免疫耐受所述相應的多肽。a)至h)的其它優選的變體是i)具有9至30個胺基酸的長度且包括由以下組成的區域的多肽-a)至h)的對應序列中的任何一種，或-與a)至t!)的對應序列中的任何一種具有至少65%同源性的序列，該序列能夠使個體免疫耐受a)至h)的序列中的任何一種，或ii)具有9至30個胺基酸的長度且包括由代表以下任何一種的序列組成的區域的多肽-a)至h)的序列中的任何一種的片段，或-a)至h)的序列中的任何一種的片段的同源物，所述序列能夠使個體免疫耐受a)至h)的序列中的任何一種，且具有至少9個胺基酸的長度，且其中所述同源物與a)至h)的序列中的任何一種中的任何9個連續胺基酸具有至少65%的同源性；其中任選地，四種多肽中無一是由a)至h)的任何一種所定義的同一原始序列的變體。因而組合物至少包括四種多肽，所述四種多肽中的每一種選自a)至h)的多肽或其變體。以上組合物可包括a)至h)或其任何一種的變體的另外的多肽，比如a)至h)或其變體的五種、六種、七種、八種或更多種多肽。在一些方面，組合物可包括a)或其變體的多肽，至少一種選自b)、e)或f)或其任何一種的變體的多肽，和至少一種選自c)、d)、g)或h)或其變體的多肽。可選地，組合物可優選地包括a)或其變體的多肽、和至少兩種或三種選自b)、e)或f)或其任何一種的變體的多肽。該組合物可優選地包括多肽BerOl或其變體。在另一個實施方案中，組合物可包括a)或其變體的多肽和至少兩種、三種或四種選自c)、d)、g)或h)或其任何一種的變體的多肽。該組合物可優選地包括多肽Bio04A或其變體。所有這些組合物可優選地包括多肽Tim07B或其變體，多肽BerOl或其變體，和多肽Bio04A或其變體。以上選自a)至h)的組合物優選地包括a)至h)的至少四種不同的多肽或包括至少四種變體，所述變體的每一種對應於a)至h)的不同的原始或基線序列。這樣，該組合物通常以起源的四種不同的表位序列為基礎來選擇。優選地，該組合物包括狗牙根起源的至少一種表位序列，黑麥草起源的至少一種表位序列和貓尾草起源的至少一種表位序列。相關表位序列可選自SEQ ID NO 1至74中的任何一種或其變體。基於a)至h)的以上所有組合物可因而包括選自SEQ ID NO 1至74的任何一種或其變體、且先前根據a)至h)未選擇的另外的多肽。所有選擇以該組合物包括至少四種選自a)至h)或其變體的多肽為條件。任選地，本文所描述的特定多肽的任何組合物可包括另外的多肽而最多總共14 種獨特的多肽。另外的多肽通常與不在已選擇的多肽中的其它序列，即SEQ ID N0:1至73相關(即，通常為其同源物和/或其片段)。另外的肽通常是SEQ ID NO :1至73的肽中其一的功能性變體。另外的肽可以與SEQ ID NO :1至73中的任何一種相同。因此該組合物可包括最多十四種不同的多肽，所述多肽如SEQ ID NO :1至73中任何一種所提供的，以至少一種多肽選自如上所定義的(a)和(b)的每種為條件。然而，任選的另外的多肽不需要與SEQ ID NO :1至73的任何一種100%相同。它們優選地與SEQ ID NO :1至73的任何一種中的至少9個(例如至少10、11、12或13個)或更多個連續胺基酸至少65%相同，而非在選自(a)和(b)的每一種的至少一種多肽中已選擇的。這些連續胺基酸可包括MHC II類表位，例如其與本文所述的MHC分子中的任何一種相結合。本發明還提供了用於通過免疫耐受來預防或治療草過敏症、包括本發明的多肽的產物和製劑，和包括能夠表達本發明的多肽的多核苷酸的組合物、產物和載體。所述免疫耐受通常將針對SEQ ID NO 1至74中任何一種中存在的表位(例如MHC II類-結合的T細胞表位)。草物種草物種黑麥草(Loliumperenne)、貓尾草(Phleum pratense)和狗牙根(Cynodon dactylon)在世界範圍造成高比例的草過敏症，尤其是與草花粉相關的過敏症，比如乾草熱。