兩種化學抗腫瘤藥物的製作方法

2023-06-12 22:16:26 1

專利名稱：兩種化學抗腫瘤藥物的製作方法
技術領域：
本發明屬於化學藥物領域，特別涉及兩種化學抗腫瘤藥物5，7-二羥基-8-(1， l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮，以及5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3， 4' -二甲氧基黃酮。
背景技術：
3-甲氧基黃酮屬於從柑桔屬植物中分離出來的多甲氧基黃酮化合物(PMFs)，由 於其具有包括抗炎、抗癌和抗動脈粥樣硬化等廣譜的生物學活性，一直受到特別的關注。人 們探索柑桔樹水果中PMFs保健特性的興趣在不斷增高。因此，從甜桔皮中分離、鑑定PMFs
將使桔汁加工的副產品得到新的應用，以及柑桔在其他保健品和藥品中被消耗。 PMFs通過不同的潛在機制實現其抗癌作用。從葡萄柚(GFJ)的乙酸乙酯提取物中
分離得3， 3' ， 4' ， 5， 6， 7， 8-七甲氧基黃酮( 一種3-甲氧基黃酮)，以濃度依賴性方式顯著
增強阿黴素抵抗的人髓細胞性白血病細胞攝取[3H]長春新鹼。數據顯示，3，3'，4'，5，6，7，
8-七甲氧基黃酮抑制P-糖蛋白介導的[3H]長春新鹼的輸出，導致化療藥物在細胞內積聚。
這一化合物有望成為腫瘤化療中一個候選的多藥耐藥性逆轉劑。 除了其他的黃酮類化合物，從藥用植物中分離的多聚甲基化黃酮和C-糖基化衍 生物，它們對大鼠肝微體中FeSO"半胱氨酸引起的脂類氧化的影響都已得到研究，其中梔 子素D是非酶促脂類過氧化的抑制劑。已建立結構_活性關係，並且觀察到活性多聚羥基 化合物的結構特徵不同於多甲氧基黃酮，抗過氧化黃酮類具有高度的親油性。
從白鼠麴植物地上部分分離、鑑別得到七種3-甲氧基黃酮，研究了它們的基團清 除活性、抗氧化活性和豬胰腺a-澱粉酶抑制活性。在3_甲氧基黃酮中，5，7，4'-三羥 基-3，6-二甲氧基黃酮，5，7，4'-三羥基-3，3' -二甲基黃酮和5，4' -二羥基-3，7， 3' _三甲基黃酮顯示了顯著的基團清除活性。5，7，4'-三羥基_3，6-二甲氧基黃酮，5，7， 4'-三羥基-3，3' _二甲氧基黃酮和5，4' -二羥基_3，6，7-三甲氧基黃酮具有亞油酸體 系中的抗氧化活性。5，7，4' -二羥基_3，6-二甲氧基黃酮，5，7，4'-三羥基-3，3' -二 甲氧基黃酮和5，4' -二羥基_3，6，7-三甲氧基黃酮，5，7，4' _三羥基_3_甲氧基黃酮和 5，4' -二羥基_3，7-二甲氧基黃酮則表現出很高的豬胰腺a-澱粉酶抑制活性。
Sergeev的研究顯示，來源於甜桔的5_羥基_3， 6， 7， 8， 3'， 4'-六甲氧基黃酮 (5-0H-HxMF)和3，-羥基-5，6，7，4' _四甲氧基黃酮(3' -OH-TtMF)通過鈣離子依賴性細 胞凋亡機制抑制人乳腺癌細胞(MCF-7)生長。這些結果強烈提示，PMFs的細胞Ca2+調節活 性是其細胞凋亡機制的基礎，PMFs的羥基化對於它們能誘導Ca"增加，進而活化鈣離子依 賴的細胞凋亡蛋白酶至關重要。

發明內容
本發明的目的在於研究兩種新的3-甲氧基黃酮衍生物-化合物(A)5，7_ 二羥 基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮(compound A)和化合物(B)5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黃酮(compound B)，這兩種化合物是有效 的脂肪酸合成酶(FAS)抑制劑，能廣泛抑制多種類型的人腫瘤細胞系生長，並進一步誘導 腫瘤細胞凋亡。在人腫瘤異種移植模型研究中，5，7- 二羥基-8-(l， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黃酮被證明是一種有效的抗腫瘤劑，能強烈抑制人肺癌和結腸癌細胞在體 內生長。 為了實現上述目的，本發明採用以下方案來合成化合物5，7_ 二羥 基-S-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮，其化學結構式為
0Me
