一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法
2023-05-27 04:36:01
專利名稱：一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法
技術領域：
本發明涉及一種從虎杖中製備高純 度白藜蘆醇的方法。
背景技術：
虎杖，寥科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的乾燥根莖和根。虎杖不僅供觀賞，也做食品，嫩莖做蔬菜，根做冷飲料，置涼水中鎮涼，清涼解暑代茶。它的液汁可染米粉，別有風味。食用以其味酸故也稱「酸湯杆」。虎杖含有寥甙、有機酸、葡萄糖甙、多糖類等。有清熱解毒、清涼解署、健胃清食作用。虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.)是我國傳統中藥,具有降壓,減慢心率，加強心肌收縮力，保護心臟、降血脂；抑制血小板聚集，抗休克，改善微循環；抗菌、抗病毒、抗癌抗氧化；平喘，鎮咳、鎮靜、鎮痛，止血、抗炎等功效。現代藥理表明，虎杖中含有的白藜蘆醇和虎杖苷是虎杖發揮藥理作用的主要成分。白藜蘆醇是虎杖中的次生代謝物，在乾燥的虎杖原料中的含量為O. 1% O. 2%，虎杖苷的含量為2. 0%左右。虎杖苷通過酶解可轉化為白藜蘆醇而發揮藥理作用。白藜蘆醇(ResveratiOl)化學名稱為3，4』，5-三羥基二苯乙烯，分子式為C14H1203，分子量為228. 24。虎杖苷(Polydatin)化學名稱為3，4』，5-三羥基二苯乙烯-3- β -D-葡萄糖苷，分子式為C20H2208，分子量為390. 40。白藜蘆醇和虎杖苷均存在順式和反式兩種異構體，即順式白藜蘆醇(Z)、反式白藜蘆醇(E)、順式虎杖苷(Z)以及反式虎杖苷(Ε)。反式白藜蘆醇為無色針狀結晶，易溶於乙醚，氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等，難溶於水，熔點253 255°C，261°C即升華。反式虎杖苷為白色針狀結晶粉末，易溶於甲醇、乙醇，微溶於水和乙酸乙酯。研究表明，反式白藜蘆醇異構體的生理活性強於順式異構體。白藜蘆醇具有抗腫瘤、抗氧化、預防心臟病、改善微循環、降血脂、降血壓、抗菌消炎、抑制血小板聚集、調節免疫力以及抗誘變等作用，對帕金森症、老年痴呆症、風溼性疾病、心腦血管疾病等病症都有較好的預防和治療作用，白藜蘆醇已被譽為繼紫杉醇之後又一新的綠色抗癌藥物，廣泛應用於高端藥品和保健品行業；而且白藜蘆醇具有祛除黃褐斑和增白作用，也廣泛應用於化妝品行業。因此，白藜蘆醇具有很大的藥用價值和市場前景，開發簡單易行、成本低、收率聞和純度聞的白黎蘆醇廣品生廣工藝具有重大的現實意義。為了提高虎杖中的白藜蘆醇的含量，需要將虎杖中的虎杖苷轉化為白藜蘆醇，轉化對象為虎杖或者虎杖提取物。以虎杖為轉化對象有固態酶解法、酵母固態發酵法以及專用微生物固態發酵法，如CN 101948370 A、CN 101628857 A以及CN 101792373 A採用的固態酶解法，是將虎杖粉碎後，加入複合酶和水在室溫下發酵時間為10 15天；CN101805755 A和CN 1385535 A是利用虎杖中自身的生物酶進行酶解，酶解時間為2 20天；如CN 101870640 A採用酵母發酵法，將虎杖粉碎後加入O. 5% 3%的酵母，發酵4 10天；如CN 102242159 A採用二步微生物法發酵虎杖粉，CN 1513822 A採用虎杖專用微生物，發酵時間為24 84小時。固態發酵法佔地面積大，發酵條件難以控制，而且發酵時間長。以虎杖提取物為轉化對象有酸解和酶解法，如CN 101811939 A採用酸解法，在pH2 5、50 100 °C水解I 5小時，操作條件對設備的要求大，能耗較高；CN 101643754 A採用酶解方法，所用的酶為單一的糖化酶，酶解時間為24 96小時，酶解時間長；CN 101338327 A採用虎杖專用酶進行酶解，但是酶解時間為4 5天，酶解時間長。目前，提取分離白藜蘆醇的方法主要有溶劑提取法、萃取、矽膠柱層析、高速逆流萃取、大孔吸附樹脂吸附、二氧化碳超臨界萃取法以及重結晶法。CN 101628859 A採用乙醇提取，濃縮後加水用複合酶水解，酶滅活過濾，濾液用活性炭脫色，再用乙醇反覆結晶製得白藜蘆醇。工藝中採用活性炭脫色，由於活性炭對白藜蘆醇有一定的吸附，回收率低，而且要製得白藜蘆醇精品還需要反覆結晶，產品收率低，生產成本高。CN 101993354 A採用二氧化碳超臨界萃取、大孔吸附樹脂以及精製製備白藜蘆醇，但二氧化碳超臨界萃取技術投入大，生產規模小。CN 1962592 A採用高速逆流色譜分離純化白藜蘆醇，設備一次性投資大，產能少， 而且還需要用活性炭脫色以及反覆結晶，收率低，操作步驟多。CN 1323776 A採用矽膠柱層析和高速逆流色譜製備白藜蘆醇，產品純度高，但是高速逆流色譜製備量小，難以實現工業化，而且工藝中沒有將虎杖苷轉化為白藜蘆醇，降低了白藜蘆醇的收率。CN 1269831 C採用聚醯胺層析法分離純化虎杖苷和白藜蘆醇，但工藝中沒有將虎杖苷轉化為白藜蘆醇，降低了白藜蘆醇的收率。CN 1513822 A用微波提取，縮短了提取時間，但是微波提取技術用於大規模化生
