防止和減少生物膜形成與浮遊增殖的製作方法

2023-06-12 07:42:51

專利名稱：：防止和減少生物膜形成與浮遊增殖的製作方法
技術領域：
：本發明提供方法和組合物，用於防止和/或減少表面上的生物膜形成和/或水環境中的浮遊增殖，特別是在生活/家庭和工業環境中。
背景技術：
：由不期望的微生物引起的生物膜形成和浮遊增殖是家庭以及工業環境中公知的現象。例如，便器在表面和溶液中攜帶不期望的細菌，其能引起便器表面出現明顯的汙穢。此外，便器中存在不期望的微生物可能導致沖洗時浮質(aerosol)的分散。已知水系統例如管路、泵和容器中大量的生物膜形成與浮遊增殖可引起健康護理風險、腐蝕和美觀問題。防止或減少由不期望的微生物引起的生物膜形成和/或浮遊增殖通常需要使用分散劑、表面活性劑、酶、微生物、抗微生物劑、殺生物劑、煮沸(boil-out)步驟，和/或化學品。美國專利5，171，591涉及使用蛭弧菌屬(^^//0討^'0)的寄生細菌，在某些食品中，或在食品或食品接觸表面上控制或消除不期望細菌。美國專利5,242,593涉及通過向循環水加入單一形式的非固著微生物(non-sessilemicrobe)而減少水循環系統中粘質物(slime)和/或膜的形成的方法。美國專利5,360,517公開了調節含水造紙電路/過程流中存在的微生物/細菌群落生長的方法，包括引入有效消毒量的肉葡萄球菌(5"to//y;/ococcwcar"oyws)菌種的糹田菌。美國專利5,863,882涉及液體清潔和消毒製劑，其中包含消毒組合物，活的芽孢桿菌屬(^z"7/w"孢子，和能減少四種病原微生物的表面活性劑。澳大利亞專利719544涉及通過加入非病原革蘭氏陽性細菌而控制水體中病原細菌數量的方法。WO2006/031554公開了通過用源自細菌的a-澱粉酶接觸所述表面而防止、去除、減少或破壞表面上生物膜的方法。儘管本領域已知減少和防止不期望的微生物的生物膜形成和浮遊增殖的方法，但是仍然需要用於這方面的方法和組合物。附圖簡述圖1顯示在芽孢桿菌屬混合物(6BB)存在時，在不同的芽孢桿菌屬假單胞菌屬(屍化Mdomo"as)比例，假單胞菌屬群落的浮遊增殖減少。圖2顯示在芽孢桿菌屬混合物(6BB)存在時，在不同的芽孢桿菌屬假單胞菌屬比例，假單胞菌屬生物膜群落的減少。圖3顯示在芽孢桿菌屬混合物(6BB)存在時，在不同的芽孢桿菌屬假單胞菌屬比例，浮遊的假單胞菌屬增殖的減少。發明詳述本發明涉及用於減少和/防止水環境中生物膜形成和/或浮遊增殖的方法和組合物。本發明的發明人已經分離並測試了眾多細菌菌抹在水環境中減少和/或防止生物膜形成和/或浮遊增殖的能力。他們發現，當與不期望的微生物共培養時，芽孢桿菌屬的測試菌抹中有少量能減少和/或防止生物膜形成和/或浮遊增殖，所述不期望的微生物包括銅綠假單胞菌CPwwdowo"asawwg/wosa),蒙氏假單胞菌(i^e^fowowoswow&〃/)，惡臭有i單月包菌CP化"cfowo"ospwrit/a),哈維氏弧菌(nZWo/(3n^y/),溶藻弧菌(P6n'oa/g/"o/_y"cus)，費氏弧菌(P6n'o/^c/zen'/)和/或大腸軒菌C&c/2en'c/n'aco/z')。防止和/或減少生物膜形成的方法在第一方面，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸選自下組的一種或多種細菌菌林具有保藏登錄號NRRLB-50014的菌林；具有保藏登錄號NRRLB-50015的菌抹；具有保藏登錄號NRRLB-50016的菌抹；具有保藏登錄號NRRLB-50017的菌株；具有保藏登錄號NRRLB-50018的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7541的菌林；具有保藏登錄號PTA-7542的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7543的菌抹具有保藏登錄號PTA-7544的菌抹具有保藏登錄號PTA-7545的菌林具有保藏登錄號PTA-7546的菌抹具有保藏登錄號PTA-7547的菌抹具有保藏登錄號PTA-7549的菌抹具有保藏登錄號PTA-7790的菌抹具有保藏登錄號PTA-7791的菌林具有保藏登錄號PTA-7792的菌抹具有保藏登錄號PTA-7793的菌抹或這些菌林中兩種或多種的混合物'在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號NRRLB-50014的菌株。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號NRRLB-50015的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號NRRLB-50016的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號NRRLB-50017的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號NRRLB-50018的菌林。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號NRRLB-50019的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7541的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7542的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7543的菌林。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7544的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7545的菌林。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7546的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7547的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7549的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7550的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7789的菌林。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7790的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7791的菌4朱。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7792的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少表面上的生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸具有保藏登錄號PTA-7793的菌抹。在一個實施方案中，根據本發明的方法，可以使用細菌的混合物。混合物的實例可以在下面的"細菌菌抹和細菌菌抹混合物"部分中找到。術語"生物膜形成"表示由不期望的微生物在表面上形成粘液層或膜。生物膜形成是不期望的微生物的生長結果，所述微生物單獨或以菌落形式附著在表面上。術語"表面"指任何表面，優選硬表面，其可以容易引起微生物的生物膜形成和粘附。期望的表面的實例包括由下述材料中一種或多種製成的硬表面金屬、塑料、橡膠、板、玻璃、木材、紙、混凝土、巖石、大理石、石膏和陶瓷材料，如瓷，其可選地用例如塗料或瓷釉塗覆。軟表面的實例包括由任何種類纖維製成的表面(例如，紗、織物、植物纖維、石棉/巖棉(rockwo01)和毛髮)；或任何多孔表面；皮膚(人或動物)；角質材料(例如指(趾)曱)；和體內器官(例如，肺)。