測量胺基酸‑N‑甲酸酐中氯離子含量的方法與流程

2023-06-02 00:17:01 1

測量胺基酸-N-甲酸酐中氯離子含量的方法技術領域本發明涉及製備可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，以及測量N-羧基酸酐中氯離子含量的方法。本發明還涉及製備具有高純度N-羧基酸酐的方法，以及製備得到的具有高純度N-羧基酸酐。此外，本發明還涉及製備具有高純度多肽混合物的方法，以及由此製備得到的多肽混合物，尤其地，多肽混合物是醋酸格拉替雷。

背景技術：
胺基酸N-羧基酸酐（即，下文中表示為「N-羧基酸酐」或「胺基酸NCA」）是3-取代噁唑啉-2,5-二酮，如下所示：由於從α-、β-、γ-胺基酸中得到的N-羧基酸酐（縮寫為NCA）的酸性功能基團的活化可使得其成為具有反應性的化合物。這是因為N-羧基酸酐使得該酸性功能性基團與任何親核本體的反應成為可能。因此，使得通過與胺功能基團反應進行醯胺功能基團製備得到簡化。由此，N-羧基酸酐通常用於合成多肽。此外，N-羧基酸酐與醇反應液容易形成酯鍵。有幾個已知方法可用於製備N-羧基酸酐，例如US6656458，US4267344和US6479665。最普通和最直接的方法是將胺基酸或其鹽酸鹽與光氣、雙光氣或三光氣在溶劑介質中反應。與光氣的反應如下圖所示：其中，R表示α-、β-、γ-胺基酸的主要游離基，R』表示氫原子或胺基酸的仲氨基的游離基，R』可以與R形成環。已知，在合成N-羧基酸酐過程中除了N-羧基酸酐外，還形成了大量鹽酸氣，也就是說每摩爾的N-羧基酸酐生產2mol鹽酸氣。鹽酸氣是具有高反應性的，在介質中，鹽酸氣的存在將可能導致副反應和氯化副產物的出現。從質量和產量方面，殘留在N-羧基酸酐中的氯化雜質是絕對不希望的。由於殘留在N-羧基酸酐中鹽酸氣的存在，會嚴重幹擾N-羧基酸酐的聚合反應。為了聚合能順利進行，需要在N-羧基酸酐單體中存在的氯離子含量足夠低。因此，可游離氯的含量通常需要小於0.05wt%。很多類型的多肽混合物，例如醋酸格拉替雷，是通過胺基酸的N-羧基酸酐進行聚合而製備得到。例如，醋酸格拉替雷(GA，也稱為共聚物-1，Cop-1或，CASNo.147245-92-9)，它通過四種胺基酸（L-丙氨酸、L-酪氨酸、L-穀氨酸-γ-苄酯、L-ε-三氟乙醯基-賴氨酸）的N-羧基酸酐（NCA）進行隨機聚合而製備的多肽混合物，具有如下結構式：(Glu,Ala,Lys,Tyr)xXCH3COOH(C5H9NO4·C3H7MO2·C6H14N202·C9H11NO3)x'XC2H4O2醋酸格拉替雷是一種用於治療多發性硬化症的人工合成多肽混合物（M.M.Mouradain,Pharmacology&Therapeutics,98,245-255,2003）。具體請參見physician′sDeskReference,ThomsonPDR,Montvale,NewJersey,第3297頁(2007)。醋酸格拉替雷的胺基酸摩爾比大約是0.392-0.462:0.129-0.153:0.300-0.374:0.086-0.100，平均分子量大約5000-9000道爾頓。本發明發明人發現，由N-羧基酸酐製備多肽混合物（如，醋酸格拉替雷）時，N-羧基酸酐的品質，尤其是游離氯離子含量，對於聚合反應和產物的品質影響很大。特別地，如果N-羧基酸酐不能達到應有規格，醋酸格拉替雷的平均分子量和胺基酸組成都會達不到應有的範圍：醋酸格拉替雷的胺基酸摩爾比大約是0.392-0.462:0.129-0.153:0.300-0.374:0.086-0.100，平均分子量大約5000-9000道爾頓。為了使製備的多肽混合物（如，醋酸格拉替雷）可以達到產品相應的要求，本發明發明人發現，N-羧基酸酐優選純度≥99.5%，氯離子<0.01%，游離胺基酸含量<0.01%。由於N-羧基酸酐中的氯離子含量是一種重要因素，其影響胺基酸N-羧基酸酐質量，進而影響多肽混合物品質。但是，N-羧基酸酐對水和醇類非常不穩定，會聚合成不溶於水的聚合物。而由於聚合物的水溶性非常差，直接影響了對氯離子定量檢測的準確性。本領域需要獲得關於N-羧基酸酐的氯離子含量的有效且精確的檢測方法以及可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液。