產還有一定的難度。CN 1090603 C主要是將白藜蘆醇用有機溶劑提取後，經萃取、濃縮和重結晶步驟後所製得白藜蘆醇半成品，但需要多次的重結晶才能進一步純化，產品收率低，生產成本聞。CN 101397242 A採用矽膠柱層析和重結晶方法製得的白藜蘆醇的純度為95%，純度較低。CN 102531851 A採用大孔吸附樹脂富集、半製備型高效液相色譜分離純化，得到白藜蘆醇和虎杖苷，但是利用半製備型高效液相色譜製備量太小，難以工業化而且虎杖苷沒有轉化為白藜蘆醇，降低了白藜蘆醇的收率。
發明內容
本發明的目的是針對現行的收率較低，成本較高，市場競爭力弱的調製方法進行改進，建立一條具有工業化可操作性的從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法。本發明的目的是這樣實現的一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，其特徵在於包括以下步驟a.白藜蘆醇的粗提以虎杖為原料，用有機溶劑回流攪拌提取，過濾，殘渣按上述步驟再提取兩遍，過濾，收集濾液，合併3次濾液；濾渣用擠幹機擠幹，收集液體，殘渣用蒸渣機回收殘留的溶劑；合併提取液，提取液真空濃縮至無有機溶劑，待酶解；b.酶解將濃縮液加水進行分散，調節pH=4_5，然後加入一定量由β-葡萄糖苷酶、纖維素酶和葡聚糖苷酶按一定比例配製的複合酶，攪拌，在一定的溫度下酶解時間為12-24 h ;HPLC檢測酶解液中的虎杖苷直至檢測不出虎杖苷，酶解完成後酶解液待萃取；
c.萃取將上述的酶解液用乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚中的一種或者幾種混合溶劑進行萃取；在萃取過程中會出現不同程度的乳化現象，將乳化層分離出來後用超聲波設備進行破乳處理，收集萃取相，合併萃取相；將萃取相真空濃縮，回收溶劑，得白藜蘆醇樣品I，待用矽膠柱層析純化；d.矽膠柱層析純化白藜蘆醇稱取一定量的層析矽膠並進行活化，然後溼法裝入不鏽鋼層析柱中，並用流動相平衡層析柱；將上述的白藜蘆醇樣品I用流動相溶解後溼法上樣；然後用石油醚、乙酸乙酯、甲醇混合液為洗脫劑進行等梯度洗脫；分步收集流出液，TLC檢測流出液，合併含有白藜蘆醇成份的流出液，回收溶劑，乾燥得白藜蘆醇樣品II ;白藜蘆醇樣品II待用中壓C18鍵合矽膠ODS柱層析純化；e.中壓C18鍵合矽膠ODS柱層析純化將C18鍵合矽膠溼法裝入動態軸向不鏽鋼中壓層析柱，用加壓裝置進行壓縮，並用流動相平衡層析柱；將上述的白藜蘆醇樣品II用流動相進行溶解，溼法上樣；以甲醇水混合液為洗脫劑進行等梯度洗脫，紫外檢測器在線監測，分步收集色譜峰對應流出液，HPLC檢測流出液，合併具有相同成份的流出液，回收溶劑，乾燥得高純度白藜蘆醇樣品III和低純度白藜蘆醇樣品IV j^HPLC檢測，白藜蘆醇樣品 III純度達98%以上；f.將上述的低純度白藜蘆醇樣品IV用甲醇、乙醇、丙酮一種或幾種混合溶劑的水溶液重結晶純化；晶體經過HPLC檢測，白藜蘆醇純度達98%以上。本發明一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，其特徵在於包括以下步驟a.白藜蘆醇的粗提以虎杖為原料，用有機溶劑回流攪拌提取，過濾，殘渣按上述步驟再提取兩遍，過濾，收集濾液，合併3次濾液；濾渣用擠幹機擠幹，收集液體，殘渣用蒸渣機回收殘留的溶劑；合併提取液，提取液真空濃縮至無有機溶劑，待酶解；b.酶解將濃縮液加水進行分散，調節pH=4_5，然後加入一定量由β -葡萄糖苷酶、纖維素酶和葡聚糖苷酶按一定比例配製的複合酶，攪拌，在一定的溫度下酶解時間為12-24 h ;HPLC檢測酶解液中的虎杖苷直至檢測不出虎杖苷，酶解完成後酶解液待萃取；c.萃取將上述的酶解液用乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚中的一種或者幾種混合溶劑進行萃取；在萃取過程中會出現不同程度的乳化現象，將乳化層分離出來後用超聲波設備進行破乳處理，收集萃取相，合併萃取相；將萃取相真空濃縮，回收溶劑，得白藜蘆醇樣品I，待用矽膠柱層析純化；d.矽膠柱層析純化白藜蘆醇稱取一定量的層析矽膠並進行活化，然後溼法裝入不鏽鋼層析柱中，並用流動相平衡層析柱；將上述的白藜蘆醇樣品I用流動相溶解後溼法上樣；然後用石油醚、乙酸乙酯、甲醇混合液為洗脫劑進行等梯度洗脫；分步收集流出液，TLC檢測流出液，合併含有白藜蘆醇成份的流出液，回收溶劑，乾燥得白藜蘆醇樣品II ;白藜蘆醇樣品II待用中壓C18鍵合矽膠ODS柱層析純化；e.中壓C18鍵合矽膠ODS柱層析純化將C18鍵合矽膠溼法裝入動態軸向不鏽鋼中壓層析柱，用加壓裝置進行壓縮，並用流動相平衡層析柱；將上述的白藜蘆醇樣品II用流動相進行溶解，溼法上樣；以甲醇水混合液為洗脫劑進行等梯度洗脫，紫外檢測器在線監測，分步收集色譜峰對應流出液，HPLC檢測流出液，合併具有相同成份的流出液，回收溶劑，乾燥得高純度白藜蘆醇樣品III和低純度白藜蘆醇樣品IV J^HPLC檢測，白藜蘆醇樣品III純度達98%以上；
f.將上述的低純度白藜蘆醇樣品IV用甲醇、乙醇、丙酮一種或幾種混合溶劑的水溶液重結晶純化；晶體經過HPLC檢測，白藜蘆醇純度達98%以上。步驟a中所述的虎杖粉碎至20-40目，提取溶劑為甲醇、乙醇或者丙酮水溶液，濃度為60%-80% (v/v)，提取的溫度為50-60°C，提取時間為2-4 h，料液比為1:6-1:10，提取次數為3次；步驟a中所述的濾渣用擠幹機擠幹，收集液體，殘渣用蒸渣機回收殘留的溶劑；步驟a中所述的真空濃縮時的溫度為55_60°C，濃縮液比重為I. 10-1. 25。步驟b中所述的加水量為1-2倍濃縮液體積；步驟b中所述的pH調節酸為檸檬酸或鹽酸；