硬表面可以在例如浴室中找到，例如，固定裝置、水槽、浴缸、便器，和衝洗水箱；在冷卻塔；水處理裝置；水槽(watertank);奶製品、食品加工裝置等；化學或藥物加工裝置；或醫療設備(例如，導管，整形外科設備和植8入物)中找到。易於引起生物膜形成的表面也可以是多孔表面。多孔表面可以，例如存在於濾器中，例如膜濾器。用於防止和/或減少浮遊增殖的方法中的所述微生物接觸選自下組的一種或多種細菌菌林具有保藏登錄號NRRLB-50014的菌林；具有保藏登錄號NRRLB-50015的菌抹；具有保藏登錄號NRRLB-50016的菌才朱；具有保藏登錄號NRRLB-50017的菌林；具有保藏登錄號NRRLB-50018的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7541的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7542的菌林；具有保藏登錄號PTA-7543的菌林；具有保藏登錄號PTA-7544的菌株；具有保藏登錄號PTA-7545的菌林；具有保藏登錄號PTA-7546的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7547的菌林；具有保藏登錄號PTA-7549的菌林；具有保藏登錄號PTA-7790的菌林；具有保藏登錄號PTA-7791的菌林；具有保藏登錄號PTA-7792的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7793的菌林；或這些菌抹中兩種或多種的混合物。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號NRRLB-50014的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述樣史生物接觸具有保藏登錄號NRRLB-50015的菌抹。在括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號NRRLB-50016的菌林。在一使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號NRRLB-50017的菌林。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號NRRLB-50018的菌林。在一個實溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號NRRLB-50019的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7541的菌株。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7542的菌抹。在一個實施方案所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7543的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7544的菌林。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7545的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7546的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7547的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少;微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7549的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少;敞生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7550的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7789的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7790的菌林。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少」微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述孩t生物接觸具有保藏登錄號PTA-7791的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述孩i生物接觸具有保藏登錄號PTA-7792的菌抹。在一個實施方案中，本發明涉及用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使水溶液中的所述微生物接觸具有保藏登錄號PTA-7793的菌才朱。在一個實施方案中，根據本發明的方法，可以使用細菌的混合物(blend)。混合物的實例可以在下面的"細菌菌林和細菌菌抹混合物，，部分中找到。術語"浮遊增殖"表示不期望的^f鼓生物(優選不期望的細菌)在水環境中(如水體)中的生長。不期望的微生物通常在水環境中自由存在。所涵蓋的水環境的實例是便器中的衝洗水和裝置/工廠(plant)中循環的冷卻水。糹田菌菌才朱和細菌菌才朱混合物應理解的是，根據本發明使用的細菌菌抹可以是上述保藏菌林之一的培養物，但是還可以是與上述分離和保藏菌抹具有基本相同的性質的菌抹的培養物。在優選的實施方案中，菌抹是保藏菌抹之一或其子代。細菌菌抹可以是組合物中的活性成分，所述組合物還包含其他活性和/或非活性成分。術語"有效量"，"有效濃度"或"有效劑量"在本文定義為一種或多種細菌菌抹的量，濃度或劑量，其能減少和/或防止表面上不期望的微生物引起的生物膜形成和/或減少和/或防止不期望的^t生物在水環境中的浮遊增殖。實際有效劑量在絕對數目上依賴於多種因素，包括待研究的不期望的微生物；無論目標是防止還是減少；菌抹或包含所述菌抹的組合物的接觸時間；存在的其他成分，以及待研究的表面或水環境。在一個實施方案中，細菌例如下述六株芽孢桿菌屬菌抹混合物的有效劑量在1至lx108cfWml,優選50至lxl07cfti/ml的範圍中。此外，在一個實施方案中，本文涉及的細菌菌抹或混合物與待研究的不期望的;f效生物之間的比例可為l:100，000-100，000:l(菌才朱/混合物:不期望的樣i生物)，優選1:10,000至10,000:1,更優選1:1,000至1,000:1,更優選1:100至100:1，甚至更優選1:10至10:1。通常地，接受高負荷不期望的微生物和營養物質的環境需要高劑量的緩和用細菌菌抹(mitigatingbacteriastrain),而不期望生物體負荷低的環境需要較低劑量的緩和用細菌菌株。此外，例如，防止表面上的生物膜形成或防止水環境中浮遊狀態的形成所需要的相關細菌菌抹的劑量，通常，低於減少相應表面上的生物膜形成或減少相應水環境中已經存在的不期望^f效生物^:所需的劑量。因此，本發明的方法可以用於抑制一種或多種不期望的微生物(優選已經存在在表面上或已經存在於水環境中的細菌)的生長(即，導致生物膜形成的減少)。在另一個實施方案中，本發明涉及防止和/或顯著延遲基本上清潔的表面ii(即，基本上不含不期望微生物的表面)上生物膜的形成和/或基本上清潔的水(即，基本上不含不期望微生物的水環境)中的浮遊增殖。換句話說，相關細菌菌林保護表面和/或水環境將來不生長一種或多種不期望的微生物。本發明的方法可以導致已經存在的不期望微生物的減少或者甚至消除/去除。相關的細菌菌抹在優選實施方案中可以應用於待研究表面和/或定期加入至待研究的水環境中。定期表示本發明的方法可以在一段時間(例如，每分鐘、小時、天、周、月等)內重複或者反覆。如上所述，效果可以不持續長時間。這需要再施用(redosing)細菌菌株。例如，當表面和水環境分別是便器內部表面和便器中的衝洗水時，可(定期)進行再施用，例如，隨每次沖水進行。