d-生物素的純化方法

2023-05-28 21:16:36

專利名稱：d-生物素的純化方法
技術領域：
本發明涉及一種d-生物素的純化方法。
背景技術：
d-生物素是一種環狀結構的化學物質，具有硫酚(Thiophene)的結構環， 此種化學物質有八種同形異構體，但也只有右旋生物素(d-biotin)是存在於自 然界中，也才有維生素的功能，d-生物素具有活性，無嗅無味，無色至近無色 結晶性粉末。25。C時的溶解度(mg/100ml):水-22; 95%乙醇-80,幾乎不溶 於醚及三氯甲垸，較易溶於熱水和稀鹼液，不溶於其它常用有機溶劑。d-生物 素在強酸、強鹼、甲醛及紫外線處理後才會被破壞。特別遇強鹼或氧化劑則 分解明顯。熔點為228 232。C (分解)，比旋光度問025 +89° +93°。
在化學合成d-生物素中存在著雙苄基生物素[a]D":26.8(c^ .O，MeOH)、 單節基生物素問025=+108.1(0=1.0,0.州NaOH)、 二氨基生物素以及d-生物素 的對映體1-生物素問025=-89° -93°，這些雜質的存在影響著生物素的質量和 活性。特別是l-生物素的存在使得產品不合格，並且無法單純依靠重結晶等處 理方法而得到合格產品，造成了極大的資源浪費。
在後處理提純生物素的現有方法中， 一般採用氯仿等提取雙苄基生物素 與單苄基生物素等雜質，在沸水中活性炭脫色重結晶，冷卻到0°C，過濾析出 固體所得。由於雜質的多樣性，氯仿提取不完全，無法去除l-生物素，且由於 含單苄基生物素的d-生物素的旋光度與少量的l-生物素的旋光度相抵消，可 能會導致產品旋光度合格的假象，從而生產出不合格的d-生物素產品。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服上述現有技術存在的缺陷，提供一種 不但可以提純粗品生物素、而且能夠有效去除l-生物素的d-生物素純化方法， 為藥用d-生物素的質量提供了保證。
為此，本發明採用如下的技術方案d-生物素的純化方法，其步驟如下: 1)用低級垸基醇與冰乙酸的混合溶劑重結晶提純含雜質的d-生物素，除去雜
質雙苄基生物素和單苄基生物素；2)若前一步驟所得產物的旋光度不合格， 在水與低級烷基醇中，投入手性誘導拆分劑1-精氨酸和旋光度不合格的d-生 物素，攪拌溶解後，冷凍結晶、過濾，除去雜質l-生物素，然後在加熱條件
下，用水或低級烷基醇溶解所得的濾餅，用稀酸調ra值到2-5，冷凍結晶、
過濾，濾餅為d-生物素純品。本發明先提純粗品生物素，除去雙苄基生物素 與單苄基生物素等雜質；然後與手性誘導拆分劑反應，利用冷凍狀態下d-生 物素精氨酸鹽不溶於低級烷基醇、而1-生物素精氨酸鹽溶於低級烷基醇的特 性，使d-生物素以固體的方式析出，而1-生物素留在濾液中，從而有效地去 除l-生物素，保證了藥用d-生物素的質量。
所述的d-生物素的純化方法，所述的低級垸基醇為甲醇、乙醇、丙醇或 異丙醇。
所述的d-生物素的純化方法，最後所得的濾液用鹼液調PH值為10-11， 然後濃縮析出l-精氨酸，使其可以重複回收使用。
所述的d-生物素的純化方法，第一次冷凍結晶的時間為6-10小時， 一般 採用靜止過夜。
本發明具有以下有益效果不但可以提純粗品生物素，而且能夠有效去
除l-生物素，生產出合格的d-生物素產品，保證了藥用d-生物素的質量；I-
精氨酸可以重複回收使用，降低了生產成本。
具體實施例方式
實施例1
生物素粗品30g(HPLC檢測含有5%的雙苄基生物素，7%單苄基生物素， 85%生物素。U〕 D25=79.5°(c=1.0， 0. 1NNaOH))， 95%藥用乙醇800ml，冰 乙酸30ml升溫回流，完全溶解後，趁熱投入活性碳1.5g，攪拌0.5小時，過 濾，濾餅用95。/。藥用乙醇100ml洗滌，濾液冷凍過夜，析出白色針狀結晶， 過濾真空8CTC烘乾得25g d-生物素(HPLC生物素含量高達98%， 〔 a 〕 D25=83.2°(c=1.0， 0. 1NNaOH))， d-生物素因為旋光度的問題為不合格產品。
實施例2
取實施例1製備的生物素25g(0.102mo1)， 20g(0.115mol)l-精氨酸，去離 子水150ml，異丙醇300ml，攪拌緩慢升溫到8CTC，得到澄清無色液體，保 溫1小時後，先用水浴，再冰水緩慢降溫至O'C，靜置恆溫0'C過夜，析出生 物素精氨酸鹽，過濾濾餅用50ml無水乙醇漂洗兩次，烘乾得41g(0.098mo1)，
加入1000mL80。/。藥用乙醇溶解，水浴加熱到8CTC，滴加17.5%鹽酸，測PH 約為3，繼續升溫回流，加入活性碳1.0g，過濾，濾液冷凍結晶，析出d-生 物素23.2g， 93.2%的收率，HPLC檢測含量為99.5% (〔 a 〕 D25=90. 4°(c=l. 0， 0. IN NaOH) )o
