含有刺五加苷類活性成分的組合物及其製備方法和用途的製作方法

2023-06-14 17:21:56

專利名稱：含有刺五加苷類活性成分的組合物及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於中藥製藥技術領域，具體涉及一種含有刺五加苷類活性成分的組合物及其製備方法。
背景技術：
刺五力口 Acanthopanax senticosus (Rupr. et Maxim. ) Harm,又名——百針(河北)， 為五加科五加屬植物，生長於海拔500-2000m的落葉闊葉林、針闊混交林的林下或林緣。廣泛分布於東北及河北、山西等地。其根莖呈結節狀不規則圓柱形，直徑1. 4-4. 2cm，有分支； 表面灰棕色，有縱皺，彎曲處常有密集的橫皺紋，皮孔橫長，微突起而色淡。刺五加根含刺五加苷(eleutheroside)A、B、Bi、C、D、Ε,刺五加苷A即是胡蘿蔔苷(daucosterol)，刺五加苷B即是丁香苷(syringin)；根還含芥子醛葡萄糖苷(sinapaldehyde glucoside)，鵝掌揪苷(Iiriodemdrin)，苦杏仁苷(amydalin), 3 β-
-0-β-D-吡喃葡萄糖醛酸基]-16α-羥基-13β，28_環氧齊墩果烷， 3 β -
-0- β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — χ) -0- β -D-吡喃葡萄糖醛酸基]-16 α -羥基-13 β，28-環氧齊墩果烷。刺五加用於治療和調節神經衰弱、失眠多夢症狀由來已久，刺五加苷對體外培養大鼠脊髓運動神經元缺氧損傷的保護作用也取代較好的結果，提示刺五加苷可以提高體外缺氧損傷的運動神經元的細胞活性，對細胞的缺氧損傷有明顯的保護作用。刺五加根的提取物及刺五加苷對多種疲勞動物模型均有抗疲勞作用，苷的作用較根的提取物強，其中刺五加苷E的效果最好。刺五加lmg/kg能顯著降低抓握頸背部懸吊24h應激法所致大鼠組織中過氧化脂質的含量，並使幾乎耗竭的生育酚含量恢復，其中作用以刺五加苷E最強。 Steinmann等研究結果顯示，刺五加苷E、B以及它們的混合體，刺五加乙醇提取液均能夠誘導產生和提高IL-I和IL-6，說明刺五加提取物及其成分刺五加苷E、B均具有較好的免疫藥理活性。現有刺五加苷製備工藝多採用水或含醇水提取，然後經醇沉或水沉處理後經大孔吸附樹脂柱吸附，用適當濃度的含水醇洗脫、濃縮乾燥製得。由此工藝的得到含有刺五加苷類活性成分的組合物含有鞣質等雜質，並且苷的含量低於50%。另一方面，現有技術對產品中刺五加苷的成份組成並不確定，因而實際生產中難以獲得組成穩定、工藝可控性好的產品。刺五加B和刺五加E在刺五加中的含量極低，同時富集這兩種成分需要較高的技術條件；現代藥理研究表明，刺五加B和刺五加E具有顯著的藥理活性，如何製得富含高純度的刺五加B和刺五加E的組合物顯得尤為迫切。

發明內容
本發明目的在於提供一種含有刺五加苷類活性成分的組合物，解決了現有技術中刺五加苷內苷的含量低、刺五加B和刺五加E含量低等問題。為了解決現有技術中的這些問題，本發明提供的技術方案是一種含有刺五加苷類活性成分的組合物，其特徵在於所述組合物包括刺五加苷B 和刺五加苷E，所述刺五加苷B和刺五加苷E在組合物中的含量在60% 100%範圍內。優選的，所述刺五加苷B和刺五加苷E在組合物中的含量在60% 90%範圍內。更優選的， 所述刺五加苷B和刺五加苷E在組合物中的含量在70 % 90 %範圍內。優選的，所述組合物中刺五加苷B含量在40% 80%範圍內；刺五加苷E含量在 20% 40%範圍內。優選的，所述組合物中刺五加苷B含量在40% 70%範圍內；刺五加苷E含量在20 % 35%範圍內。更優選的，所述組合物中刺五加苷B含量在40% 70 % 範圍內；刺五加苷E含量在20% 30%範圍內。本發明還提供了一種含有刺五加苷類活性成分的組合物的製備方法，其特徵在於所述方法包括以下步驟(1)以刺五加藥材為原料經水提，濃縮，低溫靜置6-M小時，過濾，濾液備用得到刺五加提取液；(2)將刺五加提取液通過預處理好的AB-8大孔樹脂進行吸附，依次經純水洗脫除去雜質，再用10% 100%乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮，乾燥，得刺五加苷粗品；(3)刺五加苷粗品通過預處理好的小孔樹脂(MCI)進行吸附，先用水洗，棄去雜質；繼用5% 20%甲醇洗脫，回收溶劑得浸膏A ；最後用20% 40%甲醇梯度洗脫，回收溶劑得浸膏B ；(4)浸膏A採用ODS填料進行柱層析，經20%甲醇、30%甲醇梯度洗脫，收集30% 甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分A ；浸膏B採用ODS填料進行柱層析，經30%甲醇、40%甲醇梯度洗脫，收集40%甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分B ；(5)把組分A和組分B按1 1勾兌，即得含有刺五加苷類活性成分的組合物。