包埋玻璃化超低溫保存山藥種質的預培養基及其培養方法

2023-05-27 01:45:11

專利名稱：包埋玻璃化超低溫保存山藥種質的預培養基及其培養方法
包埋玻璃化超低溫保存山藥種質的預培養基及其培養方法 技術領域-
本發明涉及一種種質保存技術，特別是一種包埋玻璃化超低溫保存山 藥種質的預培養基及其培養方法。
背景技術：
山藥既是一種深受人們喜愛的食品，又是一種藥用價值很高且應用廣 泛的中藥材，尤其懷山藥，其藥用價值更高。然而，對山藥種質的保存技 術仍沿用傳統的方法，許多珍貴種質資源丟失，不能適應現在日益增長的 需求量的要求。超低溫保存技術是目前保存期長、品質穩定、應用成熟的 一種種質保存方法。20世紀90年代出現的包埋玻璃化法超低溫保存技術， 綜合了玻璃化法和包埋脫水法的優點，而克服了包埋幹法操作繁瑣及細胞 內外冰晶的形成和玻璃化法的毒性。目前己在蘋果、薄荷、草莓、柿、山 葵、甘薯、大蒜等得到成功應用。此種方法由繼代培養、低溫練苗、預培 養、包埋、裝載和脫水處理、液氮保存、保存後化凍和洗滌及再生培養等 環節組成、然而，經過試驗這種方法在山藥種質的保存中應用未能成功， 經研究其原因之一是預培養基不適於山藥種質。

發明內容
本發明的目的是提供一種能將包埋玻璃化法超低溫保存技術應用在山 藥種質保存的包埋玻璃化超低溫保存山藥種質的預培養基及其培養方法。 本發明的技術解決方案是， 一種包埋玻璃化超低溫保存山藥的預培養基， 它包含有MS基本培養基，其特徵在於在MS中還加有以下兩種滲透物
質的任一種①0.1 mol/L甘油和0.2mol/L蔗糖；②0.2mol/L蔗糖。 一種
用權利要求1製成的包埋玻璃化超低溫保存山藥的預培養基對山藥種質進 行預培養的方法，包括將低溫鍛鍊後的山藥試管苗切成帶芽莖段，其特徵 在於將切取的帶芽山藥莖段放入預培養基中在4。C下恆定培養3-5天。 本發明與現有技術比較具有操作簡單、保存時間長和保存後再生植株遺傳 穩定性好的顯著優點。
具體實施例方式
本發明的預培養基是MS+ 0.2 mol/L蔗糖+0.1 mol/L甘油或者MS+ 0.2 mol/L庶糖。
本發明的預培養方法是，將低溫鍛鍊後的懷山藥(一般山藥亦可)試 管苗切成lcm左右的帶芽莖段，放入上述本發明的預培養基中在4。C下恆定 培養3-5天。
通過對保存時間和保存後再生植株的遺傳穩定性的研究發現保存時
間對材料的相對存活率和成活率均沒有影響；再生植株與常溫保存苗相比，
株高、葉片數、芽數、莖節長、葉綠素和可溶性蛋白的含量、SOD、 POD、 PPO和澱粉酶的同工酶酶譜以及RAPD條帶均未出現變異。
權利要求
1、一種包埋玻璃化超低溫保存山藥種質的預培養基，它包含有MS基本培養基，其特徵在於在MS中還加有以下兩種滲透物質的任一種①0.1mol/L甘油和0.2mol/L蔗糖；②0.2mol/L蔗糖。
2、 一種用權利要求l製成的包埋玻璃化超低溫保存山藥的預培養基對 山藥種質進行預培養的方法，包括將低溫鍛鍊後的山藥試管苗切成帶芽莖 段，其特徵在於將切取的帶芽山藥莖段放入預培養基中在4'C下恆定培養 3-5天。
全文摘要
本發明公開了一種包埋玻璃化超低溫保存山藥種質的預培養基及其培養方法，本發明的目的是提供一種能將包埋玻璃化法超低溫保存技術應用在山藥種質保存的包埋玻璃化超低溫保存山藥種質的預培養基及其培養方法。本發明的技術解決方案是，它包含有MS基本培養基，在MS中還加有以下兩種滲透物質的任一種①0.1mol/L甘油和0.2mol/L蔗糖；②0.2mol/L蔗糖。本發明與現有技術比較具有操作簡單、保存時間長和保存後再生植株遺傳穩定性好的顯著優點。本發明用於山藥的離體保存。
文檔編號A01H4/00GK101637124SQ20091006604
公開日2010年2月3日 申請日期2009年9月3日 優先權日2009年9月3日
發明者娜 周, 宋萍萍, 張曉麗, 翔 李, 苗 李, 李明軍, 李海兵, 趙喜亭 申請人:河南師範大學