一種香蕉稈纖維素水解糖化的方法與流程
2023-06-12 23:56:46 2
本發明屬於生物化工與生物質能源領域，具體涉及一種香蕉稈纖維素水解糖化的方法。
背景技術：
能源是社會和經濟發展的重要物質基礎，生物質能是世界第四大能源，利用生物質製備燃料乙醇對我國經濟和社會的持續發展意義重大，而木質纖維素是地球上最豐富的可再生生物質，但該資源的當前利用率極低，除了傳統的直接燃燒產熱產汽外，只有極少量用於生產燃料乙醇。一直以來，如何有效地低成本地將木質纖維素轉化成燃料乙醇都是科學家們面對的巨大難題和極大挑戰。
香蕉是我國南方廣泛種植的水果，每年的產量均在1000萬噸以上，產生香蕉稈高達1500萬噸。而目前香蕉稈除極少量用於提取香蕉纖維素外，其它均廢棄或直接還田，經濟效益低，造成資源的極大浪費。雖然香蕉稈纖維素原料供應十分充足，但要真正利用這些纖維素生物質資源生產燃料乙醇，把資源優勢轉化為經濟優勢，還存在諸多技術瓶頸問題有待解決,如原料的收集、水解成本高、五碳糖的發酵、廢液處理等問題，均嚴重製約了該纖維素原料的再生利用。在香蕉稈的處理利用方面，檢索到相關的文獻如：
1、申請號為201020596836.X的中國專利公開了一種香蕉稈脫水裝置。通過該裝置，能將香蕉稈脫掉大部分水分，並將纖維切碎，可直接用作食用菌的培養基或發酵後用作肥料和飼料等。該裝置投資少，運營成本低，脫水效率高，連續處理量大，可實現香蕉稈原料的機械化收集工作。但是，香蕉稈纖維收集後，只能用於食用菌或肥料，應用面較窄，用途與用量有限。
2、申請號為201110461656.X的中國專利公開了一種利用汽爆技術製備香蕉稈纖維素納米纖維的方法。該方法是將香蕉粗纖維剪切成長度為2～10cm 的短纖維後在NaOH 溶液中浸泡，水洗至中性，進行汽爆處理，漂白液漂洗後洗滌至中性即得到香蕉納米纖維，得率在60％以上。該發明以蕉園廢棄的香蕉莖稈粗纖維為主要原料，採用化學處理和汽爆技術相結合的方法，解決了傳統納米纖維製備方法成本高、工序複雜、汙染環境的缺陷，大大縮短了納米纖維的生產周期，提高效率，具有工藝簡單、生產成本低、鹼液和漂洗液均可循環使用等特點。該技術發明屬納米材料領域，實現了操作簡單，綠色環保，快速高效的製備納米纖維的方法。但納米纖維素的生產過程一般由兩部分組成，該發明專利僅涉及原料預處理的第一步，利用汽爆技術以大量蒸汽獲取純度優異的纖維素為目的，需消耗大量的蒸汽能源，且還需進行第二步的深加工。而第二步的處理深加工，涉及到纖維素轉化為微纖維素或納米原纖化纖維素，整個製作過程涉及機械、化學和生物酶作用。整個納米纖維素的生產過程能耗極大，雖說已由原來開發初期的每噸納米纖維素能耗30000 kWh，目前已下降到2000 kWh，但納米晶纖維素成本之高仍是市場所不能接受因素之一。而國內納米纖維素研究尚處在起步階段，目前只在製漿造紙行業有較多的投入，限制了該技術的進一步應用。
我國香蕉稈纖維素原料資源豐富但是香蕉稈生物質資源的綜合利用率不高，造成資源的極大浪費，而利用香蕉稈纖維素生物質資源生產燃料乙醇，把資源優勢轉化為經濟優勢，則還存在諸多技術瓶頸問題有待解決,因此如何開展香蕉稈的綜合利用，延長香蕉產業鏈，增加產品的附加值對香蕉產業的發展起著重要作用。
技術實現要素：
本發明的目的在於針對目前香蕉稈利用率不高而提供的一種簡單有效、生產成本低、應用前途廣的香蕉稈纖維素水解糖化的方法，採用該方法能大大提高香蕉稈纖維素水解糖化速度，提高香蕉稈生物質資源的綜合利用率，實現經濟效益與社會效益的雙贏。
為實現上述目的，本發明採用如下技術方案：
一種香蕉稈纖維素水解糖化的方法，包括如下步驟：