OH 合成原料及合成步驟 第一步10g(55mmol)3，4-二甲氧基苯甲酸和2.2ml甲磺醯氯(28. 4mmo1)室溫下 時間產出8. 47g 3，4-二甲氧基苯甲酸酐(24. 5mmo1 ;產出率89% ); 第二步1.6g 2'，4'，6'-三羥基-2-甲氧基苯乙酮(8. lmmol)禾P8.4g 3，4_二 甲氧基苯甲酸酐(21.0mmol)40。C反應產出2. 2g5， 7-二羥基-3， 3'，4'-三甲氧基黃酮 (5.9mmo1 ;產出率74% )，在己烷丙酮(50 : 50)中結晶，得0. 85g純的5， 7-二羥基-3， 3'，4'-三甲氧基黃酮； 第三步O. 34g 5，7-二羥基-3，3'，4'-三甲氧基黃酮(0. 98mmo1)，0. 25ml異戊二 烯溴化物(1. 97mmo1)和含0. 4g無水碳酸鉀(2. Ommol)的50ml丙酮溶液室溫回流5小時。 濾液經過濾蒸發，殘渣在甲醇中結晶得0. 3g 5-羥基-7-異戊烯氧基-3， 3' ， 4'-三甲氧基 黃酮(0. 73mmo1 ;產率74% ); 第四步O. 3g 5-羥基-7-異戊烯氧基-3，3'，4'-三甲氧基黃酮(0. 73mmo1)和 0. 12g脫水醋酸鈉的乙酸酐溶液20ml回流48小時。氯仿稀釋萃取後，殘渣在室溫下70ml含 5X甲醇K0H溶液中攪拌4小時。然後溶液經乙酸乙酯酸化萃取，在己烷丙酮(50 : 50) 中結晶，得O. 183g純物質5，7-二羥基_8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮 (0. 44mmo1 ;產率60% )。 通過核磁共振技術闡明其分子結構，並通過質譜計算其分子量H NMR(300MHz， CDC13) : S 1. 68 (s， 6H， H4"+H5") ， 3. 82 (s， 3H， 30Me) ， 3. 94 (s， 3H，
3， OMe) ，3. 97(s，3H，4， OMe) ， 5. 39(d， 1H， J = 10. 7Hz，H3") ，5. 46(d， 1H， J = 17. 7Hz，H3")，
6. 29(s， 1H， H6) ，6. 46(dd， 1H， J = 17. 7和10. 7Hz， H2") ，7. OO(d， 1H， J = 8. 7Hz， H5，)，
7. 25 (s， 1H， 70H) ， 7. 53 (d， 1H， J = 2. 1Hz， H2， ) ， 7. 63 (dd， 1H， J = 8. 7禾P 2. 1Hz， H6，)，
413. 03(s， 1H，50H) ;13C NMR(75MHz， CDC13) : S 28. 06 (C4"+C") ， 40. 64 (Cl") ， 55. 97 (3， OMe)， 55. 98(4' OMe) ，60. 29 (3_0Me) ， 101. 17(C6) ， 106. 95(C10) ， 109. 70 (C8) ， 110. 84(C5')， 111. 54(C2， ) ， 113. 68(C3") ， 122. 53 (C6， ) ， 122. 74(C1， ) ， 138. 65 (C3) ， 148. 69(C3，)， 148. 96 (C2，，) ， 151. 08(C4' ) ， 155. 27 (C9) ， 156. 54 (C2) ， 160. 54(C5) ， 161. 48 (C7)， 179.07(C4);化學電離質譜和高分辨質譜確認(C23H2407)的分子量是412。
本發明採用以下方案來合成化合物5， 7- 二羥基-8-(l， 1- 二甲基烯丙基)_3， 4' -二甲氧基黃酮，其化學結構式為
_ 訓e
飾 合成原料及合成步驟 第一步10g(65. 7mmo1)對甲氧基苯甲酸和2. 6ml甲磺醯氯(33. 6mmo1)室溫反應 得6. 13g對甲氧基苯甲酸酐(24. 5mmo1 ;產率89% );第二步0.6g 2'，4'，6'-三羥基-2-甲氧基苯乙酮(3mmo1)和2. 6g對甲氧基苯 甲酸酐(9mmo1)室溫反應得0.763g麥角新鹼(2. 43mmo1 ;產率81% );
第三步含0. 30g麥角新鹼(0. 95,1) ，0. 2ml異戊二烯基溴化物(1. 73,1)和 0. 4g無水k2C03(2. Ommol)的50ml丙酮溶液室溫回流5小時。經過濾蒸發，殘渣在甲醇中 結晶，得0.33g 5-羥基-7-異戊烯氧基-3，4'-二甲氧基黃酮(0.86mmo1 ;產率91%);
第四步O. 3g 5-羥基-7-異戊烯氧基-3，4'-二甲氧基黃酮(0. 78mmo1)和O. 12g 無水醋酸鈉的20ml醋酸酐回流48小時。氯仿稀釋萃取後，殘渣在室溫下70ml含5%甲醇 KOH溶液中攪拌4小時。溶液經乙酸乙酯酸化萃取，得0. 21g純品5， 7- 二羥基8- (1， 1- 二 甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黃酮(0. 55mmo1 ;產率71% )。
