雜交種試管苗的煉苗及移栽方法與流程

2024-03-01 10:17:15 2

本發明涉及植物工程
技術領域：
，尤其是涉及一種雜交種試管苗的煉苗及移栽方法。
背景技術：
：通常將植物分類學上不同種、屬或親緣關係更遠的物種間進行的雜交稱作遠緣雜交。作為一種育種手段，遠緣雜交打破了物種間的界限，人為地促進了不同物種間遺傳物質的交換和結合，把不同生物類型各自所具有的獨特性狀，不同程度地結合於共同的雜種個體中，從而創造出新的品種。因此在植物遺傳與育種研究中發揮重要作用，受到遺傳及育種專家的長期重視。它在育種方面的應用主要包括，新物種的人工創造、提高品種的抗逆性、創造異染色體體系、培育雄性不育系以及研究生物的進化及親緣關係等。以三葉草屬牧草為例，三葉草屬牧草具有品質優良、營養豐富、固氮能力強等多種優點，尤以具有強抗逆性的六倍體高加索三葉草品種，和具有強固氮能力的四倍體大興安嶺野生白三葉為例，為了培育出結合雙親優良性狀的三葉草新品種，希望以高加索三葉草為母本，以白三葉為父本進行雜交。但是，遠緣雜交中物種的親緣關係較遠，雌雄配子不親和，因此，人工雜交難以成功，雜種易夭亡或敗育且分離範圍廣、耗時長、中間類型不穩定。其中，以高加索三葉草為母本，以白三葉為父本進行雜交，雜種成活率很低，遠不能滿足育種進程的需求。用組織培養技術進行植物快速無性繁殖的方法簡稱為試管繁殖(propagationbytissueculture)，也稱微體繁殖或微型繁殖。繁殖的植株稱試管苗，以此與種子苗(實生苗)、扦插苗、嫁接苗相區別。以三葉草屬牧草為例，通過組織培養可以短時間獲得大量雜交種三葉草組培苗。試管苗的移植需要從「異養」到「自養」的轉變過程，由於培養容器內的環境與外部環境差異較大，移植前試管苗要進行煉苗，使小植株逐漸適應外界環境條件並健壯生長，這種「煉苗」方法可以有效提高移植成活率。移植後的小苗管理，必須注意控制土壤溼度，掌握光照強度。煉苗，適時移栽，保溫、保溼以及適度的光照是保證該階段順利通過的主要因素。目前，雜交種試管苗的煉苗和移栽方法，使試管苗的成活率還停留在較低水平，浪費時間和勞動力，因此，亟需一種可以提高雜交種試管苗煉苗和移栽成活率的方法。有鑑於此，特提出本發明。技術實現要素：本發明的第一個目的在於提供一種雜交種試管苗的煉苗方法，以緩解現有技術中存在的雜交種試管苗煉苗成活率低的技術問題。本發明的第二個目的在於提供一種雜交種試管苗的移栽方法，以緩解現有技術中存在的雜交種試管苗移栽成活率低的技術問題。本發明提供的一種雜交種試管苗的煉苗方法包括：在無菌培養容器中，培養雜交種試管苗，至所述試管苗生長至4－6cm高且至少具有3條不定根時，打破培養容器的無菌環境，所述試管苗繼續生長至所述培養容器內培養基表面出現渾濁，煉苗結束。進一步地，所述培養容器置於培養室中，所述培養室內的溫度為25－28℃，溼度為80％－95％，所述培養室內的光周期為10－13h/d，所述培養室內的光照強度為18000－22000μmol/m2·s。進一步地，所述培養室內的溫度為：光照期27－28℃，暗期25－26℃，溼度為90％，所述培養室內的光周期為12h/d，所述培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。進一步地，所述雜交種試管苗為高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗。另外，本發明還提供了一種雜交種試管苗的移栽方法，所述移栽方法應用於上述的雜交種試管苗。進一步地，所述移栽方法包括：將雜交種試管苗連同培養基整體從培養容器內取出，用清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於滅菌後的生長基質中，完成所述移栽。進一步地，所述生長基質為體積比為1：2－2：1的沙土和珍珠巖。進一步地，所述生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。進一步地，所述生長基質置於培養室中，所述培養室內的條件為：移栽後1－10天：溫度為光照期26－28℃，暗期25－26℃，溼度為90％－95％，光周期為10－13h/d，光照強度為18000－20000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期28－30℃，暗期23－25℃，溼度為85％－90％，光周期為10－13h/d，光照強度為20000－22000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期30－32℃，暗期21－23℃，溼度為80％－85％，光周期為10－13h/d，光照強度為22000－24000μmol/m2·s。進一步地，所述培養室內的條件為：移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。本發明提供的雜交種試管苗的煉苗方法和移栽方法，能夠有效提高雜交種試管苗的成活率，節約了時間成本和勞動力成本。具體實施方式下面將結合實施例對本發明的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。本發明提供了一種雜交種試管苗的煉苗方法，包括：在無菌培養容器中，培養雜交種試管苗，至所述試管苗生長至4－6cm高且至少具有3條不定根時，打破培養容器的無菌環境，所述試管苗繼續生長至所述培養容器內培養基表面出現渾濁，煉苗結束。其中，選取的雜交種試管苗例如可以為，但不限於4cm，4.5cm，5cm，5.5cm或6cm高。選取的雜交種試管苗所具有的不定根至少為3條，例如可以為，但不限於3條，4條，5條，6條，7條或8條，且長度大於2cm。培養容器可以為試管或三角瓶。無菌的培養容器，可以在培養容器開口處放置與培養容器口大小相匹配的蓋或塞，或者套設封口膜。打破培養容器的無菌環境，是使培養容器內的無菌環境變為有菌環境，可以將培養容器開口處的蓋或塞去除，或者將封口膜扎破。在一個優選的實施方式中，無菌的培養容器為在培養容器口套設封口膜，破壞培養容器的無菌性為將封口膜扎破，培養基表面出現渾濁，說明培養基開始染菌，雜交種試管苗在培養容器中，從完全無菌的環境變為有菌環境，逐步加強對外界環境的適應能力。在本發明中，培養容器置於培養室中，培養室內的溫度為25－28℃，溼度為80％－95％，所述培養室內的光周期為10－13h/d，所述培養室內的光照強度為18000－22000μmol/m2·s。