技術實現要素：
本發明一個目的是，提供可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，以及測量N-羧基酸酐中氯離子含量的方法。本發明另一目的是，提供製備具有高純度N-羧基酸酐的方法，以及製備得到的具有高純度N-羧基酸酐。此外，本發明還有另一目的是，提供涉及製備具有高純度多肽混合物的方法，以及由此製備得到的多肽混合物，尤其地，多肽混合物是醋酸格拉替雷。本發明可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，其由包括下述步驟的方法製備：1.將N-羧基酸酐溶於一種或多種溶劑中，其中該溶劑為基本無水溶劑，2.使用水解試劑水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐，得到可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液。本發明測量N-羧基酸酐中氯離子含量的方法，其包括下述步驟：1.製備可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，其包括：（a）將N-羧基酸酐溶於一種或多種溶劑中，其中該溶劑為基本無水溶劑，（b）使用水解試劑水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐，得到可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液。2.測量上述得到的N-羧基酸酐中氯離子含量。本發明製備具有高純度N-羧基酸酐的方法，其包括常規本領域技術人員已知使用的製備具有高純度N-羧基酸酐的方法，其進一步包括下述步驟：-如下檢測得到的N-羧基酸酐中氯離子含量；(1).製備可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，其包括：（a）將N-羧基酸酐溶於一種或多種溶劑中，（b）使用水解試劑水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐，得到可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液。(2).測量上述得到的N-羧基酸酐中氯離子含量；當氯離子含量大於0.05wt%，優選大於0.01wt%時，則進行下一步純化步驟。上述方法中溶劑為基本無水溶劑，而且不包含醇，例如：-與水混溶的溶劑，尤其是選自二甲基亞碸(DMSO)、N，N-二甲基甲醯胺(DMF)、N，N-二甲基乙醯胺(DMA)、N-甲基-2吡咯烷酮(NMP)、二甲基亞碸(DMSO)、甲醯胺和環丁碸、二氧六環、四氫呋喃(THF)、丙酮、乙腈以及羧酸如甲酸、乙酸等；-離子液體，例如烷基化咪唑的液體鹽。由上述製備得到的具有高純度N-羧基酸酐也屬於本發明的發明範圍。此外，本發明提供製備具有高純度多肽混合物的方法，其包括常規本領域技術人員已知使用的製備多肽混合物的方法，其進一步包括下述步驟：-如下檢測原料N-羧基酸酐中氯離子含量，當氯離子含量大於0.05wt%，優選大於0.01wt%時，則進行下一步純化步驟；(1).製備可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，其包括：（a）將N-羧基酸酐溶於一種或多種溶劑中，（b）使用水解試劑水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐，得到可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液。（2）檢測原料N-羧基酸酐中氯離子含量。