一種紅樹提取液與它們的製備方法

2023-05-27 04:14:26 2

專利名稱：一種紅樹提取液與它們的製備方法
一種紅樹提取液與它們的製備方法
技術領域：
本發明涉及中藥提取技術領域。更具體地，本發明涉及一種紅樹提取
液，還涉及含有新二碎類化合物Tagalsin C的4是耳又液製備方法。背景技術：
在世界上，紅樹林有84種，隸屬於16科24屬，主要生長在南、北回 歸線之間，並可分為兩個群系，即東方群系(主要生長在熱帶亞洲和非洲， 有74種，隸屬於14科18屬)和西方群系(主要生長在熱帶美洲，共有 10種，隸屬於5科6屬)。
我國民間海洋用藥如紅樹林植物具有多種疾病治療作用，我國紅樹植 物有12科15屬27種,廣布於我國東南沿海海岸線。據對民間紅樹植物的 藥用考證,我國民間具有長期藥用紅樹植物的歷史,如正紅樹為治療腎結核、 尿路結石等的特效藥，紅茄冬用於治療血尿病，木欖果治療糖尿病，老鼠 勒根具有抗白血病和抗B肝活性,海蓮樹皮提取物具有抑制肉瘤S180和 Lewis肺癌活性。在"全國中草藥彙編"(1978)中記載3種紅樹植物(老鼠勒、 海芒果和黃槿)及其藥用功效。據統計,我國近一半的紅樹植物對多種疾病具 有治療用途。然而，對紅樹藥用植物的活性成分及其作用機理研究在國內少 見報導。而國際上，特別是東南亞國家近年在國際雜誌相繼發表與紅樹植物 的化學成分和生物活性的論文,表明國際上對紅樹植物的化學成分多樣性 及其生物活性已引起高度重視。
北京大學人類疾病基因研究中心林文翰等人(CN101077345A)發現紅 樹植物中含有的新二薛化合物Tagalsin C及其同系物具有抗肺瘤活性。但 關於從紅樹植物中提取Tagalsin C的報導很少，尤其是沒有釆用生物酶法 提取Tagalsin C的文獻報導。因此，本發明人經過大量研究，終於作出了 本發明。
發明內容[要解決的技術問題
本發明的目的是提供一種紅樹提取液。
本發明的另 一個目的是提供一種所述紅樹提取液的製備方法。 [技術方案
本發明的目的在於針對上述問題，提供一種含有新二碎類化合物
TagalsinC的紅樹植物提取液及其製備方法，使製得的提取液具有廣譜的選 擇性殺腫瘤活性。
本發明是採用下述技術方案實現的。
本發明涉及一種紅樹提取液，其特徵在於它含有以所述提取液重量計 0.001-0.25重量。/。新二碎類化合物TagalsinC。
本發明還涉及所述紅樹提取液的製備方法，其特徵在於該方法的步驟 如下
A、 粉碎
將幹紅樹植物粉碎至20-200目，把得到的紅樹植物粉加入到提取爸
中；
B、 殺菌
按照所述的紅樹植物粉水的重量比l: 3-20往步驟A)得到的紅樹 植物粉中加水得到一種漿體，在攪拌下以升溫速率5-15。C/分鐘將得到的 紅樹植物粉漿體加熱到75 - 85QC,在這個溫度下進行滅菌8-12分鐘；
C、 冷卻
將步驟B)得到的滅菌紅樹植物粉漿體冷卻至40 - 60°C;
E、 酶解
往步驟C)得到的冷卻紅樹植物粉漿體中加入以所述紅樹植物重量計 0.01 - 0.5%果膠酶和0.2-0.4%纖維素酶，在酶解溫度為40 - 60。C與酶解pH4 -5條件下進行酶解60 - 300分鐘；
F、 滅酶
在步驟E)酶解的紅樹植物粉漿體在溫度75 - 85。C下進行加熱滅酶8-12 分鐘，滅酶後進行冷卻與離心過濾，得到上清液l與提餘物；
G、 超聲波提取往步驟F)得到的紅樹植物提餘物中加入95%乙醇溶液，其紅樹植物提 餘物與乙醇溶液的體積比為1: 5-15,在55-78。C恆溫與頻率18KHz下進行 輔助超聲波提取3.5-4小時，然後進行冷卻並進行離心過濾，得到上清液2;
H濃縮
