硫酸軟骨素鈉鹽的純化方法
2023-06-01 16:28:11
專利名稱：硫酸軟骨素鈉鹽的純化方法
技術領域：
本發明涉及一種酸性粘多糖的純化方法，尤其涉及一種從動物軟骨中提 取的硫酸軟骨素鈉鹽粗品的純化方法，屬於生物化學製藥領域。
背景技術：
硫酸軟骨素鈉鹽是從動物軟骨中提取的一種酸性粘多糖，主要用於預防 和治療心腦血管疾病，我國也將其用於預防鏈黴素引起的耳聾。現在市場上的硫酸軟骨素一般有兩個規格，即分別為90%和95%，兩者 的蛋白質含量都較高，產品放置一段時間後就會變黃，變質，保質期在兩年 以內，有可能產品用戶還沒服用就過了保質期了。現有的硫酸軟骨素鈉鹽生產工藝一般是先稀鹼處理動物軟骨，再經酶解， 乙醇沉澱等步驟，可生產出90%左右含量的食品級產品，個別方法也有通過 超濾或鈣鹽轉化法生產含量大於95%的醫用級產品。但現有的各種方法均無 法做到大批量的生產含量大於99%，蛋白質含量低於1.0。^的硫酸軟骨素鈉 鹽。有部份文獻報導採用強鹼性陰離子交換樹脂可以試製蛋白質含量同樣低 的產品，但僅限於實驗室規模，不能擴大到大生產實際應用。迄今為止，缺 乏一種大規模，可批量的硫酸軟骨素粗品的純化方法。發明內容本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種大規模， 可批量生產的純化硫酸軟骨素鈉鹽的方法。本發明所要解決的技術問題是通過以下技術方案來實現的 一種硫酸軟骨素鈉鹽的純化方法，包括(1) 將粗品硫酸軟骨素鈉鹽(90%含量)經水溶解後上強酸陽離子交換 樹脂柱，收集過柱液；用純水洗脫，收集洗脫液與過柱液合併，備用；(2) 將步驟(1)所收集的過柱液和洗脫液上大孔弱鹼陽離子交換柱，依次用純水、1-5°/。的氯化鈉溶液洗脫雜質；(3)用7-10%的氯化鈉溶液洗脫硫酸軟骨素鈉鹽，收集洗脫液；過濾， 超濾脫鹽，用乙醇沉澱，乾燥，即得。 為了達到更好的純化效果，優選的-步驟(1)中所收集的過柱液或洗脫液的pH值小於3.0; 步驟(2)中用3-5%的氯化鈉溶液洗脫雜質；步驟(3)中用8%的氯化鈉溶液洗脫硫酸軟骨素鈉鹽；所述的過濾是將洗脫液板框過濾後再用0.2微米微孔濾膜過濾；所述的超濾脫鹽是用10000分 子量超濾膜反覆加純水超濾至氯化鈉濃度低於2.0%。本發明將粗品硫酸軟骨素鈉鹽經水溶解，依次通過強酸陽離子交換樹脂 轉變成氫型游離硫酸軟骨素，再通過羥型大孔陰離子交換柱或在反應罐中攪 拌吸附從而使產品交換吸附在大孔陰離子交換柱上。純水洗滌數次，根據產 品要求的蛋白質限度用不同濃度氯化鈉再進行洗脫，提高洗脫液氯化鈉的濃 度有助於得到純度更高，雜質更少的高純度產品(最高几近純品)。 一般做為口服級產品，硫酸軟骨素含量達到99.0%以上，蛋白質含量低於0.5%已足夠 了。最後用較高濃度(大於5.0%)的氯化鈉洗下產品，超濾脫鹽後，用乙醇 沉澱，8(TC以下乾燥，得到純度很高的硫酸軟骨素鈉鹽。本發明的純化硫酸軟骨素鈉鹽主要具有以下幾方面的優點1、 由本發明方法所純化的硫酸軟骨素鈉鹽純度高，雜質少；現有方法除 強鹼性陰離子交換樹脂無一能將硫酸軟骨素鈉鹽產品中的蛋白質含量降到l.O %以下。本發明方法通過提高氯化鈉濃度洗脫雜質使蛋白質含量輕鬆達到0.5 %以下甚至更低水平，硫酸軟骨素鈉鹽的純度達到99.0%以上。2、 本發明方法產量大，可應用於工業化大規模生產；現有方法中採用強 鹼性陰離子交換樹脂雖然在產品質量上與本發明方法不相上下，但其單位體 積樹脂產量不及本發明方法二十分之一，應用本發明方法IOOO升樹脂每天可 提純得到100公斤高純度硫酸軟骨素鈉鹽，而現有方法無法將蛋白質的含量 降到1.0%以下。
具體實施方式