相關的細菌菌才朱可以，例如，併入唇面區(rimblock)中。本發明的方法還可以如下進行由手動和/或機械使細菌菌抹或包含一種或多種細菌菌抹的組合物(即，混合物)接觸(即，施用或接觸)待研究表面。在優選的實施方案中，可以單獨使用或與其他細菌組合使用的細菌是NRRLB-50014。在優選的實施方案中，可以單獨使用或與其他細菌組合使用的細菌是NRRLB-50015。在優選的實施方案中，可以單獨使用或與其他細菌組合使用的細菌是NRRLB-50016。在優選的實施方案中，可以單獨使用或與其他細菌組合使用的細菌是NRRLB-50017。在優選的實施方案中，可以單獨使用或與其他細菌組合〗吏用的細菌是NRRLB-50018。在優選的實施方案中，細菌菌抹是2007年3月14日保藏的如下保藏菌林中兩種、三種、四種、五種或六種的混合物NRRLB-50014、NRRLB-50015、NRRLB-50016、NRRLB-50017、NRRLB-50018和NRRLB-50019。在另一個優選的實施方案中，細菌菌株是2007年3月14日保藏的如下保藏菌才朱中兩種、三種、四種或五種的混合物NRRLB-50014、NRRLB-50015、NRRLB-50016、NRRLB-50017和NRRLB-50018。應理解的是，本發明的混合物可以或者可以不包含除本發明相關保藏菌林之外的其他菌抹。應理解的是，本發明的混合物可以在本發明相關保藏菌抹之外還包含其他菌抹。一個實例是美國2005/0036990中乂>開的巨大芽孢桿菌(5a"7/wsmegaten'MW)SB-3112(ATCC保藏號PTA-3142)。在一個實施方案中，混合物包含NRRLB-50014、NRRLB-50015、NRRLB-50016、NRRLB-50017、NRRLB-50018和PTA-3142。12不期望的微生物在本發明的上下文中，術語"不期望的微生物"表示可能產生認為對於待研究表面和/或待研究水環境為消極的作用/效果的微生物，特別是在家庭或工業環境中。這樣的消極作用的實例包括氣味、腐蝕、點蝕或材料的其他降解；感染；染色或以其他方式(otherwise)使表面顯得不美M7美感上不愉悅(aestheticallyunpleasing)。不期望的樣i生物還包括病原孩i生物，特別是病原細菌。通過使用有效量的本文相關的一種或多種分離的細菌菌抹，可以減少和/或防止表面上的生物膜形成和/或水環境中的浮遊增殖。在優選的實施方案中，待研究的容易引起生物膜形成的表面可以在任何生物膜形成/建立之前接觸一種或多種細菌菌抹作為預防措施。這會導致生物膜形成明顯減少。或者，如果生物膜已經形成，或者剛剛出現生物膜建立的跡象，可以使用本發明的方法減少進一步的生物膜形成。本發明的方法甚至可能導致生物膜的部分或全部去除。不期望的微生物的實例包括下文所公開的那些。不期望的微生物包括，但不限於，好氧細菌或厭氧細菌，革蘭氏陽性和革蘭氏陰性，真菌(酵母或絲狀真菌)，藻類和/或原生動物。期望的細菌包括選自下組的細菌假單胞菌屬菌種包括銅綠假單胞菌、棕色固氮菌04zoto^cferWwe/a"A7)、大腸4幹菌、白4矣才奉4幹菌(Co/^weZ)ac&n'wm、肉毒才炎菌(C7c^nWww6o^/z>Mm)、MJ求菌屬菌種(5^eptococcwsspp.)、醋酸桿菌屬(JcetoZac/er)、明串J朱菌屬(丄ewco"ostoc)、異型乳酸桿菌亞屬(5eto6a"en'ww7)、月申炎3求菌屬(屍wewmococci^)、結才亥分才支4幹菌(Afyco6ac&Wwm^^eirw/os7'"、氣單胞菌屬(v4eramo"os)、伯克霍爾德氏菌屬(5w狄oWen'a)、黃桿菌屬(F/avo6a"eWwm)、沙、門氏菌屬(Sa/mowe〃a)、葡萄^求菌屬(5"to;/^/ococci^)、孓瓜菌屬菌種、利斯特菌屬菌種(丄&fen'aspp.)和軍團菌屬菌種(丄eg/o"e〃aspp.)。在優選的實施方案中，不期望的微生物是好氧細菌。在更優選的實施方案中，好氧細菌是氣單胞菌屬菌抹。在另一個更優選的實施方案中，好氧細菌是伯克霍爾德氏菌屬菌林。在另一個更優選的實施方案中，好氧細菌是黃桿菌屬菌林。在另一個更優選的實施方案中，好氧細菌是微桿菌屬(Af/crak"en'wm)菌抹。在另一個更優選的實施方案中，好氧細菌是假單胞菌屬菌株。在另一個更優選的實施方案中，好氧細菌是沙門氏菌屬菌林。在另一個更優選的實施方案中，好氧細菌是葡萄球菌屬菌抹。在另一個更優選的實施方案中，好氧細菌來自腸桿菌科(包括例如大腸桿菌)。在最優選的實施方案中，好氧細菌是洋蔥伯克霍爾德氏菌(^^狄oWenhC印flC&)。在另一個最優選的實施方案中，好氧細菌是蛾微桿菌(Mz'cra6a"en'wm/mper/a/e)或結核分枝桿菌。在另一個最優選的實施方案中，好氧細菌是銅綠假單胞菌。在另一個最優選的實施方案中，好氧細菌是螢光假單胞菌(屍化wfifomowayyZwomsce"s)。在另一個最優選的實施方案中，好氧細菌是食油假單胞菌CP"wfifowwoso/eovonms)。在另一個最優選的實施方案中，好氧糹田菌是類產石鹹々i單月包菌(屍sewciomowas/^61^/00/<%/^6"&5)。在另一個最4尤選的實施方案中，好氧細菌是腸炎沙門氏菌(5"a/mo"e〃a。在另一個最優選的實施方案中，好氧細菌是金黃色葡萄球菌OSto;/^/ococc^m^w力。在另一個最優選的實施方案中，好氧細菌是表皮葡萄球菌(&a//zy/ococc^在另一個最優選的實施方案中，細菌是單核細胞增生利斯特菌(ZiWeW"附o"。qytoge"es)。在另一個最優選的實施方案中，細菌是阿德萊德軍團菌(丄e-owe〃aatfeteWe"^)。在另一個最優選的實施方案中，細菌是嗜肺軍團菌(丄eg/o"e〃a;wewm^/z//a)。在另一個最優選的實施方案中，細菌是菲氏軍團菌(丄eg/o"e〃a/ee/e")。在另一個最優選的實施方案中，細菌是摩拉維採軍團菌(丄eg/o"e〃"morav/ca)。在另一個實施方案中，細菌是哈維氏弧菌，費氏弧菌和/或溶藻弧菌。在另一個優選的實施方案中，微生物是厭氧細菌。在另一個更優選的實施方案中，厭氧細菌是脫硫弧菌屬00&^//0*^/0)菌抹。在另一個最優選的實施方案中,厭氧糹田菌是脫石克脫石危弧菌(Z)&sw^/bv/6Wo^fesM^/r/ca"s)。在另一個優選的實施方案中，不期望的微生物是真菌如酵母或絲狀真菌。在另一個更優選的實施方案中，酵母是念珠菌屬(0/w/Wa)菌林。在另一個最優選的實施方案中，酵母是白色念珠菌(Owcfefaa/6/cara)。本發明的組合物本發明還涉及包含本文所述一種或多種保藏細菌的組合物。應理解的是，本發明的組合物可以包含本文所述一種或多種細菌菌林作為單一菌抹或兩種或多種菌抹的混合物，但是還可以包括其他細菌菌林和/或活性成分。在一個實施方案中，組合物進一步包含下述的表面活性劑或一種或多種其他成分。表面活性劑表面活性劑可以是非離子型，包括半極性和/或陰離子和/或陽離子和/或兩性離子型。表面活性劑應對細菌培養物的活性引起儘可能少的危害。表面活性劑可以以按重量計0.01°/。至60%的水平存在於組合物中。當包括於本文中時，組合物通常包含約0至約40%的陰離子表面活性劑，如線性烷基苯磺酸鹽(酯)，a-烯烴磺酸鹽(酯)，烷基硫酸鹽(酯)(脂肪醇硫酸鹽(酯))，醇乙氧基硫酸鹽(酯)，仲烷磺酸鹽(酯)，a-磺基脂肪酸曱酯，烷基或烯基琥珀酸或肥急。當包括於本文時，組合物通常包含從約0至約40%的非離子表面活性劑，如醇乙氧基化物，壬基酚乙醇酯，烷基聚葡糖苷，烷基二曱基胺氧化物，乙氧基化的脂肪酸單乙醇醯胺，脂肪酸單乙醇醯胺，聚羥基烷基脂肪酸醯胺，或葡萄糖胺的N-醯基N-烷基衍生物("葡糖醯胺")。其他成分組合物可以包含一種或多種酶。涵蓋的酶的實例在"酶"部分中提及。其他成分包括，但不限於，M劑、穩定劑、抗微生物劑、香料、染料，和殺生物劑。酶一種或多種酶可以存在於本發明的組合物中。特別期望的酶包括蛋白酶、a-澱粉酶、纖維素酶、脂肪酶、過氧化物酶/氧化酶、果膠酸裂合酶和甘露聚糖酶，或它們的混合物。蛋白酶:合適的蛋白酶包括那些動物、植物或微生物來源的蛋白酶。優選微生物來源。包括化學修飾或蛋白質工程化的突變體。