（1）原料收集：將香蕉稈原料稈徑剝離，用水洗淨，晾乾，打包收集，捲成筒狀，貯存備用；
（2）稀酸預處理：將香蕉稈纖維進行粉碎剪切成長度為0.5～5cm的粗纖維，
在常溫下用質量濃度為0.5～10%的稀酸溶液進行浸泡2～18小時，得到含稀酸物料；
（3）擠壓爆破：將步驟（2）得到的含稀酸物料進行過濾濾去水分後，放入擠壓爆破機中，於溫度140-170℃，壓力4-20Mpa條件下進行連續擠壓爆破，得到爆破物料；
（4）酶解水解：用鹼劑將步驟（3）得到的爆破物料的pH調節至3.5-5.5，然後加入一定量的纖維素酶和木聚糖酶混合酶後置於酶解器中於轉速為80-200rpm、溫度為40-55℃下水解糖化48-72小時，即得到香蕉稈纖維素水解糖化液。
上述的香蕉稈纖維素水解糖化的方法，步驟（2）中，所述的稀酸溶液為磷酸、鹽酸和硫酸中的一種或幾種。
上述的香蕉稈纖維素水解糖化的方法，步驟（4）中，所述的鹼劑為質量濃度為10-20%的氨水溶液。在傳統的纖維素水解糖化的生產方法中，通常用NaOH等片鹼或鹼液來調節爆破物料的pH值，然而，由於在酶解過程中鹼會被大量消耗，引起pH波動較大，從而導致酶解過程的不穩定。在本發明中，用氨水替代傳統的NaOH，可以對擠爆物料的酸鹼度起到有效的緩衝，從而使整個水解過程處於一個較為穩定的pH環境中，保證了纖維素酶與木聚糖酶的活性，同時，氨水中的氮也可以為作為本發明後續的乙醇發酵提供氮源，既降低了生產成本，又易於操作。
上述的香蕉稈纖維素水解糖化的方法，步驟（4）中，所述的纖維素酶（外文名稱：Cellulase）和木聚糖酶（外文名稱：Pentopan Mono）混合酶的用量為每100g爆破物料加入0.05-0.5g的纖維素酶和木聚糖酶混合酶。其中，所述的纖維素酶和木聚糖酶混合酶的製備方法為：①在溫度25～32℃、pH4～6的條件下，按50 mL的裝液量分別將初選培養基、產孢培養基以及產酶培養基裝入250mL 的三角瓶中，以草酸青黴（拉丁名：Penicillium oxalicum）和黑麴黴（學名：Aspergillus niger）作為出發菌株，接種至初選培養基後置於搖床中，於180-300 rpm的轉速下培養3-5d；②在與上述相同的培養條件下，將初選培養基培養得到的菌株接種於產孢培養基中培養3-5d；③在與上述相同的培養條件下，將產孢培養基中得到的菌株接種於產酶培養基中培養3-5d，分離提純後得到纖維素酶和木聚糖酶混合酶。
所述的初選培養基的組成為：硝酸鈉0.5-1.0g，磷酸氫二鉀1.0-2.0g，七水合硫酸鎂 0.5-1.0g，微量元素0.1-0.2ml，蒸餾水1000ml；所述的產孢培養基為PDA培養基：馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂16g，水1000ml；所述的產酶培養基組成為：磷酸二氫鉀4-6g、硫酸銨4-6g、七水合硫酸鎂0.6-1.2g、無水氯化鈣0.6-1.2g、酵母粉0.04-0.4g，吐溫80 2-4 mL、微晶纖維素10-20g、麥麩40-60g、微量元素 0.1-0.2ml，其中所述微量元素含有以下成分mg/L：FeSO4·7H2O,5.0；MnSO4，1.6；ZnSO4·7H2O，1.4；CoCl2，2.0。
本發明的有益效果為:
1、本發明以蕉園廢棄的香蕉莖稈資源為主要原料，資源十分豐富、成本低，而且本發明工藝簡單，工藝周期短。
2、本發明採用稀酸低溫的擠壓爆破工藝，與普通的蒸汽爆破技術相比，無需消耗大量的蒸汽，而且可以連續生產，可大大提高香蕉稈纖維素水解糖化速度，縮短降解的時間，同時大幅度減少了副產物與影響後續發酵乙醇的有害物質的產生，減少能源消耗，提高原料利用率，大大降低了生產成本。