步驟b中所述的酶解pH為4-5，酶解溫度為45_55°C，加入的複合酶量為虎杖原料質量的 O. 2%-0. 4% ；步驟b中所述的複合酶為β -葡萄糖苷酶、纖維素酶和β -葡聚糖苷酶按一定比例配製，其中比例為4:1:2-2:1:1 (m/m)；步驟b中所述的攪拌頻率為20-40 rpm ；步驟b中所述的酶解時間為12-24 h, HPLC檢測酶解液中的虎杖苷直至檢測不出虎杖苷。步驟c中所述的萃取溶劑為乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚中的一種或者幾種混合溶劑；步驟c中所述的萃取溫度為室溫，每次萃取劑用量為萃餘相體積的的1-1. 5倍；步驟c中所述的萃取攪拌時間為15 min，靜置時間為30-45 min ；步驟c中所述的萃取次數為3-5次；步驟c中所述的乳化層用超聲波設備進行處理；步驟c中所述的真空濃縮溫度為45_50°C。步驟d中所述的矽膠為300-400目；步驟d中所述的矽膠在105_110°C活化1-2 h ；步驟d中所述的矽膠柱層析裝柱方法為取適量的矽膠用流動相進行浸泡，並且攪拌，待矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入不鏽鋼層析柱中，並用流動相平衡層析柱；步驟d中所述的上樣量為1-4 g樣品/50 g矽膠，用流動相溶解，溼法上樣；步驟d中所述的洗脫劑採用石油醚乙酸乙酯甲醇=85:10:5-80:15:5 (v/v)；步驟d中所述的洗脫步驟用洗脫劑等梯度洗脫，洗脫劑的量為4-5 BV，洗脫速度為1-1. 5 BV/h ;分步收集流出液，TLC檢測流出液，合併含有白藜蘆醇成份的流出液，回收溶劑，乾燥得白藜蘆醇樣品II。步驟e中所述的中壓C18鍵合矽膠柱層析裝柱方法為稱取適量的C18鍵合矽膠用流動相進行浸泡，並且攪拌，待C18鍵合矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入動態軸向不鏽鋼中壓層析柱中；然後用加壓裝置進行壓縮，使壓縮後的C18鍵合矽膠柱在正常流速下的工作壓力為5-20 bar，並用流動相平衡層析柱；步驟e中所述的上樣量為1-2 g樣品/20 g C18鍵合矽膠，用流動相溶解，溼法上樣;步驟e中所述的洗脫劑採用甲醇水=40:60-35:65 ( v/v)；
步驟e中所述的洗脫步驟用洗脫劑等梯度洗脫，洗脫劑的量為3-5 BV，洗脫速度為1-1.5 BV/h ;紫外檢測器的監測波長為299-300 nm，分步收集色譜峰對應流出液，HPLC檢測流出液，合併具有相同成份的流出液，回收溶劑，乾燥得高純度白藜蘆醇樣品III和低純度白藜蘆醇樣品IV。步驟f中所述的重結晶溶劑為甲醇、乙醇、丙酮一種或幾種混合溶劑的水溶液；步驟f中所述的重結晶溶劑的濃度為35%_50% (v/v)；步驟f中所述的混合重結晶溶劑為甲醇丙酮=2:1-1:1 (v/v)或者乙醇丙酮=3:1-1:1 (v/v)；步驟f中所述的溶解溫度為50-55 V ；步驟f中所述的重結晶溶劑用量為1-2 mL/1 g樣品； 步驟f中所述的重結晶溫度為0-5 0C，重結晶時間24 h ；步驟f中所述的重結晶的白藜蘆醇的晶體經過HPLC檢測，白藜蘆醇純度達98%以上；步驟f中所述的母液處理將母液乾燥後用C18鍵合矽膠柱進一步處理。本發明涉及一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，是利用虎杖為原料，通過有機溶劑提取、複合酶水解、萃取、矽膠柱層析耦合C18鍵合矽膠柱層析分離純化以及重結晶，可以製備高純度的白藜蘆醇。本發明的有益效果是由於採用新的提取工藝，通過簡化操作、減少損失、提高產率，降低成本，增強產品的市場競爭能力。
附圖I為白藜蘆醇製備工藝流程圖。圖I。附圖2為E型白藜蘆醇化學結構式。附圖3為E型虎杖苷化學結構式。
具體實施例方式本發明是一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，解決現有技術中從虎杖中提取白藜蘆醇的提取率不高、生產周期長、產品純度不高、產品收率低以及生產成本高等問題。本工藝是利用虎杖為原料，通過有機溶劑提取、複合酶水解、萃取、矽膠柱層析耦合C18鍵合矽膠柱層析分離純化以及重結晶，可以製備高純度的白藜蘆醇。整個工藝白藜蘆醇提取率達90%，回收率達65%以上，白藜蘆醇產品純度達98%以上，達到藥用標準，整個工藝產品的得率為O. 65%。本工藝提取率高、生產周期短、產品純度高、收率高以及生產成本低，工藝操作簡單易行。I、白藜蘆醇的粗提以虎杖為原料，適當粉碎至20 40目，用60% 80% (v/v)甲醇、乙醇或者丙酮水溶液於50 60°C回流攪拌提取2 4 h，料液比為1:6 1:10，過濾，收集濾液，殘渣按上述步驟再提取兩遍，過濾，收集濾液，合併3次濾液。濾渣用擠幹機擠幹，收集液體，殘渣用蒸渣機回收殘留的溶劑。合併提取液，提取液於55 60°C真空濃縮回收有機溶劑，濃縮至無有機溶劑，濃縮液比重為I. 10 I. 25，待酶解。