通過核磁共振技術解析其結構，並且通過質譜技術計算分子量
力畫R(200MHz， DMS0_d6) : S 1. 55 (s， 6H， 1，， Me) ， 3. 75 (s， 3H， 30Me) ， 3. 84 (s， 3H，4' OMe) ，4. 77(dd， 1H， J = 10. 5and 1. 1Hz， H3") ， 4. 80 (dd， 1H， J = 17. 5and 1. 1Hz， H3") ，6. 27(dd， 1H， J = 17. 5and 10. 5Hz， H2") ，6. 30 (s 1H， H6) ， 7. 10(d，2H， J = 9. OHz， H3， +H5， ) ，7. 91 (d，2H， J = 9. OHz， H2， +H6， ) ， 10. 52(brs， 1H， 70H) ， 13. OO(s， 1H， 50H); 13C NMR(50MHz， DMS0_d6) : S 29. 54(1"Me) ，40. 34(Cl") ，55. 25(4， OMe) ， 59. 66 (3—OMe)， 99. 60(C6) ， 105. 02(C10) ， 108. 36 C3") ， 110. 75 (C8) ，113. 80(C' +C5， ) ， 121. 95(C1，)， 130. 33 (C2， +C6" ) ， 137. 42 (C3) ， 149. 66 (C2" ) ， 154. 75 (C2) ， 156. 07 (C9) ， 158. 98 (C5)， 161. 03 (C4') ， 162. 89 (C7) ， 178. 13 (C4);化學電離質譜和高分辨質譜確認(C22H2206)的分子 量是382。 本發明合成的兩種新的3-甲氧基黃酮衍生物，化合物5， 7- 二羥基-8- (1， 1_ 二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮和化合物5，7-二羥基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3， 4' -二甲氧基黃酮是有效的脂肪酸合成酶(FAS)抑制劑，能廣泛抑制多種類型的人腫 瘤細胞系生長，並進一步誘導腫瘤細胞凋亡。在人腫瘤異種移植模型研究中，5，7-二羥 基-8-(1， 1-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮被證明是一種有效的抗腫瘤劑，能 強烈抑制人肺癌和結腸癌細胞在體內生長。5，7-二羥基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，3'， 4'-三甲氧基黃酮和5，7- 二羥基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)_3，4'- 二甲氧基黃酮具有被開 發成為新的廣譜抗腫瘤藥物的巨大潛能。


圖1是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮抑 制人前列腺癌細胞LnCAP脂肪生成_濃度曲線圖； 圖2是化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 4'- 二甲氧基黃酮抑制人 前列腺癌細胞LnCAP脂肪生成-濃度曲線圖； 圖3是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 3'， 4'-三甲氧基黃酮抑 制人前列腺癌細胞LnCAP脂肪酸合成酶活性_濃度曲線圖； 圖4是化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 4'- 二甲氧基黃酮抑制人 前列腺癌細胞LnCAP脂肪酸合成酶活性_濃度曲線圖； 圖5是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮和 化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黃酮體外抑制人腫瘤細胞生 長的數據表； 圖6是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)_3， 3' ，4' _三甲氧基黃酮治
療小鼠皮下接種人前列腺癌細胞LnCAP腫瘤的腫瘤體積治療天數曲線圖； 圖7是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 3'， 4'-三甲氧基黃酮治