其它重要的草物種包括絨毛草(Holcus lanatus)、鴨茅(Dactylis glomerate)、加那利草(Phalaris canariensis)和草地早熟禾/肯塔基藍草(草地早熟禾(Poa pratensis))。黑麥草是世界上最常見的草之一，並廣泛用作動物飼料的來源。其原產於歐洲，但已被引進到世界所有大陸上，並且在所有溫帶都是常見的。其花期可貫穿整個夏季，但在北半球通常在5月到7月之間。黑麥草良好適應於溫和、溼潤的溫帶氣候，並且在相對粘重、 肥沃、滋潤的土地上生長得最好。其在充分施肥的具有足夠水分的輕質土壤上也生長良好。 其不喜陰且需要排水良好的土壤。黑麥草通常生長於土壤PH在從約6到約7的範圍內的位置處，但其可耐受從約4. 5到約8. 5的範圍，優選地年降水量在約21到約180cm的範圍。貓尾草是世界上另一種最常見的草，並且是動物飼料的首要來源。其原產和分布於歐洲、北非和亞洲北部的大部分。其已被引進到北美和南美、南非和澳洲並在那裡廣泛分布。貓尾草通常生長於年降水量在約35到約180cm的範圍、年平均溫度在約4到約22°C 的範圍和土壤PH為約4. 5到約8的位置。其良好適應於涼的、溼潤的溫帶氣候，在粘重的、 深層的和溼潤的土壤或甚至溼地上生長得最好。生長的最佳溫度在18-21°C間變化，且晝/ 夜溫度為15/10°C和21/15°C。貓尾草花期通常限於初夏且貓尾草花粉是這個季節中草過敏症的主要原因。在研究中，已發現達21%的患有過敏性鼻炎或其它症狀的患者對貓尾草花粉響應。狗牙根通常生長於年降水量為約9至約429cm、年平均溫度範圍為約5到約和土壤PH在約4到約8. 5，優選地約6到約7的範圍的位置。狗牙根花期通常在夏末(北半球的8月到10月)。狗牙根植物產生大量的花粉且因此是乾草熱的主要原因。還已報導狗牙根植物導致接觸性皮炎。狗牙根在世界範圍廣泛生長，主要在溫暖的氣候中，且通常發現於約北緯30°到約南緯30°的緯度之間。組1和組5草花粉過敏原的肽片段主要的草過敏原包括組1草花粉過敏原和組5草花粉過敏原。將來自不同物種的蛋白根據胺基酸序列同源性分組。例如，組1主要草花粉過敏原包括貓尾草蛋白Wil P 1和黑麥草蛋白Lol ρ 1，組5主要草花粉過敏原包括貓尾草蛋白W1I ρ 5和黑麥草蛋白Lol ρ 5。本發明人已鑑定了某些草花粉過敏原蛋白中包括MHC II類結合T細胞表位的區域。本發明人也已證明，主要草花粉過敏原中對應於MHC II類結合T細胞表位的區域在給定的組中的代表之間是高度保守的，參見，例如，實施例2。基於該信息，來源於給定的組中的蛋白的相關區域的肽適宜於通過免疫耐受該組中的草過敏原而預防或治療草過敏症。例如，來自，例如貓尾草的Wil P 1或黑麥草的Lol ρ 1的相關區域適用於通過免疫耐受組1 草過敏原而預防或治療草過敏症。本發明的肽來源於組1 (SEQ ID NO :1至27)和組5 (SEQ ID NO J8至73)草過敏原。術語「肽」和「多肽」在本文中可互換使用。以上的蛋白在本文中還被稱作「過敏原」。表2至4列出了本發明的肽的序列，指明了每種肽所來源的母體蛋白質。當本發明的組合物包括四種或更多種選自a)至h)的多肽或其變體的多肽時，該組合物通常包括選自a) SEQ ID NO :1至27 ；和b) SEQ ID NO 28至73的每一種的至少一種多肽或其變體(例如功能性變體)。該組合物可包括選自a) SEQ ID NO :1至27 ；和b) SEQ ID NO 28至73的每一種的至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種、至少六種或至少七種多肽或其變體(例如功能性變體)。