一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法
2023-06-18 05:19:36 2
一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法
【專利摘要】本發明提供一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法，包括：1）將待測生物蛋白稀釋成不同濃度，與綠盲蝽人工飼料混合，製得生物蛋白測定飼料，並以不添加生物蛋白的飼料組作為對照；2）用拉伸的封口膜分別包裹測定飼料和對照飼料，製成膠囊；3）將膠囊粘在無蓋飼育盒的側壁上，4）在飼育盒中接入綠盲蝽若蟲，用紗布封口，進行培養；5）從第0天開始記錄綠盲蝽的死亡情況或體重變化，從而評價生物蛋白對綠盲蝽的影響。本方法適用範圍廣，對具有胃毒、內吸作用的藥劑及溶於人工飼料的化學物質均能夠有效測定，解決了包括綠盲蝽在內的刺吸式口器昆蟲難於直接接觸不同濃度的生物蛋白等問題，能準確測定生物蛋白對綠盲蝽的影響，具有很強的實用性。
【專利說明】一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於植物保護【技術領域】，具體地說，涉及一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法。
【背景技術】
[0002]盲蝽蟓是一類重要的農業害蟲，在我國主要有綠盲蝽(Apolygus IucorumMeyer-Diir )> 中黑盲疇(Adelphocoris sutural is Jakovlev)、苜猜盲疇(Adelphocorislineolatus Goeze)、三點盲疇(Adelphocoris fasciaticollis Reuter)等幾種。20世紀後半葉，我國棉田盲蝽蟓的發生數量很低，一直作為棉鈴蟲(Helicoverpa armigera Hiibner)化學防治的兼治對象進行控制。90年代末，我國開始商業化種植轉Bt基因棉，棉鈴蟲得到了有效控制，但是作為棉田次要害蟲的盲蝽蟓的發生數量卻急劇增加，危害加重，成為當前轉Bt棉上的主要害蟲。不僅是棉田，盲蝽蟓種群暴發還波及到其他農業作物,近年來盲蝽蟓對棗、葡萄、櫻桃、茶樹等的危害也日益嚴重，已經成為影響多種作物生產的重大問題。
[0003]轉基因棉花對非靶標昆蟲的生態效應一直受到人們的廣泛關注，主要是採用田間調查的方法進行研究比較。Lu YH等研究結果表明，Bt棉花(表達CrylAc蛋白)對盲椿象種群發生沒有明顯影響，Bt棉花種植後盲椿象出現區域性種群劇增、在多種作物上猖獗為害的現象，主要是由於防治棉鈴蟲化學農藥的減少使用直接導致棉田盲椿象種群上升，危害加重。目前，為了延緩棉鈴蟲、紅鈴蟲等靶標害蟲抗性的發展，轉雙價抗蟲棉花已陸續在美國等國家種植，因此準確及時的評價新型生物蛋白對綠盲蝽的影響，可為轉雙價抗蟲棉的安全性評價奠定基礎。
[0004]綠盲蝽屬於刺吸式害蟲，其取食特徵與咀嚼式害蟲差異很大，而且綠盲蝽若蟲和成蟲都比較活躍，對其進行生物測定具有一定的難度；綠盲蝽的繼代飼養通常是利用新鮮的四季豆或玉米等在室內飼養，測定的蛋白通過浸泡、塗抹等只能存在於四季豆或玉米的表面，很難被綠盲蝽刺吸到。如果利用轉基因棉花等植物評價生物蛋白對綠盲蝽的影響，只能限定植物中表達的一定範圍內的蛋白濃度，難以準確評價不同蛋白濃度，尤其是高濃度蛋白對綠盲蝽的影響。因此，建立適用於不同濃度梯度生物蛋白的生物測定方法，是準確評價生物蛋白對綠盲蝽影響的關鍵，為轉基因作物的安全性評價奠定基礎 。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法。
[0006]為了實現本發明目的，本發明的一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法，包括如下步驟:
[0007]I)根據生物蛋白的作用效果，將待測生物蛋白稀釋成不同濃度，與綠盲蝽人工飼料混合，製得生物蛋白測定飼料，並以不添加生物蛋白的飼料組作為對照；
[0008]2)用拉伸的封口膜分別包裹不同濃度的生物蛋白測定飼料和對照組飼料，製成大小一致的飼料膠囊；[0009]3)將上述飼料膠囊粘在無蓋飼育盒的側壁上或置於與所述飼育盒相匹配的網架上，每個飼育盒對應於不同的生物蛋白濃度；
[0010]4)向飼育盒中接入綠盲蝽若蟲(優選I齡)若蟲或成蟲，用紗布封口，置於溫度27±2°C，溼度75±10%，光照14h，黑暗IOh的條件下培養；
[0011]5)從第0天開始記錄綠盲蝽的死亡情況或體重變化。