將上清液1與上清液2合併，在100-800Pa真空減壓下進行濃縮，濃 縮至上清液中可溶性固形物含量達45 - 60%時停止濃縮，所得產品即為紅 樹植物提耳又液。
在本發明中，所述的紅樹植物選自該植物根、莖、葉、枝、花或果實 中的一種或多種。
根據一種優選實施方式，所述的離心過濾可以採用布袋過濾或採用壓 濾方法進4亍。
根據另 一種優選實施方式，所述的濃縮可以是常壓濃縮。 下面將更詳細地描述本發明。
本發明涉及一種紅樹提取液，它含有以所述提取液重量計0.001-0.25重 量％新二碎類化合物Tagalsin C。
CN101077345A公開了TagalsinC及其同系物TagalsinsA、 B、 D、 E、 F、 G在製備抗腫瘤藥物中的應用。該系列化合物具有膜通透性和廣譜的殺腫 瘤活性，可以殺傷人早幼粒急性白血病細胞HL-60、人骨髓瘤細胞IM9等， 而對正常細胞人腎胚細胞293和人肝二倍體細胞L02沒有明顯的殺傷能力， 可應用於製備治療腫瘤的藥物等。
本發明還涉及所述紅樹提取液的製備方法。該紅樹提取液製備方法的 步驟如下
首先，紅樹植物原料粉碎。使用在中藥加工技術中通常使用的粉碎設 備將千紅樹植物粉碎至20 - 200目，優選地40 - 150目，更優選地60 - 120
市場上大量銷售的中藥材粉碎設備。在本發明中，所述的紅樹植物選自該 植物根、莖、葉、枝、花或果實中的一種或多種。
粉碎後得到的紅樹植物粉裝到提取釜中。在本發明中，所述的提取釜 應該理解是一種從紅樹植物粉提取有效成分的反應器，該反應器例如可以是不鏽鋼罐式反應器、壓力釜反應器或任何其它可以實施從植物中提取有 效成分的反應器。
然後，紅樹植物粉殺菌。按照所述的紅樹植物粉水的重量比l: 3-20往所述紅樹植物粉中加水，攪拌得到紅樹植物粉漿體，該漿體在攪拌下 以升溫速率5 - 15。C/分鐘將得到的紅樹植物粉漿體加熱到75 - 85QC，在這 個溫度下進行滅菌8-12分鐘。優選地，升溫速率控制在8 - 12。C/分鐘， 紅樹植物粉漿體溫度控制在78 - 82GC,在這個溫度範圍內進行滅菌9-10 分鐘。根據使用反應器類型，可以選擇直接加熱方式或間接加熱方式。直 接加熱方式是用蒸汽直接加熱紅樹植物粉漿體，而間接加熱方式是通過加 熱流體流過反應器夾套加熱紅樹植物粉漿體，這些加熱方式都是本技術領 域的技術人員熟知的。紅樹植物粉漿體滅菌情況可以採用本技術領域通常 採用的菌落總數方法進行檢查，當紅樹植物粉漿體菌落總數小於20個/毫 升時可以認為合格，否則需要再進行滅菌。
接著，紅樹植物粉漿滅菌後進行冷卻。 一般地，將上述得到的滅菌紅 樹植物粉漿體置於空氣中自然冷卻到40-60°C;當然也可以採用其它冷卻 方法進行冷卻，例如往反應器夾套通自來水進行冷卻。
然後，冷卻紅樹植物粉漿體進行酶解。往冷卻紅樹植物粉漿體中加入 以所述紅樹植物重量計0.01 - 0.5%果膠酶和0.2-0.4%纖維素酶，在酶解溫 度為40 - 6(TC與酶解pH4 - 5條件下進行酶解60 - 300分鐘。優選地，往 冷卻紅樹植物粉漿體中加入以所述紅樹植物重量計0.1 - 0.4%果膠酶和 0.2-0.3%纖維素酶。
纖維素酶能使結構緻密的紅樹植物細胞壁破壁，因此有利於紅樹細胞 內的有效成分溶出，果膠酶能將紅樹植物中的澱粉、蛋白質等不溶物進行 水解，由不溶物變成可溶物，從而提高酶解效率。使用的纖維素酶是無錫 傑能科公司以商品名傑能科P200銷售的產品或山東隆大生物工程有限公 司生產的纖維素酶產品。使用的果膠酶是諾維信公司以商品名AFPXXL銷 售的果膠酶。
酶解紅樹植物粉漿體進行滅酶。將酶解的紅樹植物粉漿體在溫度75 -85。C下進行加熱滅酶8-12分鐘，滅酶後的紅樹植物粉漿體進行冷卻，再進行離心過濾，這樣可以得到上清液1與提餘物。紅樹植物粉漿滅酶後進行 冷卻方式可以與紅樹植物粉漿滅菌後的冷卻方式相同。離心過濾一般是使
