用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶ⅳ的雙抗夾心elisa試劑盒及其方法與運用的製作方法

2023-06-26 01:08:56

專利名稱：用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶ⅳ的雙抗夾心elisa試劑盒及其方法與運用的製作方法
技術領域：
本發明涉及醫學檢驗領域，特別涉及用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA試劑盒及其方法與運用。
背景技術：
類風溼關節炎(RA)是一種以滑膜炎為基本病理改變，以慢性破壞性關節病變為特徵的全身性自身免疫病，大多病情呈進行性，最終導致關節纖維性或骨性強直而嚴重致殘，嚴重影響患者生活質量。未經正確治療的類風溼關節炎可遷延不愈，甚至導致關節畸形。作為自身免疫性疾病，致病抗原驅動的自身反應性CD4+T細胞活化是類風溼關節炎發病的核心途徑。對於類風溼關節炎的診斷，現在主流仍然沿用1987年美國風溼病學學會RA的分類標準，其主要靠臨床表現並排除其他關節炎從而對RA進行判斷。另外，X線改變和類風溼因子也是判斷RA的常用標準。但上述方法操作繁瑣且特異性不高，且不適用於早期診斷。眾所周知，RA的病理改變從滑膜組織開始逐漸向軟骨到骨發展。RA在早期若未得到有效治療，將會引起關節功能障礙甚至勞動力喪失，並導致全身多臟器受累進而危及生命。如果能儘早對RA病情做出診斷，及早治療，從而阻止或延緩其發展，將能有效的提高RA 的治療效果並減少其併發症的發生。而針對RA早期有高度敏感性和特異性的檢測指標是實現RA早期診斷和治療的前提。早期診斷指標中，IL-8、IL-6水平在巨細胞病毒DNA陽性的類風溼關節炎患者中升高和CMV基因組出現之間存在聯繫，但特異性和敏感性低。在RA自身抗體作為檢測指標方面類風溼因子(RF)存在靈敏度低的缺點；在早期RF陰性的類風溼關節炎病人中可 53. 3%的病人抗核周因子(APF)呈陽性，但APF抗原片的保存時間較短(僅為1 2周)，檢測穩定性低fa抗體在類風溼關節炎中陽性率為40%，特異性為98. 9%，但類風溼關節炎早期僅約23% ；過氧化物還原酶IV和類風溼關節炎的相關性研究尚未有人報導。

發明內容
本發明的目的之一在於提供一種試劑盒，該試劑盒能快速檢測過氧化物還原酶IV 的含量，操作簡單，成本低廉。為實現上述目的，本發明的技術方案為
1、用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA試劑盒，包括以抗過氧化物還原酶IV的特異性單抗和/或多抗組成的捕獲劑、酶標二抗、樣品稀釋液和底物。2、進一步，所述捕獲劑為小鼠抗過氧化物還原酶IV抗體IgG。
3、進一步，小鼠抗過氧化物還原酶IV抗體IgG作不大於640倍體積稀釋，其稀釋液為捕獲劑。4、根據1所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA試劑盒，所述捕獲劑附於固相支持物上。5、根據4所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA試劑盒，所述固相支持物為酶標板或生物晶片。6、根據1所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA試劑盒，所述生物標本為血清、尿液、細胞組織物或血漿。7、根據6所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA試劑盒，所述生物標本為血清。8、根據1所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA試劑盒，所述酶標二抗為HRP標記的大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG。9、根據8所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA試劑盒，將所述HRP標記的大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG作不大於640倍體積稀釋液，其稀釋液為酶標二抗。10、根據1所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA試劑盒，所述捕獲劑與酶標二抗的用量比為1:1。本發明的目的之二在於提供上述試劑盒的用途，該用途能彌補過氧化物還原酶IV 檢測領域的技術空白，並為類風溼關節炎及其它免疫性疾病提供了診斷思路，特別適用於生物標本的檢測。為實現上述目的，本發明的技術方案為
11、1-10任一項所述雙抗夾心ELISA試劑盒在檢測過氧化物還原酶IV含量的應用。12、根據11所述的雙抗夾心ELISA試劑盒應用，所述試劑盒在檢測類風溼關節炎中的應用。13、根據11所述的雙抗夾心ELISA試劑盒應用，所述試劑盒檢測待測血清與正常人血清的過氧化物還原酶IV的含量，當待測血清的OD45tlnm值大於0. 257為過氧化物還原酶 IV陽性，小於或等於0. 257為過氧化物還原酶IV陰性。本發明的目的之三在於提供過氧化物還原酶IV含量的方法，該方法敏感性高，操作簡單。為實現上述目的，本發明的技術方案為
