人溶菌酶凝膠劑、製法及應用的製作方法
2023-05-27 06:32:01
專利名稱：人溶菌酶凝膠劑、製法及應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域，特別是人溶菌酶藥物及其製法、應用。
背景技術：
抗生素創造了許多醫學奇蹟，使許多疾病消失無蹤，如肺炎、腦膜炎、產褥熱、敗血症、結核等。21世紀的今天，耐藥菌的發展令人觸目驚心。如耐青黴素的肺炎鏈球菌，過去對青黴素、紅黴素、磺胺等藥品都很敏感，現在幾乎「刀槍不入」。肺炎克雷伯氏菌對西力欣、復達欣等16種高檔抗生素的耐藥性高達51.85％-100％。而耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)除萬古黴素外已經無藥可治。從細菌的耐藥發展史可以看出，在某種新的抗生素出現以後，就有一批耐藥菌株出現。開發一種新的抗生素一般需要10年左右的時間，而一代耐藥菌的產生只要2年的時間，抗生素的研製速度遠遠趕不上耐藥菌的發展速度。目前急需開發一種針對不同耐藥菌株均有效的「超級抗生素」用於臨床治療。
發明內容
本發明的目的是克服上述不足問題，提供一種人溶菌酶凝膠劑，劑型合理，使用方便、作用時間長、療效更高，另外還提供其製法，製法簡單易操作，提供其最適合的應用，以更佳的提高其作用效果。
本發明為實現上述目的所採用的技術方案是人溶菌酶凝膠劑，含有人溶菌酶300U～300萬U/mL。
所述凝膠劑中還可以加入殺蟎止癢劑SM-650。
所述人溶菌酶為基因工程表達的重組人溶菌酶或基因工程表達人溶菌酶的氨基端帶有(穀氨酸-丙氨酸)2或(穀氨酸-丙氨酸)3修飾的人溶菌酶或基因工程表達或化學合成突變體重組人溶菌酶。
所述人溶菌酶凝膠劑的配方可以是下述兩種(1)純度95％的基因重組人溶菌酶300U～300萬U/mL/g，聚乙二醇400在60～600，硬脂醇10～30，甘油5～50，吡咯烷銅酸鈉5～50，尼泊金甲酯0.15～1.5，蒸餾水18.5～268.5。
(2)純度95％的基因重組人溶菌酶300U～300萬U/mL/g，羧甲基纖維素鈉1～10，甘油2～20，吡咯烷銅酸鈉5～50，尼泊金甲酯0.15～1.5，蒸餾水91.85～918.5本發明所述凝膠劑的製法將純度95％的基因重組人溶菌酶製得300U～300萬U/mL/g，將各原料在常溫下混合均質，在符合GMP要求的製藥工廠，按製藥規程完成，製成凝膠劑。
本發明人溶菌酶凝膠劑在治療由金黃色葡萄球菌、化膿性葡萄球菌、銅綠假單胞菌、表葡菌、丙酸桿菌和耐藥菌引起的痤瘡、燙傷、燒傷、皮膚疾病中的應用。
在治療由金黃色葡萄球菌、化膿性葡萄球菌、銅綠假單胞菌、表葡菌、丙酸桿菌和耐藥菌引起的皮膚潰瘍疾病以及病毒引起的皮膚病中的應用。
本發明人溶菌酶凝膠劑發掘了人溶菌酶藥物的新的劑型，人溶菌酶安全無毒副作用，有很好的藥用前景。來源豐富，製備工藝簡單，並可做成凝膠劑使用方便，而且針對某些疾病有其特殊的效果，水凝膠含20％-40的固體物，水性凝膠基質大多在水中溶脹成水性凝膠而不溶解。凝膠在釋藥系統周圍形成一層稠厚的凝膠屏障，藥物可以通過擴散作用通過凝膠屏障而釋放，釋放速度因凝膠屏障的作用而被延緩。本類基質一般易塗展和洗除，由於粘滯度較小而利於藥物釋放，特別是水溶性藥物的釋放，具有釋藥快、對皮膚無刺激性、無油膩感、能吸收組織滲出液不防礙皮膚正常功能。其他劑型與凝膠劑相比有不足，如噴霧劑、滴劑使用不如凝膠劑方便，藥物劑量不如其精確，藥物在創面保留時間短；膏劑由於粘滯度較大，容易黏附其它物質，或者被其它物質黏附掉，藥物劑量不如其精確，藥物在創面保留時間短。而本發明凝膠劑使用方便，可直接塗抹於創面並形成一層膜，藥物劑量精確，藥物在創面保留時間長，作用時間長，效果更佳。