[0012]前述方法中，步驟2)中所述封口膜大小為2.5cmX2.5cm，拉伸成6cmX8cm，在膜中央滴加0.4-0.6mL飼料。
[0013]前述方法中,所述飼育盒為無色透明燒杯，直徑4.0cm,高6.0cm。
[0014]前述方法中，步驟4)中所述紗布為150目紗網。
[0015]具體地，將綠盲蝽放入燒杯中，用細紗布和橡膠圈封口防止綠盲蝽逃逸，使其取食飼料，觀察綠盲蝽取食飼料情況，並記錄綠盲蝽的致死情況或體重抑制效果，評價生物蛋白對綠盲蝽的影響作用。
[0016]本發明中涉及的人工飼料為根據ZL201010556195.X製備的綠盲蝽人工飼料。人工飼料在0-4°C的條件下儲存，儲存時間不超過30天。
[0017]本發明提供的生物測定方法，適用範圍廣，對具有胃毒、內吸作用的藥劑及溶於人工飼料的化學物質均能夠進行有效測定，並解決了包括綠盲蝽在內的刺吸式口器昆蟲難於直接接觸不同濃度的生物蛋 白等問題，能準確測定生物蛋白對綠盲蝽的影響，具有很強的實用性。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0018]圖1為本發明實施例1中飼料球位於燒杯中的位置。
【具體實施方式】
[0019]以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段，所用原料均為市售商品。
[0020]以下實施例中使用的綠盲蝽人工飼料按照ZL201010556195.X中公開的方法製備。
[0021]實施例1評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法
[0022]製備綠盲蝽人工飼料lOOmL，將其放入4°C冰箱中儲存，備用。
[0023]在人工飼料裡加入不同劑量的CrylAc蛋白，製備成濃度分別為4.1 U g/mL,12.3 u g/mL、37.0 u g/mLUll.1 U g/mL、333.3 u g/mLUOOO u g/mL 的生物測定飼料。並以不含CrylAc的人工飼料為對照。將預先裁剪的2.5cmX2.5cm封口膜拉伸成6cmX8cm，在膜中央滴加0.4mL各個濃度的生物測定飼料，密封成飼料球。將2個飼料球上的封口膜拉伸粘在燒杯(直徑4.0cm,高6.0cm的無蓋透明燒杯)中間位置的側壁上。(圖1)
[0024]處理組和對照組(CK)分別接入12頭I齡綠盲蝽若蟲，並用細紗布(150目紗網)和橡膠圈封口防止其逃逸。置於溫度27±2°C，溼度75±10%，光照14h，黑暗IOh的條件下培養。培養過程中，飼料不用更換，每天記錄燒杯中的綠盲蝽剩餘數目，第7天記錄剩餘蟲數並回收剩餘若蟲，重複3次，評價不同濃度的CrylAc對綠盲蝽的影響。其中第7天的毒殺效果如表1所示。[0025]表1生物蛋白CrylAc對綠盲蝽的生物測定效果
[0026]
【權利要求】
1.一種評價生物蛋白對綠盲蝽影響的方法，其特徵在於，包括如下步驟: 1)根據生物蛋白的作用效果，將待測生物蛋白稀釋成不同濃度，與綠盲蝽人工飼料混合，製得生物蛋白測定飼料，並以不添加生物蛋白的飼料組作為對照； 2)用拉伸的封口膜分別包裹不同濃度的生物蛋白測定飼料和對照組飼料，製成大小一致的飼料膠囊； 3)將上述飼料膠囊粘在無蓋飼育盒的側壁上或置於與所述飼育盒相匹配的網架上，每個飼育盒對應於不同的生物蛋白濃度； 4)向飼育盒中接入綠盲蝽若蟲或成蟲8-12頭，用紗布封口，置於溫度27±2°C，溼度75 ±10%，光照14h，黑暗IOh的條件下培養； 5)從第0天開始記錄綠盲蝽的死亡情況或體重變化。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，步驟2)中所述封口膜大小為2.5cm X 2.5cm，拉伸成6cmX 8cm，在膜中央滴加0.4-0.6mL飼料。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述飼育盒為無色透明燒杯，直徑4.0cm,高 6.0cm。
4.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，步驟4)中所述紗布為150目紗網。
5.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，步驟4)中向飼育盒中接入I齡綠盲蝽若蟲。
【文檔編號】A23K1/18GK103609529SQ201310429417
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年9月18日 優先權日:2013年9月18日
【發明者】王英麗, 梁革梅, 魏紀珍, 袁向東, 張麗麗, 謝丙堂, 鍾豐 申請人:中國農業科學院植物保護研究所