一種預防腎結石的罐子草提取物及其製備工藝和應用的製作方法
2023-05-27 01:46:56 1
一種預防腎結石的罐子草提取物及其製備工藝和應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種預防腎結石的罐子草提取物及其製備工藝和應用，所述的罐子草提取物為罐子草新鮮嫩葉的乙醇浸提物，它是在室溫條件下，將罐子草的新鮮嫩葉磨漿後用濃度為92%-100%（v/v）的乙醇溶液浸提，提取液濃縮成稠膏，冷凍乾燥，即得。本發明的提取物能明顯降低機體尿液及腎組織中草酸和鈣含量，從而達到預防腎結石的目的。
【專利說明】—種預防腎結石的罐子草提取物及其製備工藝和應用
【技術領域】
[0001]本發明屬於中藥材提取【技術領域】，涉及一種預防腎結石的罐子草提取物及其製備工藝和應用。
【背景技術】
[0002]腎結石是泌尿系統常見疾病，發病率為3.4% -4.8%，發病率隨年齡增加，危險性也增大。腎結石成分以草酸鈣和磷酸鈣結石為主，佔全部尿路結石的80% -84%，其中草酸鈣結石佔58.8%。目前腎結石治療主要運用體外衝擊波碎石術(ESWL)和腔內泌尿外科手術，但難以根治腎結石，其術後復發率為78%-80%。我國在應用中醫藥治療和預防結石病復發方面有著悠久的歷史，但該方面的基礎研究尚有待進一步深入研究並開發。
[0003]罐子草，灌木，高0.3-1.2m。莖四稜形或稀六稜形，被平貼的糙伏毛或上升的糙伏毛，葉對生或有時3枚輪生；葉柄長0.5-lcm，密被平貼糙伏毛；葉片堅紙質，卵形至卵狀披針形，長5.5-11.5cm，寬2.3_3cm，先端漸尖，基部鈍或圓形，全緣，具緣毛，兩面被糙伏毛、微柔毛及透明腺點；基出脈5。稀疏聚傘花序組成圓錐花序，頂生；花萼長約2.3cm，長壇形，外面被刺手狀有柄星狀毛及微柔毛，裂片4，長三角形或卵狀三角形，長約1.1cm ;花瓣4，深紅色至紫色，卵形，長約2cm ;雄蕊8，花葯具長喙，藥隔基部微膨大，末端具刺毛2 ;子房半下位，4室，先端具一圈短剛毛，上半部被疏微柔毛。蒴果長卵形，為宿存萼所包，宿存萼長壇狀，中部略上縊縮，長1.4-2cm，被刺毛狀有柄星狀毛。花果期7-9月。生於海拔250_800m的山坡、山谷、水邊、路旁、疏林中或灌木叢中。分布於長江流域以南及臺灣、廣西、貴州等地。
[0004]目前，罐子草被用於溼熱瀉痢、淋痛、久咳、勞嗽、咯血、月經不調、白帶等方面的疾病，尚無文獻報導罐子草或其提取物具有預防腎結石的功效。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在於提供一種以罐子草作為原料製備的預防腎結石罐子草提取物及其製備工藝和應用。
[0006]為了實現本發明的目的，發明人通過大量試驗研究並不懈探索，最終獲得了如下技術方案:
一種預防腎結石的罐子草提取物，所述的罐子草提取物為罐子草新鮮嫩葉的乙醇浸提物。需要說明的是，本發明所述的中藥材罐子草選用野牡丹科植物朝天罐Osbeckiaopipara C.Y.Wuet C.Chen 的新鮮嫩葉。
[0007]—種上述預防腎結石的罐子草提取物的製備工藝，該工藝包括如下步驟:將罐子草新鮮嫩葉磨漿後用濃度為92%_100% (v/v)的乙醇溶液浸提，提取液濃縮成稠膏，冷凍乾燥，即得。
[0008]優選地，如上所述預防腎結石的罐子草提取物的製備工藝，其中所述的浸提步驟為:將罐子草新鮮嫩葉磨漿後用濃度為92%-100% (v/v)的乙醇溶液超聲振蕩0.5-1.5h，然後在室溫下放置36_720h。優選室溫下放置浸提48_96h。