實施例3
生物素粗品40g(HPLC檢測含有2%的雙苄基生物素,5%單苄基生物素， 88%生物素〔a〕 D25=75°(c=1.0， 0. lNNaOH))， 95。/。藥用乙醇600ml，冰乙 酸80ml升溫回流，完全溶解後，趁熱投入活性碳2g，攪拌0.5小時，過濾， 濾餅用95。/。藥用乙醇100ml洗滌，濾液冷凍過夜，析出白色針狀結晶。過濾 真空8CTC烘乾得35g生物素(HPLC生物素含量高達98.8%, 〔 a 〕 D25=80.6。(c=1.0， 0. 1NNaOH)，小於標準問025 +89° +93°(c=1.0， 0. IN NaOH))。
實施例4
取實施例3製備的生物素15g(0.061mo1)， 12.7g(0.073mol)l-精氨酸，去 離子水100ml，異丙醇200ml，攪拌緩慢升溫到6CTC，得到澄清無色液體， 保溫1小時後，用水浴，再冰水緩慢降溫至0'C，靜置恆溫0'C過夜，析出生 物素精氨酸鹽，過濾濾餅用50ml無水乙醇漂洗兩次，烘乾得23g(0.055mo1)， 加入500ml去離子水加熱溶解到100°C，滴加17.5%鹽酸，測PH約為4， 繼續升溫回流，加入活性碳1.0g，過濾，濾液冷凍結晶，析出d-生物素12.6g， 84.7%的收率,HPLC檢測含量為99.5。/。， (a〕 。25二89. 8 (c=l. 0, 0. 1NNaOH)。
實施例5
取實施例3製備的生物素15g(0.061mo1)， 13.8g(0.079mol)l-精氨酸，去 離子水100ml，異丙醇200ml，攪拌緩慢升溫到70C，得到澄清無色液體，
保溫1小時後，用水浴，再冰水緩慢降溫至or，靜置恆溫ot:過夜，析出生物素精氨酸鹽，過濾濾餅用50ml無水乙醇漂洗兩次，烘乾得23.5g(0.056mo1)， 加入500ml70X藥用酒精溶解，水浴加熱到80C，滴加30%稀硫酸調PH約 為2，繼續升溫回流，加入活性碳1.0g，過濾，濾液冷凍結晶，析出d-生物 素13.1g， 88%的收率，HPLC檢測含量為99.6%， 〔 a 〕 。25二91. 5 (c=l. 0, 0. 1N NaOH。
實施例6
取實施例5得到的含拆分劑的濾液，濃縮異丙醇與水至幹，加入100ml
去離子水溶解，加熱到80'C，滴加50X稀硫酸調PH約為2，繼續升溫回流， 加入活性碳0.5g，過濾，濾液冷凍結晶，析出l-生物素1.1g， 7.4%的收率， HPLC檢測含量為96%， (ct〕 D25=-85. 5 (c=1.0， 0. IN NaOH)。濾液與d-生物 素的結晶母液合併，用5y。氫氧化鈉調PH約為10-12，回收幹，用100ml95X 藥用酒精重結晶，冷凍過夜，析出白色針狀結晶，過濾真空8CTC烘乾得10.1g， 以73.2%收率回收得到l-精氨酸。
本發明的保護範圍並不限於上述實施例，凡與本發明的技術方案相同或 等同的技術內容均落入本發明的保護範圍內。
權利要求
1、d-生物素的純化方法，其步驟如下1)用低級烷基醇與冰乙酸的混合溶劑重結晶提純含雜質的d-生物素，除去雜質雙苄基生物素和單苄基生物素；2)若前一步驟所得產物的旋光度不合格，在水與低級烷基醇中，投入手性誘導拆分劑l-精氨酸和旋光度不合格的d-生物素，攪拌溶解後，冷凍結晶、過濾，除去雜質l-生物素，然後在加熱條件下，用水或低級烷基醇溶解所得的濾餅，用稀酸調PH值到2-5，冷凍結晶、過濾，濾餅為d-生物素純品。
2、 根據權利要求1所述的d-生物素的純化方法，其特徵在於所述的低級 烷基醇為甲醇、乙醇、丙醇或異丙醇。
3、 根據權利要求1或2所述的d-生物素的純化方法，其特徵在於最後所 得的濾液用鹼液調ra值為10-11，然後濃縮析出1-精氨酸。
4、 根據權利要求2所述的d-生物素的純化方法，其特徵在於第一次冷凍 結晶的時間為6-10小時。
全文摘要
本發明公開了一種d-生物素的純化方法。現有方法中，無法去除l-生物素，從而生產出不合格的d-生物素產品。本發明用低級烷基醇與冰乙酸的混合溶劑重結晶提純含雜質的d-生物素，除去雜質雙苄基生物素和單苄基生物素；若前一步驟所得產物的旋光度不合格，在水與低級烷基醇中，投入手性誘導拆分劑l-精氨酸和旋光度不合格的d-生物素，攪拌溶解後，冷凍結晶、過濾，除去雜質l-生物素，然後在加熱條件下，用水或低級烷基醇溶解所得的濾餅，用稀酸調pH值到2-5，冷凍結晶、過濾，濾餅為d-生物素純品。本發明使d-生物素以固體的方式析出，而l-生物素留在濾液中，從而有效地去除l-生物素，保證了藥用d-生物素的質量。
文檔編號C07D495/00GK101195629SQ20061015508
公開日2008年6月11日 申請日期2006年12月5日 優先權日2006年12月5日
發明者丁建清, 王紅衛, 陳建輝 申請人:浙江醫藥股份有限公司新昌製藥廠