為了更好地理解本發明的實質，下面將用基因重組人溶菌酶的藥理試驗及結果來說明其在製藥領域中的新用途。
基因重組人溶菌酶以配製200毫升培養基為基準，用H3PO44-8毫升、MgSO41-5克，K2SO42-6克，KOH1-3克，CaSO42H2O1-3.5克，加蒸餾水至200毫升，高壓滅菌後接種甘油管種子，搖床轉數為每分鐘250轉，培養溫度為20-35℃，在恆溫床上培養36-48小時。進行種子罐培養後進行生產罐培養。將發酵表達完成的培養液進行提取純化，對提取純化的蛋白濃縮液冰凍乾燥，測定蛋白量、純度和溶菌酶活性保存。將製備好的純度95％～99％活性30000U/mL/g基因重組人溶菌酶備用。
一、基因重組人溶菌酶(HLZ)體內外抗菌作用評價1體外抗菌作用藥品及試劑1、人溶菌酶(Human Lysozyme HLZ)活性單位30000單位/mL，由大連奇龍生物技術研究所提供。
2、對照溶菌酶(contral Lysozyme，CLZ)白色粉未，活性單位50000單位/mg，美國SIGMA公司產品，批號L6876。
3、克拉黴素效價948μ/mg，中國藥品生物製品檢定所標準品，批號4、羅紅黴素效價878μ/mg，中國藥品生物製品檢定所標準品，批號5、注射用阿莫西林哈爾濱製藥廠產品，批號010504。
6、瓊脂糖(B10WEST AGAROSE)7、三羥甲基氨基甲烷(Tris)成都化學試驗廠，批號010211
試驗菌株所用菌株均為2001.4-2002.4月於四川、北京地區收集的臨床分離致病菌。經本室用API方法重新鑑定後用於試驗。
質控菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希菌ATCC25922銅綠假單孢菌ATCC27853培養基1、Tris-HCl緩衝液0.1M Tris 100ml，0.1M HCl70ml，High Water 800ml，測PH值，用HCl溶液調至PH7.2，加High Water至1000ml。
2、Tris-HCl脂瓊養基在Tris-Cl緩衝液中加入脂瓊糖116℃天菌後使用。
3、M-H培養基中國藥品生物製品檢定所產品，M-H肉湯培養基稱取25g加1000ml蒸餾水，加熱溶解，分裝，高壓滅菌，116℃ 20分鐘。M-H固體培養基稱取36g，加1000ml蒸餾水，高壓滅菌，116℃ 20分鐘，用於革蘭陽性、陰性需氧菌的藥敏試驗。
4、血培養基，即在M-H培養基中加5-10％脫纖維兔血配製而成，用於腸球菌、鏈球菌的藥敏試驗。
試驗方法體外抗菌活性(MIC)測定採用瓊脂二倍稀釋法測定受試藥物對試驗菌株的最低抑菌濃度(MIC)。將受試藥物用滅菌蒸餾水溶解，適當稀釋。分別取1ml藥液加9ml融化的Tris-HCl瓊脂糖固體培養基混勻，以二倍稀釋，製備系列含藥平皿。每皿所含藥物終濃度分別為4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03……0.001mg/ml；用多點接種儀將稀釋至105CFU/ml的試驗菌液接種於各含藥平皿表面，置於37℃培養8-10小時，取出分別吸取6ml融化的M-H培養基(50℃)覆蓋上述系列平皿表面，再置於37℃培養10小時取出，觀察結果，以無細菌生長平皿內所含最低藥物濃度為該菌的最低抑菌濃度(MIC)。