2、酶解將濃縮液用I 2倍體積水進行分散，用檸檬酸或鹽酸調節pH至4 5，保溫至45 55°C，加入虎杖原料質量的O. 2% O. 4%的複合酶進行酶解，複合酶由β -葡萄糖苷酶、纖維素酶以及β-葡聚糖苷酶按一定比例配製，保持一定的攪拌頻率，酶解時間為12 24 h。HPLC檢測酶解液中的虎杖苷直至檢測不出虎杖苷，酶解完成後酶解液待萃取。3、萃取將上述的酶解液用乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚中的一種或者幾種混合溶劑進行萃取，溫度為室溫，每次萃取劑用量為萃餘相體積的I I. 5倍,萃取攪拌時間為15 min,靜置時間為30 45 min。分離出萃取相和萃餘相,萃餘相再加入萃取溶劑進行萃取,萃取3 5次。在萃取過程中會出現不同程度的乳化現象，將乳化層分離出來後 用超聲波設備進行破乳處理，收集萃取相，合併萃取相。將萃取相於45 50°C真空濃縮，回收溶劑，得白藜蘆醇樣品I，待用矽膠柱層析純化。4、矽膠柱層析純化白藜蘆醇4. I矽膠的活化稱取300 400目的矽膠於105 110°C活化I 2 h。4. 2溼法裝柱將活化好的矽膠放入容器中，並加入適量的流動相，順著固定方向攪拌，待矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入不鏽鋼層析柱中，並用流動相平衡層析柱。4. 3溼法上樣和洗脫將上述的白藜蘆醇樣品I用流動相溶解後溼法上樣，上樣量為I 4 g樣品/50 g娃膠。然後用石油醚乙酸乙酯甲醇(85:10:5 80:15:5, v/v/v)為洗脫劑進行等梯度洗脫，洗脫劑的量為4 5 BV，洗脫速度為I I. 5 BV/h。分步收集流出液，TLC檢測流出液，合併含有白藜蘆醇成份的流出液，回收溶劑，乾燥得白藜蘆醇樣品II。矽膠層析柱經甲醇再生後可重複使用。白藜蘆醇樣品II待用中壓C18鍵合矽膠(ODS)柱層析純化。5、中壓C18鍵合矽膠(ODS)柱層析純化白藜蘆醇5. I溼法裝柱稱取適量的C18鍵合矽膠用流動相進行浸泡，並且攪拌，待C18鍵合矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入動態軸向不鏽鋼中壓層析柱中。然後用加壓裝置進行壓縮，使壓縮後的C18鍵合矽膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar，並用流動相平衡層析柱。5. 2溼法上樣和洗脫將上述的白藜蘆醇樣品II用流動相溶解，溼法上樣，上樣量為I 2 g樣品/20 gC18鍵合矽膠。以甲醇水(40:60 35:65，v/v)為洗脫劑進行等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5 BV，洗脫速度為I I. 5 BV/h。紫外檢測器在線監測，監測波長為299 300 nm,分步收集色譜峰對應流出液，HPLC檢測流出液，合併具有相同成份的流出液，回收溶劑，乾燥得高純度白藜蘆醇樣品III和低純度白藜蘆醇樣品IV。經HPLC檢測，白藜蘆醇樣品III純度達98%以上，低純度白藜蘆醇樣品IV純度為89% 95%。低純度白藜蘆醇樣品IV需要進過重結晶進一步純化以製備98%純度以上的精品。中壓C18鍵合矽膠層析柱經甲醇再生後可重複使用。6、重結晶
將上述的低純度白藜蘆醇樣品IV用35% 50% (v/v)的甲醇、乙醇、丙酮一種或幾種混合溶劑的水溶液於50 55 1加熱溶解，用量為I 2 mL/1 g樣品，過濾，冷卻至O 5 °C，結晶時間為24 h。分離母液和晶體，母液乾燥後用C18鍵合矽膠柱進一步處理，晶體經過HPLC檢測，白藜蘆醇純度達98%以上。下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但發明的實施方式不限於此。實施例I(I)白藜蘆醇的粗提將虎杖適當粉碎至20 40目，稱取虎杖粉100 kg於提取罐中，用60% (v/v)甲醇水溶液600 L於50°C回流攪拌提取2 h，袋式過濾器過濾，收集濾液於儲罐中，殘渣按上述步驟再提取兩遍，過濾，收集濾液，合併3次濾液。濾渣用擠幹機擠幹，收集液體，殘渣用蒸渣機回收殘留的溶劑。合併提取液，得提取液1700 L0將提取液轉移至真空濃縮罐中，於 55 60°C真空濃縮回收甲醇，濃縮至無甲醇，濃縮液比重為I. 12，體積約為240 L，濃縮液轉移至酶解罐中待酶解。(2)酶解量取240 L水加入酶解罐中，用檸檬酸調節pH至4. 5 4. 7，保溫至45 47°C，加入O. 2 kg的複合酶進行酶解，複合酶為β -葡萄糖苷酶纖維素酶β -葡聚糖苷酶(2:1:2, m/m/m)，攪拌頻率為20 rpm，酶解完成耗時12 h。將酶解液轉移至萃取罐中，待萃取。(3)萃取將上述的酶解液用乙酸乙酯480 L進行萃取，溫度為室溫，萃取攪拌時間為15min，靜置時間為30 min。分離出酯相，水相再加入乙酸乙酯480 L進行萃取，再萃取2次。在萃取過程中會出現不同程度的乳化現象，將乳化層分離出來後用超聲波設備進行破乳處理，收集酯相，合併酯相。共得酯相1450 L0將酯相轉移至真空濃縮罐中於45 50°C真空濃縮，回收乙酸乙酯，得白藜蘆醇樣品I，HPLC檢測，白藜蘆醇的含量為50. 1%，質量為I. 76kg。白藜蘆醇樣品I待用矽膠柱層析純化。(4)矽膠柱層析純化白藜蘆醇稱取300 400目的矽膠88 kg於105 110°C活化I 2 h。將活化好的矽膠放入容器中，並加入適量的流動相，順著固定方向攪拌，待矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入不鏽鋼層析柱中，並用流動相平衡層析柱。將上述的白藜蘆醇樣品I用流動相溶解後溼法上樣，上樣量為I g樣品/50 g矽膠。然後用石油醚乙酸乙酯甲醇(85:10:5，v/v/v)為洗脫劑進行等梯度洗脫，洗脫劑的量為4 5 BV，洗脫速度為I BV/h。分步收集流出液，TLC檢測流出液，合併含有白藜蘆醇成份的流出液，回收溶劑，乾燥得白藜蘆醇樣品II，HPLC檢測，白藜蘆醇的含量為81. 3%，質量為O. 98 kg。白藜蘆醇樣品II待用中壓C18鍵合矽膠(ODS)柱層析純化。矽膠層析柱經甲醇再生後可重複使用。(5)中壓C18鍵合矽膠(ODS)柱層析純化白藜蘆醇稱取19. 6 kg的C18鍵合矽膠用流動相進行浸泡，並且攪拌，待C18鍵合矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入動態軸向不鏽鋼中壓層析柱中。然後用加壓裝置進行壓縮，使壓縮後的C18鍵合矽膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar,並用流動相平衡層析柱。