其中，培養室內的溫度可以為，但不限於25℃，25.5℃，26℃，26.5℃，27℃，27.5℃或28℃。在一個優選的實施方式中，培養室內的溫度為：光照期27－28℃，暗期25－26℃；其中，光照期的溫度可以為，但不限於27℃，27.5℃或28℃；暗期的溫度可以為，但不限於25℃，25.5℃或26℃。在光照期和暗期給予不同的溫度，能更好地模擬自然環境下晝夜溫度的變化，使雜交種試管苗在經過本發明提供的煉苗方法煉苗之後，加強對外界環境的適應能力。溼度可以為，但不限於80％，82％，84％，85％，86％，88％，90％，92％，94％或95％。在一個優選的實施方式中，隨著煉苗時間的增加，可以逐漸降低培養室內的溼度，以使雜交種試管苗逐漸適應乾燥的內部環境。光周期可以為，但不限於10h/d，11h/d，12h/d或13h/d。光照強度可以為，但不限於18000μmol/m2·s，19000μmol/m2·s，20000μmol/m2·s，21000μmol/m2·s或22000μmol/m2·s。在一個優選的實施方式中，隨著煉苗時間的增加，可以逐漸增強培養室內的光照強度，以使雜交種試管苗加強對外界環境的適應能力。在本發明中，雜交種試管苗為高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗。六倍體高加索三葉草品種是紐西蘭引進種，在內蒙古赤峰市和呼和浩特市成功建植，其抗旱、抗寒能力很強，也有一定的耐鹽能力，不論作為栽培品種還是補播種都具有良好的應用前景。但其固氮所需的根瘤菌特化，與其他三葉草種的根瘤菌不能互接，在高加索以外地區不能結瘤固氮。另外，相對於其他三葉草種，高加索三葉草在種植的第一年生長發育非常緩慢，這也是制約其推廣種植的因素之一。本發明選用的白三葉來自大興安嶺地區，具有產量高，固氮能力強的特點，但其根系淺，喜溼，在內蒙古其他地區種植時或不能越冬，或由於氣候乾燥而成片死亡。為了結合二者的優良性狀，以高加索三葉草為母本，以白三葉為父本進行雜交。另外，本發明還提供了一種雜交種試管苗的移栽方法，應用於上述的雜交種試管苗。將利用上述煉苗方法進行煉苗之後的雜交種試管苗，應用此雜交種試管苗的移栽方法進行移栽。在本發明中，移栽方法包括：將雜交種試管苗連同培養基整體從培養容器內取出，用清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於滅菌後的生長基質中，完成移栽。其中，進行移栽的雜交種試管苗為生長狀態良好，且無破損的健康試管苗。用於清洗根部培養基的清水的溫度為25－28℃，例如可以為，但不限於25℃，26℃，27℃或28℃。對生長基質進行滅菌的方法為物理滅菌法或化學滅菌法，其中，物理滅菌法可以為高溫蒸汽滅菌或紫外線照射滅菌，化學滅菌法為應用殺菌劑進行滅菌，如0.2％的高錳酸鉀，75％的乙醇等。在本發明中，生長基質為體積比為1：2－2：1的沙土和珍珠巖。沙土和珍珠巖的體積比例如可以為，但不限於1：1，1：2或2：1。以沙土和珍珠巖為基質進行移栽，既能夠保持水分，又能夠保證基質的透氣性，防止雜交種試管苗爛根。在本發明中，生長基質置於培養室中，移栽時培養室內的條件為：移栽後1－10天：溫度為光照期26－28℃，暗期25－26℃，溼度為90％－95％，光周期為10－13h/d，光照強度為18000－20000μmol/m2·s；其中，光照期的溫度可以為，但不限於26℃，27℃或28℃；暗期的溫度可以為，但不限於25℃或26℃；溼度可以為，但不限於90％，91％，92％，93％，94％或95％；光周期可以為，但不限於10h/d，11h/d，12h/d或13h/d；光照強度可以為，但不限於18000μmol/m2·s，19000μmol/m2·s或20000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期28－30℃，暗期23－25℃，溼度為85％－90％，光周期為10－13h/d，光照強度為20000－22000μmol/m2·s；其中，光照期的溫度可以為，但不限於28℃，29℃或30℃；暗期的溫度可以為，但不限於23℃，24℃或25℃；溼度可以為，但不限於85％，86％，87％，88％，89％或90％；光周期可以為，但不限於10h/d，11h/d，12h/d或13h/d；光照強度可以為，但不限於20000μmol/m2·s，21000μmol/m2·s或22000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期30－32℃，暗期21－23℃，溼度為80％－85％，光周期為10－13h/d，光照強度為22000－24000μmol/m2·s；其中，光照期的溫度可以為，但不限於30℃，31℃或32℃；暗期的溫度可以為，但不限於21℃，22℃或23℃；溼度可以為，但不限於80％，81％，82％，83％，84％或85％；光周期可以為，但不限於10h/d，11h/d，12h/d或13h/d；光照強度可以為，但不限於22000μmol/m2·s，23000μmol/m2·s或24000μmol/m2·s。在光照期和暗期給予不同的溫度，能更好地模擬自然環境下晝夜溫度的變化，使雜交種試管苗在經過本發明提供的移栽方法移栽之後，加強對外界環境的適應能力。隨著移栽後時間的增加，可以逐漸降低培養室內的溼度，以使雜交種試管苗逐漸適應乾燥的內部環境。並且，隨著移栽後時間的增加，可以逐漸增強培養室內的光照強度，以使雜交種試管苗加強對外界環境的適應能力。本發明提供的雜交種試管苗的煉苗方法和移栽方法，能夠有效提高雜交種試管苗的成活率，節約了時間成本和勞動力成本。下面將結合實施例1－18和對比例1－9對本發明的技術方案進行進一步地說明。實施例1雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為90％，培養室內的光周期為12h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。實施例2雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期27℃，暗期25℃，溼度為90％，培養室內的光周期為12h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。