2、體內抗菌作用評價藥品人溶性酶來源同前。
克拉黴素來源同前。
羅紅黴素來源同前。
阿莫西林來源同前。
細菌金黃色葡球菌01193，金黃色葡球菌MRSA021923均為臨床分離致病菌。
動物昆明種小鼠，體重18-22克，由本所動物室提供。
試驗方法1、體內保護試驗挑取一定量的菌苔接種於2ml M-H液體培養基中，37℃培養6小時後，取出用滅菌乾酵母液進行適當稀釋(10-1，10-2，10-3，10-4)，再取昆明種小鼠，隨機分組，每組5隻鼠，分別腹腔感染不同菌量的受試菌液，測定引起小鼠100％死亡的最小致死菌量(MLD)。再按1∶0.5劑間距設置5個劑量組，每組10隻鼠，每隻小鼠腹腔感染1MLD菌量的菌液0.5ml，感染後即刻靜脈注射受試藥0.5ml，設感染對照組(不給藥)，觀察1周，記錄小鼠死亡數。按Bliss法計算半數有效劑量ED50及95％可信限。
2、小鼠皮膚燒傷感染模型的療效評價昆明種小鼠26-30g，隨機分組，每組5隻鼠，分別皮膚燒傷感染模型噴塗金黃色葡萄球菌菌液100ml，菌量為108CFU/ml，連續噴5次(間隔10分鐘噴一次)，末次噴菌後6小時，分別用無菌棉籤挑取皮膚燒傷感染模型塗於無藥瓊脂平板表面，37℃培養18小時，皮膚燒傷感染模型感染細菌數在＞103CFU/ml，且經革蘭氏染色、光鏡檢測為金黃色葡萄球菌的小鼠為感染模型成功。選取皮膚燒傷感染模型感染成功小鼠隨機分組，每組10隻鼠，分別用噴霧器噴塗受試藥物100μl/次，4次/日，連續5日，每日採用咽試子塗片法，於瓊脂平板表面進行活菌計數，作統計學處理，與感染對照組和克拉黴素組、羅紅黴素給藥組作比較。
表1人溶菌酶、雞溶菌酶、克拉黴素和羅紅黴素體內外抗菌活性
續表2
續表3
試驗結果(1)人溶菌酶對臨床分離菌株的體外抗菌活性見表1。(2)克拉黴素、羅紅黴素、阿莫西林與人溶菌酶以1∶1聯合用藥的體外抗菌作用結果見續表2。(3)人溶菌酶對379株臨床分離致病菌的MIC50、MIC90見續表3。
以上試驗結果表明人溶菌酶體外具有一定抗菌作用，體內對傷口感染潰爛的療效較確切。
二、動物模型試驗A、人溶菌酶對大鼠的鎮痛作用(大鼠甩尾法)選用120-150克SD健康大鼠50隻，雌雄各半，動物自由飲水。試驗室溫度控制在22-28℃左右，動物餵飼大滑鼠準飼料。在TF-光熱測痛儀(光源為12V，50W)熱照射下10秒鐘內反應的大鼠，隨機分為5組，每組10隻，雌雄各半。設空白對照組、人溶菌酶三個劑量組(120、60、30IU/只)、雞溶菌酶(陽性對照)30IU/，均尾部塗藥。塗藥前和塗藥後0.5-4小時測每隻大鼠的疼痛反應(甩尾)時間，若痛閾升高到照射30秒鐘不甩尾時即中斷照射，以免損傷皮膚與起泡，並以30秒計算。試驗重複一次。
試驗結果見表17-21，結果表明，塗抹人溶菌酶30、60、120IU/只三小時內，其痛閾明顯升高，具有鎮痛作用。
表17-21(A)人溶菌酶外塗對大鼠的鎮痛作用(甩尾法)(第一次試驗結果)
注經統計學處理，與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
表17-21(B)人溶菌酶外塗對大鼠的鎮痛作用(甩尾法)
注經統計學處理，與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