將上述的白藜蘆醇樣品II用流動相溶解，溼法上樣，上樣量為I g樣品/20 g C18鍵合矽膠。以甲醇水(40:60，v/v)為洗脫劑進行等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5 BV，洗脫速度為I BV/h。紫外檢測器在線監測，監測波長為299 nm，分步收集色譜峰對應流出液，HPLC檢測流出液，合併具有相同成份的流出液，回收溶劑，乾燥得高純度白藜蘆醇樣品III和低純度白藜蘆醇樣品IV。經HPLC檢測，白藜蘆醇樣品III純度達98%以上，質量為O. 30 kg。低純度白藜蘆醇樣品IV純度為90%，質量為O. 45 kg。低純度白藜蘆醇樣品IV需要進過重結晶進一步純化以製備98%純度以上的精品。中壓C18鍵合矽膠層析柱經甲醇再生後可重複使用。(6)重結晶將上述的低純度白藜蘆醇樣品IV用450 mL的35% (v/v)的甲醇溶液於50 °〇加熱溶解，過濾，冷卻至O 5 °C結晶24 h。分離母液和晶體，母液乾燥後用C18鍵合矽膠柱進一步處理，晶體經過HPLC檢測，白藜蘆醇純度達98%以上，質量為O. 36 kg。 實施例2(I)白藜蘆醇的粗提將虎杖適當粉碎至20 40目，稱取虎杖粉100 kg於提取罐中，用80% (v/v)乙醇水溶液700 L於50°C回流攪拌提取3 h，袋式過濾器過濾，收集濾液於儲罐中，殘渣按上述步驟再提取兩遍，過濾，收集濾液，合併3次濾液。濾渣用擠幹機擠幹，收集液體，殘渣用蒸渣機回收殘留的溶劑。合併提取液，得提取液2000 L0將提取液轉移至真空濃縮罐中，於55 60°C真空濃縮回收甲醇，濃縮至無甲醇，濃縮液比重為I. 15，體積約為260 L，濃縮液轉移至酶解罐中待酶解。(2)酶解量取260 L水加入酶解罐中，用鹽酸調節pH至4. 8 5.0，保溫至50 51 °C，加入0.3 kg的複合酶進行酶解，複合酶為β -葡萄糖苷酶纖維素酶葡聚糖苷酶(3:1:2，m/m/m),攪拌頻率為30 rpm,酶解完成耗時15 h。將酶解液轉移至萃取罐中,待萃取。(3)萃取將上述的酶解液用氯仿520 L進行萃取，溫度為室溫，萃取攪拌時間為15 min，靜置時間為35 min。分離出氯仿相，水相再加入氯仿520 L進行萃取，再萃取3次。在萃取過程中會出現不同程度的乳化現象，將乳化層分離出來後用超聲波設備進行破乳處理，收集氯仿相，合併氯仿相。共得氯仿相2100 L0將酯相轉移至真空濃縮罐中於45 50°C真空濃縮，回收氯仿，得白藜蘆醇樣品I，HPLC檢測，白藜蘆醇的含量為50.9%，質量為1.78 kg。白藜蘆醇樣品I待用矽膠柱層析純化。(4)矽膠柱層析純化白藜蘆醇稱取300 400目的矽膠44. 5 kg於105 110°C活化I 2 h。將活化好的矽膠放入容器中，並加入適量的流動相，順著固定方向攪拌，待矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入不鏽鋼層析柱中，並用流動相平衡層析柱。將上述的白藜蘆醇樣品I用流動相溶解後溼法上樣，上樣量為2 g樣品/50 g矽膠。然後用石油醚乙酸乙酯甲醇(80:15:5，v/v/v)為洗脫劑進行等梯度洗脫，洗脫劑的量為4 5 BV，洗脫速度為1.5 BV/h。分步收集流出液，TLC檢測流出液，合併含有白藜蘆醇成份的流出液，回收溶劑，乾燥得白藜蘆醇樣品II，HPLC檢測，白藜蘆醇的含量為82. 5%，質量為O. 97 kg。白藜蘆醇樣品II待用中壓C18鍵合矽膠(ODS)柱層析純化。矽膠層析柱經甲醇再生後可重複使用。(5)中壓C18鍵合矽膠(ODS)柱層析純化白藜蘆醇稱取9. 7 kg的C18鍵合矽膠用流動相進行浸泡，並且攪拌，待C18鍵合矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入動態軸向不鏽鋼中壓層析柱中。然後用加壓裝置進行壓縮，使壓縮後的C18鍵合矽膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar，並用流動相平衡層析柱。將上述的白藜蘆醇樣品II用流動相溶解，溼法上樣，上樣量為2 g樣品/20 g C18鍵合矽膠。以甲醇水(35:65，v/v)為洗脫劑進行等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5 BV，洗脫速度為I. 5 BV/h。紫外檢測器在線監測，監測波長為300 nm，分步收集色譜峰對應流出液，HPLC檢測流出液，合併具有相同成份的流出液，回收溶劑，乾燥得高純度白藜蘆醇樣品III和低純度白藜蘆醇樣品IV。經HPLC檢測，白藜蘆醇樣品III純度達98%以上，質量為O. 31 kg。低純度白藜蘆醇樣品IV純度為89%，質量為O. 46 kg。