蛋白酶可以是絲氨酸蛋白酶或金屬蛋白酶，優選鹼性微生物蛋白酶或胰蛋白酶樣蛋白酶。鹼性蛋白酶的實例是枯草桿菌蛋白酶(subtilisin)，特別是源自芽孢桿菌屬的那些，例如，枯草桿菌蛋白酶Novo，枯草桿菌蛋白酶Carlsberg，枯草桿菌蛋白酶309，枯草桿菌蛋白酶147和枯草桿菌蛋白酶168(在WO89/06279中描述)。胰蛋白酶樣蛋白酶的實例是WO89/06270與WO94/25583中所述的鐮孢屬15(Fw^n'ww)蛋白酶和胰蛋白酶(例如豬或牛來源的)。有用的蛋白酶的實例是WO92/19729、WO98/20115、WO98/20116和WO98/34946中所述的變體，特別是在下述位置中一個或多個位置具有取代的變體27、36、57、76、87、97、101、104、120、123、167、170、194、206、218、222、224、235和274。優選的商業上可得到的蛋白酶包括ALCALASETM、SAVINASETM、PRIMASETM、DURALASETM、DYRAZYMTM、ESPERASE、EVERLASETM、POLARZYMETM和KANNASE、LIQUANASE(NovozymesA/S)，MAXATASETM、MAXACALTM、MAXAPEMtm、PROPERASETM、PURAFECTTM、PURAFECTOxP、FN2TM和FN3TM(GenencorInternationalInc.)。脂肪酶:合適的脂肪酶包括細菌或真菌來源的那些。包括化學修飾或蛋白質工程化的突變體。有用的脂肪酶的實例包括來自腐質黴屬(Hwm/co/a)(同物異名嗜熱黴屬(77zemw^yce力)的脂肪酶，例如來自疏棉狀腐質黴(//./"""g/"ora(細毛嗜熱黴(r/am/g/"asw))脂肪酶，如EP258068和EP305216中所述，或來自特異腐質黴(H/rao/e"力，如WO96/12580所述，假單胞菌屬脂肪酶，例如來自產鹼假單胞菌(屍《/^//^"^)或類產鹼假單胞菌(￡218272)，洋蔥假單胞菌CPcepada)(EP331376)，施氏假單胞菌(GB1,372,034),螢光假單胞菌，假單胞菌屬菌種SD705(WO95/06720和WO96/27002)，威斯康星假單胞菌OPvWsco附/"^2^)(WO96/12012)，芽孢桿菌屬脂肪酶，例如，來自枯草芽孢桿菌(及swZ^7/力(Dartois等,1993,5/oc/zem/caef5z'o//z;^/caacto1131,253-260)，？耆^\脂肪芽孢桿菌脂肪酶(5.stearaf/2e，o/Mz^)(JP64/744992)或短小芽孢桿菌(及/薩7—(WO91/16422)。其他實例是脂肪酶變體，如WO92/05249，WO94/01541，EP407225,EP260105，WO95/35381，WO96/00292，WO95/30744，WO94/25578，WO95/14783，WO95/22615，WO97/04079和WO97/07202中所述的那些。優選的商業提供脂肪酶包括LIPOLASE和LIPOLASEULTRATM、LIPOZYME和LIPEX(NovozymesA/S)。角質酶:本發明的方法可以在分類為EC3.1.1.74的角質酶的存在下進行。根據本發明使用的角質酶可以是任何來源的。優選微生物來源的角質酶，特別是細菌，真菌或酵母來源的。角質酶是能降解角質的酶。在優選的實施方案中，角質酶源自麴黴屬(J5^erg7'〃w力菌4朱，淨寺另ll是米麴黴(^spe屍g77/w51o/jzae),鏈格孑包黴屬(j/ten^n'")菌抹，特別是蕓薹鏈格孢04/fewaW"6ra^c/o/a),鐮孢屬(i^saWww)菌4朱，特別是腐皮鐮孢(Fwsar/wmso/aw.)，豆宛豆腐皮鐮孑包(屍i^"n'wwso/ara'p/w〕，大刀粉紅鐮孑包(FwsGn'M附ra化wwcw/worwm)，或並分糹工鐮孑包才妄骨木亞種(Fws(3n'ww^w6wc/wm),長蠕孢屬(//e/w/"決o^orwm)菌才朱，特另'J是小麥長蠕孢菌(T/e/m/wAosporwmsadvMm)，腐質黴屬(/7"w7/co/a)菌才朱,4寺另ll是對爭異腐質黴，，支單胞菌屬CPse^fomo"os)菌抹，特別是門多薩假單胞菌(屍化i^fomo"oswe"&d加)，或惡臭假單胞菌，絲核菌屬(i/^octom'a)菌林，特別是立枯絲核菌(W/7/zoctow/aso/am〕，鏈黴菌屬(5^^tomjcay)菌才朱，特另'J是痴痂鏈黴菌(5^eptomycessca6^)，或細基格孢屬(Woc/a&ww)菌抹，特別是群生細基格孢(t//oc/^^w7comoW/a/e)。在最優選的實施方案中，角質酶源自特異腐質黴菌抹，特別是特異腐質黴菌抹DSM1800。特異腐質黴角質酶在WO96/13580中描述，其通過提述併入本文。角質酶可以是變體，如WO00/34450和WO01/92502中所公開的變體之一，所述文獻通過提述併入本文。優選的角質酶變體包括WO01/92502的實施例2中列出的變體，所述文獻通過提述併入本文。優選的商業角質酶包括NOVOZYMTM51032(可從NovozymesA/S,Denmark獲得)。可以在分類為EC3.1.1.4和/或EC3丄1.32的磷脂酶存在時進行本發明的方法。如本文所使用的，術語磷脂酶是具有針對磷脂的活性的酶。磷脂，如卵磷脂或磷脂醯膽44，由在外部(sn-l)和中部(sn-2)位置用兩個脂肪酸酯化的和在第三個位置用磷酸酯化的甘油組成；磷酸又可以酯化成為氨基醇。磷脂酶是參與磷脂水解的酶。可以識別幾種類型的磷脂酶活性，包括磷脂酶A,和A2，其將一個脂肪醯基(分別在sn-l和sn-2位置)水解形成溶血磷脂；而溶血磷脂酶(或磷脂酶B)能將溶血磷脂中剩餘的脂肪醯基水解。磷脂酶C和磷脂酶D(磷酸二脂酶)分別釋放二醯基甘油或磷脂酸。術語磷脂酶包括具有磷脂酶活性的酶，例如，磷脂酶A(Ai或A。，磷脂酶B活性，磷脂酶C活性或磷脂酶D活性。本文與本發明一起使用的術語"磷脂酶A，，意^l涵蓋具有磷脂酶A,和/或磷脂酶A2活性的酶。可以同樣地由具有其他活性如具有磷脂酶活性的脂肪酶提供磷脂酶活性。磷脂酶活性可以，例如，來自具有磷脂酶副活性(sideactivity)的脂肪酶。在本發明的其他實施方案中，由基本上僅具有磷脂酶活性的酶提供磷脂酶酶活性，其中磷脂酶酶活性不是副活性。磷脂酶可以是任何來源的，例如，動物(如哺乳動物)來源的，例如，來自胰臟(例如，牛或豬胰臟)，或蛇毒或蜜蜂毒液。優選地，磷脂酶可以是微生物來源的，例如，來自絲狀真菌、酵母或細菌，如以下的屬或種麴黴屬，例如，黑麴黴(Aw'ge。，網柄菌屬(D/c^wfe"Mm)，例如盤基網柄菌(Z).flfaco/^fewm);毛黴屬(Mwc。r)，例如爪唾毛黴(M高大毛黴(Mwwcecfo)，細孑包毛黴(Mrate'fcw'wus)，脈孢菌屬(7Vewrai^ora)，例如4且闢造脈孑包菌(iV.cra^a)，才艮毛黴屬(A/2/zowwcor)，例如，微小才艮毛黴(兄；^/〃w力；根黴屬(i/7&qf^)，例如，少才財艮黴(尺.a^r/2iz"力，曰本根黴(i.j'apow/cw力，葡枝根黴(i.Wo/o"^r);核盤菌屬(5Weraft'm'G)，例如，白腐核盤菌(S.//6eW/a朋)；毛褲菌屬(7h'c/zop/^to"),例如，紅色毛褲菌(rn^rww);維氏核盤菌屬(附etee/Z"/a),例如，Ksc/era"www;芽孢桿菌屬，例如，巨大芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌；檸檬酸細菌屬(CV的kc欲)，例如，弗氏檸檬酸細菌(C.>eww<i//);腸桿菌屬(五"fera6acfer),例如，產氣腸桿菌(￡,aeragewas)，陰溝腸桿菌(Ec/oacae);愛德華菌屬(五cw"ra^W/a)，遲緩愛德華菌(Eto"ia);歐文氏菌屬(五nW"/a)，例如，草生歐文氏菌(E/ze^/co/a);埃希氏菌屬(&cfen'c/^),例如大腸桿菌；克雷伯氏菌屬(《MmW/a),例如，肺炎克雷伯氏菌(jwewwom'ae);變形桿菌屬(/Voew)，例如，普通變形桿菌(戶vw/gan》；普羅維登斯菌屬(/VovWe"da)，例如，斯氏普羅維登斯菌(P沙門氏菌屬，例如，鼠傷寒沙門氏菌(51.