療小鼠皮下接種人乳腺癌細胞ZR-75-l腫瘤的腫瘤體積治療天數曲線圖； 圖8是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 3'， 4'-三甲氧基黃酮治
療小鼠皮下接種人肺癌細胞NCI-H23腫瘤的腫瘤體積治療天數曲線圖； 圖9是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 3'， 4'-三甲氧基黃酮治
療小鼠皮下接種人結腸癌細胞HCT-116腫瘤的腫瘤體積治療天數曲線圖； 圖10是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，4' _ 二甲氧基黃酮治療
小鼠皮下接種人前列腺癌細胞LnCAP腫瘤的腫瘤體積治療天數曲線圖； 圖11是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，4' _ 二甲氧基黃酮治療
小鼠皮下接種人乳腺癌細胞ZR-75-l腫瘤的腫瘤體積治療天數曲線圖； 圖12是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 4' _ 二甲氧基黃酮治療
小鼠皮下接種人肺癌細胞NCI-H23腫瘤的腫瘤體積治療天數曲線圖； 圖13是化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 4' _ 二甲氧基黃酮治療 小鼠皮下接種人結腸癌細胞HCT-116腫瘤的腫瘤體積治療天數曲線圖。
具體實施例方式
為證明本發明原料化合物的藥用效果，可以用以下方法來驗證
實驗方法 1. [2_14C]醋酸鹽摻入法 用不同濃度的化合物5， 7- 二羥基-8-(l， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4' _三甲氧基 黃酮或化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黃酮處理1小時或20 小時，在LnCAP細胞培養液中加入2-14C-標記的醋酸鹽，孵育4小時，收集培養液和細胞，離 心，0.8ml PBS重懸。應用Bligh Dyer法抽提脂質；應用閃爍計數法定量摻入細胞脂質的 [2-14C]醋酸鹽。所得結果以樣本蛋白含量校正。
2.脂肪酸合成酶活性測定(體外試驗) 按文獻報導的方法測定LnCAP細胞提取物脂肪酸合成酶活性。收集LnCAP細胞，離 心，低滲緩衝液(1毫摩爾EDTA，20毫摩爾Tris-鹽酸，pH 7. 5)重懸；隨後應用BCA法測定 樣品蛋白質含量。預先在含不同濃度的化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'， 4'-三甲氧基黃酮(0. 01-10 iiM)或化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4'-二 甲氧基黃酮(0. 3-30uM)的2. 5ml磷酸鉀鹽緩衝液(100mM，pH 7. 0)中37。C孵育相同量的蛋 白質(50ii g)30分鐘。然後加入20ii l反應混和液(2. 5mM NADPH， 1. 25mM乙醯-CoA， 1. 25mM 丙二酸單醯-CoA和0. 02mM[2-14C]丙二酸單醯_CoA(60毫居裡/毫摩爾；PerkinElmer生 命科學公司)，樣品在37t:中孵育15分鐘。加入3ml預冷的1M HC1/甲醇(6 : 4，V/V)終 止反應，石油醚萃取脂肪酸，閃爍計數法分析摻入的[2-14C]丙二酸單醯-CoA。
3.細胞毒性分析 應用人腫瘤細胞株分析化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'， 4'-三甲氧基黃酮和化合物5，7-二羥基-8-(1，1-二甲基烯丙基)_3，4' -二甲氧基黃酮 (溶解於DMSO)的細胞毒性。人腫瘤細胞株購自ATCC和NCI，在10% FBS的DMEM培養液 中，置於5% C02的37t:孵箱中培養。細胞生長匯合後作毒性分析，胰蛋白酶消化細胞後用 培養液洗滌，然後計數。96孔板每孔傳3000-6000個細胞孵育16-24小時，再加入不同濃度 的化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮或化合物5，7-二 羥基_8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，4' _ 二甲氧基黃酮。培養72小時後，應用MTT分析藥物 處理後的細胞和對照細胞。
