中草藥核磁共振指紋圖譜鑑別方法

2023-05-27 03:34:51

專利名稱：中草藥核磁共振指紋圖譜鑑別方法
技術領域：
本發明屬於儀器分析方法中的核磁共振方法，具體地說是關於中草藥核磁共振指紋圖譜鑑別方法。
背景技術：
中草藥是中醫用於防治疾病的物質基礎，其真偽優劣不僅直接決定著臨床療效乃至患者的生命安危，也嚴重影響中藥學的繼承發揚和中藥走向世界。因此只有對中藥材進行現代意義下的科學的質量控制，才能更好地保障中藥飲片和成藥的質量，實現中藥質量的安全、有效、穩定、可控，掃除制約中藥走向世界的障礙，為中藥走向世界奠定良好的基礎。其中建立在中藥成分的系統測試、分析結果之上的標準指紋圖譜是全面、客觀評價反映中藥內在質量的有效手段，同時也易被國際社會所接受。指紋圖譜技術也是在現有的技術條件下對中藥材、中成藥進行嚴格質量控制的最好解決辦法。它能從原藥材的栽培、引種、中成藥生產過程中生產工藝的規範與優化，到產品質量標準的制定提供全方位的質量保證。目前已被美國、歐洲、印度、日本等國家廣泛使用，並被多個國家的藥典所承認。因此能真正反映中藥材、中成藥內在質量的指紋圖譜的建立是實現中藥現代化的關鍵。對於其他光譜如紫外、紅外、螢光、原子吸收以及色譜法如氣相色譜、高效液相色譜、色譜-光譜聯用法，也都可以進行中藥質量評價的研究。各種方法性能的差別導致其鑑別效果也各具特色。每種圖譜鑑別方法都有其局限性和相對優勢。不同方法的難易程度、解決問題的角度、測試成本以及鑑別效果均有所差異。對於中草藥某成分的定性、定量分析而言，色譜—質譜聯用技術較好。而對於單味中藥或中成藥的品種鑑定和真偽鑑別而言，特別是其特徵性較差時，可靠、靈敏、簡便、價廉、重現性好、特徵性強的鑑別方法尚未見報導。

發明內容
本發明針對目前已有技術存在的上述缺點，提供了一種可靠、靈敏、簡便、價廉、重現性好、特徵性強的中草藥核磁共振指紋圖譜鑑別方法。
本發明的目的是這樣實現的本發明包括將樣品用低分子量的極性溶劑提取，分別測試提取物的核磁共振圖譜，與相應對照品的核磁共振圖譜進行比較，即可獲得鑑別結果。所述低分子量的極性溶劑是指乙醇、甲醇、水、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等。
具體操作方法如下取5-20克樣品，加50-200毫升低分子量的極性溶劑，於水浴上加熱回流30-120分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發，殘餘物稱重。取1-50毫克殘餘物進行核磁共振分析，與相應對照品的核磁共振圖譜進行比較。
本發明的適用對象包括可粉碎成粉末的固體樣品，如中藥材或以生藥為主的中成藥的片劑、散劑、膠囊、水丸劑、錠劑等；粘性固體樣品需要將樣品切碎，如中成藥的蜜丸劑等；液體樣品則可以直接選擇合適溶劑提取。最常用的溶劑是甲醇、乙醇和水。


