預防與治療自身免疫性疾病的物質的製作方法
2023-05-27 11:37:01
專利名稱：預防與治療自身免疫性疾病的物質的製作方法
聯邦資助研發的聲明本發明是由美國政府資助並在與美國國防部的National MedicalTechnology Testbed公司的合作協議(協議號DAMD-17-97-2-7016)下完成的，因此美國政府擁有本發明的某些權利。
相關申請的交叉引用本申請要求2002年8月6日在美國提交的臨時申請第60/401,652號，題目為「抑制糖尿病的方法和物質」的權益，其內容在本發明公開中全部引用作為參考。
背景技術：
自身免疫性疾病可造成較高的人類發病率和死亡率。這些疾病大約包括80種疾病，例如類風溼關節炎、系統性紅斑狼瘡及多發性硬化症，有大約5％的美國人受到影響。I型糖尿病作為一種自身免疫性疾病，在兒童中是最常見的慢性疾病，其發病在全世界呈穩定的上升趨勢。
一般而言，通過抗原提呈細胞(APC)對胰腺β細胞合成的自身抗原的展現來作為I型糖尿病發病的開始。該展現導致胰腺β細胞免疫系統的破壞，這種破壞多數由I型T輔助細胞(Th1)和細胞毒T淋巴細胞而引起並由此導致胰島素產生能力的喪失。
I型糖尿病的許多預防性和治療性手段是通過誘導免疫系統使致病的自身反應性淋巴細胞喪失、失活或抑制來防止β細胞的破壞，該手段例如給予單獨傳輸自身抗原的疫苗、或給予作為免疫系統的直接作用因子的物質(例如細胞因子)。然而，目前使用的以DNA為基礎的疫苗在預防所述的疾病中沒有完全的作用，而且其中一些疫苗不但不能預防所述的疾病相反卻與誘導或增強自身免疫反應有關。此外，細胞因子的使用可伴隨較高的發病率。
因此，需要一種新的通過使用不伴隨上述缺點的疫苗來預防、延遲患者的自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的方法。
此外，需要一種新的通過使用不伴隨上述缺點的疫苗來預防、延遲患者的I型糖尿病的發病或治療所述疾病的方法。
發明概述根據一個實施方案，本發明提供預防、延遲患者的一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的物質。
所述的物質包含多聚核苷酸構建，所述的構建包含編碼促凋亡蛋白BAX和編碼一種或多種自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸序列。
根據另一個實施方案，本發明提供包含編碼促凋亡蛋白BAX和編碼一種或多種自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建的製備藥物的用途，所述的藥物用於預防、延遲一種或多種自身免疫性疾病的發病或治療所述疾病。
根據另一個實施方案，本發明提供包含編碼腺病毒蛋白E3-GP19k的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建在製備藥物中的用途，所述的藥物用於預防、延遲一種或多種自身免疫性疾病的發病或治療所述疾病。
根據另一個實施方案，本發明提供包含編碼ΔBCL-2的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建在製備藥物中的用途，所述的藥物用於預防、延遲一種或多種自身免疫性疾病的發病或治療所述疾病。
在一個實施方案中，所述的藥物製備成約0.5mg-約5mg的劑量單位。在另一個實施方案中，所述的藥物製備成約1mg-約4mg的劑量單位。在另一個實施方案中，所述的藥物製備成約2.5mg-約3mg的劑量單位。在另一個實施方案中，所述的藥物製備成適合肌肉內給藥的形式。在另一個實施方案中，所述的藥物製備成適合靜脈內給藥的形式。
根據另一個實施方案，本發明提供預防、延遲患者的一種或多種自身免疫性疾病的發病或治療所述疾病的方法。所述的方法包括選擇容易發展為所述自身免疫性疾病、正發展為所述的自身免疫性疾病、或已經患有所述的自身免疫性疾病的患者；及給予所述的患者一種或多種劑量的包含編碼促凋亡蛋白BAX和編碼一種或多種自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建，或者給予包含編碼所述的腺病毒蛋白E3-GP19k的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建，或者給予包含編碼所述的ΔBCL-2的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建或者上述多聚核苷酸構建的組合。