[0009]優選地，如上所述預防腎結石的罐子草提取物的製備工藝，其中所述的濃縮步驟在42 °C以下進行。
[0010]優選地，如上所述預防腎結石的罐子草提取物的製備工藝，其中乙醇溶液的用量為罐子草新鮮嫩葉質量的3-8倍(v/w)。
[0011]本發明通過設計試驗觀察小鼠負重遊泳時間，檢測小鼠負重遊泳後血漿中乳酸的含量，證實了罐子草提取物具有提高小鼠運動耐力、降低運動後小鼠血清血中乳酸的作用。本發明試驗還證明罐子草提取物組小鼠運動後肝糖元含量明顯高於正常對照組，血清尿素氮明顯低於正常對照組，說明罐子草提取物有較好維持肝糖元含量，提高動物對運動負荷的適應能力。
[0012]腎結石的形成是腎內一定大小的晶體瀦留或粘附到腎小管上皮細胞，草酸鈣晶體(CaOX)是腎結石中最常見的晶體。乙二醇是草酸的前體，進入體內後轉化成羥乙酸，後者既可在羥乙酸氧化酶的作用下直接轉化為草酸，也可經乳酸脫氧酶的催化轉化成乙醛酸，乙醛酸又可以直接在非酶作用下轉化為草酸。因此，給動物餵食乙二醇進入體內代謝後最終轉化為草酸，經尿排出，增加尿中草酸的濃度，加服氯化銨，腎內結石形成率提高。本發明通過腎結石動物模型試驗研究發現，能明顯降低腎結石小鼠尿液及腎組織中草酸和鈣含量，從而達到預防腎結石的目的，其抑制結石的形成可能是通過抑制草酸鈣結晶的生長和聚集，減少草酸鈣晶體在腎中的形成和沉積從而抑制草酸鈣結石的形成。
【具體實施方式】
[0013]以下是本發明罐子草乙醇浸提物乾粉的製備實施例和效果試驗例，對本發明做進一步說明和闡述。但是，本發明的保護範圍並不受限於以下實施例，凡是基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。
[0014]實施例1罐子草乙醇浸提物的製備
稱取1.16kg罐子草的新鮮嫩葉，清洗乾淨，磨漿，所得漿液中加入6L體積百分濃度為95%的乙醇溶液，超聲振蕩lh，頻率26.4kHz,隨後在室溫下放置72h後進行過濾，將濾液在40°C條件下減壓濃縮成稠膏，冷凍乾燥，粉碎成細粉，過100目篩，得罐子草乙醇浸提物乾粉。
[0015]對比例I罐子草提取物的製備
將1.0kg罐子草新鮮嫩葉，清洗乾淨，用6L體積百分濃度為95%的乙醇溶液加熱回流提取2h，過濾，重複提取2次，合併2次濾液，將濾液在40°C條件下減壓濃縮成稠膏，冷凍乾燥，粉碎成細粉，過100目篩，得罐子草提取物乾粉。
[0016]實施例2罐子草乙醇浸提物對小鼠草酸鈣腎結石模型的抗結石試驗研究
ICR小鼠，雄性，體質量28-32g，隨機分為如下四組:正常對照組、模型對照組、試驗I組、試驗II組，每小組12隻。除正常對照組小鼠每天自由飲用正常水外，其他各組均自由飲用成石水(含1%乙二醇+1%氯化銨)，連續飲用6周，同時並進行如下灌胃給藥幹預:以體質量為基準，正常對照組和模型對照組灌胃純化水，劑量為0.lml/10g ;試驗I組灌胃對比例I製備的罐子草提取物乾粉，試驗II組灌胃本發明實施例1製備的罐子草乙醇浸提物，劑量均為0.76g/kg/d，每天上午9點和下午5點左右各灌胃一次，共給藥6周。於實驗第6周末次給藥後，收集4h尿液，採用甲基百裡酚藍法測定尿鈣含量，以及採用高錳酸鉀退色法測定草酸含量。第6周末次給藥後24h處死全部小鼠，取腎臟稱重，用生理鹽水進行組織勻漿，測定腎鈣、草酸含量。