在一些實施方案中，該組合物可包括選自a) SEQ ID NO 1至10 ；和b) SEQ ID NO 28至52的每一種的至少一種多肽或其變體(例如功能性變體)。 該組合物可包括選自a) SEQ ID NO :1至10 ；和b)SEQ ID NO J8至52的每一種的至少兩種、 至少三種、至少四種、至少五種、至少六種或至少七種多肽或其變體(例如功能性變體)。如以上概述，因此，基於a)至h)的多肽或其變體的優選的組合物包括組合物中包括至少一種來源於Cyn d 1或其變體的肽和至少一種來源於Lol p5或其變體的肽的那些組合物。特別優選的組合物是包括至少一種來源於Cyn d 1或其變體的肽、至少一種來源於 Lol p5或其變體的肽和至少一種來源於Wil ρ 5的肽的那些組合物。在一些實施方案中， a)至h)的組合物可包括來源於Cyn d 1或其變體的兩種、三種、四種或更多種肽和/或來源於Lol ρ 5或其變體的兩種、三種、四種或更多種肽。在一些實施方案中，該組合物可由來源於Cyn d 1和Lol ρ 5或其變體的肽組成，或基本上由來源於Cyn d 1和Lol ρ 5或其變體的肽組成。在另一些實施方案中，該組合物任選地不包括來源於Lol pi或其變體的肽。如上所討論的，基於Cyn d 1和Lol ρ 5肽的組合物在草過敏症的治療中特別有用。本發明的特別優選的組合物包括包括以下、由以下組成或基本上由以下組成的那些組合物a)如本文所定義的SEQ ID NO :1、2和5的多肽或其變體中的至少一種；b)如本文所定義的SEQ ID NO :28,29,31和46的多肽或其變體中的至少一種；和任選地c)如本文所定義的SEQ ID NO 69的多肽或其變體。這些組合物提供了特別優選的Cyn d 1肽、特別優選的Lol p5肽、和任選地，特別優選的Wil P5肽。更優選地，該組合物包括如a)中所定義的至少兩種或所有三種多肽，和如b)中所定義的至少兩種或至少三種多肽。仍為優選地，該組合物包括如c)中所定義的多肽。特別優選地，組合物包括i) SEQ ID NO 1, ii)SEQ ID NO :2和SEQ ID NO :5中的一種；和 iii)SEQ ID NO :46。具體的優選的組合物包括組合1至10，如表7中所列。在所述組合物中，SEQ ID NO :1、2、5、28、四、31、46和69的單獨的多肽的一種或多種可任選地替代其變體。在一些實施方案中，存在於組合1至10的SEQ ID NO :1、2、5、28、四、31、46和69的多肽中的兩種、三種、四種、五種或更多種可被其變體替代。被其變體替代的多肽的數目通常取決於該組合物中所包括的多肽的總數目。例如，在基於四種多肽的組合(即，組合6、8、10)中，優選地僅有一種或兩種多肽被其變體替代。可選地，包括選自SEQ ID N0:1、69、31、46、2、5、29J8、 43、53、35、27、4和70的任何一種或其變體的四種或更多種多肽的任何組合物也是優選的。更優選的組合物包括SEQ ID NO :1、2、5、28、31、91和93或其變體的多肽，由SEQ ID NO :1、2、5、28、31、91和93或其變體的多肽組成，或基本上由SEQ ID NO :1、2、5、28、31、 91和93或其變體的多肽組成。其它優選的組合物包括SEQ ID NO :1、2、5、28、31、91和93、 或替代這些多肽的一種、兩種或三種、四種或更多種的它們的變體。在一些實施方案中，以上7種肽組合物不包括任何其它的多肽或不包括任何其它的來源於草過敏原的多肽。在優選的實施方案中，組合物包括SEQ ID NO :1、2、5、28、31、91和93或其變體，且不包含與本文所述的任何草物種的蛋白具有超過20%的同源性的任何另外的蛋白。以上組合物可包括另外的非肽組分，比如載體或佐劑。