在一個實施方案中，所述的自身免疫性疾病為I型糖尿病。在另一個實施方案中，選擇所述的患者包括鑑定所述患者的抗胰島素抗體或抗GAD自身抗體的存在或者抗胰島素抗體和抗GAD自身抗體二者的同時存在。在另一個實施方案中，選擇所述的患者包括鑑定所述患者漸增的高血糖症的存在。在另一個實施方案中，選擇所述的患者包括鑑定所述患者的尿糖的存在。在另一個實施方案中，選擇所述的患者包括鑑定所述患者的所述自身免疫性疾病的遺傳性傾向的存在。
在另一個實施方案中，所述的一種或多種劑量是多個劑量。在另一個實施方案中，給予所述患者一種或多種劑量包括給予所述患者肌肉內注射所述的一種或多種劑量。在另一個實施方案中，所述的方法進一步包括給藥後監測所述患者所述自身免疫性疾病的發展。
根據如下的描述、所附的權利要求以及附圖將會更好地理解本發明的上述及其它特徵、方面以及優點，其中圖1為本發明三種物質的示意圖；圖2為十五種質粒的示意圖，對這些質粒的預防、延遲患者的自身免疫性疾病的發病或治療所述疾病的效果進行了試驗。
發明的描述根據一個實施方案，本發明提供預防、延遲一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的物質。
根據另一個實施方案中，本發明提供預防、延遲患者的一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的方法。在一個實施方案中，所述的自身免疫性疾病為I型糖尿病。在一個優選的實施方案中，所述的方法包括使用疫苗作為本發明的物質。本發明所述的物質與方法不單獨使用所述自身抗原的傳輸，以及不使用如現有方法中的免疫系統的直接作用因子的分子。相反，本發明使用預防一種或多種類型細胞凋亡的疫苗，該細胞能夠抑制自身免疫性疾病。由於這些能夠抑制自身免疫性疾病的一種或多種類型的細胞能參與生理和免疫系統的調節，因此與現有的方法比較，本發明的方法可最大限度地減少誘導或增強自身免疫反應的風險。此外，由於本發明不包括給予作為所述免疫系統的直接作用因子(例如細胞因子)的物質，因此本發明沒有與此免疫系統直接作用因子相關的副作用的風險。其它的優點有，含有原始質粒DNA的遺傳疫苗能夠以相對低的成本大規模生產並且不需要儲存的「低溫運輸系統」。
因此，本發明所述的物質與方法對於預防、延遲自身免疫性疾病的發病或治療所述疾病是經濟和實用的。此外，本發明的遺傳疫苗直接修飾生物體的遺傳物質，這意味著與蛋白疫苗不同，所述的生物體免疫系統將會加工天然抗原決定簇。以下將對本發明所述的物質與方法進行詳細的描述。
本發明所使用的術語「自身免疫性疾病」包括由於所述的生物體自身的免疫系統導致的部分或全部正常細胞或組織的破壞而引發的疾病，以及包括由於所述的生物體自身的免疫系統導致的移植到所述生物體中的細胞或組織的破壞，該細胞或組織作為缺失或缺陷細胞或組織的替代，例如胰島細胞移植，或部分或全部器官移植。
本發明所使用的術語「comprise」(本文譯為包含、含有或包括)及其變體如「comprising」和「comprises」意指不排除其它附加物、成分、整體或步驟。
在一個實施方案中，本發明包括能夠單獨、順序或同時使用的三種物質，其用來預防、延遲一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病。所述三種物質的一種為含有多聚核苷酸序列SEQ ID NO1的DNA構建，其編碼促凋亡蛋白BAX，並編碼一種或多種自身免疫性疾病的自身抗原。所述三種物質的另一種為含有多聚核苷酸序列SEQ ID NO2的DNA構建，其編碼腺病毒蛋白E3-GP19k，能夠防止內質網中MHC-I分子上的抗原出現。所述三種物質的第三種為含有多聚核苷酸序列SEQ IDNO3的DNA構建，其編碼BCL-2的刪減形式即本發明中所謂的ΔBCL-2。
本領域所屬技術人員參考本發明的公開應該理解，雖然本發明已經給出了所述多聚核苷酸的特定序列，例如編碼所述促凋亡蛋白BAX、腺病毒蛋白E3-GP19k以及ΔBCL-2的多聚核苷酸序列，本發明包括不引起所翻譯的胺基酸序列的改變的任何其它序列，以及雖可引起所翻譯的胺基酸序列改變但其改變基本上不引起所翻譯的胺基酸序列使其不適合用於本發明的預期用途的功能變化的任何其它序列。