低純度白藜蘆醇樣品IV需要進過重結晶進一步純化以製備98%純度以上的精品。中壓C18鍵合矽膠層析柱經甲 醇再生後可重複使用。(6)重結晶將上述的低純度白藜蘆醇樣品IV用460 mL的45% (v/v)的乙醇溶液於55 °〇加熱溶解，過濾，冷卻至O 5 °C結晶24 h。分離母液和晶體，母液乾燥後用C18鍵合矽膠柱進一步處理，晶體經過HPLC檢測，白藜蘆醇純度達98%以上，質量為O. 35 kg。實施例3(I)白藜蘆醇的粗提將虎杖適當粉碎至20 40目，稱取虎杖粉100 kg於提取罐中，用70% (v/v)丙酮水溶液800 L於60°C回流攪拌提取4 h，袋式過濾器過濾，收集濾液於儲罐中，殘渣按上述步驟再提取兩遍，過濾，收集濾液，合併3次濾液。濾渣用擠幹機擠幹，收集液體，殘渣用蒸渣機回收殘留的溶劑。合併提取液，得提取液2300 L0將提取液轉移至真空濃縮罐中，於55 60°C真空濃縮回收甲醇，濃縮至無甲醇，濃縮液比重為I. 25，體積約為270 L，濃縮液轉移至酶解罐中待酶解。(2)酶解量取270 L水加入酶解罐中，用檸檬酸調節pH至4. 8 5.0，保溫至45 46°C，加入O. 4 kg的複合酶進行酶解，複合酶為β -葡萄糖苷酶纖維素酶β -葡聚糖苷酶(4:1:2, m/m/m)，攪拌頻率為40 rpm，酶解完成耗時17 h。將酶解液轉移至萃取罐中，待萃取。(3)萃取將上述的酶解液用乙醚540 L進行萃取，溫度為室溫，，萃取攪拌時間為15 min，靜置時間為40 min。分離出醚相,水相再加入乙醚540 L進行萃取,再萃取4次。在萃取過程中會出現不同程度的乳化現象，將乳化層分離出來後用超聲波設備進行破乳處理，收集醚相，合併醚相。共得醚相2900 L0將醚相轉移至真空濃縮罐中於45 50°C真空濃縮，回收乙醚，得白藜蘆醇樣品I，HPLC檢測，白藜蘆醇的含量為51. 1%，質量為I. 70 kg。白藜蘆醇樣品I待用矽膠柱層析純化。(4)矽膠柱層析純化白藜蘆醇
稱取300 400目的矽膠28. 3 kg於105 110°C活化I 2 h。將活化好的矽膠放入容器中，並加入適量的流動相，順著固定方向攪拌，待矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入不鏽鋼層析柱中，並用流動相平衡層析柱。將上述的白藜蘆醇樣品I用流動相溶解後溼法上樣，上樣量為3 g樣品/50 g矽膠。然後用石油醚乙酸乙酯甲醇(82:13:5，v/v/v)為洗脫劑進行等梯度洗脫，洗脫劑的量為4 5 BV，洗脫速度為I BV/h。分步收集流出液，TLC檢測流出液，合併含有白藜蘆醇成份的流出液，回收溶劑，乾燥得白藜蘆醇樣品II，HPLC檢測，白藜蘆醇的含量為80. 2%，質量為O. 97 kg。白藜蘆醇樣品II待用中壓C18鍵合矽膠(ODS)柱層析純化。矽膠層析柱經甲醇再生後可重複使用。(5)中壓C18鍵合矽膠(ODS)柱層析純化白藜蘆醇稱取13 kg的C18鍵合矽膠用流動相進行浸泡，並且攪拌，待C18鍵合矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入動態軸向不鏽鋼中壓層析柱中。然後用加壓裝置進行壓縮，使壓縮後的C18鍵合矽膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar，並用流動相平衡層析柱。將上述的白藜蘆醇樣品II用流動相溶解，溼法上樣，上樣量為I. 5 g樣品/20 gC18鍵合矽膠。以甲醇水(40:60，v/v)為洗脫劑進行等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5BV，洗脫速度為I BV/h。紫外檢測器在線監測，監測波長為299 nm，分步收集色譜峰對應流出液，HPLC檢測流出液，合併具有相同成份的流出液，回收溶劑，乾燥得高純度白藜蘆醇樣品III和低純度白藜蘆醇樣品IV。經HPLC檢測，白藜蘆醇樣品III純度達98%以上，質量為O. 29 kg。低純度白藜蘆醇樣品IV純度為91%，質量為0.44 kg。低純度白藜蘆醇樣品IV需要進過重結晶進一步純化以製備98%純度以上的精品。中壓C18鍵合矽膠層析柱經甲醇再生後可重複使用。(6)重結晶將上述的低純度白藜蘆醇樣品IV用440 mL的45% (v/v)的丙酮溶液於55 °〇加熱溶解，過濾，冷卻至O 5 °C結晶24 h。分離母液和晶體，母液乾燥後用C18鍵合矽膠柱進一步處理，晶體經過HPLC檢測，白藜蘆醇純度達98%以上，質量為O. 38 kg。 實施例4(I)白藜蘆醇的粗提將虎杖適當粉碎至20 40目，稱取虎杖粉100 kg於提取罐中，用80% (v/v)甲醇水溶液900 L於50°C回流攪拌提取2. 5 h，袋式過濾器過濾，收集濾液於儲罐中，殘渣按上述步驟再提取兩遍，過濾，收集濾液，合併3次濾液。濾渣用擠幹機擠幹，收集液體，殘渣用蒸渣機回收殘留的溶劑。合併提取液，得提取液2600 L0將提取液轉移至真空濃縮罐中，於55 60°C真空濃縮回收甲醇，濃縮至無甲醇，濃縮液比重為I. 25，體積約為310 L，濃縮液轉移至酶解罐中待酶解。(2)酶解量取310 L水加入酶解罐中，用鹽酸調節pH至4. 6 4. 8，保溫至52 53°C，加入