(vp/w'wwWww);沙雷氏菌屬(5^ra^)，例如，液化沙雷氏菌(S./z々we^wc/era),粘質沙雷氏菌(5".warcascera);志賀氏菌屬GS7z/ge〃a)，例如，弗氏志賀氏菌(51.yfec"en〕；鏈黴菌屬，例如，紫紅鏈黴菌(5".Wo/eceon^e。；耶爾森氏菌屬(Jera^'a)，例如，小腸結腸耶爾森氏菌(Jfe"teraco/衍ca)。因此，磷脂酶可以是真菌的，例如，來自核菌綱(/yewowycetes)，如鐮孢屬，如大刀鐮孑包(Fcw/worww)、異孢鐮孢(F/7etemsponw7)、腐皮鐮孢的菌林或尖鐮孢(Foxy^oram)的菌林。磷脂酶還可以來自麴黴屬中的絲狀真菌菌抹，如泡盛麴黴(」5/grg7'〃WSfl而WW7')，臭麴黴(^/erg7-〃Wy^油力，日本麴黴(AspergW/us)(3pOW'CM力,，繁、麴黴或米麴黴的菌才朱。優選的磷脂酶源自腐質黴菌抹，特別是疏棉狀腐質黴。磷脂酶可以是變體，如WO00/32758中公開的變體之一，其通過提述併入本文。優選的磷脂酶變體包括WO00/32758中列出的變體，其通過提述併入本文。在另一個優選的實施方案中，磷脂酶是WO04/111216中所述的磷脂酶，特別是實施例118中表格所列的變體。在另一個優選的實施方案中，磷脂酶源自鐮孢屬，特別是尖鐮孢的菌林。磷脂酶可以是WO98/026057中涉及的示於SEQIDNO:2源自尖鐮孢DSM2672的磷脂酶，或其變體。在本發明的優選實施方案中，磷脂酶是磷脂酶A,(EC.3丄1.32)。在本發明的另一個優選實施方案，磷脂酶是磷脂酶A2(EC.3丄1.4)。商業磷脂酶的實例包括LECITASETM和LECITASETMULTRA，YIELSMAX,或LIPOPANF(可從NovozymesA/S,Denmark獲得)。澱粉酶:合適的澱粉酶包括那些細菌或真菌來源的澱粉酶。包括化學修飾或蛋白質工程化的突變體。澱粉酶包括，例如，從芽孢桿菌例如地衣芽孢桿菌CS.//c/2em/0w^)的特定菌株獲得的a-澱粉酶，其在GB1,296,839中詳細描述，或者在WO95/026397或WO00/060060中公開的芽孢桿菌屬菌種菌林。優選的澱粉酶的實例是WO94/02597，WO94/18314，WO96/23873，WO97/43424，WO01/066712,WO02/010355，WO02/031124和WO2006/002643中所述變體(通過提述全部併入本文)。商業上可得到的澱粉酶為DURAMYL,TERMAMYL,TERMAMYLULTRA，NATALASE，SIAINZYMETM,S丁AINZYMEULTRA，FUNGAMYLtm和BAN(NovozymesA/S),RAPIDASEtm和PURASTARTM沐自GenencorInternationalInc.)。纖維素酶:合適的纖維素酶包括那些細菌或真菌來源的纖維素酶。包括化學修飾或蛋白質工程化的突變體。合適的纖維素酶包括來自芽孢桿菌屬、假單胞菌屬、腐質黴屬、鐮孢屬、梭孢殼屬(77z/e/av/a)、枝頂孢黴屬04cremom'ww)的纖維素酶，例如由特異腐質黴、土生梭孢黴(777/e/av/a/wm^n:j)、嗜熱毀絲黴(^^"//0//^20〃"Aem7op/n7a)和尖鐮孢產生的真菌纖維素酶，其公開於US4,435,307，US5,648,263，US5,691,178，US5,776,757，WO89/09259,WO96/029397和WO98/012307中。特別合適的纖維素酶是具有色彩保護益處的鹼性或中性纖維素酶。這種纖維素酶的實例是EP0495257，EP0531372,W096/11262,W096/29397,WO98/08940中所述纖維素酶。其他實例是纖維素酶變體，如WO94/07998，EP0531315，US5,457,046，US5,686,593，US5,763,254,WO95/24471，WO98/12307和WO1999/001544中所述。商業上可得到的纖維素酶包括CELLUZYME,CELLUCLASTTM，CAREZYME，ENDOLASE,RENOZYME(NovozymesA/S)，CLAZINASETM和PURADAXHATM，ACCELERASETM1000(GenencorInternationalInc.),和KAC-500(B)TM(KaoCorporation),過氧化物酶/氧化酶:合適的過氧化物酶/氧化酶包括那些植物、細菌或真菌來源的酶。包括化學修飾或蛋白質工程化的突變體。有用的過氧化物酶的實例包括來自鬼傘屬(0j^/"^),例如來自灰蓋鬼傘(C."'"ew"》的過氧化物酶及其變體，如WO93/24618、WO95/10602和WO98/15257中所述。商業上可得到的過氧化物酶包括GuardzymeTM和NovozymTM51004(NovozymesA/S)。果膠酸裂合酶(也稱作多聚半乳糖醛酸裂合酶):果膠酸裂合酶的實例包括已經從不同細菌屬如歐文氏菌屬、假單胞菌屬、克雷伯氏菌屬和黃單孢菌屬(la"Ao/w"a力，以及從枯草芽孢桿菌(Nasser等，1993，F五5S丄eto.335:319-326)和芽孢桿菌屬菌種YA-14(Kim等，1994，B/ofec/7.所oc/ze肌58:947-949)克隆的果膠酸裂合酶。也已經描述了由短小芽孢桿菌(Dave和Vaughn,1971,Sacter/o/.108:166-174)、多粘芽孢桿菌(5.po(ym;aa)(Nagel和Vaughn,1961,jrc/z.歷oc/em.所op/z;^.93:344-352)、嗜熱脂肪芽孢桿菌(Karbassi和Vaughn,1980,Ca"./MzcraWo/.26:377-384)、芽孢桿菌屬菌種RK9(Kelly和Fogarty，1978,C朋.JM/cra&o/.24:1164-1172)產生的在8-10的pH範圍中具有最大活性的果膠酸裂合酶的純化。上述任一種酶，以及二價陽離子-非依賴性和/或熱穩定的果膠酸裂合酶，可用於本發明的實施。在優選的實施方案中，果膠酸裂合酶包含Heffron等，1995,Mo/.P/aW-M/craZ^/"&rac/.8:331-334和Henrissat等，1995,屍/朋fP/^w'o/.107:963-976中公開的果膠酸裂合酶的胺基酸序列。特別期望的果膠酸裂合酶公開於WO99/27083和WO99/27084中。其他衍生自地衣芽孢桿菌的特別期望的果膠酸裂合酶在美國專利6,284,524(所述文獻通過提述併入本文)中作為SEQIDNO:2公開。特別期望的果膠酸裂合酶變體公開於WO02/006442中，特別是WO02/006442(所述文獻通過提述併入本文)的實施例中公開的變體。商業上可得到的鹼性果膠酸裂合酶的實例包括來自NovozymesA/S，Denmark的BIOPREPtm和SCOURZYMEtmL。甘露聚糖酶:甘露聚糖酶(EC3.2丄78)的實例包括細菌和真菌來源的甘露聚糖酶。在特定的實施方案中，甘露聚糖酶衍生自絲狀真菌麴黴屬，優選黑麴黴或棘孢麴黴(A;^w"/wacw/e"/w力(WO94/25576)的菌抹。WO93/24622公開了分離自裡氏木黴(7Wc/7o&rwflree化0的甘露聚糖酶。從幾種細菌中也分離出了甘露聚糖酶，包括芽孢桿菌屬生物。例如，Talbot等，1990，M/cra&o/.56(11):3505-3510描述了源自嗜熱脂肪芽孢桿菌的p-甘露聚糖酶。Mendoza等，1994,M/craWo/.Aofec/z.10(5):551-555描述了源自枯草芽孢桿菌的(3-甘露聚糖酶。JP-A-03047076公開了源自芽孢桿菌屬菌種的卩-甘露聚糖酶。JP-A-63056289描述了鹼性熱穩定P-甘露聚糖酶的產生。JP-A-63036775涉及產生p-甘露聚糖酶和|3-甘露糖苷酶的芽孢桿菌屬微生物FERMP-8856。JP-A-08051975公開了來自嗜鹼芽孢桿菌AM-001的鹼性卩-甘露聚糖酶。WO97/11164中公開了來自解澱粉芽孢桿菌(^flc/〃usam^y/o/^we/ac^""的純化的甘露聚糖酶。