如圖1所示，為本發明所述的三種物質的示意描述。如圖中所示，每種物質均包含質粒DNA構建。物質A包含編碼自身免疫性疾病的自身抗原的多聚核苷酸的質粒構建，例如I型糖尿病自身抗原分泌性穀氨酸脫羧酶，其後跟隨編碼BAX的多聚核苷酸SEQ ID NO1。物質B包含質粒構建，其包含編碼E3-GP19k的多聚核苷酸SEQ ID NO2，不含編碼自身免疫性疾病的自身抗原的多聚核苷酸。物質C包含質粒構建，其包含編碼抗凋亡蛋白BCL-2的刪減形式的多聚核苷酸SEQ ID NO3，不含編碼自身免疫性疾病的自身抗原的多聚核苷酸。
附圖中所用的「CMV」表示細胞巨病毒啟動子元件，「pA」表示多聚腺苷酸位點，「IRES」表示來自EMCV病毒的內在的核糖體結合位點SEQ ID NO4。
為說明本發明的優點，構建了1 5種質粒並將其用做疫苗。將每種構建克隆致載體pND2中。
參見圖2，給出了所述15種質粒的示意性描述，對這些質粒的預防、延遲患者的自身免疫性疾病的發病或治療所述疾病的效果進行了試驗。
如圖所示，每一種質粒均在相同的啟動子(CMVP)的質粒轉錄控制下，來保證在每種轉染細胞中的兩種開放讀碼框架的表達。在這些含有編碼BCL-2的cDNA的質粒構建中，發現大分子cDNA可導致質粒的缺失，因此，使用所謂的Δbcl-2，一種bcl-2的刪減形式來構建質粒。如圖2所示，所述的質粒，質粒1包含編碼細胞漿GAD的cDNA，SEQ ID NO5；質粒2包含編碼分泌性GAD(SGAD)，SEQ ID NO6；質粒3包含對照分泌性螢光素酶，SEQ ID NO7；質粒4包含刪減人抗凋亡蛋白BCL-2(ΔBCL-2)，SEQ ID NO3；質粒5包含抗凋亡蛋白BAX，SEQ ID NO1；質粒6包含E3-GP19k，SEQ ID NO2；質粒7-9分別包含ΔBCL-2(SEQ IDNO3)與細胞漿GAD(SEQ ID NO5)、分泌性GAD(SEQ ID NO6)及分泌性螢光素酶(SEQ ID NO7)組合；質粒10-12分別包含BAX(SEQ ID NO1)與細胞漿GAD(SEQ ID NO5)、分泌性GAD(SEQ ID NO6)及分泌性螢光素酶(SEQ ID NO7)的組合；以及質粒13-15分別包含E3-GP19k(SEQ IDNO2)與細胞漿GAD(SEQ ID NO5)、分泌性GAD(SEQ ID NO6)及分泌性螢光素酶(SEQ ID NO7)的組合。
製備所有的質粒，使用PCR擴增所述的開放讀碼框架，並且用DNA測序來檢測所述的擴增產物，並證明沒有突變。隨後將每種構建瞬時轉染致猿COS-7細胞中以進行細胞裂解物的免疫印記分析，此分析用於驗證正確大小的基因產物被編碼(資料未顯示)。
其次，所述的15種質粒對非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠的作用被檢測如下。首先，使用Qiagen Endofree試劑盒(Qiagen Inc.，Chatsworth，CA，US)分離質粒DNA，將300μg的15種質粒中每一種質粒DNA肌肉內注射到15隻4-5周齡的雌性NOD小鼠中。所述的300μg劑量是依據生物體的重量、相對於人類的臨床用量而選擇的。直到35周齡時才通過尿糖和血糖分析來監測糖尿病的發病情況。
當連續兩天的血糖水平超過300mg/dl，高水平的尿糖試驗陽性時，則認為此小鼠患有糖尿病。
這些試驗結果如下所述。預防接種質粒1-3的35周齡小鼠的糖尿病動物百分比範圍為73-93％；預防接種質粒4或7-9的小鼠為60-67％；預防接種質粒5和10-12的小鼠為47-85％；以及預防接種質粒6和13-15的小鼠為53-73％。對照動物(沒有進行預防接種)糖尿病的發病率約為93％。因此，給予300μg單獨的質粒載體或300μg單獨的編碼抗原的質粒載體(質粒1-3)沒有產生顯著的抑制糖尿病作用。與未處理的小鼠比較，預防接種質粒6-9和11的小鼠表現出具有統計學意義的顯著抑制糖尿病作用(質粒7，P＜0.05；質粒9，P＜0.02)。此外，當與接受質粒pND2-GAD65、質粒1或pND2-GAD65-BAX、質粒10比較時，接受pND2-E3-GP19k、質粒6或pND2-SGAD55-BAX、質粒11的小鼠在35周齡時表現出糖尿病發病率的顯著降低(P＜0.04)；而且當與接受pND2-GAD65、質粒1比較時，接受pND2-GAD65-ΔBCL2、質粒7或pND2-SGAD55-ΔBCL2、質粒8的小鼠表現出糖尿病發病率的顯著降低(P＜0.05)。糖尿病的抑制與胰島的炎症反應降低有關(資料未顯示)。這些結果在本文中有更加詳細的描述。