優選的，步驟O)中所述大孔樹脂選用非極性或弱極性苯乙烯型大孔樹脂，所述乙醇-水混合溶媒選用按水、70 %乙醇梯度洗脫。優選的，步驟中所述反相碳18填料粒徑為10-120 μ m。優選的，步驟(4)中所述反相碳18填料粒徑為40-100 μ m。優選的，步驟中所述柱層析採用加壓方式進行；壓力範圍在1 lObar。本發明還提供了一種含有刺五加苷類活性成分的組合物作為製備具有癌症化療增效作用或減毒作用的食品或藥物中的應用。本發明含有刺五加苷類活性成分的組合物由刺五加經常規提取和大孔樹脂柱精製後，再經反相柱層析等工序處理獲得。本發明所述含有刺五加苷類活性成分的組合物保留了原植物中苷類成分，並提高了產品純度，可應用於相關藥品和食品領域。本發明的組合物中含有刺五加苷B和刺五加苷E，兩種苷總含量大於60%。優選的，該組合物中刺五加苷B含量大於40%。更優選的，該組合物中刺五加苷E含量大於 20%。含有刺五加苷類活性成分的組合物的製備方法如下(1)選取刺五加藥材，水提，濃縮，低溫靜置6-M小時，過濾，濾液備用。(2)由(1)所得刺五加提取溶液，採用預處理好的AB-8大孔樹脂進行吸附，先用水洗，再用10% 100%乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮，乾燥，得刺五加粗苷。(3)由(2)所得刺五加粗苷，採用預處理好的小孔樹脂(MCI)進行吸附，先用水洗， 棄去；繼用5% 20%甲醇洗脫，回收溶劑得浸膏A(主要含刺五加苷B)；最後用20% 40%甲醇梯度洗脫，回收溶劑得浸膏B (主要含刺五加苷E)。(4)由(3)所得浸膏A，採用ODS填料進行柱層析，經20%甲醇、30%甲醇梯度洗脫，收集30%甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分A (主要含刺五加苷B)。(5)由(3)所得浸膏B，採用ODS填料進行柱層析，經30%甲醇、40%甲醇梯度洗脫，收集40%甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分B (主要含刺五加苷E)。(6)把組分A和組分B按1 1勾兌，即得類白色刺五加苷。優選的，其製備方法步驟(1)中所選取刺五加藥材為五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus (Rupret Maxim.) Harms 的乾燥根或根蓮或蓮。優選的，其製備方法步驟O)中所述大孔樹脂優選非極性或弱極性苯乙烯型大孔樹脂，所述乙醇-水混合溶媒優選按水、70%乙醇梯度洗脫。優選的，其製備方法步驟(4)和(5)中所述柱層析採用加壓方式進行。本發明還提供了一種含有刺五加苷類活性成分的組合物在製備食品或藥物中的應用，可作為食品或藥物的組份或組合物之一。該食品或藥物具有癌症化療增效作用或癌症化療減毒作用。本發明的目的是提供一種組成成份穩定、工藝和質量可控的含有刺五加苷類活性成分的組合物，組合物中刺五加苷B和刺五加苷E總含量大於60%。本發明的另一目的是提供含有刺五加苷類活性成分的組合物的製備工藝，具體工藝步驟如下1、藥材提取500kg刺五加藥材切成l-2cm的小段，8倍量水回流提取三次，分別為3小時、2小時、1小時。合併提取液，回收溶劑，調整體積為250L。置冷庫中Mh，取上清液用濾紙過濾， 濾液備用。2、AB_8樹脂純化樹脂用量藥材質量/樹脂質量=3 1上樣速度lml/min. cm2洗脫速度2-3ml/min.cm2樹脂床的徑高比1 5提取液上樣兩次，靜態吸附12h。先用水洗:3BV，棄去；再用70%乙醇洗!3BV，合併。3、小孔樹脂純化樹脂質量/浸膏質量=30 1上樣速度lml/min. cm2洗脫速度2-3ml/min.cm2樹脂床的徑高比1 10浸膏用適量水溶解，上樣兩次，靜態吸附12h。先用水洗:3BV，棄去；再用10%甲醇洗:3BV，濃縮得浸膏A (主要含刺五加苷B)；最後用30 %甲醇洗;3BV，濃縮得浸膏B (主要含刺五加苷E)。