0.2 kg的複合酶進行酶解，複合酶為葡萄糖苷酶纖維素酶葡聚糖苷酶(2:1:1，m/m/m),攪拌頻率為30 rpm,酶解完成耗時14 h。將酶解液轉移至萃取罐中,待萃取。(3)萃取將上述的酶解液用乙酸乙酯與石油醚的混合物(2:1) 930 L進行萃取，溫度為室溫，，萃取攪拌時間為15 min，靜置時間為45 min。分離出有機相，水相再加入乙酸乙酯與石油醚的混合物930 L進行萃取，再萃取2次。在萃取過程中會出現不同程度的乳化現象，將乳化層分離出來後用超聲波設備進行破乳處理，收集有機相，合併有機相。共得有機相2850L0將有機相轉移至真空濃縮罐中於45 50°C真空濃縮，回收乙酸乙酯與石油醚的混合物，得白藜蘆醇樣品I，HPLC檢測，白藜蘆醇的含量為50. 2%，質量為I. 77 kg。白藜蘆醇樣品I待用矽膠柱層析純化。(4)矽膠柱層析純化白藜蘆醇稱取300 400目的矽膠22 kg於105 110°C活化I 2 h。將活化好的矽膠放入容器中，並加入適量的流動相，順著固定方向攪拌，待矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入不鏽鋼層析柱中，並用流動相平衡層析柱。將上述的白藜蘆醇樣品I用流動相溶解後溼法上樣，上樣量為4 g樣品/50 g矽膠。然後用石油醚乙酸乙酯甲醇(85:10:5，v/v/v)為洗脫劑進行等梯度洗脫，洗脫劑的 量為4 5 BV，洗脫速度為1.5 BV/h。分步收集流出液，TLC檢測流出液，合併含有白藜蘆醇成份的流出液，回收溶劑，乾燥得白藜蘆醇樣品II，HPLC檢測，白藜蘆醇的含量為79. 9%，質量為O. 97 kg。白藜蘆醇樣品II待用中壓C18鍵合矽膠(ODS)柱層析純化。矽膠層析柱經甲醇再生後可重複使用。(5)中壓C18鍵合矽膠(ODS)柱層析純化白藜蘆醇稱取19. 4 kg的C18鍵合矽膠用流動相進行浸泡，並且攪拌，待C18鍵合矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入動態軸向不鏽鋼中壓層析柱中。然後用加壓裝置進行壓縮，使壓縮後的C18鍵合矽膠柱在正常流速下的工作壓力為5 20 bar,並用流動相平衡層析柱。將上述的白藜蘆醇樣品II用流動相溶解，溼法上樣，上樣量為I g樣品/20 g C18鍵合矽膠。以甲醇水(35:65，v/v)為洗脫劑進行等梯度洗脫，洗脫劑的量為3 5 BV，洗脫速度為I. 5 BV/h。紫外檢測器在線監測，監測波長為300 nm，分步收集色譜峰對應流出液，HPLC檢測流出液，合併具有相同成份的流出液，回收溶劑，乾燥得高純度白藜蘆醇樣品III和低純度白藜蘆醇樣品IV。經HPLC檢測，白藜蘆醇樣品III純度達98%以上，質量為O. 32 kg。低純度白藜蘆醇樣品IV純度為90%，質量為O. 45 kg。低純度白藜蘆醇樣品IV需要進過重結晶進一步純化以製備98%純度以上的精品。中壓C18鍵合矽膠層析柱經甲醇再生後可重複使用。(6)重結晶將上述的低純度白藜蘆醇樣品IV用900 mL的50% (v/v)的甲醇與丙酮混合溶劑(1:1)溶液於50 1加熱溶解，過濾，冷卻至O 5 °C結晶24 h。分離母液和晶體，母液乾燥後用C18鍵合矽膠柱進一步處理，晶體經過HPLC檢測，白藜蘆醇純度達98%以上，質量為
O.33 kg。
權利要求
1.一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，其特徵在於包括以下步驟 a.白藜蘆醇的粗提以虎杖為原料，用有機溶劑回流攪拌提取，過濾，殘渣按上述步驟再提取兩遍，過濾，收集濾液，合併3次濾液；濾渣用擠幹機擠幹，收集液體，殘渣用蒸渣機回收殘留的溶劑；合併提取液，提取液真空濃縮至無有機溶劑，待酶解； b.酶解將濃縮液加水進行分散，調節pH=4-5，然後加入一定量由β-葡萄糖苷酶、纖維素酶和葡聚糖苷酶按一定比例配製的複合酶，攪拌，在一定的溫度下酶解時間為12-24 h ;HPLC檢測酶解液中的虎杖苷直至檢測不出虎杖苷，酶解完成後酶解液待萃取； c.萃取將上述的酶解液用乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚中的一種或者幾種混合溶劑進行萃取；在萃取過程中會出現不同程度的乳化現象，將乳化層分離出來後用超聲波設備進行破乳處理，收集萃取相，合併萃取相；將萃取相真空濃縮，回收溶劑，得白藜蘆醇樣品I，待用矽膠柱層析純化； d.矽膠柱層析純化白藜蘆醇稱取一定量的層析矽膠並進行活化，然後溼法裝入不鏽鋼層析柱中，並用流動相平衡層析柱；將上述的白藜蘆醇樣品I用流動相溶解後溼法上樣；然後用石油醚、乙酸乙酯、甲醇混合液為洗脫劑進行等梯度洗脫；分步收集流出液，TLC檢測流出液，合併含有白藜蘆醇成份的流出液，回收溶劑，乾燥得白藜蘆醇樣品II ;白藜蘆醇樣品II待用中壓C18鍵合矽膠ODS柱層析純化； e.中壓C18鍵合矽膠ODS柱層析純化將C18鍵合矽膠溼法裝入動態軸向不鏽鋼中壓層析柱，用加壓裝置進行壓縮，並用流動相平衡層析柱；將上述的白藜蘆醇樣品II用流動相進行溶解，溼法上樣；以甲醇水混合液為洗脫劑進行等梯度洗脫，紫外檢測器在線監測，分步收集色譜峰對應流出液，HPLC檢測流出液，合併具有相同成份的流出液，回收溶劑，乾燥得高純度白藜蘆醇樣品III和低純度白藜蘆醇樣品IV 45HPLC檢測，白藜蘆醇樣品III純度達98%以上； f.將上述的低純度白藜蘆醇樣品IV用甲醇、乙醇、丙酮一種或幾種混合溶劑的水溶液重結晶純化；晶體經過HPLC檢測，白藜蘆醇純度達98%以上。