預防接種包含Δbcl-2的質粒(質粒4和質粒7-9)的小鼠無論共轉染所述的抗原與否，顯示4-5周的糖尿病發病延遲，並且無論共轉染所述的抗原與否在35周齡時糖尿病的發病率降低(與未進行預防接種的對照小鼠的約93％發病率比較，其為60-67％)。因此，共轉染GAD自身抗原不抑制所述的作用。
除轉染sgad55-bax(質粒11)外，預防接種包含bax的質粒(質粒5和質粒10-12)的小鼠沒有表現糖尿病的抑制作用。儘管接種質粒11的小鼠在與接種只包含bax的質粒(質粒5)的其它小鼠在相似時間開始發生糖尿病，但與未接種的對照小鼠的93％發病率比較，接種質粒11的小鼠在35周齡的糖尿病發病率僅為47％(P＜0.05)。
預防接種含有E3-gpl9k的質粒6和13-15的質粒的小鼠依據共轉染所述的抗原的情況，糖尿病發病情況也不同。
預防接種含有E3-gpl9k而沒有自身抗原的質粒6的小鼠開始發展為糖尿病的時間延遲4-5周，並在35周齡時糖尿病發病率降低(53％vs 93％，以未接種的對照小鼠作為對照)(P＜0.05)。
預防接種含有E3-gpl9k與自身抗原的質粒13-15的小鼠無論是糖尿病發病的時間延遲還是在35周齡時糖尿病發病率均表現出抑制作用。
其次，通過GAD特異的ELISpot分析和血清抗同型GAD IgG的ELISA來檢測本發明所述物質的給藥對糖尿病有抑制作用是否與炎症反應Th1-樣活性的抑制、及抗炎症Th2樣反應的上調有關，從而確定免疫反應的特性。
所述的ELISpot分析按如下步驟進行。分離在糖尿病發病時或在非糖尿病動物的觀察終點的小鼠脾細胞。隨後根據標準的廠商說明書用重組的GAD蛋白刺激所述的細胞，並且計數分泌IFN-γ-(Th1-樣活性)與IL-4(Th2樣活性)的細胞。減去未進行GAD刺激而分泌所述細胞因子的細胞數並分析結果。對於IFN-γ，資料清楚地表明質粒6(單獨編碼E3-GP19k)、或質粒4和質粒7-9(單獨編碼ΔBCL-2或與抗原一同編碼)產生的糖尿病抑制作用與GAD-特異活性抑制作用有關。因此，E3-19k與ΔBCL-2可誘導免疫反應，其能夠抑制針對β細胞的自身反應活性。奇怪的是，SGAD55-BAX組合沒有出現顯著的抑制Th1-樣活性。此外，單獨的SGAD55不能抑制糖尿病，但可抑制GAD-特異的Th1-樣反應。
對於IL-4，資料顯示接受單獨編碼E3-GP19k的質粒6(糖尿病抑制)、編碼SGAD55和E3-19k的質粒13(非糖尿病抑制)及編碼SGAD55和ΔBCL-2的質粒8(糖尿病抑制)的小鼠表現GAD-特異活性的增加。因此，增加的Th2-樣活性並不總是與Th1樣活性和疾病的抑制相關。
所述的ELISA以如下的方法進行。使用抗GAD IgG2a，b和同型IgG1的動物血清來進行ELISA，其分別表明Th1樣和Th2樣活性。當與編碼BAX的質粒5比較而不與未接種的對照小鼠比較時，抗GAD IgG2a，b的ELISA表明編碼ΔBCL-2的三種質粒DNA(質粒4、8和9)能夠顯著降低Th1樣活性。抗GAD IgG1的ELISA顯示編碼BAX的所有質粒DNA(質粒5和10-12)能夠降低Th2-樣活性。
這些資料結合在一起表明，第一，bax，編碼促凋亡蛋白的質粒cDNA能夠用作預防自身免疫性疾病的遺傳疫苗的分子佐劑，所述的疫苗例如包含編碼自身抗原分泌形式的多聚核苷酸的疫苗。第二，雖然編碼E3-GP19k或編碼刪減BCL-2的質粒cDNA與抗原組合作用降低，單獨編碼E3-GP19k或編碼刪減BCL-2的質粒cDNA可抑制自身免疫性疾病。
在一個實施方案中，本發明提供預防、延遲患者的一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的方法。所述的方法包括，首先選擇容易發展為所述自身免疫性疾病、正發展為所述的自身免疫性疾病、或已經患有所述的自身免疫性疾病的患者。可使用本領域所述技術人員根據本發明的公開能夠理解的常規方法來進行所述的選擇。例如，如果所述的自身免疫性疾病是糖尿病，所述的選擇可通過鑑定所述患者中抗胰島素或抗GAD自身抗體的存在、或者抗胰島素和/或抗GAD自身抗體二者的同時存在，漸增的高血糖血症的存在，尿糖的存在，所述糖尿病的遺傳性傾向的存在或者其多種的存在來實現。