B、人溶菌酶對巴豆油誘發小鼠耳廓腫脹的影響選用體重27-30克的健康雄性昆明小鼠50隻，隨機分成5組，每組10隻。動物自由飲水。試驗室溫度控制在22-28℃左右。動物餵飼大滑鼠準飼料。第一組為空白對照組；第二、三、四組為人溶菌酶，劑量分別為120、60、30IU/只；第五組為雞溶菌酶(陽性對照)，30IU/只。首先，各組小鼠全部右耳內側塗1％巴豆油30μL致炎，(巴豆油，淺棕色油狀液體，藥用級，批號000309，由江西吉水縣華寶天然藥用廠生產。臨用前用乙醇∶水∶乙醚25∶5∶70混合溶媒配製成1％濃度備用。)半小時後分別用雙蒸水20μl、人溶菌酶(6000IU/ML)20μl、入溶菌酶(3000IU/ML)20μl、人溶菌酶(1500IU/ML)20μl、雞溶菌酶(1500IU/ML)20μl塗抹各組小鼠右耳內側。致炎後4小時將小鼠脫頸椎致死，沿耳廓基線剪下左右兩耳片，用8mm打孔器衝下兩耳片，精確稱重，左右耳片重量之差為腫脹度。經T檢驗，比較藥物組與空白對照組的差異，並求出抑制率。試驗重複一次。試驗結果見表17-22。小鼠經外塗人溶菌酶120、60、30IU/只，使小鼠由巴豆油誘發耳廓腫脹度明顯減輕，經T檢驗，藥物組與空白對照組比較，有顯著性差異(P＜0.05)。結果表明人溶菌酶具有抗炎作用。
表17-22人溶菌酶對巴豆油誘發小鼠耳廓腫脹的影響
注與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
C重組人溶菌酶對角叉菜膠致大鼠足蹠腫脹的影響(1)受試藥物重組人溶菌酶白色粉末，批號020110，3萬單位/毫克，由大連奇龍生物技術研究所提供。臨用時用無菌雙蒸水配成所需濃度。
(2)對照品雞溶菌酶白色粉末，2萬單位/毫克，Lysozyine Sigma L6878.臨用時用無菌雙蒸水配製。
(3)試劑角叉菜膠，淺黃白色粉末，批號21H0340，Sigam Chemical CO生產。臨用時用無菌生理鹽水配成1％的濃度。
實驗方法選用體重130-150克的健康雄性SD大鼠50隻，由四川抗菌素工業研究所動物中心提供。合格證川實動管第99-32號。每籠5隻。動物自由飲水，試驗室溫度控制在22~28℃左右，動物餵飼大滑鼠準飼料。隨機分成5組，每組10隻。測量各鼠正常左後足蹠容積。第1組為空白對照組，外塗等容積無菌雙蒸水；第2、3、4組為人溶菌酶，劑量分別為120、60、30IU/只；第5組為雞溶菌酶，劑量為30IU/只。每鼠外塗各組藥物(20μl/只)一次後1小時，給大鼠左後足蹠皮下注射1％的角叉菜膠0.1ml。致炎後半小時再塗一次藥。致炎前和致炎後1、2、4、6小時按微量吸管測量法測定致炎前後大鼠左後足容積。致炎前後足容積差為腫脹度。試驗重複一次。
數據處理和統計分析對計量資料，把原始數據按組分別輸入Microsoft Excel中，各組結果以算術平均數±標準差表示。根據《新藥西藥臨床前研究指導原則彙編》中的有關新藥藥效研究中統計處理的指導原則，選擇Student t檢驗進行各用藥組均數與模型對照組均數、相同劑量的受試藥組與對照品組的差異顯著性檢驗。
試驗結果見表4，大鼠外塗人溶菌酶30、60、120IU/只，在致炎後1-4小時內，使由1％角叉菜膠誘發的左後足蹠腫脹度明顯減輕。說明人溶菌酶具有抗炎作用，重組人溶菌酶不但有殺菌作用，而且有很好的抗炎作用。
表4(1)人溶菌酶對大鼠由角叉菜膠所致足蹠腫脹的影響(第一次試驗結果)