WO91/18974描述了半纖維素酶，如有活性的葡聚糖酶，木聚糖酶或甘露聚糖酶。期望的是源自WO99/64619中公開的5ac/〃wagarad/wera、地衣芽孢桿菌、耐鹽芽孢桿菌(5ac〃/ws/a/o^ram)、克勞氏芽孢桿菌C6ac/〃1^c/aww7)、芽孢桿菌屬菌種和特異腐質黴的鹼性家族5和26甘露聚糖酶。特別期望的是WO99/64619的實施例中涉及的芽孢桿菌屬菌種甘露聚糖酶，所述文獻通過提述併入本文。商業上可得到的甘露聚糖酶的實例包括可從NovozymesA/SDenmark獲得的MANNAWAYTM。材料與方法用作緩沖液和試劑的化學品是至少試劑級的商業產品。平板計數培養液(PlateCountBroth)(Difco275120)MacConkey瓊脂(SmithRiverBiologicals,Ferrum,VAcat#l1-00380)Luria培養液(Difco241420)標準方法瓊脂平板(SMA平板)(SmithRiverBiologicals,Ferrum,VAcat#11-00450)細菌菌抹-芽孢桿菌屬混合物(6BB):六種芽孢桿菌屬菌種菌株的混合物，由下述保藏菌抹組成:NRRL#B-50014(30°/。)，B-50015(30%)，B-50016(10%)，B-50017(10%),B-50018(10%)，B-50019(腦)6BB混合物中菌抹之間的實際比例在括號中表示(x0/。)。-銅綠假單胞菌在所有實施例中使用的銅綠假單胞菌配有組成型表達綠色螢光蛋白的質粒，菌林如Nivens等，2001，/183:1047-1057所述構建。-蒙氏假單胞菌(ATCC700412)-惡臭假單胞菌(ATCC49451)-哈維氏弧菌(ATCC25919)-溶藻弧菌(ATCC17749)-費氏弧菌(MJ-1):野生型菌林生物材料的保藏已經依據布達佩斯條約的規定將生物材料保藏於-美國典型培養物保藏中心(ATCC),10801UniversityBlvd.,Manassas,VA20108,USA.，和-用於農業利用研究的微生物基因組和生物加工研究單位(NRRL)國家中心(農業研究培養物保藏中心)，1815N.UniversityStreet,Peoria，IL61604,USA。-細菌菌株給出了下述登錄號#鑑定登錄號保藏日期解澱粉芽孢桿菌PTA-75412006年4月20日解澱粉芽孢桿菌PTA-75422006年4月20日萎縮芽孢桿菌(5dfd〃w51a^op/z(3ew力PTA-75432006年4月20日解澱粉芽孢桿菌PTA-75442006年4月20日解澱粉芽孢桿菌PTA-75452006年4月20日解澱粉芽孢桿菌PTA-75462006年4月20日枯草芽孢桿菌枯草亞種PTA-75472006年4月20日PTA-75482006年4月20日解澱粉芽孢桿菌PTA-75492006年4月20日簡單芽孢#幹菌(5a"7/ws57'附p/ex)PTA-75502006年4月20曰筒單芽孢桿菌PTA-77892006年8月18曰解澱粉芽孢桿菌PTA-77902006年8月18日解澱粉芽孢桿菌PTA-77912006年8月18日22tableseeoriginaldocumentpage23菌抹於下述條件下保藏確保在本專利申請未決期間，由專利與商標委員依據37C.F.R.§1.14和35U.S.C.§122授權的人能夠獲得該培養物。該保藏物代表純的培養物。在提交了該申請的副本或其後續文本的國家，依據該外國專利法律的要求，可以獲得該保藏物。然而，應當理解，保藏物的獲得並不構成對實施本發明的許可，實施本發明是對政府行為所授予的專利權的侵犯。保藏於ATCC的細菌菌林源自分離的天然存在的細菌菌抹。所有菌抹都於2005年在美國收集。對於保藏於NRRL的細菌菌抹，兩抹收集自美國的土壤(作為NRRLB-50017和NRRLB-50018保藏)，四抹來自美國培養物保藏中心。我們相信NRRLB-50014與ATCC#23842相同；NRRLB-50015與ATCC#21415相同；NRRLB-50016與NRRLB-4064;而且NRRLB-50019=NRRLB3254。菌抹可以由休眠細菌孢子和/或活細菌組成。設螢光動力學微量滴定板閱讀器(BioTekSynergyHT-I)聚碳酸酯支架(BiosurfacesTechnology,USA)磁掛片(porcelaincoupon)(TylerResearchInstrumentsCorp.,EdmontonAlberta,Canada)寬口試管(Fishercat#NC9421998,Pittsburg,PA，USA)實施例實施例1在芽孢桿菌屬混合物〖6BB)存在時假單胞菌屬的浮遊增殖-螢光微量滴定板(FMP)用200微昇平板計數培養液(DifcoDF0751-17-2)裝滿96孔微量滴定板的孑L，並用配有組成型表達綠色焚光蛋白的質粒的銅綠假單胞菌接種。向孔中加入六種芽孢桿菌屬菌種的混合物(6BB)。假單胞菌屬的初始劑量是2.4xlS或2.4x108cfb/ml，而芽孢桿菌屬菌種劑量為6.8乂106至1.0xl07cfWml,使假單胞菌屬:芽孢桿菌屬的比例為24:1和70:1。用螢光動力學微量滴定板閱讀器(BioTekSynergyHT-I)追蹤微量滴定板，在21。C溫育並在485/20nm激發波長，528/20nm發射波長處讀螢光值，每20分鐘讀數，進行43小時。得到的螢光動力學曲線顯示gfy螢光的芽孢桿菌屬劑量依賴性抑制(即，假單胞菌屬群落抑制)(圖1)。實施例2在芽孢桿菌屬混合物存在時假單胞菌屬生物膜形成和浮遊增殖的減少-試管+掛片生物對照(TTCBC)將帶有三個覺掛片(TylerResearchInstrumentsCorp.,Edmonton,Alberta)的聚碳酸酉旨支架(BiosurfacesTechnology)4悉入寬口i式管(Fishercat#NC9421998)，並加入根據標籤說明製成的50mL平板計數培養液(DifcoDF0751-17-2)，並高壓滅菌。用芽孢桿菌屬孢子的混合物接種試管，並在28。C以溫和攪拌溫育過夜，從而使其萌發(germination)。芽孢桿菌屬孢子的初始劑量從2.6xl02至7.8xl05cfU/mL。第二天，以70cfU/ml的濃度向試管加入表達gfp的銅綠假單胞菌菌林，使假單胞菌屬:芽孢桿菌屬初始接種比例為1:3.5至1:10,000。在另外培養24和48小時後，通過如下方式對試管進行破壞性取樣將每個掛片(生物膜細胞)刮入磷酸鹽緩衝鹽水中，將懸浮液均質化，然後稀釋並塗布在MacConkey瓊脂(DifcoDF0075-17-1)上，僅計數假單胞菌屬細胞。還對試管中的培養液(浮遊細胞)取樣、稀釋並塗布。存在芽孢桿菌屬菌種時的假單胞菌屬計數與不存在芽孢桿菌屬菌種的陰性對照比較，應注意的是，芽孢桿菌屬菌種處理導致生物膜(圖2)和浮遊狀態(圖3)中假單胞菌屬群落顯著的且為粗略地劑量依賴實施例3在芽孢桿菌屬分離菌株存在時假單胞菌屬生物膜形成和浮遊增殖的減少-試管+掛片生物對照(TTCBC)24將帶有三個資掛片(TylerResearchInstrumentsCorp.,Edmonton,Alberta)的聚碳酸酯支架(BiosurfacesTechnology)插入寬口試管(Fisherca說NC9421998)，並加入根據標籤說明製成的50mL平板計數培養液(DifcoDF0751-17-2),並高壓滅菌。用各種芽孢桿菌屬候選菌抹的過夜營養細胞培養物和配有gfp質粒的銅綠假單胞菌的過夜培養物接種每個試管。在28。C以溫和攪拌溫育試管。芽孢桿菌屬細胞的初始劑量在1.0xlS至8.2xl05cfb/mL的範圍內，而假單胞菌屬的初始劑量為約lxl(^至lxl05。假單胞菌屬與芽孢桿菌屬的比例為1:2至1:147。在培養的時間點24和48小時，通過如下方式對試管進行破壞性取樣將每個掛片(生物膜細胞)刮入磷酸鹽緩衝鹽水中，將懸浮液均質化，然後稀釋並塗布在MacConkey瓊脂(DifcoDF0075-17-1)上，僅計數假單胞菌屬細胞。還對試管中的培養液(浮遊細胞)取樣、稀釋並塗布。存在芽孢桿菌屬菌種時假單胞菌屬計數與不存在芽孢桿菌屬菌種的陰性對照比較，並對於浮遊和附著細胞，計算在24和48小時時對於每種芽孢桿菌屬候選菌抹的假單胞菌屬的log對照。