在上述方法中溶劑為基本無水溶劑，而且不包含醇，例如：-與水混溶的溶劑，尤其是選自二甲基亞碸(DMSO)、N，N-二甲基甲醯胺(DMF)、N，N-二甲基乙醯胺(DMA)、N-甲基-2吡咯烷酮(NMP)、二甲基亞碸(DMSO)、甲醯胺和環丁碸、二氧六環、四氫呋喃(THF)、丙酮、乙腈以及羧酸如甲酸、乙酸等；-離子液體，例如烷基化咪唑的液體鹽。(2).測量上述得到的N-羧基酸酐中氯離子含量。本發明還涉及由此製備得到的多肽混合物，尤其地，醋酸格拉替雷也屬於本發明的發明範圍。為了使製備的多肽混合物（如，醋酸格拉替雷）可以達到產品相應的要求，本發明發明人發現，原料N-羧基酸酐優選純度≥99.5%，氯離子<0.01%，游離胺基酸含量<0.01%。本發明中所使用的純化步驟可以使用本領域公知的常規方法，如重結晶、活性炭吸附、通過填充柱等提純方法。可用於本發明的測量氯離子含量的方法很多，本領域技術人員所知的方法均可以在本發明中使用，例如色譜法例如柱色譜法、紙色譜法、薄層色譜法等等；硝酸銀比濁法；分光光度法；摩爾法-鉻酸鉀作指示劑；法揚司法-螢光黃作指示劑；佛爾加德法-間接滴定；電位滴定法等等。在上述方法中，優選，在惰性氣體保護下，將N-羧基酸酐溶於一種或多種溶劑中。惰性氣體可以是氮、氬、氦、氖、氬、氪、氙、氡等。在本發明中，基本無水溶劑是指溶劑中含的水量小於10wt%，特別地小於5wt%，優選小於3%，優選小於1%。在本發明中，使用可以使得N-羧基酸酐水解的物質進行水解。例如使用水解試劑如水或鹼水溶液進行水解，優選水或氫氧化鈉水溶液。其中，水不包含影響氯離子測量的水，即不含氯離子的水，優選去離子水。在本發明中，水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐的過程中，水解試劑如水或鹼水溶液的使用量是：0.1-50mL/mgN-羧基酸酐，優選1-30mL/mgN-羧基酸酐，尤其1-20mL/mgN-羧基酸酐，更優選1-10mL/mgN-羧基酸酐。根據本發明方法，可以將N-羧基酸酐破壞成水溶性好的水溶液，然後利用各種技術精確地測量N-羧基酸酐的氯離子含量。本發明精確檢測N-羧基酸酐的氯離子含量的方法不會因為產生聚合物包裹問題造成氯離子檢測結果不準。為了本發明的目的，表述「胺基酸」應理解為是指包含至少一個NR1R2基團以及至少一個羧基基團的任何化合物，其中R1和R2是任何可以形成胺基酸的基團，例如氫、烷基、芳基，或R1和R2形成環狀基團。本發明的胺基酸可以是天然或合成來源的。除甘氨酸外，天然胺基酸都含有手性碳原子。使用天然或非天然的胺基酸都是有可能的。胺基酸可以具有D或L構型。本發明中，N-羧基酸酐例如為，肌氨酸N-羧基酸酐、蘇氨酸N-羧基酸酐、絲氨酸N-羧基酸酐、纈氨酸N-羧基酸酐、正纈氨酸N-羧基酸酐、異亮氨酸N-羧基酸酐、亮氨酸N-羧基酸酐、正亮氨酸N-羧基酸酐、賴氨酸N-羧基酸酐、苯丙氨酸N-羧基酸酐、酪氨酸N-羧基酸酐、丙氨酸N-羧基酸酐、脯氨酸N-羧基酸酐、色氨酸N-羧基酸酐、蛋氨酸N-羧基酸酐、甘氨酸N-羧基酸酐、絲氨酸N-羧基酸酐、半胱氨酸N-羧基酸酐、精氨酸N-羧基酸酐、組氨酸N-羧基酸酐、色氨酸N-羧基酸酐、甲硫氨酸N-羧基酸酐、天冬氨酸N-羧基酸酐和穀氨酸N-羧基酸酐、穀氨酸-γ-苄酯N-羧基酸酐、ε-三氟乙醯基-賴氨酸N-羧基酸酐等等。可以使用的胺基酸的殘基根據以下3個字母的代碼縮寫：丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、天冬氨酸(Asp)、天冬醯胺(Asn)、半胱氨酸(Cys)、穀氨酸(Glu)、穀氨醯胺(Gln)、甘氨酸(Gly)、組氨酸(His)、異亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、賴氨酸(Lys)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、絲氨酸(Ser)、蘇氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和纈氨酸(Val)，具有親核側鏈的胺基酸有利的是在根據本發明的方法中使用它們之前在側鏈上加以保護。