14、運用1-10任一項所述雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法， a、將生物標本與雙抗夾心ELISA試劑盒中的捕獲劑接觸並保溫；b、將未結合的生物標本分離，得抗原-抗體複合物；C、在步驟b所得的抗原-抗體複合物加入雙抗夾心ELISA試劑盒中的酶標二抗，得雙抗夾心複合物；d、檢測結合於捕獲劑的過氧化物還原酶IV的含量。15、根據14所述的運用所述雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，還包括將步驟d所得的過氧化物還原酶IV的含量與正常人進行比較判斷。16、根據14所述的方法，步驟a中，將捕獲劑包被酶標板，將待測生物標本與捕獲劑接觸，保溫並用封閉液封閉；所述生物標本為不大於200倍體積稀釋的血清稀釋液，所述捕獲劑為小鼠抗過氧化物還原酶IV抗體IgG作不大於640倍體積稀釋的稀釋液。
17、根據14所述的運用所述雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，步驟b中，將步驟a中保溫並用封閉液封閉的酶標板洗滌將未結合的生物標本分離， 得抗原-抗體複合物。18、根據14所述的運用所述雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，步驟c中，在步驟b所得的抗原-抗體複合物加入雙抗夾心ELISA試劑盒中的酶標二抗進行保溫反應，得雙抗夾心複合物；所述酶標二抗為HRP標記的大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG作不大於640倍體積稀釋液的稀釋液。19、根據14所述的運用所述雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，步驟d中，在步驟c所得的雙抗夾心複合物中加入色原底物避光顯色後，加入終止液終止反應得顯色樣品液，通過測顯色樣品液的OD45tlnm值檢測結合於捕獲劑的過氧化物還原酶IV的含量。
20、根據14所述的運用所述雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，所述方法還包括陰性對照組和空白對照組，所述陰性對照組為源自於正常人的生物標本。21、根據20所述的運用所述雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，所述待測生物標本的OD45tlnm值大於陰性對照組樣本的OD45tlnm值平均值與其2倍標準方差之和時，判定為過氧化物還原酶IV陽性，小於或等於則為陰性。本發明的有益效果在於本試劑盒能特異性的檢測過氧化物還原酶IV的含量，其成本低，敏感性佳；運用本試劑盒檢測過氧化物還原酶IV的含量，並與正常人的過氧化物還原酶IV的水平進行比較，可特異性教高的診斷類風溼關節炎，所以該試劑盒可以製備成類風溼關節炎診斷試劑盒，尤其適用於早期診斷。


為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本發明作進一步的詳細描述，其中
圖1為不同疾病組血清當中過氧化物還原酶IV雙抗體夾心法ELISA檢測結果圖。圖2為過氧化物還原酶IV雙抗體夾心法ELISA標準曲線，橫坐標為過氧化物酶IV 標準品的稀釋濃度，縱坐標為各稀釋濃度標準品對應的OD450值。
具體實施例方式為了使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面結合附圖對本發明的優選實施例進行詳細的描述。本實施例中將所述人過氧化物還原酶IV的獲得是通過構建原核表達質粒、轉化表達菌並發酵培養，收集到大量的含有過氧化物還原酶IV的菌體沉澱，再通過超聲波破碎菌體、過氧化物還原酶IV包涵體冼滌、純化及梯度透析而獲得的；用所述人過氧化物還原酶IV對大鼠進行常規免疫程序和純化，獲得大鼠抗人過氧化物還原酶IV多克隆抗體IgG，在此抗體上標記辣根過氧化物酶(HRP)，作為雙抗體夾心法ELISA的二抗；進一步確定了小鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG和大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG的最佳濃度範圍及陰陽性臨界值的確定，制定了一種特異性和敏感性高的類風溼關節炎抗原過氧化物還原酶IV檢測方法，其能捕獲7. 8ng/mL過氧化物還原酶IV抗原。實施例
一抗體IgG的製備
1構建人過氧化物還原酶IV表達質粒，用PET原核表達系統製備重組抗原TRX-過氧化物還原酶IV融合蛋白。1. 1根據GenBank中檢索到的人過氧化物還原酶IV成熟蛋白序列編碼，設計合成編碼過氧化物還原酶IV蛋白的DNA ；