3、本發明所用的鹼劑採用氨水替代氫氧化鈉，可使整個水解過程處於一個較為穩定的pH環境中，還可以在保證香蕉稈纖維素順利水解糖化的同時，減少了鹼類用量，顯著降低生產操作難度和減少對環境的汙染。
4、本發明一種香蕉稈纖維素水解糖化的方法，採用該方法能大大提高香蕉稈纖維素水解糖化的速度，而且水解後的香蕉稈纖維素水解糖化液中纖維素轉化率達到84%以上；採用該方法對香蕉稈進行處理後得到的香蕉稈纖維素水解糖化液可用於生產燃料乙醇，提高了香蕉稈生物質資源的綜合利用率，提高了經濟效益與社會效益。
具體實施方式
本發明公開了一種香蕉稈纖維素水解糖化的方法，本領域技術人員可以借鑑本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替代和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。
本發明提供的香蕉稈纖維素水解糖化方法中所用原料或輔料均可由市場購得，草酸青黴菌株來源自中國微生物菌種保藏中心。下面結合實施例，對本發明的具體實施方式作進一步的詳細描述。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用於說明和解釋本發明，並不用於限制本發明。
實施例1
一種香蕉稈纖維素水解糖化的方法，包括如下步驟：
（1）原料收集：將香蕉稈原料稈徑剝離，進行捶打其樹皮，用水洗淨，這
樣可除去大部分雜質，不易黴變，容易保存，然後採用日曬的方式進行晾乾後，打包收集，捲成筒狀，貯存備用；
（2）稀酸預處理：取5000g香蕉稈纖維進行粉碎剪切成長度為0.5cm的粗纖維，在常溫下用質量濃度為0.5%的硫酸進行浸泡18小時，得到含稀酸物料；
（3）擠壓爆破：將步驟（2）得到的含稀酸物料進行過濾濾去水分後，放入擠壓爆破機中，於溫度140℃，壓力20Mpa條件下進行擠壓爆破，得到爆破物料；擠壓爆破是連續進行的，擠壓爆破機每分鐘放入含稀酸物料4-6L；在擠壓爆破之前進行酸泡處理，可以使得香蕉稈木質纖維素內部堅韌的組織鬆動，容易於下一步的水解，並除去部分難以水解的膠體物質；
（4）酶解水解：用質量濃度為10%的氨水溶液噴淋步驟（3）得到的爆破物料將其pH調節至3.5，然後按照每100g爆破物料加入0.05g纖維素酶和木聚糖酶混合酶的比例加入纖維素酶和木聚糖酶混合酶後置於酶解器中於轉速為80rpm、溫度為40℃下水解糖化72小時，得到纖維素轉化率為85.4%的香蕉稈纖維素水解糖化液；該糖化液經適當保存後可用於後續的發酵乙醇用途。
步驟（4）中，所述的纖維素酶和木聚糖酶混合酶的製備方法為：①在溫度25℃、pH4的條件下，按50 mL的裝液量分別將初選培養基、產孢培養基以及產酶培養基裝入250mL 的三角瓶中，以草酸青黴（拉丁名：Penicillium oxalicum）和黑麴黴（學名：Aspergillus niger）作為出發菌株，接種至初選培養基後置於搖床中，於180rpm的轉速下培養5d；②在與上述相同的培養條件下，將初選培養基培養得到的菌株接種於產孢培養基中培養5d；③在與上述相同的培養條件下，將產孢培養基得到的菌株接種於產酶培養基中培養5d，分離提純後得到纖維素酶和木聚糖酶混合酶。所述的初選培養基的組成為：硝酸鈉0.5g，磷酸氫二鉀1.0g，七水合硫酸鎂 0.5g，微量元素0.1ml，蒸餾水1000ml；所述的產孢培養基為PDA培養基：馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂16g，水1000ml；所述的產酶培養基組成為：磷酸二氫鉀4g、硫酸銨4g、七水合硫酸鎂0.6g、無水氯化鈣0.6g、酵母粉0.04g，吐溫80 2mL、微晶纖維素10g、麥麩40g、微量元素，0.1ml，其中微量元素含有以下成分mg/L：FeSO4·7H2O,5.0；MnSO4，1.6；ZnSO4·7H2O，1.4；CoCl2，2.0。
