一種高純度羅漢果皂苷Ⅴ的製備方法

2023-06-28 00:20:41 3

一種高純度羅漢果皂苷Ⅴ的製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種高純度羅漢果皂苷Ⅴ的製備方法，包括如下步驟：（1）將新鮮羅漢果打成槳糊狀，加入去離子水加熱條件下高剪切萃取，過濾，濾渣再萃取，合併所得濾液並減壓濃縮得到A；（2）將A用AB-8型大孔吸附樹脂柱分離，先用鹼性水洗脫至無色，去離子水洗至中性，最後用乙醇溶液洗脫，洗脫液減壓濃縮得到B；（3）將B用001×16強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱分離，用酸性水洗脫，洗脫液減壓濃縮得到C；（4）將C用D941弱鹼性陰離子交換樹脂柱分離，用水洗脫，洗脫液減壓濃縮得到D，噴霧乾燥後得到羅漢果皂苷Ⅴ。本發明操作簡便，生產成本低，產品無毒，安全性好，產品純度高，脫色效果好。
【專利說明】一種高純度羅漢果皂苷V的製備方法

【技術領域】
[0001] 本發明涉及植物提取【技術領域】，特別涉及一種高純度羅漢果皂苷V的製備方法。

【背景技術】
[0002] 羅漢果皂苷V是羅漢果主要活性成份之一，在乾果中的總含量為3. 7%左右，是主 要的甜味成份，甜度是蔗糖的300倍。羅漢果樹的果實中含量較高，其葉子、杆和根中含量 較少。羅漢果皂苷是一種三萜烯葡萄糖苷，其配糖原是三萜烯醇。羅漢果皂苷V連接了五 個糖基，因此甜極高，其穩定性好，是天然的甜味劑。
[0003] 羅漢果皂苷V有三個比較突出的特點：一是甜度高、熱量低，是糖尿病患者良好的 調味劑；二是具有較強的保健功能，現代作用表明：羅漢果皂苷V具有提高免疫功能，保護 肝臟及抑菌、降血糖、抗氧化等作用；三是毒性低、安全係數高，其水提物的L030大於10g/ kg。因此，羅漢果皂苷作為一種理想的天然功能性甜味劑，具有廣闊的市場發展空間。
[0004] 目前，國內羅漢果通常都以原果的形式出口到歐美、日本等發達國家，雖然出口量 大，但利潤空間小、附價值低，一直以來西方發達國家由於包含中攝糖量增多，導致肥胖，糖 尿病患者日益增多，同時國內沿海經濟發達地區這種現象也越來越普遍，而羅漢果中羅漢 果皂苷V作為一種糖度高、卡路裡低的甜味劑，加上其製成的產品口味純正、味道新穎，不 但能滿足西方人對糖分需求，同時又不會導致肥胖，因此以羅漢果皂苷V為添加劑的食品 成為肥胖患者和糖尿病患者的保健食品，其市場前景無論是在國外還是國內，都將不可限 量。
[0005] 近年來，國內外對羅漢果皂苷V成分的研究頗多，但主要集中在非糖類的甜味物 質葫蘆素、烷三萜類化合物的研究上，對其他成分如胺基酸、黃酮和維生物等也有研究。但 文獻記載不多。對羅漢果皂苷提取方法的研究，國外大都採用無機吸附劑和無機脫色劑，操 作工藝複雜，無法工業化生產，特別是工業生產中不能很好的解決羅漢果皂苷的脫色、除雜 問題。
[0006] CN1324043C的發明公開了一種高純度羅漢果甜苷V的製備方法，先將羅漢果粉 碎，用乙醇加熱回流提取，再將提取物用D101型大孔樹脂柱分離，先去離子水和乙醇分別 洗脫至無色，再收集其洗脫液，減壓濃縮至浸膏狀，然後用正相矽膠柱分離，加入氯仿、甲 醇、水為洗脫劑，收集洗脫液，減壓濃縮，再用反相矽膠C-18柱分離。其中存在的問題是： 該方法最後採用正、反相矽膠柱分離純化，這樣的分離純化法只適合實驗室操作，完全無法 工業化生產，其次，洗脫時，採用的洗脫劑是含有大量有毒的氯仿、甲醇、丙酮等有機溶劑， 生產成本高，產品不可避免的會帶有這些有機溶劑的殘留，產品具有少量的毒性，安全性不 好，且操作也相對來說較複雜。