1. 2分別在DNA5 『端和3 『端設計EcoR I和Hind III酶切位點，經聚合酶鏈反應 (PCR)、構建重組質粒pET過氧化物還原酶IV ； 1. 3在BL21 (DE3)經IPTG誘導表達； 1. 4 Ni-NTA親和層析製備TRX-過氧化物還原酶IV ；
1.5通過DNA測序、融合蛋白的相對分子質量分析及Western印跡來鑑定TRX-過氧化物還原酶IV質粒及表達的過氧化物還原酶IV抗原的正確性。2大鼠抗人過氧化物還原酶IV多克隆抗體的製備和純化 2.1弗氏佐劑
a弗氏不完全佐劑液體石蠟油3份，羊毛脂1份，混合均勻，115°C,15min高壓滅菌後得弗氏不完全佐劑。使用前加熱融化，冷卻至50°C左右，加抗原進行乳化處理；b弗氏完全佐劑在上述基礎上添加卡介苗至終濃度lmg/mL即可，使用時將抗原溶液與其等量混合， 充分乳化。2. 2大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG的製備和純化
2.2. 1大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體的製備(重複進行三次此試驗，每次間隔1周， 以製備三個不同批次的抗體)
a免疫原的製備將表達純化後的過氧化物還原酶IV，首免與等量完全弗氏佐劑混合併充分乳化，第二、三免與不完全弗氏佐劑混合併充分乳化，第四免不加佐劑。b免疫程序選擇健康雄性Wistar大鼠4隻，首免前一天分別採血，分離血清作為陰性對照。製備大鼠抗人過氧化物還原酶IV高免血清免疫程序如下表
表1製備大鼠抗人過氧化物還原酶IV高免血清免疫程序
四免後14d頸動脈放血，收集血液。37°C放置lh，4°C冰箱過夜。第二天析出血清，血凝塊以4000r/min離心15min再次收集血清，_20°C保存備用。
大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG的純化
7除使用大鼠外，也可以採用其它動物製備抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG。a正辛酸-硫酸銨法粗提大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG 粗提大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG，步驟如下(1)取分離的IOmL血清加入等量的0. 06mol/L pH4. 8醋酸鹽緩衝液，混勻；(2)室溫攪拌下逐滴加入正辛酸75yg/mL血清，室溫攪拌30min，4°C 靜置>3h，使其充分沉澱後，13，000r/min離心30min ； (3)取上清用濾紙過濾，向濾液中加入1/10體積的10mmol/L pH7. 4的PBS，用2 mol/L NaOH調節pH=7. 4 ； (4)冰浴下向液體中緩緩加入飽和硫酸銨0. 277g/mL使其終濃度達到4596，攪拌30min，置4°C靜置 >池或過夜，13，000r/min離心30min棄上清液；⑷按1 4的比例向沉澱中加入PBS，充分吹打使其充分溶解；(5)將溶解液裝入透析袋中，在4°C下用lOmmol/L pH7. 4 PBS透析，每他換液一次，直至奈氏試劑檢測透析液中無沉澱產生為止。b High Q柱陰離子交換色譜法純化大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG:純化抗體IgG，步驟如下(1)樣品前處理將粗提IgG用0. 45 μ m濾膜過濾去除雜質，以緩衝液A (pH8.0,20 mmol/L Tris-HCl緩衝液)在4°C條件下進行透析平衡過夜；(2)色譜柱前處理 經過0. 5mol/L NaOH、水洗、1. Omo 1/L NaCl、水洗等前處理，且以緩衝液A平衡HighQ色譜柱；(3)上樣取5mL的粗提IgG樣品；(4)清洗用50 mL緩衝液A平衡並洗下未結合的蛋白質和雜質；(5)洗脫以緩衝液B (1.0 mol/L NaCl)進行線性梯度離子強度洗脫，流速 0. 5 mL/min，洗脫時間為200min，分部收集洗脫組分。c抗體IgG純度和濃度測定將收集到的洗脫峰樣品處理後，進行SDS-PAGE電泳 (圖3-B和圖5)，測定抗體IgG的純度，並用Bradford法測定抗體IgG的最終濃度，並將其稀釋為ang/mL，分裝後於_20°C保存備用。3戊二醛二步法HRP標記大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG a稱取HRP25mg溶於1. 25%戊二醛溶液中，於室溫靜置過夜。
b反應後的酶溶液經kphadex G_25層析柱，用生理鹽水洗脫。流速控制在Iml / 1分鐘，收集棕色流出液。如體積大於5ml，則以PEG濃縮至5ml。放置25ml小燒杯中，緩慢攪拌。c將待標記的抗體12. 5mg用生理鹽水稀釋至5ml，攪拌下逐滴加入酶溶液中。d用IM PH9. 5碳酸緩衝液0. 25ml，繼續攪拌3小時。 e加0. 2M賴氨酸0. 25ml，混勻後，置室溫2小時。
f在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4°C 1小時。g 3000rpm離心半小時，棄上清。沉澱物用半飽和硫酸銨洗二次，最後沉澱物溶於少量 0. 15M PH7.4 的 PBS 中。