本發明還提供了產物，所述產物包括以下(a) ^ Tim07B(KIPAGELQIIDKIDA), TimlOB (KYTVFETALKKAITAMSE), Tim 04A (WGAIffRIDTPDKL)、Tim 07G(FKVAATAANAAPANDK)、或如本文所描述的其任何一種的變體；(b)多肽 BerO 1 (SGKAFGAMAKKGQED)、Ber02 (FIPMKSSWGA)、 Ber02C(KSSffGAIffRIDPKKPLK)和 Ber02B KDSDEFIPMKSSWGAIWR 中的至少一種、或如本文所描述的其任何一種的變體；和(c)多月太 Bio04A(LKKAVTAMSEAEK)、Rye09B(PEVKYAVFEAALTKAIT)禾口 Bio02A(KYDAYVATLTEALR)、Bio03A (KFIPTLVAAVKQAYAAKQ)、Rye 08A (ETYKFIPSLEAAVKQAY)、 Rye 05C(NAGFKAAVAAAANAPPK)中的至少一種、或如本文所描述的其任何一種的變體，其中每種不同的多肽是供同時地、分別地或順序地用於通過免疫耐受預防或治療草花粉過敏症。本發明的產物中的四種或更多種多肽可按照與通過免疫耐受作用而用於草過敏症的預防或治療的本發明的組合物有關的以上所述的相同標準來選擇。變體因此，本發明的組合物或產物可包括SEQ ID NO 1至73的任何一種的變體。變體通常包括存在於SEQ ID NO :1至73的相應的肽中的MHC II類表位的1個、2個、3個或更多個。本文提到了功能性變體。該變體可能能夠使個體免疫耐受存在於SEQ ID NO :1至 59的相應的肽中的MHC II類表位，並因而其將通常包括與同樣的MHC II類分子結合和/或被識別SEQ ID NO :1至73的多肽中相應的表位的T細胞所識別的序列。該序列因此能夠使得免疫耐受天然多肽中相應的序列。因此變體多肽可使得免疫耐受相應的天然多肽。
SEQ ID NO 1至73的變體可以是通過截短衍生的片段，例如，通過從多肽的N末端和/或C末端去除一個或多個胺基酸。片段還可以通過一個或多個內部缺失來生成，條件是組成τ細胞表位的核心9個胺基酸基本上不被破壞。例如，SEQ ID NO 1的變體可包括SEQ ID NO 1的片段，即，較短序列。這可包括從SEQ ID NO 1的N-末端或從SEQ ID NO 1的C-末端缺失一個、兩個、三個或四個胺基酸。這樣的缺失可從SEQ ID NO 1的兩端進行。SEQ ID NO 1的變體可包括延伸超出SEQ ID NO :1的末端的另外的胺基酸(例如來自衍生肽的親本蛋白的序列)。變體可包括以上討論的缺失和添加的組合。例如，可從SEQ ID NO :1的一端缺失胺基酸，但可在SEQ ID NO 1 的另一端添加來自全長親本蛋白序列的另外的胺基酸。以上變體的相同討論還適用於SEQ ID NO 2 至 73。變體肽可包括SEQ ID NO :1至73任一種或其片段的胺基酸序列中的一個或多個胺基酸取代。變體肽可包括與SEQ ID NO :1至73任一種中至少9個或更多個連續胺基酸具有至少65%序列同一性的序列。更優選地，合適的變體可包括與SEQ ID NO :1至73任一種的至少9個連續胺基酸至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 % 或至少98%的胺基酸同一性。這一水平的胺基酸同一性可見於肽的任何區段，儘管它優選地是核心區域。胺基酸同一性的水平是超出至少9個連續胺基酸，但它可以是至少10、11、 12、13、14、15或至少16或17個胺基酸，這取決於比較的肽的大小。因此，任何以上指明的同一性水平可跨越序列的完整長度。以與本發明的特別優選的肽的序列同一性為基礎選擇的優選變體的例子是Ber01(SEQ ID NO 1)的變體SGKAFGAMAKKGEED (SEQ ID NO :74)，絨毛草Hol 1 1 ； 草地早熟禾 Poa ρ 1 ；SGHAFGSMAKKGEED(SEQ ID NO :7 ，鴨茅 Dac g 1;黑麥草 Lol ρ 1 ； SGIAFGSMAKK⑶ED (SEQ ID NO :76)，貓尾草 Phl ρ 1，SGTAFGAMAKKGEEE (SEQ ID NO :77)，玉