表述「保護基」應理解為是指任何類型的基團，它阻止與其相連的原子或基團(例如氧原子或氮原子)在合成過程中參與所不希望的反應。這些保護基包括側鏈保護基以及保護C-或N-末端的基團，統稱為胺保護基和酸保護基。作為胺保護基的非窮盡的例子，可以提及特別是苯甲醯基(Bz)、乙醯基(Ac)、三氟乙醯基(Tfa)、苄氧羰基(Z)、對氯苄氧羰基(2ClZ)、對溴苄氧羰基(2BrZ)、對硝基苄氧羰基、二苯甲氧基苄氧羰基、二苯甲氧羰基、9-芴甲氧羰基(Fmoc)、叔丁氧羰基(Boc)、苯磺醯基、對甲苯磺醯基或2-硝基苯磺醯基。作為酸保護基的非窮盡的例子，可以提及烷基、芳基、芳烷基、甲矽烷基類型，如甲氧基甲基、甲基硫代甲基、2，2，2-三氯乙基、2-滷代乙基、2-(三甲基矽烷基)-乙基、叔丁基、芳基、烷基、芳烷基、烯丙基、苯基、三苯甲基(trityl)、二苯甲基、對硝基苄基、對甲氧苄基以及三烷基甲矽烷基的基團，如三甲基矽醚類、三乙基甲矽烷基、叔丁基二甲基甲矽烷基、或異丙基二甲基甲矽烷基。為了本發明的目的，術語「肽」指一種聚合物，在該聚合物中的單體是通過醯胺類型的共價鍵連接在一起的胺基酸。肽包含至少兩個胺基酸。優選地，肽鏈中的胺基酸的數目大於或等於3。肽鏈經常包含最多100個胺基酸。優選地，肽鏈中胺基酸的數目少於或等於20。特別優選地，肽鏈中胺基酸的數目少於或等於15。為了本發明的目的，術語「多肽」指α－胺基酸以肽鏈連接在一起而形成的化合物，它也是蛋白質水解的中間產物。由兩個胺基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽，同理類推還有三肽、四肽、五肽等。通常由10-100胺基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽。為了本發明的目的，術語「高純度N-羧基酸酐」是指N-羧基酸酐純度≥99.5%，氯離子<0.01%，游離胺基酸含量<0.01%。為了本發明的目的，術語「高純度多肽混合物」是指由原料高純度N-羧基酸酐（純度≥99.5%，氯離子<0.01%，游離胺基酸含量<0.01%）製備得到的多肽混合物。在本發明中，縮寫「NCA」表示胺基酸N-羧酸酐。本發明還涉及下述技術方案：1.測量N-羧基酸酐中氯離子含量的方法，其包括下述步驟：（1）.製備可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，其包括：（a）將N-羧基酸酐溶於一種或多種基本無水溶劑中，（b）使用水解試劑水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐，（c）得到可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，（2）.測量上述得到的N-羧基酸酐中氯離子含量。2.根據技術方案1的方法，其中基本無水溶劑選自如下：-與水混溶的溶劑，其中，溶劑優選選自二甲基亞碸(DMSO)、N，N-二甲基甲醯胺(DMF)、N，N-二甲基乙醯胺(DMA)、N-甲基-2吡咯烷酮(NMP)、二甲基亞碸(DMSO)、甲醯胺和環丁碸、二氧六環、四氫呋喃(THF)、丙酮、乙腈以及羧酸如甲酸、乙酸；和/或-離子液體，例如烷基化咪唑的液體鹽。3.根據上述技術方案任一項的方法，其中,在惰性氣體保護下，將N-羧基酸酐溶於一種或多種基本無水溶劑中。4.根據上述技術方案任一項的方法，其中,使用水解試劑如水或鹼水溶液進行水解，優選水或氫氧化鈉水溶液，尤其地，去離子水。5.根據上述技術方案任一項的方法，其中，水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐的過程中，水解試劑如水或鹼水溶液的使用量是0.1-10mL/mgN-羧基酸酐。6.