其次，給予所述的患者一種或多種劑量本發明的質粒構建，所述的質粒構建包含編碼BAX和編碼自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸，或者包含編碼E3-GP19k但不編碼自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸的質粒構建，或者包含編碼抗凋亡蛋白BCL-2的刪減形式但不編碼自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸質粒構建。在一個優選的實施方案中，所述的生物體被給予本發明的兩種質粒構建。在一個特別優選的實施方案中，所述的生物體被給予本發明的全部三種質粒構建。
在一個優選的實施方案中，所述的質粒構建以多個劑量給藥。在另一個優選的實施方案中，所述的劑量為約0.001mg/Kg至約10mg/Kg體重。在另一個優選的實施方案中，所述的劑量為約0.01mg/Kg至約1mg/Kg體重。在另一個優選的實施方案中，所述的劑量約為0.05mg/Kg體重。在一個優選的實施方案中，適合成年人的劑量約為0.5mg-5mg。
在一個優選的實施方案中，適合成年人的劑量約為1mg-4mg。在一個優選的實施方案中，適合成年人的劑量約為2.5mg-3mg。在另一個優選的實施方案中，所述的劑量每周給藥約2次至約10次。在一個特別優選的實施方案中，所述的劑量每周給藥4次。在一個特別優選的實施方案中，所述的劑量只給藥一次。
可以適合的途徑給藥。在一個優選的實施方案中，所述的途徑為肌肉內或靜脈內。
此外，所述的方法包括給藥後監測所述患者所述自身免疫性疾病的發展。
實施例I糖尿病的預防根據本發明，能夠延遲或預防患者中糖尿病的發病，如下例。首先，根據循環抗胰島素和抗GAD自身抗體的存在來選擇患者。其後，給予所述的患者肌肉內注射0.05mg/Kg體重的包含其編碼促凋亡蛋白BAX的多聚核苷酸序列SEQ ID NO1的質粒構建和編碼SGAD的SEQ ID NO6的質粒構建或者包含編碼腺病毒蛋白E3-GP19k的多聚核苷酸序列SEQ IDNO2的質粒構建，或者包含編碼ΔBCL-2的多聚核苷酸序列SEQ ID NO3的質粒構建。
所述的注射每周重複，共3周，同時監測循環抗胰島素和抗GAD自身抗體的水平。當所述的循環抗胰島素和抗GAD自身抗體的水平恢復正常時停止所述的治療。
儘管參照某些優選的實施方案已經對本發明做了相對詳細的討論，但是其它的實施方案也是可能的。因此，所附權利要求的範圍不受本發明所公開的優選實施方案的限制。
序列表SEQUENCE LISTING110洛馬林大學120預防與治療自身免疫性疾病的物質13014102-1PCT140to be assigned1412003-08-06150US 60/401,6521512002-08-061607170PatentIn version 3.22101211579212DNA213Homo sapiens4001atggacgggt ccggggagca gcccagaggc ggggggccca ccagctctga gcagatcatg60aagacagggg cccttttgct tcagggtttc atccaggatc gagcagggcg aatggggggg120gaggcacccg agctggccct ggacccggtg cctcaggatg cgtccaccaa gaagctgagc180gagtgtctca agcgcatcgg ggacgaactg gacagtaaca tggagctgca gaggatgatt240gccgccgtgg acacagactc cccccgagag gtctttttcc gagtggcagc tgacatgttt300tctgacggca acttcaactg gggccgggtt gtcgcccttt tctactttgc cagcaaactg360gtgctcaagg ccctgtgcac caaggtgccg gaactgatca gaaccatcat gggctggaca420ttggacttcc tccgggagcg gctgttgggc tggatccaag accagggtgg ttgggacggc480ctcctctcct actttgggac gcccacgtgg cagaccgtga ccatctttgt ggcgggagtg540ctcaccgcct cgctcaccat ctggaagaag atgggctga 579