實施例2
一種香蕉稈纖維素水解糖化的方法，包括如下步驟：
（1）原料收集：將香蕉稈原料稈徑剝離，進行捶打其樹皮，用水洗淨，這
樣可除去大部分雜質，不易黴變，容易保存，然後採用暖風乾燥的方式進行晾乾後，打包收集，捲成筒狀，貯存備用；
（2）稀酸預處理：取15 Kg香蕉稈纖維進行粉碎剪切成長度為3cm的粗纖維，在常溫下用質量濃度為6%的鹽酸進行浸泡10小時，得到含稀酸物料；
（3）擠壓爆破：將步驟（2）得到的含稀酸物料進行過濾濾去水分後，放入擠壓爆破機中，於溫度155℃，壓力12Mpa條件下進行擠壓爆破，得到爆破物料；擠壓爆破是連續進行的，擠壓爆破機每分鐘放入含稀酸物料4-6L；在擠壓爆破之前進行酸泡處理，可以使得香蕉稈木質纖維素內部堅韌的組織鬆動，容易於下一步的水解，並除去部分難以水解的膠體物質；
（4）酶解水解：用質量濃度為15%的氨水溶液噴淋步驟（3）得到的爆破物料將其pH調節至5，然後按照每100g爆破物料加入0.25g纖維素酶和木聚糖酶混合酶的比例加入纖維素酶和木聚糖酶混合酶後置於酶解器中於轉速為130rpm、溫度為50℃下水解糖化60小時，得到纖維素轉化率為86.5%的香蕉稈纖維素水解糖化液；該糖化液經適當保存後可用於後續的發酵乙醇用途。
步驟（4）中，所述的纖維素酶和木聚糖酶混合酶的製備方法為：①在溫度30℃、pH為5的條件下，按50 mL的裝液量分別將初選培養基、產孢培養基以及產酶培養基裝入250mL 的三角瓶中，以草酸青黴和黑麴黴作為出發菌株，接種至初選培養基後置於搖床中，於250 rpm的轉速下培養4d；②在與上述相同的培養條件下，將初選培養基培養得到的菌株接種於產孢培養基中培養4d；③在與上述相同的培養條件下，將產孢培養基中得到的菌株接種於產酶培養基中培養4d，分離提純後得到纖維素酶和木聚糖酶混合酶。所述的初選培養基的組成為：硝酸鈉0.7g，磷酸氫二鉀1.5g，七水合硫酸鎂 0.8g，微量元素0.15ml，蒸餾水1000ml；所述的產孢培養基為PDA培養基：馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂16g，水1000ml；所述的產酶培養基組成為：磷酸二氫鉀5g、硫酸銨5g、七水合硫酸鎂1g、無水氯化鈣0.9g、酵母粉0.2g，吐溫80 3 mL、微晶纖維素15g、麥麩50g、微量元素0.15ml，其中微量元素含有以下成分（mg/L）：FeSO4·7H2O,5.0；MnSO4，1.6；ZnSO4·7H2O，1.4；CoCl2，2.0。
實施例3
一種香蕉稈纖維素水解糖化的方法，包括如下步驟：
（1）原料收集：將香蕉稈原料稈徑剝離，進行捶打其樹皮，用水洗淨，這
樣可除去大部分雜質，不易黴變，容易保存，然後採用日曬的方式進行晾乾後，打包收集，捲成筒狀，貯存備用；
（2）稀酸預處理：取30 Kg香蕉稈纖維進行粉碎剪切成長度為5cm的粗纖維，在常溫下用質量濃度為10%的磷酸進行浸泡2小時，得到含稀酸物料；
（3）擠壓爆破：將步驟（2）得到的含稀酸物料進行過濾濾去水分後，放入擠壓爆破機中，於溫度170℃，壓力4Mpa條件下進行擠壓爆破，得到爆破物料；擠壓爆破是連續進行的，擠壓爆破機每分鐘放入含稀酸物料4-6L；在擠壓爆破之前進行酸泡處理，可以使得香蕉稈木質纖維素內部堅韌的組織鬆動，容易於下一步的水解，並除去部分難以水解的膠體物質；