(Zea mays) Zea m 1。Bio02A(SEQ ID NO :28)的變體:KYDAYVATLTESLR(SEQ ID NO :78)，大麥(Hordeum vu 1 gare)Hor ν 5 ；KYDAYVATLSEALR(SEQ ID NO :79)，貓尾草Phl ρ 5 ；草地早熟禾Poa ρ 9 ； KYDAFVAALTEALR(SEQ ID NO :80)，鴨茅 Dac g 5 ；KYDAFVTTLTEALR(SEQ ID NO :81)，絨毛草 Hol 1 5。Bio03A(SEQ ID NO :29)的變體KFIPTLEAAVKQAYAA (SEQ ID NO :82)，鴨茅 Dac g 5 ；薦草(Phalarus aquatica) Pha a 5 ；KFIPALEAAVKQAYAA (SEQ ID NO :83)，貓尾草 Phl ρ 5。Tim07B (SEQ ID NO :69)的變體:KIPAGELQIVDKIDA (SEQ ID NO :84)，鴨茅Dac g 5 ； 薦草 Pha a 5 ；KIPTGELQIVDKIDA (SEQ ID NO :85)，黑麥草 Lol ρ 5 ；KIPAGEQQIIDKIDA (SEQ ID NO :86)，草地早熟禾Poa ρ 5。Tim07B在絨毛草Hol 15b中也是保守的。Bio04A(SEQ ID NO :31)的變體:LKKAITAMSEAQK(SEQ ID NO :87)，貓尾草Phl p5 ； 絨毛草 Hol 1 5b ；LKKAITAMSQAQK(SEQ ID NO :88)，草地早熟禾 Poa ρ 5。Ber02C(SEQ ID NO :5)的變體KESWGAIWRIDTPDK (SEQ ID NO :89)，薦草 Pha a 1 ； 貓尾草Wil P 1。Rye09B (SEQ ID NO :46)的變體PQVKYAVFEAALTKAIT (SEQ ID NO :90)，貓尾草 Phl ρ 5。
這樣，SEQ ID NO 74至90是可作為以上天然肽的替代物用於本發明的組合物中的優選的變體。用於本發明的天然肽的其它優選變體來源於玉米過敏原。玉米過敏原與草花粉過敏原具有很近的同源性，且因此來源於玉米的序列可包含用於免疫耐受草花粉過敏原的交叉反應性表位。關於胺基酸序列，「序列同一性」是指當使用ClustalW(Thompson等人，1994，同前)用以下參數評價時具有指定值的序列成對的比對參數-方法準確，矩陣PAM，缺口開放罰分10. 00，缺口延伸罰分0. 10 ；多比對參數-矩陣PAM，缺口開放罰分10. 00，% 延遲同一性30，處罰末端缺口 開，缺口間距0，負矩陣不，缺口延伸罰分0. 20，殘基特異性缺口罰分開，親水缺口罰分開，親水殘基GPSNDQEKR。在特定殘基的序列同一性意在包括僅僅被衍生化的相同殘基。變體肽可包括SEQ ID NO :1至73任一種中的1、2、3、4、5或更多個或者多達10個胺基酸取代。取代變體優選地包括用相同數目的胺基酸代替一個或多個胺基酸並進行保守的胺基酸取代。例如，可用具有相似特徵的替代性胺基酸例如，另一鹼性胺基酸、另一酸性胺基酸、另一中性胺基酸、另一帶電荷胺基酸、另一親水胺基酸、另一疏水胺基酸、另一極性胺基酸、另一芳香族胺基酸或另一脂肪族胺基酸來取代胺基酸。可用於選擇合適的取代基的20種主要胺基酸的一些特徵如下
權利要求