4.人體腫瘤轉移模型 T細胞缺陷裸小鼠(皿/皿)，6周齡，購自Charles River實驗室，按照大學動物 飼養和使用委員會條例，在無菌環境中飼養、處理。48隻鼠肋腹部分別皮下接種5Xl(f個 懸浮於O. 2ml HBSS/基質膠(50 : 50， V/V)中的乳腺癌ZR-75-l、前列腺癌細胞LnCAP、 人肺癌細胞NCI-H23和人結腸癌細胞HCT-116，當腫瘤平均直徑長至7-8mm，腫瘤體積約在 100-200mm3大小時，24隻鼠被分成治療組(2組，每組8隻，共16隻)，按50mk/kg和100mg/ kg化合物5， 7- 二羥基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黃酮或50mk/kg和 100mg/kg化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)_3， 4'- 二甲氧基黃酮(溶解在15% C即tisol)給藥，對照組( 一組，共8隻)只接受賦形劑(15% C即tisol)。
為保證化合物5， 7- 二羥基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮或 化合物5， 7-二羥基-8-(1 ， 1-二甲基烯丙基)-3， 4' - 二甲氧基黃酮治療組和對照組在處 理開始時腫瘤大小的分布基本相同，小鼠被分成三類小體積腫瘤( 8mm)。將每一類中相同數目的小鼠分別分在對照組和化合物5，7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黃酮治療組中。
腫瘤移植裸鼠的化合物5， 7- 二羥基-8-(l， 1- 二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧 基黃酮或化合物5， 7- 二羥基-8-(l， 1- 二甲基烯丙基)-3，4' _ 二甲氧基黃酮給藥方案口 服給藥，將化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黃酮或化合物 5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)_3， 4'- 二甲氧基黃酮溶解在15% C即tisol 。每日給 予200iU含1.25mg或2. 5mg化合物5， 7-二羥基-8-(1， 1-二甲基烯丙基)-3， 3'， 4'-三 甲氧基黃酮或化合物5， 7- 二羥基-8- (1， 1- 二甲基烯丙基)_3， 4' - 二甲氧基黃酮(15 % C即tisol)的藥液，每周5天，連續3周，或200iil安慰劑(15% c即tisol)3周(對照組)。 兩組動物分開飼養，自由進食。 抗腫瘤效果的評價每3或4天測量腫瘤大小，採用下面的公式計算腫瘤體積
V = (aXb)/2 其中a代表寬(較短的直徑)，b代表長(較長的直徑)。每個瘤體的相對腫瘤體 積(RTV)指給定時間的體積與治療開始時的體積的比率。每個治療組計算平均RTV和標準 誤(SE)。應用下面的公式計算腫瘤生長抑制值確定抗腫瘤活性。
TGI(% ) = T/CX100 其中T代表實驗結束點(4周)處理組腫瘤的平均RTV， C代表對照組的平均RTV。 採用國立癌症研究所制定的抗腫瘤活性最低水平(T/C《42% )標準。實驗結束後切除瘤 體，甲醇固定。
實驗結果 1.比較分析化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)_3， 3' ， 4'-三甲氧基黃 酮和化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黃酮對腫瘤細胞脂肪生 成的抑制活性 為了研究化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黃酮 和化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黃酮抑制脂肪生成的能 力，用不同濃度的化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮or 化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黃酮處理LnCAP前列腺癌細 胞5小時，定量檢測細胞脂質中2-14C標記醋酸鹽的摻入量。如圖1所示，化合物5， 7- 二羥 基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黃酮在0. 