[0017]小鼠造模後，精神萎靡，畏寒捲縮，毛色變黃，呈聳毛狀，體質量增長明顯抑制，腎臟指數(腎臟/體質量比)增加，部分動物死亡。而試驗II組組與模型對照組相比，症狀有很大改善，但對腎臟指數的影響不顯著，具體結果見表I。
[0018]表I各組小鼠體質量和腎臟重量比較
pmm^腎耐旨數繃Ij 樣本量(
(g)(m?/g)
正顆挪擔12 38.8±2.I16.1±1.0
模型對照10 30.4土1.8"19.仕 1.1**
試驗 I 組11 31.?±1.620.3±0.9
試驗 II 組12 33.1±2.0*19.2±1.4
與正常對照組比較，*Ρ < 0.05，蛛P < 0.01 ；
與模型對照組比較，?Ρ < 0.05，--Ρ < 0.01。
[0019]另外，腎組織形態學和腎組織草酸鈣結晶觀察發現，模型對照組和試驗I組的動物腎臟水腫，表面蒼白，質地變硬，腎臟表面可見散在白色小點。而試驗II組動物的症狀較輕，表面紅潤，質地正常。值得注意的是，通過表2的試驗結果可以看出，試驗II組的尿液和腎臟的鈣含量、草酸含量明顯低於模型對照組0° < 0.05或產< 0.01)，也顯著低於試驗I組{P < 0.05)，這說明罐子草乙醇浸提物對小鼠草酸鈣腎結石模型具有非常顯著的抗結石作用，而通過乙醇加熱回流提取的罐子草提取物沒有表現出抗結石的生物活性，這可能是高溫破壞了相應的活性成分所致。
[0020]表2各組小鼠尿液、腎臟的鈣和草酸含量比較
Wm Wm^Wm^^Wm.^
B.(mmol/L)(mmol/L) (mmol/g) (|imol/g)
正 SIS120.69 +0.120.08 !±0^0340.45tCLll0.86+0.41
模型組101.84 土 0.47**0.132±0.021**0.64±0.15*1.55±0.48**
試驗丨組11 1.?1±0.300.139±0.0190.58±0.1S1.61+0.37
試驗IIIi120.95±0.23*'s0.093±0.020'!>0.50*0.12—*0.97±0.35>!—'
模型組與正常組比較，*Ρ < 0.01 ；
試驗組與模型組比較，V <0.05，yyZ7 <0.01。
【權利要求】
1.一種預防腎結石的罐子草提取物，其特徵在於:所述罐子草提取物為罐子草新鮮嫩葉的乙醇浸提物。
2.一種根據權利要求1所述預防腎結石的罐子草提取物的製備工藝，其特徵在於該工藝包括如下步驟:在室溫條件下，將罐子草的新鮮嫩葉磨漿後用濃度為92%-100%v/v的乙醇溶液浸提，提取液濃縮成稠膏，冷凍乾燥，即得。
3.根據權利要求2所述預防腎結石的罐子草提取物的製備工藝，其特徵在於，所述浸提步驟為:將罐子草的新鮮嫩葉磨漿後用濃度為92%-100%v/v的乙醇溶液超聲振蕩0.5-1.5h，然後在室溫下放置36-720h。
4.根據權利要求2所述預防腎結石的罐子草提取物的製備工藝，其特徵在於:所述濃縮步驟在42 °C以下進行。
5.根據權利要求2所述預防腎結石的罐子草提取物的製備工藝，其特徵在於:所述乙醇溶液的用量為罐子草新鮮嫩葉質量的3-8倍v/w。
6.權利要求1所述的罐子草新鮮嫩葉的乙醇浸提物在製備預防腎結石的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K36/80GK104127454SQ201410422184
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年8月26日 優先權日:2014年8月26日
【發明者】武希芬 申請人:崔銀方