注經統計學處理，與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
表4(2)人溶菌酶對大鼠由角叉菜膠所致足蹠腫脹的影響(第二次試驗結果)
注經統計學處理，與空白對照組比較，*P＜0.05。
D重組人溶菌酶(HLZ)加殺蟎止癢劑SM-650體外殺蟎作用評價1、基因重組人溶菌酶濃縮液活性單位300單位/mL試驗藥品及試劑1、基因重組人溶菌酶濃縮液(Human Lysozyme HLZ)活性單位300單位/mL，由大連奇龍生物技術研究所提供，2、殺蟎止癢劑SM-650白色粉未，純度為≥99％，ph6～8，生產單位北京耐特生化技術研究所試驗蟎蟲所用蟎蟲標本為第四軍醫大學臨床門診痤瘡病人。
試驗方法體外殺蟎蟲活性測定採用圖片法測定了人溶菌酶(HLZ)加殺蟎止癢劑SM-650最低殺蟎濃度(MIC)。將蟎蟲標本分離到玻片上，用人溶菌酶(HLZ)300單位/mL，殺蟎止癢劑SM-650 1％/Ml。滴到玻片蟎蟲標本上，觀察結果，以最低殺蟎濃度(MIC)。
試驗結果見表5，結果表明人溶菌酶加殺蟎止癢劑SM-650體外殺蟎有殺滅作用。
表5
2、基因重組人溶菌酶濃縮液活性單位3000單位/mL試驗藥品及試劑1、基因重組人溶菌酶濃縮液(Human Lysozyme HLZ)活性單位3000單位/mL，由大連奇龍生物技術研究所提供，2、殺蟎止癢劑SM-650白色粉未，純度為≥99％，ph6～8，生產單位北京耐特生化技術研究所試驗蟎蟲所用蟎蟲標本為第四軍醫大學臨床門診痤瘡病人。
試驗方法體外殺蟎蟲活性測定採用圖片法測定了人溶菌酶(HLZ)加殺蟎止癢劑SM-650最低殺蟎濃度(MIC)。將蟎蟲標本分離到玻片上，用人溶菌酶(HLZ)3000單位/mL，殺蟎止癢劑SM-650 1％/Ml。滴到玻片蟎蟲標本上，觀察結果，以半數殺蟎濃度(MBC)。
試驗結果見表6，結果表明人溶菌酶加殺蟎止癢劑SM-650體外殺蟎有殺滅作用。
表6
3、基因重組人溶菌酶濃縮液活性單位30000單位/mL試驗藥品及試劑1、基因重組人溶菌酶濃縮液(Human Lysozyme HLZ)活性單位30000單位/mL，由大連奇龍生物技術研究所提供，2、殺蟎止癢劑SM-650白色粉未，純度為≥99％，ph6～8，生產單位北京耐特生化技術研究所試驗蟎蟲所用蟎蟲標本為第四軍醫大學臨床門診痤瘡病人。
試驗方法體外殺蟎蟲活性測定採用圖片法測定了人溶菌酶(HLZ)加殺蟎止癢劑SM-650最低殺蟎濃度(MIC)。將蟎蟲標本分離到玻片上，用人溶菌酶(HLZ)30000單位/mL，殺蟎止癢劑SM-650 1％/Ml。滴到玻片蟎蟲標本上，觀察結果，以無活蟎蟲為殺蟎濃度。
試驗結果見表7，結果表明人溶菌酶加殺蟎止癢劑SM-650體外殺蟎有殺滅作用。
表7
採用圖片法測定了人溶菌酶(HLZ)加殺蟎止癢劑SM-650對臨床分離五人份的蟎蟲標本體外殺蟎作用，結果表明人溶菌酶加殺蟎止癢劑SM-650對蟎蟲有殺滅作用。殺蟎止癢劑SM-650最低殺蟎濃度MICRange為0.2％-2％。