3 ii M濃度時抑制脂肪合成率超 過50% 。如圖2所示，化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)_3， 4'- 二甲氧基黃酮 在1 P M濃度時抑制脂肪合成率超過50% 。更高濃度則進一步減少脂肪合成，並呈現濃度依 賴方式。處理24小時後則進一步降低。 2.化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮以及化 合物5， 7- 二羥基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)_3，4'- 二甲氧基黃酮通過抑制FAS活性降低前 列腺癌細胞和乳腺癌細胞中脂肪合成 為證實化合物5， 7- 二羥基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)_3， 3' ， 4' _三甲氧基黃酮或 化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4' - 二甲氧基黃酮是一個FAS抑制劑，用 不同濃度的化合物5， 7- 二羥基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)_3， 3' ， 4' _三甲氧基黃酮或化合 物5， 7- 二羥基-8- (1， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4' - 二甲氧基黃酮處理LnCAP細胞蛋白提取 物，定量檢測脂肪酸中2-14C標記丙二酸單醯-CoA的摻入量。如圖3所示，化合物5， 7- 二羥基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4' _三甲氧基黃酮在0. 1 M濃度時降低體外脂肪酸合成酶活性50%以下。如圖4所示，化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黃酮在O. 3微摩爾濃度時降低體外脂肪酸合成酶活性50X以下。Western Blot分析顯示，化合物5，7-二羥基_8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，3'，4' _三甲氧基黃酮或化合物5，7- 二羥基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)_3，4'- 二甲氧基黃酮不影響LnCAP細胞中FAS蛋白水平。由此可知，抑制脂類合成是抑制FAS酶活性的直接結果，而不是FAS表達減少的結果。
3.化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮和化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黃酮廣泛抑制人體腫瘤細胞株生長，但不抑制正常細胞株生長 26株腫瘤細胞株在含化合物5， 7- 二羥基_8_(1， 1_ 二甲基烯丙基)_3， 3' ， 4'-三甲氧基黃酮和化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黃酮的普通培養基中培養。3天後應用MTT測定細胞生存力。結果如圖5所示，大多數人腫瘤細胞對化合物5， 7- 二羥基-8- (1， 1- 二甲基烯丙基)-3， 3' ， 4'-三甲氧基黃酮和化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黃酮敏感。並且發現，大多數人腫瘤細胞對化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮和化合物5，7-二羥基-8- (1 ， 1- 二甲基烯丙基)-3， 4'- 二甲氧基黃酮都較敏感，而化合物5， 7- 二羥基-8- (1 ，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮比化合物5，7-二羥基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黃酮的作用更強。但是，正常人乳腺上皮細胞(MCF10A)和小鼠胚胎成纖維細胞對這兩個化合物不敏感。兩種化合物濃度為50 ii M時這些細胞仍能正常成長。