1.一種適用於通過免疫耐受作用預防或治療草花粉過敏症的組合物，所述組合物包括(a)^ Tim07B(KIPAGELQIIDKIDA) , TimlOB (KYTVFETALKKAITAMSE) , Tim 04A (WGAIffRIDTPDKL), Tim 07G (FKVAATAANAAPANDK)、或其任何一種的變體中的至少一種；(b)多肽BerOl(SGKAFGAMAKKGQED)、Ber02 (FIPMKSSWGA) ,Ber02C (KSSffGAIffRIDPKKPLK) 和Ber 02BKDSDEFIPMKSSWGAIWR、或其任何一種的變體中的至少一種；禾口(c)多肽Bio04A (LKKAVTAMSEAEK)、Rye09B (PEVKYAVFEAALTKAIT)、 Bio02A (KYDAYVATLTEALR)、Bio03A (KFIPTLVAAVKQAYAAKQ)、Rye 08A (ETYKFIPSLEAAVKQAY)、 Rye05C(NAGFKAAVAAAANAPPK)、或其任何一種的變體中的至少一種，其中所述變體是I)長度為最多30個胺基酸的較長的多肽，其包括(a)、(b)或(c)中指定的相應多肽的序列，或II)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括與(a)、(b)或(c)中指定的相應多肽的序列具有至少65%同源性，且能夠使得免疫耐受所述相應多肽的序列；或III)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括(a)、(b)或(c)中指定的相應多肽的序列中至少9個連續胺基酸的序列，或與所述至少9個連續胺基酸具有至少65%同源性的序列，所述至少9個連續胺基酸的序列或同源性序列能夠使得免疫耐受所述相應多肽。
2.根據權利要求1所述的組合物，所述組合物包括a)多肽Tim07B(KIPAGELQIIDKIDA)或其變體，b)多肽BerOl (SGKAFGAMAKKGQED)或其變體，和c)多肽Bio04A (LKKAVTAMSEAEK)或其變體。
3.一種適用於通過免疫耐受作用預防或治療草花粉過敏症的組合物，所述組合物包括至少四種不同的選自以下的多肽(a)TimO7B(KIPAGELQIIDKIDA)或其變體；(b)BerOl (SGKAFGAMAKKGQED)或其變體；(c)Bio04A (LKKAVTAMSEAEK)或其變體；(d)Rye09B (PEVKYAVFEAALTKAIT)或其變體；(e)Ber02 (FIPMKSSffGA)或其變體；(f)Ber02C (KSSffGAIffRIDPKKPLK)或其變體；(g)Bio03A (KFIPTLVAAVKQAYAAKQ)或其變體；禾口(h)Bio02A (KYDAYVATLTEALR)或其變體；其中所述變體是I)長度為最多30個胺基酸的較長的多肽，其包括(a)至(h)中指定的相應多肽的序列，或II)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括與(a)至(h)中指定的相應多肽的序列具有至少65%同源性，且能夠使得免疫耐受所述相應多肽的序列；或III)長度為9至30個胺基酸的多肽，其包括(a)至(h)中指定的相應多肽的序列中至少9個連續胺基酸的序列，或與所述至少9個連續胺基酸具有至少65 %同源性的序列，所述至少9個連續胺基酸的序列或同源性序列能夠使得免疫耐受所述相應多肽。
4.根據權利要求3所述的組合物，所述組合物包括(a)多肽Tim07B(KIPAGELQIIDKIDA)或其變體；(b)多肽 BerO 1 (SGKAFGAMAKKGQED)、Ber02 (FIPMKSSWGA)禾口 Ber02C(KSSffGAIffRIDPKKPLK)、或其任何一種的變體中的至少一種；禾口(c)多肽Bio04A (LKKAVTAMSEAEK)、ye09B(PEVKYAVFEAALTKAIT)、 Bio02A(KYDAYVATLTEALR)和 Bio03A(KFIPTLVAAVKQAYAAKQ)、或其任何一種的變體中的至少一種；禾口(a)以上未選擇的b)或c)的至少一種另外的多肽。