E重組人溶菌酶抑制豚鼠牛血清白蛋白過敏反應試驗模型選用體重250克左右的健康豚鼠20隻，雄性，隨機均分四組，每組5隻，進行靜脈注射牛血清白蛋白造模。將造模後的20隻小鼠重新合併後再隨機分成四組，分別設立三個給藥組和一模型組。重組人溶菌酶臨床氣霧劑治療時藥液的濃度為15000u/ml，初步擬定劑量為15000u/次，每日3～5次，即0.5mg/次/日。(按體表面積推算至豚鼠劑量為1.3×10-3mg/只(250g體重計)，由於人通氣量9000ml/分相當於豚鼠通氣量31ml/分的290倍，人用單次劑量0.5mg/70kg相當於小鼠劑量1.3×10-3mg/250g的280倍，以上二者較為接近)。所以設定用臨床人用濃度0.5mg/ml對小鼠進行霧化治療，另考慮到臨床人用氣霧吸入重組人溶菌酶氣體利用率較高，而小鼠在霧化缸內只能靠自身呼吸吸入含藥氣體，故只有延長吸入時間才能確保吸入藥量，設定為一小時。在15000u/ml為低劑量濃度基礎上再配製30000u/ml、60000u/ml二濃度作為中、高劑量組治療時的藥液濃度。在第二十一天給每隻豚鼠靜脈注射牛血清白蛋白前一個小時，將豚鼠置於玻璃乾燥器後，用PAR1.BOY壓縮噴霧器霧化不同濃度的重組人溶菌酶液對豚鼠進行霧化預防。然後給每隻豚鼠靜脈注射牛血清白蛋白1mg，肉眼觀察豚鼠形態變化情況和死亡數量及時間。
實驗結果豚鼠靜脈注射牛血清白蛋白後10秒鐘模型組出現咳嗽、氣促和撓唇現象。30秒鐘後模型組豚鼠全部死亡。給藥重組人溶菌酶組30小時豚鼠仍然全部存活。給藥重組人溶菌酶組和一模型組有明顯區別。見表8、見表9。
表8
表9
綜合以上實驗結果表明，對豚鼠靜脈注射牛血清白蛋白進行過敏反應試驗重組人溶菌酶霧化保護，有很好的保護預防效果。其保護預防效果與使用劑量無明顯量效關係。
F、重組人溶菌酶抗皰疹病毒抑制豚鼠角膜炎試驗模型選用體重250克左右健康豚鼠20隻，雄性，將20隻豚鼠隨機均分四組，每組5隻，進行滴眼液造模。首先用細針在豚鼠的眼角膜上輕微劃出三道痕跡，然後用四川抗菌素工業研究所實驗動物中心提供I型皰疹病毒100～1000TCID50感染豚鼠的眼角膜，每天三次。第三天豚鼠眼角膜出現輕微角膜炎，第四天豚鼠眼角膜出現紅腫，角膜炎加重。將造模後的20隻豚鼠重新合併後再隨機分成四組，分別設立三個給藥組和一模型組。
重組人溶菌酶滴眼液以15000u/ml(每滴1500U)為低劑量濃度基礎上再配製30000u/ml(每滴3000U)、60000u/ml(每滴6000U)二濃度作為中、高劑量組治療時的藥液濃度。在第五天開始給豚鼠眼角膜用重組人溶菌酶滴眼液，每天三次，每次每隻眼一滴，肉眼觀察豚鼠形態變化情況及時間。
實驗結果給藥重組人溶菌酶滴眼液第二天，給藥重組人溶菌酶滴眼液中、高劑量組治療效果凸現，豚鼠角膜紅腫減輕。給藥重組人溶菌酶滴眼液第三天，給藥重組人溶菌酶滴眼液低劑量組也出現好轉治療效果。給藥重組人溶菌酶滴眼液第六天，給藥模型低、中、高組豚鼠角膜炎和紅腫全部消退好轉。模型對照組豚鼠角膜紅腫，角膜炎症加重並出現潰瘍。給藥重組人溶菌酶組和一模型組有明顯區別。見表10、見表11。
表10
表11
綜合以上實驗結果表明，試驗重組人溶菌酶對抗I型皰疹病毒100～1000TCID50感染豚鼠，有很好的治療效果。其治療效果與使用劑量有明顯量效關係。
用法與用量直接作用於病灶局部給藥1500u～30000u/g外用，每日2～3次，每次按病灶部位大小給藥。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步的描述，但不限於實施例。
實施例1基因重組人溶菌酶的製備基因重組人溶菌酶經高壓滅菌後接種甘油管種子，搖床轉數為每分鐘250轉，培養溫度為20℃，在恆溫床上培養36小時。進行種子罐培養後進行生產罐培養。將發酵表達完成的培養液進行提取純化，對提取純化的蛋白濃縮液冰凍乾燥，測定蛋白量、純度和溶菌酶活性保存備用。