【發明內容】

[0007] 本發明的目的在於一種高純度羅漢果皂苷V的製備方法，操作簡便，生產成本低， 產品無毒，安全性好，產品純度高，脫色效果好。
[0008] 本發明解決其技術問題所採用的技術方案是： 一種高純度羅漢果皂苷V的製備方法，包括如下步驟： (1)將新鮮羅漢果打成槳糊狀，加入2-4倍重量的去離子水加熱條件下高剪切萃取 20-40min，過濾，濾渣再加上述同樣重量的去離子水加熱條件下高剪切萃取20-40min，過 濾，合併所得濾液並減壓濃縮至原體積的1〇%_15%得到A。
[0009] 本發明採用新鮮羅漢果作為原料，無需乾燥粉碎後提取，只需簡單的打成槳糊狀 即可進行後續提取。本發明針對新鮮羅漢果的提取，採用水提法，在較低溫度（50_60°C )下 配合高剪切進行提取，相對於常規的醇提法，生產成本更低，安全性好，無農藥殘留，保證食 品安全，提取時間短，提取效果相當。
[0010] (2)將A用AB-8型大孔吸附樹脂柱分離，先用PH 9-11的鹼性水洗脫至無色，再用 去離子水洗至中性，最後用30%-50%的乙醇溶液作為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至 原體積的1〇%_15%得到B。
[0011] 在初級分離時，本發明選擇AB-8型大孔吸附樹脂柱分離，這樣對有效成份吸附常 量大，對有效成份容易解吸，樹脂再生性能優異，可以幾十次重複使用，樹脂價格相對較低， 更適合工業化生產。首次洗脫是本發明採用PH 9-11的鹼性水洗脫，洗脫效果好，脫色性好， 避免使用乙醇，進一步降低成本，更適合工業化生產。
[0012] (3)將B用001 X 16強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱分離，用PH 1-3的酸性水 作為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的1〇%_15%得到C。
[0013] (4)將C用D941弱鹼性陰離子交換樹脂柱分離，用PH7-9的水作為洗脫劑洗脫，收 集洗脫液，減壓濃縮至原體積的1〇%_15%得到D，D噴霧乾燥後得到純度在95%以上的羅漢 果皂苷V。
[0014] 在後續的純化分離時，本發明採用特定的陽離子交換樹脂與陰離子交換樹組合進 行，這樣更適合工業化的大批量生產，洗脫劑避免使用甲醇、氯仿等有機溶劑，使用安全性 好的無機的水洗脫，不僅洗脫效果好，且安全、無毒，保證了產品的食品安全性能。此外，相 對於甲醇、氯仿等有機溶劑，無機的水洗脫劑成本只是其十幾分之一，生產成本更低，更適 合工業化生產。操作時無需使用展開劑的操作，操作更簡便。
[0015] 作為優選，步驟（1)中加熱的溫度控制在50-60°C。
[0016] 作為優選，步驟（1)中高剪切的轉速控制在1700-1800r/min。
[0017] 作為優選，步驟（2)中、步驟（3)及步驟（4)中的洗脫劑用量均為10-20BV。樹脂 柱內裝載樹脂的體積稱為床容積（bed volume)，簡寫為BV。
[0018] 作為優選，步驟（2)中PH 9-11的鹼性水是由去離子水加鹼調配而成。
[0019] 作為優選，步驟（3)中PH 1-3的酸性水是由去離子水加酸調配而成。
[0020] 作為優選， 本發明的有益效果是：操作簡便，生產成本低，產品無毒，安全性好，產品純度高，脫色 效果好。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0021] 圖1是羅漢果皂苷V標準品的HPLC圖譜。
[0022] 圖2是本發明製備的產品的HPLC圖譜。