5.根據權利要求4所述的組合物，所述組合物包括多肽Tim07B(K IPAGELQ11DKI DA)或其變體、多肽 BerOl (SGKAFGAMAKKGQED)或其變體、多肽 Bio04A (LKKAVTAMSEAEK)或其變體， 和以上未選擇的b)或c)的至少一種另外的多肽。
6.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，所述組合物還包括以上先前未選擇的一種或多種多肽或其變體，所述多肽為如表2至4中所示的SEQ ID NO 1至73中的任何一種。
7.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述組合物-能夠使得群體中的一組草花粉過敏性個體的至少50%或至少60%免疫耐受，和/或-包括至少一種另外的多肽，最多總共14種不同的多肽，其中所述另外的多肽(a)包括與SEQID NO :1至73的任何一種中的至少9個或更多個連續胺基酸具有至少65%序列同一性、在以上未選擇的序列；和(b)長度為9至30個胺基酸。
8.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，所述組合物包括至少一種所述多肽，其長度為9-20個胺基酸或13-17個胺基酸。
9.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，所述組合物包括如表7中所列的組合1 至10中的任何一個的多肽，其中任選地一種或多種所述多肽可被I(I)或(II)中所定義的其變體所替代。
10.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，所述組合物包括以下多肽(a)Tim07Bl(KKIPAGELQIIDKIDA)；(b)BerOl(SGKAFGAMAKKGQED)；(c)Bio04A(LKKAVTAMSEAEK)；(d)Rye09Bl(KPEVKYAVFEAALTKAIT)；(e)Ber02(FIPMKSSffGA)；(f)Ber02C(KSSffGAIffRIDPKKPLK)；禾口(g)Bio02A(KYDAYVATLTEALR)。
11.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述多肽的一種或多種具有選自以下的一種或多種修飾(i)N末端乙醯化；(ii)C末端醯胺化；(iii)精氨酸和/或賴氨酸的側鏈胺上的一個或多個氫被亞甲基基團所取代；(iv)糖基化；和(ν)磷酸化。
12.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述肽的至少一種已被改造為可溶的，從而其包括(i)在T細胞表位側翼的肽的殘基的N末端一個至六個連續胺基酸，它們與衍生所述肽的蛋白序列中所述殘基的N末端緊接的兩個至六個連續胺基酸相對應；和/或(ii)在T細胞表位側翼的肽的殘基的C末端一個至六個連續胺基酸，它們與衍生所述肽的蛋白序列中所述殘基的C末端緊接的一個至六個連續胺基酸相對應；或(iii)在T細胞表位側翼的肽的殘基的N末端和C末端，選自精氨酸、賴氨酸、組氨酸、 穀氨酸和天冬氨酸的至少一個胺基酸，其中所述多肽具有至少3. 5mg/ml的溶解度，所述T細胞表位具有小於3. 5mg/ml的溶解度。