用離心過濾機在在離心速率8000轉/分鐘下進行離心分離10-20分鐘，得到 上清液1與提餘物，所述的離心過濾機例如是美國BECKMAN離心機。
接著提餘物的超聲波提取。往得到的紅樹植物提餘物中加入95%乙醇 溶液，其紅樹植物提餘物與乙醇溶液的體積比為1: 5-15,在55-78。C恆溫 與頻率18KHz下進行輔助超聲波提取3.5-4小時，然後進行冷卻並進行離 心過濾，得到上清液2。超聲波提取所使用的設備是本技術領域中通常使 用的設備，例如杭州成功超聲設備有限公司生產的超聲波設備。冷卻與離 心過濾所採用的方式和設備與前面所描述的相同。在本發明中，所述的離 心過濾可以採用布袋過濾或採用壓濾方法進行。
然後將上清液1與上清液2合併進行濃縮。將上清液1與上清液2合 並，在100-800Pa真空減壓下進行濃縮，濃縮至上清液中可溶性固形物含 量達45 -60%時停止濃縮，所得產品即為紅樹植物提取液。在本發明中， 所述合併上清液濃縮所使用的設備是本技術領域中通常使用的設備，例如 無錫市雪浪發酵工程設備廠以商品名動態熱回流提取濃縮機銷售的產品或 上海神農機械有限公司以商品名降膜蒸發器銷售的產品。在本發明中，所 述的濃縮也可以是常壓濃縮。
可以釆用氣相色譜(GC)分析方法測定在所得產品紅樹植物提取液中 的新二碎類化合物Tagalsin C含量。
[有益效果
本發明選用紅樹植物為原料，提取其中的有效成分新化合物Tagalsin C。該提取方法效率高、操作簡便快捷，成本低，具有廣泛應用前景。
具體實施方式
實施例1:
稱取100公斤的紅樹植物的葉(水分含量為10% )使用青島邁科隆粉 體技術設備有限公司生產的MZ200型中藥粉碎機進行粉碎到30目，將粉 碎的紅樹植物的葉加入提取釜中，加入500公斤水。在攪拌的情況下，對 裝有紅樹植物的提f^釜進行加熱殺菌，殺菌溫度為80°C,保持IO分鐘。殺菌後，對提取釜進行自然冷卻。當溫度下降到60。C時，停止冷卻。保持
體系溫度在6o。c,按紅樹植物重量(乾重)的o.or/。加入諾維信公司以商
品名AFP XXL銷售的果膠酶和0.4%加入無錫傑能科公司以商品名傑能科 P200銷售的纖維素酶進行酶解。酶解的時間為60分鐘，酶解的pH控制在 5。酶解完成後，進4亍加熱滅酶，滅酶的溫度為80。C,滅酶的時間為10分 鍾。滅酶後冷卻至室溫，並採用離心進行過濾，得490 /^斤上清液l。過 濾得到110公斤殘渣，往該殘渣加入95%乙醇溶液550公斤，使用杭州成 功超聲設備有限公司生產的超聲波設備在溫度55。C恆溫輔助超聲波提取4 小時，超聲條件為頻率18KHz。提取完成後冷卻並進行離心過濾，得580 公斤上清液2。
將上清液1和上清液2進行合併，在500Pa真空減壓下進行濃縮，濃 縮至上清液中可溶性固形物含量達45%時，停止濃縮，所得產品即為含有 新二萜類化合物Tagalsin C的紅樹植物提取液，採用氣相色譜(GC )分析方 法確定該紅樹植物"l是取液含有0.046%的新二碎類化合物Tagalsin C。
實施例2:
稱取100公斤的紅樹植物的葉(水分含量為10% )使用青島邁科隆粉 體技術設備有限公司生產的MZ200型中藥粉碎機進行粉碎到30目，將粉 碎的紅樹植物的葉加入提取釜中，加入1800公斤水。在攪拌的情況下，對 裝有紅樹植物的提取釜進行加熱殺菌，殺菌溫度為80°C，保持IO分鐘。 殺菌後，往提取釜夾套通自來水進行冷卻。當溫度下降到4(TC時，停止冷 卻。保持體系溫度在40°C,按紅樹植物重量(乾重)的0.5%加入諾維信 公司以商品名AFP XXL銷售的果膠酶和0.2%加入無錫傑能科公司以商品 名傑能科P200銷售的纖維素酶進行酶解。