2.按照權利要I所述的一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，其特徵在於 步驟a中所述的虎杖粉碎至20-40目，提取溶劑為甲醇、乙醇或者丙酮水溶液，濃度為60%-80%(v/v)，提取的溫度為50-60°C，提取時間為2_4 h，料液比為1:6_1:10，提取次數為3次； 步驟a中所述的濾渣用擠幹機擠幹，收集液體，殘渣用蒸渣機回收殘留的溶劑； 步驟a中所述的真空濃縮時的溫度為55-60°C，濃縮液比重為I. 10-1. 25。
3.按照權利要I所述的一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，其特徵在於 步驟b中所述的加水量為1-2倍濃縮液體積； 步驟b中所述的pH調節酸為檸檬酸或鹽酸； 步驟b中所述的酶解pH為4-5，酶解溫度為45-55°C，加入的複合酶量為虎杖原料質量的 O. 2%-0. 4% ； 步驟b中所述的複合酶為β-葡萄糖苷酶、纖維素酶和葡聚糖苷酶按一定比例配製，其中比例為4:1:2-2:1:1 (m/m)； 步驟b中所述的攪拌頻率為20-40 rpm ； 步驟b中所述的酶解時間為12-24 h，HPLC檢測酶解液中的虎杖苷直至檢測不出虎杖苷。
4.按照權利要I所述的一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，其特徵在於 步驟c中所述的萃取溶劑為乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚中的一種或者幾種混合溶劑； 步驟c中所述的萃取溫度為室溫，每次萃取劑用量為萃餘相體積的的1-1. 5倍； 步驟c中所述的萃取攪拌時間為15 min,靜置時間為30-45 min ； 步驟c中所述的萃取次數為3-5次； 步驟c中所述的乳化層用超聲波設備進行處理； 步驟c中所述的真空濃縮溫度為45-50°C。
5.按照權利要I所述的一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，其特徵在於 步驟d中所述的矽膠為300-400目； 步驟d中所述的矽膠在105-110°C活化1-2 h ； 步驟d中所述的矽膠柱層析裝柱方法為取適量的矽膠用流動相進行浸泡，並且攪拌，待矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入不鏽鋼層析柱中，並用流動相平衡層析柱； 步驟d中所述的上樣量為1-4 g樣品/50 g矽膠，用流動相溶解，溼法上樣； 步驟d中所述的洗脫劑採用石油醚乙酸乙酯甲醇=85:10:5-80:15:5 (v/v)；步驟d中所述的洗脫步驟用洗脫劑等梯度洗脫，洗脫劑的量為4-5 BV，洗脫速度為1-1. 5 BV/h ;分步收集流出液，TLC檢測流出液，合併含有白藜蘆醇成份的流出液，回收溶齊U，乾燥得白藜蘆醇樣品II。
6.按照權利要I所述的一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，其特徵在於 步驟e中所述的中壓C18鍵合矽膠柱層析裝柱方法為稱取適量的C18鍵合矽膠用流動相進行浸泡，並且攪拌，待C18鍵合矽膠中沒有氣泡時，溼法裝入動態軸向不鏽鋼中壓層析柱中；然後用加壓裝置進行壓縮，使壓縮後的C18鍵合矽膠柱在正常流速下的工作壓力為5-20 bar，並用流動相平衡層析柱； 步驟e中所述的上樣量為1-2 g樣品/20 g C18鍵合矽膠，用流動相溶解，溼法上樣； 步驟e中所述的洗脫劑採用甲醇水=40:60-35:65 ( v/v)； 步驟e中所述的洗脫步驟用洗脫劑等梯度洗脫，洗脫劑的量為3-5 BV，洗脫速度為1-1. 5 BV/h ;紫外檢測器的監測波長為299-300 nm，分步收集色譜峰對應流出液，HPLC檢測流出液，合併具有相同成份的流出液，回收溶劑，乾燥得高純度白藜蘆醇樣品III和低純度白藜蘆醇樣品IV。
7.按照權利要I所述的一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，其特徵在於 步驟f中所述的重結晶溶劑為甲醇、乙醇、丙酮一種或幾種混合溶劑的水溶液； 步驟f中所述的重結晶溶劑的濃度為35%-50% (v/v)； 步驟f中所述的混合重結晶溶劑為甲醇丙酮=2:1-1:1 (v/v)或者乙醇丙酮=3:1-1:1 (v/v)； 步驟f中所述的溶解溫度為50-55 V ； 步驟f中所述的重結晶溶劑用量為1-2 mL/1 g樣品； 步驟f中所述的重結晶溫度為0-5 °C，重結晶時間24 h ； 步驟f中所述的重結晶的白藜蘆醇的晶體經過HPLC檢測，白藜蘆醇純度達98%以上；步驟f中 所述的母液處理將母液乾燥後用C18鍵合矽膠柱進一步處理。
全文摘要
本發明涉及一種從虎杖中製備高純度白藜蘆醇的方法，其特徵在於包括如下操作步驟a)白藜蘆醇的粗提以虎杖為原料，用有機溶劑進行提取；b)酶解將濃縮液加水進行分散後加入複合酶進行酶解；c)萃取將上述的酶解液用溶劑進行萃取；d)矽膠柱層析純化白藜蘆醇用洗脫劑進行等梯度洗脫；e)中壓C18鍵合矽膠ODS柱層析純化甲醇:水為洗脫劑進行等梯度洗脫；f)將上述的低純度白藜蘆醇樣品IV用溶劑重結晶純化。白藜蘆醇產品純度達98%以上，達到藥用標準。本工藝提取率高、生產周期短、產品純度高、收率高以及生產成本低，工藝操作簡單易行。
文檔編號C07C37/70GK102925497SQ201210432150
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月1日 優先權日2012年11月1日
發明者向極釺, 程新華, 楊永康, 覃大吉, 殷紅清, 張亮 申請人:恩施清江生物工程有限公司