2102211492212DNA213Human adenovirus type 24002atgaggtaca tgattttagg cttgctcgcc cttgcggcag tctgcagcgc tgccaaaaag60gttgagttta aggaaccagc ttgcaatgtt acatttaaat cagaagctaa tgaatgcact120actcttataa aatgcaccac agaacatgaa aagcttatta ttcgccacaa agacaaaatt180ggcaagtatg ctgtatatgc tatttggcag ccaggtgaca ctaacgacta taatgtcaca240gtcttccaag gtgaaaatcg taaaactttt atgtataaat ttccatttta tgaaatgtgc300gatattacca tgtacatgag caaacagtac aagttgtggc ccccacaaaa gtgtttagag360aacactggca ccttttgttc caccgctctg cttattacag cgcttgcttt ggtatgtacc420ttactttatc tcaaatacaa aagcagacgc agttttattg atgaaaagaa aatgccttga480ttttccgctt gc4922103211599212DNA213Homo sapiens4003atggcgcacg ctgggagaag tggttacgat aaccgggaga tagtgatgaa gtacatccat60tataagctgt cgcagagggg ctacgagtgg gatgctaccg cggctgccgc ggggcctgcg120ctcagcccgg tgccacctgt ggtccacctg accctccgcc aggccggcga cgacttctcc180cgccgctacc gccgcgactt cgccgagatg tccagccagc tgcacctgac gcccttcacc240gcgcggggat gctttgccac ggtggtggag gagctcttca gggacggggt gaactggggg300aggattgtgg ccttctttga gttcggtggg gtcatgtgtg tggagagcgt caaccgggag360atgtcgcccc tggtggacaa catcgccctg tggatgactg agtacctgaa ccggcacctg420cacacctgga tccaggataa cggaggctgg gatgcctttg tggaactgta cggccccagc480
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1.預防、延遲一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的物質，所述的物質包含多聚核苷酸構建，所述的構建包含編碼促凋亡蛋白BAX和編碼一種或多種自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸序列。
2.包含編碼促凋亡蛋白BAX和編碼一種或多種自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建的製備藥物的用途，所述的藥物用於預防、延遲一種或多種自身免疫性疾病的發病或治療所述疾病。
3.包含編碼腺病毒蛋白E3-GP19k的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建的製備藥物的用途，所述的藥物用於預防、延遲一種或多種自身免疫性疾病的發病或治療所述疾病。
4.包含編碼BCL-2的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建的製備藥物的用途，所述的藥物用於預防、延遲一種或多種自身免疫性疾病的發病或治療所述疾病。
5.如權利要求2-4中任一權利要求所述的用途，其中所述的藥物製備成約0.5mg-約5mg的劑量單位。
6.如權利要求2-4中任一權利要求所述的用途，其中所述的藥物製備成約1mg-約4mg的劑量單位。