（4）酶解水解：用質量濃度為20%的氨水溶液噴淋步驟（3）得到的爆破物料將其pH調節至5.5，然後按照每100g爆破物料加入0.5g纖維素酶和木聚糖酶混合酶的比例加入纖維素酶和木聚糖酶混合酶後置於酶解器中於轉速為200rpm、溫度為55℃下水解糖化48小時，得到纖維素轉化率為87.2%的香蕉稈纖維素水解糖化液；該糖化液經適當保存後可用於後續的發酵乙醇用途。
步驟（4）中，所述的纖維素酶和木聚糖酶混合酶的製備方法為：①在溫度32℃、pH為6的條件下，按50 mL的裝液量分別將初選培養基、產孢培養基以及產酶培養基裝入250mL 的三角瓶中，以草酸青黴和黑麴黴作為出發菌株，接種至初選培養基後置於搖床中，於300 rpm的轉速下培養3d；②在與上述相同的培養條件下，將初選培養基培養得到的菌株接種於產孢培養基中培養3d；③在與上述相同的培養條件下，將產孢培養基中得到的菌株接種於產酶培養基中培養3d，分離提純後得到纖維素酶和木聚糖酶混合酶。所述的初選培養基的組成為：硝酸鈉1.0g，磷酸氫二鉀2.0g，七水合硫酸鎂1.0g，微量元素0.2ml，蒸餾水1000ml；所述的產孢培養基為PDA培養基：馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂16g，水1000ml；所述的產酶培養基組成為：磷酸二氫鉀6g、硫酸銨6g、七水合硫酸鎂1.2g、無水氯化鈣1.2g、酵母粉0.4g，吐溫80 4 mL、微晶纖維素20g、麥麩60g、微量元素 0.2ml，其中所述微量元素含有以下成分mg/L：FeSO4·7H2O,5.0；MnSO4，1.6；ZnSO4·7H2O，1.4；CoCl2，2.0。
實施例4
一種香蕉稈纖維素水解糖化的方法，包括如下步驟：
（1）原料收集：將香蕉稈原料稈徑剝離，進行捶打其樹皮，用水洗淨，這
樣可除去大部分雜質，不易黴變，容易保存，然後採用日曬的方式進行晾乾後，打包收集，捲成筒狀，貯存備用；
（2）稀酸預處理：取10Kg香蕉稈纖維進行粉碎剪切成長度為0.5-2cm的粗纖維，在常溫下用質量濃度都為3%的磷酸、鹽酸以及硫酸的混合溶液進行浸泡3小時，得到含稀酸物料；
（3）擠壓爆破：將步驟（2）得到的含稀酸物料進行過濾濾去水分後，放入擠壓爆破機中，於溫度140℃，壓力10Mpa條件下進行擠壓爆破，在擠壓爆破機內，物料在螺稈的旋轉推動下向前運動，同時被剪切、擠壓，當物料從機頭噴嘴處噴出時，由於壓力突然降低，物料體積迅速膨脹，纖維素晶體結構被破壞，得到爆破物料；擠壓爆破是連續進行的，擠壓爆破機每分鐘放入含稀酸物料4-6L；在擠壓爆破之前進行酸泡處理，可以使得香蕉稈木質纖維素內部堅韌的組織鬆動，容易於下一步的水解，並除去部分難以水解的膠體物質；
（4）酶解水解：用質量濃度為12%的氨水溶液噴淋步驟（3）得到的爆破物料將其pH調節至5.0，然後按照每100g爆破物料加入0.05g纖維素酶和木聚糖酶混合酶的比例加入纖維素酶和木聚糖酶混合酶後置於酶解器中，於轉速為110rpm、溫度為50℃下水解糖化72小時，得到纖維素轉化率為84.3%的香蕉稈纖維素水解糖化液；該糖化液經適當保存後可用於後續的發酵乙醇用途。