h將上述溶液裝入透析袋中，對0. 15M PH7. 4的PB緩衝鹽水透析，去除銨離子後(用萘氏試劑檢測)，10，OOOrpm離心30分鐘去除沉澱，上清液即為酶結合物，分裝後，冰凍保存。4包被抗體
由Abcam公司提供。5實驗方法待測血清樣品的獲得
所有待測類風溼關節炎(RA)、骨關節炎(OA)血清由第三軍醫大學附屬西南醫院中醫科提供；系統性紅斑狼瘡(SLE)血清由第三軍醫大學附屬西南醫院皮膚科提供；正常人血
8清由第三軍醫大學附屬西南醫院健康查體中心提供。
待測血清樣品的處理和保存
4°C過夜後經3，OOOrpm離心30分鐘，取上清，IOOul分裝，-70°C保存。最佳小鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG包被濃度和大鼠抗人過氧化物還原酶 IV抗體IgG最佳濃度的確定
採用方陣滴定法，具體步驟如下(1)將小鼠抗過氧化物還原酶IV抗體IgG用包被液倍比稀釋(1 20、1 40、1 80、1 160、1 320、1 640)，包被酶標板，IOOul/ 孔，置 4°C溼盒孵育過夜，洗板機洗滌3次，5min/次，拍幹；(2)加入100 μ 1/孔封閉液，37°C溼盒封閉lh，洗板機洗滌3次，5min/次，拍幹；(3)加入待測血清樣品，100 μ 1/孔，37°C溼盒作用lh，洗板機洗滌3次，5min/次，拍幹；(4)將HRP標記的大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG倍比稀釋 (1 20、1 40、1 80、1 160、1 320、1 640)，加入酶標板中，100 μ 1/L，37°C溼盒孵育 30 分鐘， 洗板機洗滌3次，5min/次，拍幹；(5)加入TMB底物100 μ 1/孔，37°C避光顯色15min後，加 Λ 100 μ 1/孔2mol/L硫酸終止反應；(6)檢測用酶標儀測OD450nm值。同時以1%的BSA/ PBS溶液作空白對照，以P/N值最大的小鼠抗過氧化物還原酶IV抗體IgG和大鼠抗過氧化物還原酶IV抗體IgG的稀釋度為最佳工作濃度。分別將小鼠抗人過氧化物還原酶IV單克隆抗體IgG和大鼠抗人過氧化物還原酶 IV多克隆抗體IgG作系列稀釋，進行方陣試驗，結果見表1。方陣滴定結果顯示，當小鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgGl 40倍稀釋，大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG以1 :80倍稀釋時，OD45tlnm值大於1.0，陰陽性血清OD45tlnm比值(P / N)最大。因此選擇小鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG的最佳包被濃度為1 20，即濃度為7. 5 μ g/mL ；大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG的最佳稀釋倍數為1:40，即最佳包被濃度為20 μ g/mL，上述最佳包被濃度均為閾濃度，在大於閾濃度時，同樣可以實現相同的作用，但經濟成本增加。表2鼠抗過氧化物還原酶IV抗體IgG和兔抗過氧化物還原酶IV抗體IgG最佳工作濃度的確定
權利要求
1.用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA試劑盒，其特徵在於包括以抗過氧化物還原酶IV的特異性單抗和/或多抗組成的捕獲劑、酶標二抗、樣品稀釋液和底物。
2.根據權利要求1所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA 試劑盒，其特徵在於所述捕獲劑為小鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG。
3.根據權利要求2所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA 試劑盒，其特徵在於小鼠抗過氧化物還原酶IV抗體IgG作不大於640倍體積稀釋，其稀釋液為捕獲劑。
4.根據權利要求1所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA 試劑盒，其特徵在於所述捕獲劑附於固相支持物上。
5.根據權利要求4所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA 試劑盒，其特徵在於所述固相支持物為酶標板或生物晶片。
6.根據權利要求1所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA 試劑盒，其特徵在於所述生物標本為血液標本、體液標本以及細胞組織物。
7.根據權利要求6所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA 試劑盒，其特徵在於所述血液標本為血清。