log對照Iog對照log對照log對照菌林P:B比例l:xB24小時浮遊24小時附著48小時浮遊48小時附著PTA-75449.53.42.25.44.1PTA-779022.83.01.95.14.4PTA-7791854.82.74.54.8PTA-77924.23.23.05.44.0PTA-7549147.14.53.76.04.3PTA-75422,82.92.85.84.5PTA-75453.73.63.27.15.3NRRLB-50017233.12.45.84.4NRRLB-500164.80.91.40.60.5實施例4在芽孢桿菌屬分離菌抹存在時大腸桿菌生物膜形成和浮遊增殖的減少-試管+掛片生物對照(TTCBC)將帶有三個瓷掛片的聚碳酸酯支架(BiosurfacesTechnology)插入寬口試管(Fishercat#NC9421998)，並加入根據標籤說明製成的50mL平板計數培養液(DifcoDF0751-17-2),並高壓滅菌。用各種芽孢桿菌屬候選菌株的過夜營養25細胞培養物和大腸桿菌的過夜培養物接種每個試管。在28。C以溫和攪拌溫育試管。芽孢桿菌屬細胞的初始劑量從L0xlS至8.2x105cfli/mL，而大腸桿菌的初始劑量為lxl3至lx105。大腸桿菌與芽孢桿菌屬的比例為1:0.6至1:32。在培養的時間點24和48小時，通過如下方式對試管進行破壞性取樣將每個掛片(生物膜細胞)刮入磷酸鹽緩衝鹽水中，將懸浮液均質化，然後稀釋並塗布在MacConkey瓊脂(DifcoDF0075-17-1)上以僅計數大腸桿菌細胞。還對試管中的培養液(浮遊細胞)取樣、稀釋並塗布。存在芽孢桿菌屬菌種時大腸桿菌計數與不存在芽孢桿菌屬菌種的陰性對照比較，並對於浮遊和附著細胞，計算在24和48小時時對於每種芽孢桿菌屬候選菌抹的大腸桿菌的log對照。tableseeoriginaldocumentpage26實施例5Petri平才反大腸4幹菌卞卩制區(zoneofinhibition)芽孢桿菌屬候選菌林在平板計數培養液中生長18至24小時，獲得約107至108cfu/mL。將生長18至24小時的大腸桿菌(約108至101Gcftj/mL)劃線，以在標準方法瓊脂平板(SMA板)(SmithRiverBiologicals,Ferrum，VA)的表面上形成菌苔(lawn)，並用無菌不鏽鋼鋼管在瓊脂中鑽四個5mm的孔。向孔中加入50微升每種芽孢桿菌屬液體培養物(每孔1種菌林)，並將平板在35。C溫育18至48小時，瓊脂面朝下(agarsidedown)。將孔周圍受抑制的大腸桿菌菌苔評分為芽孢桿菌屬候選菌抹的陽性生物對照。以毫米(mm)測量抑制區以半定量評i"介對照。將可辨別的抑制>1mm評分為陽性。tableseeoriginaldocumentpage26tableseeoriginaldocumentpage27菌(ATCC700412)和惡臭假單胞菌(ATCC49451)(約108至101GcfWmL培養物)以在標準方法瓊脂平板的表面上形成菌苔，並用無菌不鏽鋼鋼管在瓊脂中鑽四個5mm的孔。向孔中加入50微升芽孢桿菌屬液體培養物，並將平板在35。C溫育18至48小時，瓊脂面朝下。將孔周圍受抑制的假單胞菌屬菌苔評分為芽孢桿菌屬候選菌抹的陽性生物對照。也以毫米(mm)測量抑制區以半定量評價對照。將可辨別的抑制>1mm評分為陽性。tableseeoriginaldocumentpage28使用紅色沙雷氏菌(5^ra"an^Wae")(ATCCZ7S93)作為指示細菌，因為它的色素依賴於完整的(intact)群體感應途徑。群體感應化合物使細菌"交流"並影響表型如色素形成(pigmentation)、運動性(motility)、致病性(pathogenicity)和生物膜形成，因此群體感應抑制是生物膜控制的作用模式。芽孢桿菌屬候選菌抹在平板計數培養液中35。C生長18至24小時，至約107cfu/mL的密度。將枯草芽孢桿菌屬點樣(IO微升)在標準方法瓊脂平板(SmithRiverBiologicals,Ferrum,VA)上，並在26。C溫育18至24小時，此後菌落是可見的。向5mL0.5%融化的LB瓊脂(Luria培養液30.5g/L和0.5%諾布爾瓊脂)中加入沙雷氏菌屬培養物(5微升)(Luri培養液，18至24小時，26。C,約107cfU/ml)，充分混合，並傾倒在包含成熟芽孢桿菌屬候選菌落的平板上。瓊脂凝固(set)後，將平板在26。C溫育18至24小時。對QSI將色素形成受抑制而沙雷氏菌生長本身不受抑制的區域評分為陽性，並測量它們的外徑(fulldiameter)用作半定量結果。_tableseeoriginaldocumentpage28tableseeoriginaldocumentpage29實施例9CDC生物膜反應器中存在芽孢桿菌屬候選菌抹時對假單胞菌屬生物膜和浮遊細胞增殖的控制向帶有資才圭片(TylerResearchInstrumentsCorp.,Edmonton,Alberta)的CDC生物膜反應器(BiosurfacesTechnology,Bozeman,MT,Cat弁CBR卯-2)裝入400ml平板計數培養液並高壓滅菌。向兩個反應器中冷卻的培養基中加入PTA-7546孢子(反應器中的初始劑量二4.5x105cfu/mL)，以室溫溫育下預萌發(pregermination)24小時，在假單胞菌屬加入前將攪拌棒設為60rpm。不接種芽孢桿菌屬的情況下，處理另外兩個反應器作為對照。銅綠假單胞菌在平板計數培養液中過夜生長，然後向全部四個反應器中加入20微升假單胞菌屬培養物的1:100稀釋物(3590cfii/mL),得到的共培養比例為1份布支單胞菌屬:127份芽孢桿菌屬。生長24小時後，培養基再加入(mediaredosing)以3mL/min的速率開始稀釋平板計數培養液(lg/L濃度)。將攪拌設定為60rpm。一天後(開始共培養兩天後)，從每個反應器取液體樣品，稀釋並塗布在Maconkey瓊脂上，在35。C溫育約18小時以獲得革蘭氏陰性菌(=有支單胞菌屬=不期望的微生物)計數。類似地，用無菌木製塗棒刮削掛片，將刮削物(scraping)懸浮於無菌磷酸鹽緩沖液中，均質化，稀釋並塗布於在35。C溫育18小時的MacConkey瓊脂上。比較了經處理和未處理反應器中的假單胞菌屬計數，以計算"芽孢桿菌屬反應器中的log控制"。tableseeoriginaldocumentpage30實施例10再加入芽孢桿菌屬孢子的CDC生物膜反應器中存在芽孢桿菌屬候選菌抹時對假單胞菌屬生物膜和浮遊細胞增殖的控制向帶有覺掛片(TylerResearchInstrumentsCorp.,Edmonton,Alberta)的CDC生物膜反應器(BiosurfacesTechnology,Bozeman，MT，Cat弁CBR90-2)裝入400ml平板計數培養液(全濃度(fbllstrength))並高壓滅菌。向兩個反應器中冷卻的培養基中加入PTA-7545(實驗l)或NRRLB^OOn(實驗2)孢子以在假單胞菌屬加入之前在室溫以60rpm攪拌棒攪拌預萌發24小時(反應器實驗1中的初始芽孢桿菌屬劑量4.3x105cfb/ml，實驗2中為1012cfu/ml)。不接種芽孢桿菌屬的情況下，處理另外兩個反應器作為對照。銅綠假單胞菌在平板計數培養液中過夜生長，然後向全部四個反應器中加入20微升假單胞菌培養物的1:100稀釋物(實驗1為127cfU/ml，實驗2為lx105cfti/ml)，實驗1得到的共培養比例為1份假單胞菌屬:104份芽孢桿菌屬，實驗2為1:0.1。生長24小時後，培養基再加入以90ml/15min的速率開始稀釋平板計數培養液(lg/L濃度)，每小時稀釋15分鐘。對於經處理的反應器，以1.5ml孢子濃度歷時2.7小時的速率加入芽孢桿菌屬孢子，使實驗1的終濃度為l.lxl08cfti芽孢桿菌屬孢子/天，實驗2為1.8xlO、fU芽孢桿菌屬孢子/天。將攪拌設定為60rpm。一天後(開始共培養兩天後)，從每個反應器取液體樣品，稀釋並塗布在Maconkey瓊脂上，在35。C溫育約18小時以獲得革蘭氏陰性菌(不期望的生物)計數。類似地，用無菌木製塗棒刮削掛片，將刮削物懸浮於無菌磷酸鹽緩衝液中，均質化，稀釋並塗布於在35。