步驟（4）中，所述的纖維素酶和木聚糖酶混合酶的製備方法為：①在溫度25～32℃、pH為5的條件下，按50 mL的裝液量分別將初選培養基、產孢培養基以及產酶培養基裝入250mL 的三角瓶中，以草酸青黴和黑麴黴作為出發菌株，接種至初選培養基後置於搖床中，於200 rpm的轉速下培養5d；②在與上述相同的培養條件下，將初選培養基培養得到的菌株接種於產孢培養基中培養5d；③在與上述相同的培養條件下，將產孢培養基中得到的菌株接種於產酶培養基中培養5d，分離提純後得到纖維素酶和木聚糖酶混合酶。所述的初選培養基的組成為：硝酸鈉0.8g，磷酸氫二鉀1.2g，七水合硫酸鎂 0.6g，微量元素0.18ml，蒸餾水1000ml；所述的產孢培養基為PDA培養基：馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂16g，水1000ml；所述的產酶培養基組成為：磷酸二氫鉀5.5g、硫酸銨4g、七水合硫酸鎂0.9g、無水氯化鈣0.7g、酵母粉0.3g，吐溫80 2mL、微晶纖維素14g、麥麩52g、微量元素0.1ml，其中微量元素含有以下成分mg/L：FeSO4·7H2O,5.0；MnSO4，1.6；ZnSO4·7H2O，1.4；CoCl2，2.0。
實施例5
一種香蕉稈纖維素水解糖化的方法，包括如下步驟：
（1）原料收集：將香蕉稈原料稈徑剝離，進行捶打其樹皮，用水洗淨，這
樣可除去大部分雜質，不易黴變，容易保存，然後採用日曬的方式進行晾乾後，打包收集，捲成筒狀，貯存備用；
（2）稀酸預處理：取35Kg香蕉稈纖維進行粉碎剪切成長度為0.5-5cm的粗纖維，在常溫下用質量濃度都為5%的鹽酸和硫酸的混合溶液進行浸泡7小時，得到含稀酸物料；
（3）擠壓爆破：將步驟（2）得到的含稀酸物料進行過濾濾去水分後，放入擠壓爆破機中，於溫度170℃，壓力15Mpa條件下進行擠壓爆破，在擠壓爆破機內，物料在螺稈的旋轉推動下向前運動，同時被剪切、擠壓，當物料從機頭噴嘴處噴出時，由於壓力突然降低，物料體積迅速膨脹，纖維素晶體結構被破壞，得到爆破物料；擠壓爆破是連續進行的，擠壓爆破機每分鐘放入含稀酸物料4-6L；在擠壓爆破之前進行酸泡處理，可以使得香蕉稈木質纖維素內部堅韌的組織鬆動，容易於下一步的水解，並除去部分難以水解的膠體物質；
（4）酶解水解：用質量濃度為10%的氨水溶液噴淋步驟（3）得到的爆破物料將其pH調節至4.5，然後按照每100g爆破物料加入0.1g纖維素酶和木聚糖酶混合酶的比例加入纖維素酶和木聚糖酶混合酶後置於酶解器中，於轉速為150rpm、溫度為55℃下水解糖化55小時，得到纖維素轉化率為88%的香蕉稈纖維素水解糖化液；該糖化液經適當保存後可用於後續的發酵乙醇用途。
步驟（4）中，所述的纖維素酶和木聚糖酶混合酶的製備方法為：①在溫度25～32℃、pH為4的條件下，按50 mL的裝液量分別將初選培養基、產孢培養基以及產酶培養基裝入250mL 的三角瓶中，以草酸青黴和黑麴黴作為出發菌株，接種至初選培養基後置於搖床中，於260 rpm的轉速下培養4d；②在與上述相同的培養條件下，將初選培養基培養得到的菌株接種於產孢培養基中培養4d；③在與上述相同的培養條件下，將產孢培養基中得到的菌株接種於產酶培養基中培養4d，分離提純後得到纖維素酶和木聚糖酶混合酶。所述的初選培養基的組成為：硝酸鈉0.6g，磷酸氫二鉀1.8g，七水合硫酸鎂 0.8g，微量元素0.2ml，蒸餾水1000ml；所述的產孢培養基為PDA培養基：馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂16g，水1000ml；所述的產酶培養基組成為：磷酸二氫鉀5g、硫酸銨4g、七水合硫酸鎂1.2g、無水氯化鈣0.8g、酵母粉0.25g，吐溫80 3mL、微晶纖維素17g、麥麩48g、微量元素0.2ml，其中微量元素含有以下成分（mg/L）：FeSO4·7H2O,5.0；MnSO4，1.6；ZnSO4·7H2O，1.4；CoCl2，2.0。