可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，其由包括下述步驟的方法製備：（a）將N-羧基酸酐溶於一種或多種基本無水溶劑中，（b）使用水解試劑水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐。7.根據技術方案6的方法，其中基本無水溶劑選自如下：-與水混溶的溶劑，其中，溶劑優選選自二甲基亞碸(DMSO)、N，N-二甲基甲醯胺(DMF)、N，N-二甲基乙醯胺(DMA)、N-甲基-2吡咯烷酮(NMP)、二甲基亞碸(DMSO)、甲醯胺和環丁碸、二氧六環、四氫呋喃(THF)、丙酮、乙腈以及羧酸如甲酸、乙酸；和/或-離子液體，例如烷基化咪唑的液體鹽。8.根據上述技術方案6-7任一項的方法，其中,在惰性氣體保護下，將N-羧基酸酐溶於一種或多種基本無水溶劑中。9.根據上述技術方案6-8任一項的方法，其中,使用水解試劑如水或鹼水溶液進行水解，優選水或氫氧化鈉水溶液，尤其地，去離子水。10.根據上述技術方案6-9任一項的方法，其中,水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐的過程中，水解試劑如水或鹼水溶液的使用量是0.1-10mL/mgN-羧基酸酐。11.製備N-羧基酸酐的方法，其包括下述步驟：A.如下選擇N-羧基酸酐，其中氯離子含量大於0.05wt%，優選大於0.01wt%：-檢測得到的N-羧基酸酐中氯離子含量；(1).製備可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，其包括：（a）將N-羧基酸酐溶於一種或多種溶劑中，（b）使用水解試劑水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐，得到可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液；(2).測量上述得到的N-羧基酸酐中氯離子含量；當氯離子含量大於0.05wt%，優選大於0.01wt%時，則進行純化步驟使得其氯離子含量小於0.05wt%，優選小於0.01wt%。12.根據技術方案11的方法，其中基本無水溶劑選自如下：-與水混溶的溶劑，其中，溶劑優選選自二甲基亞碸(DMSO)、N，N-二甲基甲醯胺(DMF)、N，N-二甲基乙醯胺(DMA)、N-甲基-2吡咯烷酮(NMP)、二甲基亞碸(DMSO)、甲醯胺和環丁碸、二氧六環、四氫呋喃(THF)、丙酮、乙腈以及羧酸如甲酸、乙酸；和/或-離子液體，例如烷基化咪唑的液體鹽。13.根據上述技術方案11-12任一項的方法，其中,在惰性氣體保護下，將N-羧基酸酐溶於一種或多種基本無水溶劑中。14.根據上述技術方案11-13任一項的方法，其中,使用水解試劑如水或鹼水溶液進行水解，優選水或氫氧化鈉水溶液，尤其地，去離子水。15.根據上述技術方案11-14任一項的方法，其中，水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐的過程中，所述水解試劑如水或鹼水溶液的使用量是：0.1-50mL/mgN-羧基酸酐，優選1-30mL/mgN-羧基酸酐，尤其1-20mL/mgN-羧基酸酐，更優選1-10mL/mgN-羧基酸酐。16.製備多肽的方法，其包括下述步驟：A.如下選擇N-羧基酸酐，其中氯離子含量大於0.05wt%，優選大於0.01wt%：-檢測得到的N-羧基酸酐中氯離子含量；(1).製備可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液，其包括：（a）將N-羧基酸酐溶於一種或多種溶劑中，（b）使用水解試劑水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐，得到可用於測量N-羧基酸酐中氯離子含量的溶液；(2).測量上述得到的N-羧基酸酐中氯離子含量；當氯離子含量大於0.05wt%，優選大於0.01wt%時，則進行純化步驟使得其氯離子含量小於0.05wt%，優選小於0.01wt%。