13.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，其中所述肽的至少一種已被改造為可溶的，從而另外地(i)所述肽的天然序列中的任何半胱氨酸殘基被絲氨酸或2-氨基丁酸替代；和/或( )缺失了在所述肽的天然序列的N末端或C末端的至多三個胺基酸中的、不包含在 T細胞表位中的疏水性殘基；和/或(iii)缺失了在所述肽的天然序列的N末端或C末端的最多四個胺基酸中包含序列 Asp-Gly的、不包含在T細胞表位中的任何兩個連續胺基酸，和/或(iv)在N末端和/或C末端添加了一個或多個帶正電荷的殘基。
14.根據前述權利要求中任一項所述的組合物，其中每種多肽具有0.03至200nmol/ ml、0. 3 至 200nmol/ml、50 至 200nmol/ml 或 30 至 120nmol/ml 的範圍中的濃度。
15.一種用於通過免疫耐受作用預防或治療草花粉過敏症的組合物，所述組合物包括至少一種多核苷酸序列，該多核苷酸序列在表達時導致如權利要求1至13中任一項所定義的組合物的產生。
16.一種用於通過免疫耐受作用預防或治療草花粉過敏症的載體，所述載體包括四種或多種多核苷酸序列，每種所述多核苷酸序列編碼如權利要求1至13中任一項所定義的不同的多肽。
17.一種產物，所述產物包括(a)^ Tim07B(KIPAGELQIIDKIDA), TimlOB (KYTVFETALKKAITAMSE), Tim 04A(WGAIffRIDTPDKL)、Tim 07G(FKVAATAANAAPANDK)、或其任何一種的如權利要求 1 (I)或 (II)中所定義的變體；(b)多肽BerOl(SGKAFGAMAKKGQED)、Ber02 (FIPMKSSffGA) ,Ber02C (KSSffGAIffRIDPKKPLK) 和Ber02BKDSDEFIPMKSSWGAIWR、或其任何一種的如權利要求I(I)或(II)中所定義的變體中的至少一種；和(c)多肽Bio04A (LKKAVTAMSEAEK)、Rye09B (PEVKYAVFEAALTKAIT)禾口 Bio02A (KYDAYVATLTEALR)、Bio03A (KFIPTLVAAVKQAYAAKQ)、Rye 08A (ETYKFIPSLEAAVKQAY)、 Rye 05C(NAGFKAAVAAAANAPH、或其任何一種的如權利要求I(I)或(II)中所定義的變體中的至少一種，其中每種不同的多肽是供同時地、分別地或順序地用於通過免疫耐受作用預防或治療草花粉過敏症。
18.一種用於通過免疫耐受作用預防或治療草花粉過敏症的藥物製劑，所述藥物製劑包括根據權利要求1至15中任一項所述的組合物；根據權利要求16所述的載體；或根據權利要求17所述的產物；和藥學上可接受的運載體或稀釋劑。
19.根據權利要求18所述的組合物、載體或產物，所述組合物、載體或產物被配製為用於口服施用、局部施用、鼻內施用、皮下施用、舌下施用、皮內施用、口腔施用、表皮或貼劑施用、或用於通過吸入或通過注射施用。
20.如權利要求1-15中任一項所定義的組合物，或如權利要求17中所定義的產物，所述組合物或產物另外地包括另外的多肽過敏原，用於使個體免疫耐受所述另外的多肽過敏原。
21.一種確定T細胞是否識別如權利要求1至14中任一項所定義的組合物的體外方法，所述方法包括將所述T細胞與所述多肽接觸並檢測所述T細胞是否被所述多肽刺激。
22.根據權利要求21所述的方法，進行所述方法以確定個體是否患有草花粉過敏症或處於患草花粉過敏症的風險中。
全文摘要
本發明涉及包括用於預防或治療房塵蟎過敏症的肽的組合物，並且特別涉及用於預防或治療所述過敏症的肽的最佳組合。
文檔編號C07K14/415GK102307893SQ201080006665
公開日2012年1月4日 申請日期2010年2月5日 優先權日2009年2月5日
發明者保羅·萊德勒, 蓋伊·雷頓, 羅德·哈夫納, 馬克·拉爾什 申請人:切爾卡西亞有限公司