7.如權利要求2-4中任一權利要求所述的用途，其中所述的藥物製備成約2.5mg-約3mg的劑量單位。
8.如權利要求2-4中任一權利要求所述的用途，其中所述的藥物製備成適合肌肉內給藥的形式。
9.如權利要求2-4中任一權利要求所述的用途，其中所述的藥物製備成適合靜脈內給藥的形式。
10.預防、延遲患者的一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的方法，其包括a)選擇容易發展為所述自身免疫性疾病、正發展為所述的自身免疫性疾病、或已經患有所述的自身免疫性疾病的患者；及b)給予所述的患者一種或多種劑量的包含編碼促凋亡蛋白BAX和編碼一種或多種自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建。
11.如權利要求10所述的方法，其中所述的自身免疫性疾病為I型糖尿病。
12.如權利要求11所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的抗胰島素抗體或抗GAD自身抗體的存在或者抗胰島素抗體和抗GAD自身抗體二者的同時存在。
13.如權利要求11所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者漸增的高血糖症的存在。
14.如權利要求11所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的尿糖的存在。
15.如權利要求10所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的所述自身免疫性疾病的遺傳性傾向的存在。
16.如權利要求10所述的方法，其中所述的一種或多種劑量是多個劑量。
17.如權利要求10所述的方法，其中給予所述患者一種或多種劑量包括給予所述患者肌肉內注射所述的一種或多種劑量。
18.如權利要求10所述的方法進一步包括給藥後監測所述患者所述自身免疫性疾病的發展。
19.預防、延遲患者的一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的方法，其包括a)選擇容易發展為所述的自身免疫性疾病、正發展為所述的自身免疫性疾病、或已經患有所述的自身免疫性疾病的患者；及b)給予所述的患者一種或多種劑量的包含編碼所述的腺病毒蛋白E3-GP19k的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建。
20.如權利要求19所述的方法，其中所述的自身免疫性疾病為I型糖尿病。
21.如權利要求20所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的抗胰島素抗體或抗GAD自身抗體的存在或者抗胰島素抗體和抗GAD自身抗體二者的同時存在。
22.如權利要求20所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者漸增的高血糖症的存在。
23.如權利要求20所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的尿糖的存在。
24.如權利要求19所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的所述自身免疫性疾病的遺傳性傾向的存在。
25.如權利要求19所述的方法，其中所述的一種或多種劑量是多個劑量。
26.如權利要求19所述的方法，其中給予所述患者一種或多種劑量包括給予所述患者肌肉內注射所述的一種或多種劑量。
27.如權利要求19所述的方法進一步包括給藥後監測所述患者所述自身免疫性疾病的發展。
28.預防、延遲患者的一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的方法，其包括a)選擇容易發展為所述的自身免疫性疾病、正發展為所述的自身免疫性疾病、或已經患有所述的自身免疫性疾病的患者；及b)給予所述的患者一種或多種劑量的包含編碼ΔBCL-2的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建。
29.如權利要求28所述的方法，其中所述的自身免疫性疾病為I型糖尿病。