17.根據技術方案16的方法，其中多肽是醋酸格拉替雷。18.根據技術方案16-17任一項的方法，其中基本無水溶劑選自如下：-與水混溶的溶劑，其中，溶劑優選選自二甲基亞碸(DMSO)、N，N-二甲基甲醯胺(DMF)、N，N-二甲基乙醯胺(DMA)、N-甲基-2吡咯烷酮(NMP)、二甲基亞碸(DMSO)、甲醯胺和環丁碸、二氧六環、四氫呋喃(THF)、丙酮、乙腈以及羧酸如甲酸、乙酸；和/或-離子液體，例如烷基化咪唑的液體鹽。19.根據上述技術方案16-18任一項的方法，其中,在惰性氣體保護下，將N-羧基酸酐溶於一種或多種基本無水溶劑中。20.根據上述技術方案16-19任一項的方法，其中,使用水解試劑如水或鹼水溶液進行水解，優選水或氫氧化鈉水溶液，尤其地，去離子水。21.根據上述技術方案16-20任一項的方法，其中，水解溶於溶劑中的N-羧基酸酐的過程中，所述水解試劑如水或鹼水溶液的使用量是：0.1-50mL/mgN-羧基酸酐，優選1-30mL/mgN-羧基酸酐，尤其1-20mL/mgN-羧基酸酐，更優選1-10mL/mgN-羧基酸酐。以下實例旨在說明本發明而非限制本發明。具體實施方式實施例1.測試L-丙氨酸-NCA樣品溶液的配製氮氣保護下精確稱取大約20mgL-丙氨酸-NCA待檢樣品，用1毫升無水1,4-二氧六環（含水量≤0.04%）溶解。將該溶液滴加到攪拌中的10毫升去離子水中，將該混合物用去離子水完全轉移到20毫升容量瓶中，用去離子水定容。實施例2.測試L-酪氨酸-NCA樣品溶液的配製氮氣保護下精確稱取大約20mgL-酪氨酸-NCA待檢樣品，用1毫升無水1,4-二氧六環（含水量≤0.04%）溶解。將該溶液滴加到攪拌中的10毫升0.01M氫氧化鈉水溶液中，將該混合物用去離子水完全轉移到20毫升容量瓶中，用去離子水定容。實施例3.測試L-穀氨酸-γ-苄酯-NCA樣品溶液的配製氮氣保護下精確稱取大約20mgL-穀氨酸-γ-苄酯-NCA待檢樣品，用1毫升無水1,4-二氧六環（含水量≤0.04%）溶解。將該溶液滴加到攪拌中的10毫升去離子水中，將該混合物用去離子水完全轉移到20毫升容量瓶中，用去離子水定容。實施例4.測試L-ε-三氟乙醯基-賴氨酸-NCA樣品溶液的配製氮氣保護下精確稱取大約20mgL-ε-三氟乙醯基-賴氨酸-NCA待檢樣品，用1毫升無水1,4-二氧六環（含水量≤0.04%）溶解。將該溶液滴加到攪拌中的10毫升去離子水中，將該混合物用去離子水完全轉移到20毫升容量瓶中，用去離子水定容。實施例5.空白溶液的配製將1毫升無水1,4-二氧六環（含水量≤0.04%）滴加到攪拌中的10毫升去離子水中，將該混合物用去離子水完全轉移到20毫升容量瓶中，用去離子水定容。實施例6.樣品檢測將上述配製好的四個溶液用離子色譜進行檢測，色譜柱為DionexIonPacTMAS19,4.0×250mm，流速1.0ml/min，10mM的KOH進行洗脫，採用電導檢測器檢測信號，氯離子出峰時間約為10.6min處。同時用氯化鈉配製對照品，用外標法進行檢測。氯離子檢測結果如表1。表1：氯離子檢測結果實施例7.製備共聚物-1（即，醋酸格拉替雷）三口瓶中加入經金屬鈉處理過的1,4-二氧六環200mL，室溫下加入L-丙氨酸NCA2.590克，L-酪氨酸NCA1.036克，L-穀氨酸-γ-苄酯NCA1.974克，L-ε-三氟乙醯基-賴氨酸NCA4.693克。攪拌30分鐘，至體系澄清，加入二乙胺33毫克。20-25攝氏度下機械攪拌24小時。將反應液緩慢倒入400mL水中，產生大量白色固體，抽濾後，真空乾燥得7.424克，收率92.8%。三口瓶中加入上述受保護的格拉替雷7.0克，31%溴化氫/乙酸混合液140mL，在22-24攝氏度下攪拌22小時。將紅棕色反應液倒入400mL水中，產生大量白色固體，抽濾，真空乾燥得三氟乙醯基格拉替雷4.76克。三口瓶中加入上述三氟乙醯基格拉替雷0.76克，1M哌啶水溶液38mL，室溫下攪拌24小時。用1KDa的濾膜進行透析，得到的溶液加冰乙酸至pH為5.5-5.8，攪拌1小時。凍幹得白色粉末，平均分子量為7803。