人溶菌酶凝膠劑的製備將純度95％的基因重組人溶菌酶製得3萬U/mL/g，聚乙二醇400在100，硬脂醇12，甘油10，吡咯烷銅酸鈉15，尼泊金甲酯0.16，蒸餾水26在常溫下混合均質，在符合GMP要求的製藥工廠，按製藥規程完成，製成凝膠劑。
實施例2根據實施例1相同的製法製備重組人溶菌酶，然後將純度95％的基因重組人溶菌酶製得30萬U/mL/g，羧甲基纖維素鈉5，甘油15，吡咯烷銅酸鈉22，尼泊金甲酯0.35～1.5，蒸餾水118在常溫下混合均質，在符合GMP要求的製藥工廠，按製藥規程完成，製成凝膠劑。
實施例3根據實施例1相同的製法製備重組人溶菌酶，然後將純度95％的基因重組人溶菌酶製得100U萬U/mL，聚乙二醇400在300，硬脂醇23，甘油30，吡咯烷銅酸鈉33，尼泊金甲酯1.0，蒸餾水258，殺蟎止癢劑SM-650純度為≥99％ph6～8(商品)1，在常溫下混合均質，製成凝膠劑。
實施例4根據實施例1相同的製法製備重組人溶菌酶，然後將純度95％的基因重組人溶菌酶製得260萬U/mL/g，羧甲基纖維素鈉8，甘油8，吡咯烷銅酸鈉30，尼泊金甲酯0.85，蒸餾水800在常溫下混合均質，在符合GMP要求的製藥工廠，按製藥規程完成，製成凝膠劑。
權利要求
1.人溶菌酶凝膠劑，其特徵是含有人溶菌酶300U～300萬U/mL。
2.根據權利要求1所述的人溶菌酶凝膠劑，其特徵是含有殺蟎止癢劑SM-650。
3.根據權利要求1所述人溶菌酶凝膠劑，其特徵是人溶菌酶為基因工程表達的重組人溶菌酶或基因工程表達人溶菌酶的氨基端帶有(穀氨酸-丙氨酸)2或(穀氨酸-丙氨酸)3修飾的人溶菌酶或基因工程表達或化學合成突變體重組人溶菌酶。
4.根據權利要求1所述的人溶菌酶凝膠劑，其特徵是由以下原料製成，純度95％的基因重組人溶菌酶300U～300萬U/mL/g，聚乙二醇400在60～600，硬脂醇10～30，甘油5～50，吡咯烷銅酸鈉5～50，尼泊金甲酯0.15～1.5，蒸餾水18.5～268.5。
5.根據權利要求1所述的人溶菌酶凝膠劑，其特徵是由以下原料製成，純度95％的基因重組人溶菌酶300U～300萬U/mL/g，羧甲基纖維素鈉1～10，甘油2～20，吡咯烷銅酸鈉5～50，尼泊金甲酯0.15～1.5，蒸餾水91.85～918.5。
6.根據權利要求1-5任一所述的人溶菌酶凝膠劑在治療由金黃色葡萄球菌、化膿性葡萄球菌、銅綠假單胞菌、表葡菌、丙酸桿菌和耐藥菌引起的痤瘡、燙傷、燒傷和皮膚病中的應用。
7.根據權利要求1-5任一所述的人溶菌酶凝膠劑在治療由金黃色葡萄球菌、化膿性葡萄球菌、銅綠假單胞菌、表葡菌、丙酸桿菌和耐藥菌引起的皮膚潰瘍疾病及由病毒引起的皮膚病中的應用。
全文摘要
本發明涉及生物醫藥領域，人溶菌酶凝膠劑，含有人溶菌酶300U～300萬U/mL，另外還提供其製法及應用，本發明基因重組人溶菌酶發掘了新的醫療用途，開拓了一個新的應用領域。安全無毒副作用，有很好的藥用前景。並且基因重組人溶菌酶來源豐富，製備工藝簡單，使用方便。本發明人溶菌酶凝膠劑發掘了人溶菌酶藥物的新的劑型，人溶菌酶安全無毒副作用，有很好的藥用前景。來源豐富，製備工藝簡單，製成凝膠劑使用方便，可直接塗抹於創面並形成一層膜，藥物劑量精確，藥物在創面保留時間長，作用時間長，效果更佳。
文檔編號A61K38/48GK1709503SQ200510046498
公開日2005年12月21日 申請日期2005年5月20日 優先權日2005年5月20日
發明者張華 申請人:張華