30.如權利要求29所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的抗胰島素抗體或抗GAD自身抗體的存在或者抗胰島素抗體和抗GAD自身抗體二者的同時存在。
31.如權利要求29所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者漸增的高血糖症的存在。
32.如權利要求29所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的尿糖的存在。
33.如權利要求28所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的所述自身免疫性疾病的遺傳性傾向的存在。
34.如權利要求28所述的方法，其中所述的一種或多種劑量是多個劑量。
35.如權利要求28所述的方法，其中給予所述患者一種或多種劑量包括給予所述患者肌肉內注射所述的一種或多種劑量。
36.如權利要求28所述的方法進一步包括給藥後監測所述患者所述自身免疫性疾病的發展。
37.預防、延遲患者的一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的方法，其包括a)選擇容易發展為所述的自身免疫性疾病、正發展為所述的自身免疫性疾病、或已經患有所述的自身免疫性疾病的患者；及b)給予所述的患者一種或多種劑量的包含編碼促凋亡蛋白BAX和編碼一種或多種自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建、或者包含編碼腺病毒蛋白E3-GP19k的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建、或者包含編碼ΔBCL-2的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建或者上述多聚核苷酸構建的組合。
38.如權利要求37所述的方法，其中所述的自身免疫性疾病為I型糖尿病。
39.如權利要求38所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的抗胰島素抗體或抗GAD自身抗體的存在或者抗胰島素抗體和抗GAD自身抗體二者的同時存在。
40.如權利要求38所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者漸增的高血糖症的存在。
41.如權利要求38所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的尿糖的存在。
42.如權利要求37所述的方法，其中選擇所述的患者包括鑑定所述患者的所述自身免疫性疾病的遺傳性傾向的存在。
43.如權利要求37所述的方法，其中所述的一種或多種劑量是多個劑量。
44.如權利要求37所述的方法，其中給予所述患者一種或多種劑量包括給予所述患者肌肉內注射所述的一種或多種劑量。
45.如權利要求37所述的方法進一步包括給藥後監測所述患者所述自身免疫性疾病的發展。
全文摘要
本發明公開了預防、延遲一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的物質，所述的物質包含多聚核苷酸構建，所述的構建包含編碼促凋亡蛋白BAX和編碼一種或多種自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸序列。還公開了預防、延遲患者的一種或多種自身免疫性疾病發病或治療所述疾病的方法包括，選擇容易發展為所述自身免疫性疾病、正發展為所述的自身免疫性疾病、或已經患有所述的自身免疫性疾病的患者，以及給予所述的患者一種或多種劑量的包含編碼促凋亡蛋白BAX和編碼一種或多種自身免疫性疾病自身抗原的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建、或者包含編碼腺病毒蛋白E3－GP19k的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建、或者包含編碼ΔBCL－2的多聚核苷酸序列的多聚核苷酸構建。
文檔編號C12N5/00GK1675353SQ03819008
公開日2005年9月28日 申請日期2003年8月6日 優先權日2002年8月6日
發明者艾倫·P·埃舍爾, 李逢春 申請人:洛馬林達大學