酶解的時間為300分鐘，酶解的 pH控制在5。酶解完成後，進行加熱滅酶，滅酶的溫度為80。C,滅酶的時 間為10分鐘。滅酶後冷卻至室溫，並採用離心進行過濾，得1775公斤上 清液1 。過濾得到115公斤殘渣，往該殘渣加入95%乙醇溶液1725公斤， 使用杭州成功超聲設備有限公司生產的超聲波設備在溫度55°C恆溫輔助超 聲波提取3.5小時，超聲條件為頻率18KHz。提取完成後冷卻並進行離心 過濾，得1740公斤上清液2。將上清液1和上清液2進行合併，在400Pa真空減壓下進行濃縮，濃 縮至上清液中可溶性固形物含量達60%時，停止濃縮，所得產品即為含有 新二萜類化合物TagalsinC的紅樹植物提取液。採用氣相色譜(GC )分析 方法確定該紅樹植物提取液含有0.052%的新二碎類化合物TagalsinC。
權利要求
1、一種紅樹提取液，其特徵在於它含有以所述提取液重量計0.001-0.25重量％新二萜類化合物Tagalsin C。
2、 根據權利要求1所述的紅樹提取液的製備方法，其特徵在於該方法 的步驟如下A、 粉碎將幹紅樹植物粉碎至20-200目，把得到的紅樹植物粉加入到提取釜中；B、 殺菌按照所述的紅樹植物粉水的重量比l: 3-20往步驟A)得到的紅樹 植物粉中加水得到一種漿體，在攪拌下以升溫速率5-15。C/分鐘將得到的 紅樹植物粉漿體加熱到75 - 85GC,在這個溫度下進行滅菌8-12分鐘；C、 冷卻將步驟B)得到的滅菌紅樹植物粉漿體冷卻至40 - 60°C;E、 酶解往步驟C)得到的冷卻紅樹植物粉漿體中加入以所述紅樹植物重量計 0.01 - 0.5%果膠酶和0.2-0.4%纖維素酶，在酶解溫度為40 - 60。C與酶解pH4 -5條件下進行酶解60 - 300分鐘；F、 滅酶在步驟E)酶解的紅樹植物粉漿體在溫度75 - 85。C下進行加熱滅酶8-12 分鐘，滅酶後進行冷卻與離心過濾，得到上清液l與提餘物；G、 超聲波提取往步驟F)得到的紅樹植物提餘物中加入95%乙醇溶液，其紅樹植物提 餘物與乙醇溶液的體積比為1: 5-15,在55-78。C恆溫與頻率18KHz下進行 輔助超聲波提取3.5-4小時，然後進行冷卻並進行離心過濾，得到上清液2;H濃縮將上清液1與上清液2合併，在100-800Pa真空減壓下進行濃縮，濃縮至上清液中可溶性固形物含量達45-60%時停止濃縮，所得產品即為紅 樹植物提取液。
3、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於所述的紅樹植物選自 該植物根、莖、葉、枝、花或果實中的一種或多種。
4、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於往冷卻紅樹植物粉漿 體中加入以所述紅樹植物重量計0.1 - 0.4%果膠酶和0.2-0.3%纖維素酶。
5、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於所述的離心過濾可以 採用布袋過濾或採用壓濾方法進行。
6、 根據權利要求2所述的製備方法，其特徵在於所述的濃縮是常壓濃縮。
全文摘要
本發明公開了一種紅樹植物中二萜化合物Tagalsin C的製備方法，以紅樹植物的根、莖、葉、枝為原料，採用複合酶處理，95％乙醇浸提，超聲波輔助提取，濃縮得到含有Tagalsin C的紅樹提取液。
文檔編號A61K36/185GK101450089SQ20081020473
公開日2009年6月10日 申請日期2008年12月17日 優先權日2008年12月17日
發明者羅昌榮, 谷向春 申請人:華寶食用香精香料(上海)有限公司;太倉文華實業有限公司