【具體實施方式】
[0023] 下面通過具體實施例，並結合附圖，對本發明的技術方案作進一步的具體說明。
[0024] 本發明中，若非特指，所採用的原料和設備等均可從市場購得或是本領域常用的。 下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領域的常規方法。
[0025] 實施例1 一種高純度羅漢果皂苷V的製備方法，包括如下步驟： (1)將100kg新鮮羅漢果打成槳糊狀，加入200kg去離子水，加熱至60°C，打開高剪切 乳化機，轉速控制在1800r/min，萃取20min，過濾；濾漁，再用上述相同重量的去離子水，同 等條件下萃取一次，過濾；合併濾液並減壓濃縮至原體積的10%得到A。
[0026] (2)將A調節至PH9後，通過裝有20kg 100-200目的AB-8型大孔吸附樹脂柱(柱 直徑20cm，溼法裝柱）分離，先用PH 9的鹼性水(去離子水加氫氧化鈉調製而成）洗脫至無 色，再用去離子水洗至中性，最後用質量濃度30%的乙醇溶液作為洗脫劑洗脫，洗脫劑用量 為20BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的10%得到B。
[0027] (3)將B通過裝有20kg 100-200目的001 X 16強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱 (柱直徑l〇cm，溼法裝柱）分離，用PH 1的酸性水(去離子水加鹽酸調製而成）作為洗脫劑洗 脫，洗脫劑用量為10BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的10%得到C。
[0028] (4)將C通過裝有20kg 100-200目的D941弱鹼性陰離子交換樹脂柱(柱直徑10cm， 溼法裝柱)分離，用PH7的去離子水作為洗脫劑洗脫，洗脫劑用量為20BV，收集洗脫液，減壓 濃縮至原體積的10%得到D，D噴霧乾燥後得到純度在95. 8%的羅漢果皂苷V。
[0029] 實施例2 一種高純度羅漢果皂苷V的製備方法，包括如下步驟： (1)將100kg新鮮羅漢果打成槳糊狀，加入300kg去離子水，加熱至60°C，打開高剪切 乳化機，轉速控制在1750r/min，萃取30min，過濾；濾漁，再用上述相同重量的去離子水，同 等條件下萃取一次，過濾；合併濾液並減壓濃縮至原體積的10%得到A。
[0030] (2)將A調節至PH9後，通過裝有20kg 100-200目的AB-8型大孔吸附樹脂柱(柱 直徑20cm，溼法裝柱）分離，先用PH 10的鹼性水(去離子水加氫氧化鈉調製而成）洗脫至無 色，再用去離子水洗至中性，最後用質量濃度50%的乙醇溶液作為洗脫劑洗脫，洗脫劑用量 為10BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的10%得到B。
[0031] (3)將B通過裝有20kg 100-200目的001 X 16強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱 (柱直徑l〇cm，溼法裝柱）分離，用PH 2的酸性水(去離子水加鹽酸調製而成）作為洗脫劑洗 脫，洗脫劑用量為15BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的10%得到C。
[0032] (4)將C通過裝有20kg 100-200目的D941弱鹼性陰離子交換樹脂柱(柱直徑10cm， 溼法裝柱）分離，用PH8的水(去離子水加氫氧化鈉調製而成）作為洗脫劑洗脫，洗脫劑用量 為15BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的10%得到D，D噴霧乾燥後得到純度在98. 9%的 羅漢果皂苷V。
[0033] 實施例3 一種高純度羅漢果皂苷V的製備方法，包括如下步驟： (1)將100kg新鮮羅漢果打成槳糊狀，加入400kg去離子水，加熱至50°C，打開高剪切 乳化機，轉速控制在17〇〇r/min，萃取40min，過濾；濾漁，再用上述相同重量的去離子水，同 等條件下萃取一次，過濾；合併濾液並減壓濃縮至原體積的15%得到A。
[0034] (2)將A調節至PH9後，通過裝有20kg 100-200目的AB-8型大孔吸附樹脂柱(柱 直徑20cm，溼法裝柱）分離，先用PH 11的鹼性水(去離子水加氫氧化鈉調製而成）洗脫至無 色，再用去離子水洗至中性，最後用質量濃度40%的乙醇溶液作為洗脫劑洗脫，洗脫劑用量 為15BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的15%得到B。
[0035] (3)將B通過裝有20kg 100-200目的001 X 16強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱 (柱直徑l〇cm，溼法裝柱）分離，用PH 3的酸性水(去離子水加鹽酸調製而成）作為洗脫劑洗 脫，洗脫劑用量為20BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的15%得到C。