應用人腫瘤移植裸鼠模型研究化合物5，7_ 二羥基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)_3，3'，4' _三甲氧基黃酮和化合物5，7-二羥基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黃酮的有效性 在化合物5， 7- 二羥基-8_(1， 1- 二甲基烯丙基)_3， 3' ，4' _三甲氧基黃酮和化合物5， 7- 二羥基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，4' - 二甲氧基黃酮對腫瘤細胞株的體外抗增殖作用的基礎上，應用人前列腺癌細胞(LnCAP)、人乳腺癌細胞(ZR-75-l)、人肺癌細胞(NCI-H23)和人結腸癌細胞(HCT-116)的皮下移植裸鼠模型評價化合物5， 7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮以及化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4'-二甲氧基黃酮(劑量為100mg/kg)的抗腫瘤效果。結果見圖6-9，化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮在T/C值為14. 2% ，0%，31 %和20%時分別強烈抑制LnCAP，ZR-75-l，NCI-H23和HCT-116腫瘤細胞生長；化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黃酮在T/C值為17. 5%，60%，50%和30%時分別強烈抑制LnCAP， ZR-75-l， NCI-H23和HCT-116月中瘤細胞生長(見圖10-13所示)。同時未發現化合物5， 7- 二羥基-8-(1， 1- 二甲基烯丙基)-3，3' ，4'-三甲氧基黃酮和化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黃酮給藥的動物產生任何明顯的副作用，包括體重減輕等。這些數據強烈顯示，化合物5，7-二羥基-8-(l，l-二甲基烯丙基)-3，3'，4'-三甲氧基黃酮和化合物5，7-二羥基_8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4' _ 二甲氧基黃酮是可被開發為新的抗癌藥物的很好的候選者。
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權利要求
兩種化學抗腫瘤藥物，其特徵在於該兩種抗腫瘤藥物是以甲氧基黃酮衍生物5，7-二羥基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，3′，4′-三甲氧基黃酮或5，7-二羥基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4′-二甲氧基黃酮作為有效成分。
2. 如權利要求1所述的兩種化學抗腫瘤藥物，其特徵在於該兩種化學抗腫瘤藥物中 分別含有抗腫瘤有效量的甲氧基黃酮衍生物5， 7-二羥基-8- (1 ， 1-二甲基烯丙基)-3， 3'， 4' _三甲氧基黃酮或5，7-二羥基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4' -二甲氧基黃酮及可藥 用載體和/或賦形劑。
3. 如權利要求l所述的兩種化學抗腫瘤藥物，其特徵在於抗腫瘤包括有抗前列腺癌、 肺癌、乳腺癌、腎癌、卵巢癌、胰腺癌、惡性膠質瘤、胃癌、食管癌、鼻咽癌、淋巴瘤和血癌。
全文摘要
一種以二個甲氧基黃酮衍生物5，7-二羥基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，3′，4′-三甲氧基黃酮或5，7-二羥基-8-(1，1-二甲基烯丙基)-3，4′-二甲氧基黃酮為有效成分的抗腫瘤藥物，藥理試驗效果證明二個甲氧基黃酮衍生物對31種腫瘤細胞株的細胞毒性試驗結果顯示有廣譜的抗腫瘤作用；應用人腫瘤移植裸鼠模型試驗，對人前列腺癌細胞、人肺癌細胞、人結腸癌細胞、和人乳腺癌細胞有強烈的抑制腫瘤生長的作用。藥代動力學試驗也顯示該二個甲氧基黃酮衍生物在小鼠體內能保持一定的藥物濃度，有助於抗腫瘤效果。對小鼠的急性毒性試驗顯示無毒性。因此該二個甲氧基黃酮衍生物是一種具有很大開發前景的廣譜抗腫瘤新藥。
文檔編號A61P35/00GK101703499SQ200910174808
公開日2010年5月12日 申請日期2008年1月4日 優先權日2008年1月4日
發明者張南 申請人:張南