C溫育18小時的MacConkey瓊脂上。比較了經處理和未處理反應器中的假單胞菌屬計數，以計算"芽孢桿菌屬反應器中的log控制"。tableseeoriginaldocumentpage31實施例11Petri平板哈維氏弧菌抑制區芽孢桿菌屬候選菌株在營養培養液(3g/L牛肉提取物，5g/L蛋白腖)中在35。C生長18-24小時。哈維氏弧菌ATCC25919在加入1.5%NaCl的營養培養液中在28。C生長18-24小時。將加入1.5%NaCl的營養瓊脂(1.5%瓊月旨)以25mL的等分試樣高壓滅菌，並向熔融瓊脂的每個等分試樣中加入250微升過夜培養的弧菌屬培養物，使弧菌屬在瓊脂中達到約lx106cfu/mL。在瓊脂凝固後，使用一塊無菌不鏽鋼管件在每個平板中打四個孔。將50微升每種過夜的芽孢桿菌屬培養物轉移至每個孔中。將平板(瓊脂面朝下)在28。C溫育18-24小時。測量弧菌屬菌莒的抑制區。將可辨別的抑制X).5mm評分為陽性。tableseeoriginaldocumentpage31實施例12Petri平板溶藻弧菌的抑制區芽孢桿菌屬候選菌抹在營養培養液(3g/L牛肉提取物，5g/L蛋白腖)中在35。C生長18-24小時。溶藻弧菌ATCC17749在加入1.5%NaCl的營養培養液中在28。C生長18-24小時。將加入1.5%NaCl的營養瓊脂(1.5%瓊脂)以25mL的等分試樣高壓滅菌，並向熔融瓊脂的每個等分試樣中加入250微升過夜弧菌屬培養物，使弧菌屬在瓊脂中達到約lx106cfti/mL。在瓊脂凝固後，使用一塊無菌不鏽鋼管件在每個平板中打四個孔。將50微升每種過夜芽孢桿菌屬培養物轉移至每個孔中。將平板瓊脂面朝下在28。C溫育18-24小時。測量弧菌屬菌苔的抑制區。將可辨別的抑制>0.5mm評分為陽性。tableseeoriginaldocumentpage32實施例13Petri平板費氏弧菌抑制區芽孢桿菌屬候選菌抹在營養培養液(3g/L牛肉提取物，5g/L蛋白腖)中在35。C生長18-24小時。費氏弧菌在加入1.5%NaCl的營養培養液中在28。C生長18-24小時。將加入1.5%NaCl的營養瓊脂(1.5%瓊脂)以25mL的等分試樣高壓滅菌，並向熔融瓊脂的每個等分試樣中加入250微升過夜弧菌屬培養物，使弧菌屬在瓊脂中達到約lx106cfo/mL。在瓊脂凝固後，使用一塊無菌不鏽鋼管件在每個平板中打四個孔。將50微升每種過夜芽孢桿菌屬培養物轉移至每個孔中。將平板瓊脂面朝下在28。C溫育18-24小時。測量弧菌屬菌莒的抑制區。將可辨別的抑制>0.5mm評分為陽性。tableseeoriginaldocumentpage33權利要求1.用於防止和/或減少表面上生物膜形成的方法，包括使所述表面接觸選自下組的一種或多種細菌菌株具有保藏登錄號NRRLB-50014的菌株；具有保藏登錄號NRRLB-50015的菌株；具有保藏登錄號NRRLB-50016的菌株；具有保藏登錄號NRRLB-50017的菌株；具有保藏登錄號NRRLB-50018的菌株；具有保藏登錄號PTA-7541的菌株；具有保藏登錄號PTA-7542的菌株；具有保藏登錄號PTA-7543的菌株；具有保藏登錄號PTA-7544的菌株；具有保藏登錄號PTA-7545的菌株；具有保藏登錄號PTA-7546的菌株；具有保藏登錄號PTA-7547的菌株；具有保藏登錄號PTA-7549的菌株；具有保藏登錄號PTA-7790的菌株；具有保藏登錄號PTA-7791的菌株；具有保藏登錄號PTA-7792的菌株；具有保藏登錄號PTA-7793的菌株；或這些菌株中兩種或多種的混合物。2.權利要求l的方法，其中所述菌抹具有與所保藏的菌林之一或其中兩種或多種的混合物基本上相同的性質。3.權利要求1或2的方法，其中表面是硬表面，優選由選自下組的一種或多種材料製成金屬、塑料、橡膠、板、玻璃、木材、紙、混凝土、巖石、大理石、石膏和陶瓷材料，如瓷；或軟表面，優選由選自下組的一種或多種材料製成纖維，例如，紗、織物、植物纖維；石棉，毛髮；皮膚；角質材料；和體內器官，例如，肺；或多孔表面。4.權利要求1-3中任一項的方法，其中硬表面是便器；便器水箱；冷卻塔；水處理裝置；水槽；奶製品、食品加工裝置；化學或藥物加工裝置；或醫療設備。5.權利要求1-4中任一項的方法，其中由一種或多種不期望的樣i生物，優選細菌，如病原細菌引起生物膜形成。6.權利要求5的方法，其中不期望的微生物，優選細菌，引起所述材料的腐蝕、點蝕、降解；感染；染色或者以其他方式使表面顯得不美X^。7.權利要求1-6中任一項的方法，其中所述方法是定期重複的。8.權利要求1-7中任一項的方法，其進一步包括使所述表面接觸酶，優選選自下組的酶蛋白酶、a-澱粉酶、纖維素酶、脂肪酶、過氧化物酶/氧化酶、果膠酸裂合酶和甘露聚糖酶，或其混合物。9.權利要求1-8中任一項的方法，其進一步包括使所述表面接觸選自下組的一種或多種作用劑分散劑、表面活性劑、抗微生物劑和殺生物劑。10.用於防止和/或減少微生物浮遊增殖的方法，包括使所述微生物在水溶液中與選自下組的一種或多種細菌菌4朱^接觸具有保藏登錄號NRRLB-50014的菌林；具有保藏登錄號NRRLB-50015的菌林；具有保藏登錄號NRRLB-50016的菌林；具有保藏登錄號NRRLB-50017的菌林；具有保藏登錄號NRRLB-50018的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7541的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7542的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7543的菌林；具有保藏登錄號PTA-7544的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7545的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7546的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7547的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7549的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7790的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7791的菌抹；具有保藏登錄號PTA-7792的菌4^;具有保藏登錄號PTA-7793的菌4朱；或這些菌林中兩種或多種的混合物。11.權利要求10的方法，其中所述菌林具有與所保藏的菌抹之一或其中兩種或多種的混合物基本上相同的性質。12.權利要求10或11的方法，其中由一種或多種不期望的微生物，優選細菌，如病原細菌引起浮遊增殖。13.權利要求10-12中任一項的方法，其中所述方法是定期重複的。14.權利要求10-13中任一項的方法，其中進一步存在選自下組的一種或多種作用劑酶、分散劑、表面活性劑、抗微生物劑和殺生物劑。15.權利要求10-14中任一項的方法，其中所述細菌細胞計數在1至lx108cfu/mL，優選50至lx107cfb/mL的範圍內。16.包含權利要求1-15中任一項的一種或多種培養物的組合物。17.權利要求16的組合物，其進一步包含表面活性劑。18.權利要求16或17的組合物，其進一步包含一種或多種酶。19.權利要求18的組合物，其中所述酶選自下組蛋白酶、a-澱粉酶、纖維素酶、脂肪酶、過氧化物酶/氧化酶、果膠酸裂合酶和甘露聚糖酶，或其混合物。20.權利要求16-19中任一項的組合物，其進一步包含選自下組的一種或多種成分分散劑、穩定劑、抗微生物劑、香料、染料和殺生物劑。全文摘要本發明涉及用於防止和/或減少一種或多種所選細菌菌株或細菌混合物的生物膜形成和/或浮遊增殖的方法。文檔編號C11D3/38GK101679087SQ200880009596公開日2010年3月24日申請日期2008年3月20日優先權日2007年3月23日發明者戴維·德拉霍斯,艾琳·M·威廉斯,薩拉·麥克哈頓申請人:諾維信生物股份有限公司