[0036] (4)將C通過裝有20kg 100-200目的D941弱鹼性陰離子交換樹脂柱(柱直徑10cm， 溼法裝柱）分離，用PH9的水(去離子水加氫氧化鈉調製而成）作為洗脫劑洗脫，洗脫劑用量 為10BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的15%得到D，D噴霧乾燥後得到純度在95. 2%的 羅漢果皂苷V。
[0037] 實施例4 一種高純度羅漢果皂苷V的製備方法，包括如下步驟： (1)將100kg新鮮羅漢果打成槳糊狀，加入300kg去離子水，加熱至60°C，打開高剪切 乳化機，轉速控制在1750r/min，萃取30min，過濾；濾漁，再用上述相同重量的去離子水，同 等條件下萃取一次，過濾；合併濾液並減壓濃縮至原體積的10%得到A。
[0038] (2)將A調節至PH9後，通過裝有20kg 100-200目的AB-8型大孔吸附樹脂柱(柱 直徑20cm，溼法裝柱）分離，先用PH 10的鹼性水(去離子水加氫氧化鈉調製而成）洗脫至無 色，再用去離子水洗至中性，最後用質量濃度40%的乙醇溶液作為洗脫劑洗脫，洗脫劑用量 為15BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的10%得到B。
[0039] (3)將B通過裝有20kg 100-200目的001 X 16強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱 (柱直徑l〇cm，溼法裝柱）分離，用PH 2的酸性水(去離子水加鹽酸調製而成）作為洗脫劑洗 脫，洗脫劑用量為15BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的10%得到C。
[0040] (4)將C通過裝有20kg 100-200目的D941弱鹼性陰離子交換樹脂柱(柱直徑10cm， 溼法裝柱）分離，用PH8的水(去離子水加氫氧化鈉調製而成）作為洗脫劑洗脫，洗脫劑用量 為15BV，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的10%得到D，D噴霧乾燥後得到純度在96. 2%的 羅漢果皂苷V。
[0041] 將本發明的產品進行HPLC檢測，其圖譜(附圖2)與羅漢果皂苷V標準品（附圖1) 進行比對，確認本發明的產品為羅漢果皂苷V。
[0042] 本發明的方法操作簡便，生產成本低，整體成本為常規正、反相矽膠柱分離純化加 工方法的大約十分之一左右，產品無毒，安全性好，產品純度高達95%以上，脫色效果好，呈 白色粉末。
[〇〇43] 以上所述的實施例只是本發明的一種較佳的方案，並非對本發明作任何形式上的 限制，在不超出權利要求所記載的技術方案的前提下還有其它的變體及改型。
【權利要求】
1. 一種高純度羅漢果皂苷V的製備方法，其特徵在於，包括如下步驟： (1) 將新鮮羅漢果打成槳糊狀，加入2-4倍重量的去離子水加熱條件下高剪切萃取 20-40min，過濾，濾渣再加上述同樣重量的去離子水加熱條件下高剪切萃取20-40min，過 濾，合併所得濾液並減壓濃縮至原體積的1〇%_15%得到A ; (2) 將A用AB-8型大孔吸附樹脂柱分離，先用PH 9-11的鹼性水洗脫至無色，再用去離 子水洗至中性，最後用30%-50%的乙醇溶液作為洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至原體 積的1〇%-15%得到B ; (3) 將B用001 X 16強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱分離，用PH 1-3的酸性水作為 洗脫劑洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至原體積的1〇%_15%得到C ; (4) 將C用D941弱鹼性陰離子交換樹脂柱分離，用PH7-9的水作為洗脫劑洗脫，收集洗 脫液，減壓濃縮至原體積的1〇%_15%得到D，D噴霧乾燥後得到純度在95%以上的羅漢果皂 苷V。
2. 根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於：步驟（1)中加熱的溫度控制在 50-60。。。
3. 根據權利要求1或2所述的製備方法，其特徵在於：步驟（1)中高剪切的轉速控制在 1700-1800r/min。
4. 根據權利要求1或2所述的製備方法，其特徵在於：步驟（2)中、步驟（3)及步驟（4) 中的洗脫劑用量均為10-20BV。
5. 根據權利要求1或2所述的製備方法，其特徵在於：步驟（2)中PH 9-11的鹼性水是 由去離子水加鹼調配而成。
6. 根據權利要求1或2所述的製備方法，其特徵在於：步驟（3)中PH 1-3的酸性水是 由去離子水加酸調配而成。
【文檔編號】C07J17/00GK104059122SQ201410186296
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2014年5月6日 優先權日:2014年5月6日
【發明者】丁舸 申請人:義烏章舸生物工程有限公司