8.根據權利要求1所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA 試劑盒，其特徵在於所述酶標二抗為HRP標記的大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG。
9.根據權利要求8所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心ELISA 試劑盒，其特徵在於將所述HRP標記的大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG作不大於640 倍體積稀釋液，其稀釋液為酶標二抗。
10.根據權利要求1所述的用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶IV的雙抗夾心 ELISA試劑盒，其特徵在於所述捕獲劑與酶標二抗的用量比為1:1。
11.權利要求1-10任一項所述雙抗夾心ELISA試劑盒在檢測過氧化物還原酶IV含量的應用。
12.根據權利要求11所述的雙抗夾心ELISA試劑盒應用，其特徵在於所述試劑盒在植被檢測類風溼關節炎試劑盒中的應用。
13.根據權利要求11所述的雙抗夾心ELISA試劑盒應用，其特徵在於所述試劑盒檢測待測血清與正常人血清的過氧化物還原酶IV的含量，當待測血清的OD45tlnm值大於0. 257 為過氧化物還原酶IV陽性，小於或等於0. 257為過氧化物還原酶IV陰性。
14.運用權利要求1-10任一項所述雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，a、將生物標本與雙抗夾心ELISA試劑盒中的捕獲劑接觸並保溫；b、將未結合的生物標本分離，得抗原-抗體複合物；c、在步驟b所得的抗原-抗體複合物加入雙抗夾心 ELISA試劑盒中的酶標二抗，得雙抗夾心複合物；d、檢測結合於捕獲劑的過氧化物還原酶 IV的含量。
15.根據權利要求14所述的運用雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，其特徵在於所述方法還包括將步驟d所得的過氧化物還原酶IV的含量與正常人進行比較判斷。
16.根據權利要求14所述的運用雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，其特徵在於步驟a中，將捕獲劑包被酶標板，將待測生物標本與捕獲劑接觸，保溫並用封閉液封閉；所述生物標本為不大於200倍體積稀釋的血清稀釋液，所述捕獲劑為小鼠抗過氧化物還原酶IV抗體IgG作不大於640倍體積稀釋的稀釋液。
17.根據權利要求14所述的運用雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，其特徵在於步驟b中，將步驟a中保溫並用封閉液封閉的酶標板洗滌將未結合的生物標本分離，得抗原-抗體複合物。
18.根據權利要求14所述的運用雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，其特徵在於步驟c中，在步驟b所得的抗原-抗體複合物加入雙抗夾心ELISA試劑盒中的酶標二抗進行保溫反應，得雙抗夾心複合物；所述酶標二抗為HRP標記的大鼠抗人過氧化物還原酶IV抗體IgG作不大於640倍體積稀釋液的稀釋液。
19.根據權利要求14所述的運用雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，其特徵在於步驟d中，在步驟c所得的雙抗夾心複合物中加入色原底物避光顯色後， 加入終止液終止反應得顯色樣品液，通過測顯色樣品液的OD45tlnm值檢測結合於捕獲劑的過氧化物還原酶IV的含量。
20.根據權利要求14所述的運用雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，其特徵在於所述方法還包括陰性對照組和空白對照組，所述陰性對照組為源自於正常人的生物標本。
21.根據權利要求20所述的運用雙抗夾心ELISA試劑盒檢測過氧化物還原酶IV含量的方法，其特徵在於所述待測生物標本的OD45tlnm值大於陰性對照組樣本的OD45tlnm值平均值與其2倍標準方差之和時，判定為過氧化物還原酶IV陽性，所述待測生物標本的OD45tlnm值小於或等於陰性對照組樣本的OD45tlnm值平均值與其2倍標準方差之和時則為陰性。
全文摘要
本發明涉及醫學檢驗領域，特別涉及用於檢測生物標本中的過氧化物還原酶Ⅳ的雙抗夾心ELISA試劑盒，其包括以抗過氧化物還原酶Ⅳ的特異性單抗和/或多抗組成的捕獲劑、酶標二抗、樣品稀釋液、底物；該試劑盒可專用於過氧化物還原酶Ⅳ含量的檢測，進而判斷人體過氧化物還原酶Ⅳ水平是否超標；本試劑盒特異性和敏感性高。
文檔編號G01N33/577GK102346190SQ20111002563
公開日2012年2月8日 申請日期2011年1月24日 優先權日2011年1月24日
發明者吳喬, 吳玉章 申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學