實施例3雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為80％，培養室內的光周期為12h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。實施例4雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為95％，培養室內的光周期為12h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。實施例5雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為90％，培養室內的光周期為10h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。實施例6雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為90％，培養室內的光周期為11h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。實施例7雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為90％，培養室內的光周期為13h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。實施例8雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為90％，培養室內的光周期為12h/d，培養室內的光照強度為18000μmol/m2·s。實施例9雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為90％，培養室內的光周期為12h/d，培養室內的光照強度為22000μmol/m2·s。對比例1雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期30℃，暗期23℃，溼度為90％，培養室內的光周期為12h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。對比例2雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為70％，培養室內的光周期為12h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。對比例3雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為90％，培養室內的光周期為15h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。對比例4雜交種試管苗的煉苗方法選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為90％，培養室內的光周期為12h/d，培養室內的光照強度為25000μmol/m2·s。實施例10雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。實施例11雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：2的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。實施例12雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為2：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。實施例13雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期26℃，暗期25℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期28℃，暗期23℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期30℃，暗期21℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。實施例14雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期28℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期30℃，暗期25℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期32℃，暗期23℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。實施例15雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為10h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為10h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為10h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。實施例16雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為13h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為13h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為13h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。實施例17雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為18000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為20000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為22000μmol/m2·s。實施例18雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為20000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為22000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為24000μmol/m2·s。對比例5雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：3的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。對比例6雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1：1的草炭土，蛭石和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。對比例7雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期30℃，暗期23℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期32℃，暗期21℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期34℃，暗期19℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。對比例8雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為15h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為15h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為15h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。對比例9雜交種試管苗的移栽方法將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為22000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為24000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為26000μmol/m2·s。為了篩選能夠使雜交種試管苗成活率最高的煉苗及移栽方法的組合，將經過上述實施例1－9和對比例1－4的煉苗方法進行煉苗的雜交種試管苗，應用實施例10－18和對比例5－9的移栽方法進行移栽，進行正交試驗，實驗分組設計見表1(表1中實施例簡稱為實，對比例簡稱為對)。表1實1實2實3實4實5實6實7實8實9對1對2對3對4實1012345678910111213實1114151617181920212223242526實1227282930313233343536373839實1340414243444546474849505152實1453545556575859606162636465實1566676869707172737475767778實1679808182838485868788899091實179293949596979899100101102103104實1810106107108109110111112113114115116117對5118119120121122123124125126127128129130對6131132133134135136137138139140141142143對7144145146147148149150151152153154155156對8157158159160161162163164165166167168169對9170171172173174175176177178179180181182上述各組每組隨機選取15株雜交種試管苗，在進行相應的煉苗及移栽之後，統計試管苗成活率。根據實驗結果顯示，1組雜交種試管苗的成活率最高，為93.33％，即，選取三角瓶中生長至4－6cm高，且至少具有3條長度在2cm以上的不定根的，高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，將三角瓶的封口膜扎破，在培養室中繼續培養，至三角瓶內培養基表面出現渾濁。其中，保持培養室內的溫度為：光照期28℃，暗期26℃，溼度為90％，培養室內的光周期為12h/d，培養室內的光照強度為20000μmol/m2·s。將經過煉苗的高加索三葉草與白三葉雜交f1代的試管苗，連同培養基整體從培養容器內取出，用26℃的清水將根部的培養基清洗乾淨，栽種於高溫蒸汽滅菌後的生長基質中，在培養室中繼續培養。其中，生長基質為體積比為1：1的沙土和珍珠巖。移栽後1－10天：溫度為光照期27℃，暗期26℃，溼度為90％－95％，光周期為12h/d，光照強度為19000μmol/m2·s；移栽後11－20天：溫度為光照期29℃，暗期24℃，溼度為85％－90％，光周期為12h/d，光照強度為21000μmol/m2·s；移栽後21－30天：溫度為光照期31℃，暗期22℃，溼度為80％－85％，光周期為12h/d，光照強度為23000μmol/m2·s。153組雜交種試管苗的成活率最低，僅為26.67％，其餘各組雜交種試管苗的平均成活率為73.33％。綜上所述，本發明提供的雜交種試管苗的煉苗方法和移栽方法，能夠有效提高雜交種試管苗的成活率，節約了時間成本和勞動力成本。最後應說明的是：以上各實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；儘管參照前述各實施例對本發明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術特徵進行等同替換；而這些修改或者替換，並不使相應技術方案的本質脫離本發明各實施例技術方案的範圍。當前第1頁12