圖1不同品種金銀花的核磁共振指紋圖譜圖2不同品質金銀花的核磁共振指紋圖譜圖3北沙參的核磁共振指紋圖譜圖4不同廠家六味地黃丸的核磁共振指紋圖譜圖中1-蒙花(大毛花)的核磁共振氫譜2-雜交一代的核磁共振氫譜3-金銀花的標準核磁共振氫譜4-蒙花(大毛花)的核磁共振碳譜5-雜交一代的核磁共振碳譜6-金銀花的標準核磁共振碳譜7-金銀花的標準核磁共振氫譜8-受潮變質蒙花(大毛花)的核磁共振氫譜9-金銀花的標準核磁共振碳譜10-受潮變質蒙花(大毛花)的核磁共振碳譜
具體實施例方式
實施例1.對不同品種金銀花的核磁共振指紋圖譜將樣品粉碎，過40目篩，稱取樣品5克，加50ml乙醇，在水浴上回流30分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發後得到提取物。測試提取物的1HNMR(見圖1-1，2)譜和13CNMR譜(見圖2-4，5)，並將其與金銀花對照藥材的1HNMR(見圖1-3)譜和13CNMR(見圖2-6)譜比較，根據相似程度判斷其真偽。
實施例2.對不同品質金銀花的核磁共振指紋圖譜所用劣質金銀花為保存過程中受潮變質的金銀花，將樣品粉碎，過40目篩，稱取樣品5克，加50ml乙醇，在水浴上回流30分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發後得到提取物。測試提取物的1HNMR譜(見圖3-7)和13CNMR譜(見圖4-9)，並將其與金銀花對照藥材的1HNMR譜(見圖3-8)和13CNMR譜(見圖4-10)比較，根據相似程度判斷其優劣。
實施例3.北沙參的核磁共振指紋圖譜將樣品粉碎，過40目篩，稱取樣品5克，加50ml甲醇，在水浴上回流30分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發後得到提取物。測試提取物的1HNMR譜和13CNMR譜，並將其與北沙參對照藥材的1HNMR譜和13CNMR譜比較，根據相似程度判斷其真偽。
實施例4.不同廠家六味地黃丸的核磁共振指紋圖譜將樣品切碎，過40目篩，稱取樣品5克，加50ml甲醇，在水浴上回流30分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發後得到提取物。測試提取物的1HNMR譜和13CNMR譜，並將其與北沙參對照藥材的1HNMR譜和13CNMR譜比較，根據相似程度判斷其真偽。
實施例5.對僅含水溶物的液體樣品丹參注射液的核磁共振指紋圖譜取注射液10ml，將水蒸乾得到提取物。測試提取物的1HNMR譜和13CNMR譜，並將其與丹參注射液對照品的1HNMR譜和13CNMR譜比較，根據相似程度判斷其真偽。
實施例6.銀杏葉的核磁共振指紋圖譜將樣品粉碎，過40目篩，稱取樣品5克，加50ml丙酮，在水浴上回流30分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發得到提取物。測試提取物的1HNMR譜和13CNMR譜，並將其與銀杏對照藥材的1HNMR譜和13CNMR譜比較，根據相似程度判斷其真偽。
本發明的優點是基於核磁共振檢測方法的特點，核磁共振圖譜具有單一性，即氫譜和碳譜的譜峰與每一個氫和碳都有嚴格的對應關係；全面性，即所測樣品中的任一質子和碳原子都有其相關的譜峰；定量性，即譜圖的信號的相對強弱反映混合物中各組分的相對含量；易辨性，即通過化合物的結構研究可歸屬指紋圖譜中的各個信號。因此在規範的分離提取程序下，植物中藥提取物的核磁共振圖譜與植物中藥品種間存在嚴格的對應關係，可以提供反映分子結構的一維特徵信號(例如1HNMR和13CNMR)和二維特徵信號(例如gHMQC，gHMBC等)，核磁共振檢測可以提供反映分子結構特徵的多維多息特徵信號的優勢，使核磁共振指紋圖譜鑑別技術能夠提供大量的特徵信號從多方面，多角度來描述樣品的結構特徵，從而使中藥核磁共振指紋圖譜鑑別技術真正達到了重複性高、特徵性強、信息量大、使用範圍廣、鑑別效果準確的優勢。
本發明通過測定檢品的核磁共振圖譜，將其圖譜與其對照品的核磁共振圖譜或與已建立的中藥材和中成藥的標準核磁共振波譜庫進行比較，同時也可以利用計算機自動檢索波譜庫進行輔助判斷，確定檢品的真偽優劣。
使用本發明可以使天然植物或以天然植物原料為主的中藥材、中成藥以及其各種提取物和添加劑獲得其特徵的核磁共振指紋圖譜。該圖譜可用於中藥樣品的品種鑑定和真偽鑑別以及對產品質量的穩定性考察。不同藥材核磁共振譜圖是其所有成分磁共振譜圖的疊加，是中藥材整體化學特徵的反映。每種藥材核磁共振譜圖的輪廓是相對固定的，因此可以看作是一個穩定的譜圖，從這個意義上來說，核磁共振指紋圖譜鑑別技術就成為類似藥材外形鑑別的特殊圖形的宏觀形態鑑別方法，但它獨立於傳統的形態學和組織學特徵之外，而其準確性則能有效地減少人的主觀判斷造成的錯誤，從而使其圖譜特徵的差異較其形態特徵差異更具直觀性。同時核磁共振圖譜上不同位置的特徵峰則反映了中藥含有的特徵化學成分的存在和結構特徵，從微觀上反映中藥的化學特徵。
本發明的方法可以對中藥生產、貯存、加工以及最終產品進行全程的質量控制，從而保證產品的質量，提高產品的信譽。
權利要求
1.一種中草藥核磁共振指紋圖譜鑑別方法，其特徵在於取5-20克樣品，加50-200毫升低分子量的極性溶劑，於水浴上加熱回流30-120分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發，殘餘物稱重。取1-15毫克殘餘物進行核磁共振分析，與相應對照品的核磁共振圖譜進行比較。
2.根據權利要求1所述的中草藥核磁共振指紋圖譜鑑別方法，其特徵在於所述的低分子量的極性溶劑是甲醇。
3.根據權利要求1所述的中草藥核磁共振指紋圖譜鑑別方法，其特徵在於所述的低分子量的極性溶劑是乙醇。
4.根據權利要求1所述的中草藥核磁共振指紋圖譜鑑別方法，其特徵在於所述的低分子量的極性溶劑是水。
全文摘要
本發明公開了一種中草藥核磁共振指紋圖譜鑑別方法，其特徵在於取5－20克樣品，加50－200毫升低分子量的極性溶劑，於水浴上加熱回流30－120分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發，殘餘物稱重。取1－15毫克殘餘物進行核磁共振分析，與相應對照品的核磁共振圖譜進行比較。所述低分子量的極性溶劑是指乙醇、甲醇、水、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等。本發明的優點是基於核磁共振圖譜具有單一性、全面性、易辨性，能夠提供大量的特徵信號從多方面，多角度來描述樣品的結構特徵，從而使中藥核磁共振指紋圖譜鑑別方法真正達到了重複性高、特徵性強、信息量大、使用範圍廣、鑑別效果準確的優勢。該方法可以應用於天然植物或以天然植物原料為主要防治疾病的中藥材、中成藥以及其各種提取物和添加劑的品種鑑定和真偽鑑別。
文檔編號G01N24/00GK1731163SQ20051004439
公開日2006年2月8日 申請日期2005年8月10日 優先權日2005年8月10日
發明者孫慶雷, 林雲良, 王曉, 程傳格, 劉建華, 李福偉, 耿巖玲 申請人:山東省分析測試中心