4、中壓ODS柱分離ODS 粒徑40-60 μ mODS 孔徑1 aimODS質量/浸膏質量=50/1上樣速度2ml/min洗脫速度20ml/min浸膏A用適量20%甲醇溶解後，經0.45 μ m有機膜過濾，上樣；先用20%乙醇洗 3BV,棄去，再用30%甲醇洗;3BV，收集30%甲醇部位，回收溶劑得組分A(主要含刺五加苷 B)。浸膏B用適量30%甲醇溶解後，經0.45 μ m有機膜過濾，上樣；先用30%乙醇洗 3BV,棄去，再用40%甲醇洗;3BV，收集40%甲醇部位，回收溶劑得組分B (主要含刺五加苷 E)。把組分A和組分B按1 1勾兌，即得類白色刺五加苷。提取溶媒可採用常規的水提取，提取液合併，常法濃縮得濃縮液，再加適量水稀釋，過濾，得刺五加提取溶液。為進一步提高提取液中苷含量，可優選採用冷藏處理，即濃縮液冷藏條件下靜置6-M小時(優選8-16小時)，再過濾，得刺五加粗苷溶液。所述工藝步驟O)中，所述大孔樹脂優選非極性或弱極性大孔樹脂，更優選弱極性大孔樹脂。大孔樹脂柱梯度洗脫時更優選按水、70%乙醇梯度洗脫並收集70%乙醇洗脫部位洗脫液獲得。
權利要求
1.一種含有刺五加苷類活性成分的組合物，其特徵在於所述組合物包括刺五加苷B和刺五加苷E，所述刺五加苷B和刺五加苷E在組合物中的總含量在609Γ100%範圍內。
2.根據權利要求1所述的含有刺五加苷類活性成分的組合物，其特徵在於所述組合物中刺五加苷B含量在40% 80%範圍內；刺五加苷E含量在20% 40%範圍內。
3.—種權利要求1所述的含有刺五加苷類活性成分的組合物的製備方法，其特徵在於所述方法包括以下步驟(1)以刺五加藥材為原料經水提，濃縮，低溫靜置6-Μ小時，過濾，濾液備用得到刺五加提取液；(2)將刺五加提取液通過預處理好的ΑΒ-8大孔樹脂進行吸附，依次經純水洗脫除去雜質，再用10% 100%乙醇梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮，乾燥，得刺五加苷粗品；(3)刺五加苷粗品通過預處理好的小孔樹脂(MCI)進行吸附，先用水洗，棄去雜質；繼用5% 20%甲醇洗脫，回收溶劑得浸膏A ；最後用20% 40%甲醇梯度洗脫，回收溶劑得浸膏B ；(4)浸膏A採用ODS填料進行柱層析，經20%甲醇、30%甲醇梯度洗脫，收集30%甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分A ；浸膏B採用ODS填料進行柱層析，經30%甲醇、40%甲醇梯度洗脫，收集40%甲醇洗脫部位，回收溶劑，得組分B ；(5)把組分A和組分B按1 1勾兌，即得含有刺五加苷類活性成分的組合物。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於步驟(2)中所述大孔樹脂選用非極性或弱極性苯乙烯型大孔樹脂，所述乙醇-水混合溶媒選用按水、70%乙醇梯度洗脫。
5.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於步驟(4)中所述反相碳18填料粒徑為 10-120 μm。
6.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於步驟(4)中所述反相碳18填料粒徑為 40-100 μm0
7.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於步驟(4)中所述柱層析採用加壓方式進行； 壓力範圍在Γ10 bar。
8.—種權利要求1所述的含有刺五加苷類活性成分的組合物作為製備具有癌症化療增效作用或減毒作用的食品或藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種含有刺五加苷類活性成分的組合物，其特徵在於所述組合物包括刺五加苷B和刺五加苷E，所述刺五加苷B和刺五加苷E在組合物中的總含量在60%~100%範圍內。所述含有刺五加苷類活性成分的組合物保留了原植物中苷類成分，並提高了產品純度，可應用於相關藥品和食品領域。
文檔編號A23L1/29GK102283875SQ20111020722
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月25日 優先權日2011年7月25日
發明者劉江雲, 劉豔麗, 張苗苗, 楊世林, 許瓊明, 賈丹, 陳重 申請人:蘇州大學