下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨 著描述而更為清楚。但這些實施例僅是範例性的，並不對本發明的範圍構成 任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和範圍下 可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均 落入本發明的保護範圍內。
實施例1
1、 按照以下方法預處理強酸性陽離子交換樹脂732號(購自上海樹脂廠) (1)用純水浸泡新樹脂24小時；(2)加入1N鹽酸溶液浸泡樹脂12小時，純水洗至pH5.0; (3)加0.5N氫氧化鈉溶液浸樹脂12小時，純水洗至pH8.0;(4)用柱床體積2倍1N鹽酸溶液流經樹脂柱床，流速為每小時1倍柱床體 積，鹽酸合部加完後，加純水洗至pH5.0備用；2、 按照以下方法預處理大孔弱鹼陰離子交換樹脂(魯抗樹脂廠生產，其 型號為D-845)， (l).用純水浸泡新購樹脂24小時；(2)加1N氫氧化鈉溶液 浸泡樹脂12小時，純水洗至pH8.0; (3)力Q 0.5N鹽酸溶液浸泡樹12小時， 純水洗至pH5.0; (4).用柱床體積2倍量1N氫氧化鈉溶液流經樹脂柱床，流 速為每小時l倍柱床體積，氫氧化鈉完全加完後，加純水洗至pH7.0備用；3、 按陰、陽樹脂體積交換當量的三分之一計算(按樹脂標示交換當量3/1 計算)出粗品硫酸軟骨素的重量，加20倍純水溶解，再用板框過濾得到澄清 溶液；4、 先步驟(3)所得到的澄清溶液通過陽離子交換樹脂，收集pH3.0以 下部份溶液，最後用純水洗脫，當pH高於3.0時，停止收集；樹脂按常規方 法再生備下次使用；5、 將步驟(4)所收集溶液控制流速為每小時1倍柱床體積，通過大孔 弱鹼陽離子交換柱，全部加注完成後先用純水洗脫，再用3%氯化鈉洗脫雜質；6、 繼續用8.0%氯化鈉洗脫，從硫酸軟骨素鈉鹽流出開始收集至無產品 流出(或較少產品流出)；7、 將流出液板框過濾，0.2微米微孔濾膜過濾後，再用10000分子量超 濾膜反覆加純水超濾至氯化鈉濃度低於2.0%或調整至2.0%。體積濃縮至硫 酸軟骨素濃度為8.0 %左右時加2倍95 %乙醇沉澱。8、用85%和95%乙醇依次脫水，抽乾，80。C以下乾燥，得到硫酸軟骨 素純品；經檢測，本純化方法所得到的硫酸軟骨素純品的純度為99.2%，蛋 白含量為0.5%，其它雜質約0.3%。 實施例21 、按照以下方法預處理強酸性陽離子交換樹脂732號(購自上海樹脂廠) (1).用純水浸泡新樹脂24小時；(2)加入1N鹽酸溶液浸泡樹脂12小時，純水洗至pH5.0; (3)加0.5N氫氧化鈉溶液浸樹脂12小時，純水洗至pH8.0; (4)用柱床體積2倍1N鹽酸溶液流經樹脂柱床，流速為每小時1倍柱床體積，鹽酸合部加完後，加純水洗至pH5.0備用；2、 按照以下方法預處理大孔弱鹼陰離子交換樹脂(魯抗樹脂廠生產，其 型號為D-845)， (l).用純水浸泡新購樹脂24小時；(2)加1N氫氧化鈉溶液 浸泡樹脂12小時，純水洗至pH8.0; (3)加0.5N鹽酸溶液浸泡樹12小時， 純水洗至pH5.0; (4).用柱床體積2倍量1N氫氧化鈉溶液流經樹脂柱床，流 速為每小時l倍柱床體積，氫氧化鈉完全加完後，加純水洗至pH7.0備用；3、 按陰、陽樹脂體積交換當量的三分之一計算(按樹脂標示交換當量3/1 計算)出粗品硫酸軟骨素的重量，加20倍純水溶解，再用板框過濾得到澄清 溶液；4、 先步驟(3)所得到的澄清溶液通過陽離子交換樹脂，收集pH3.0以 下部份溶液，最後用純水洗脫，當pH高於3.0時，停止收集；樹脂按常規方 法再生備下次使用；5、 將步驟(4)所收集溶液控制流速為每小時1倍柱床體積，通過大孔 弱鹼陽離子交換柱，全部加注完成後先用純水洗脫，再用5%氯化鈉洗脫雜質；6、 繼續用8.0。Z氯化鈉洗脫，從硫酸軟骨素鈉鹽流出開始收集至無產品 流出(或較少產品流出)；7、 將流出液板框過濾，0.2微米微孔濾膜過濾後，再用10000分子量超 濾膜反覆加純水超濾至氯化鈉濃度低於2.0% 。體積濃縮至硫酸軟骨素濃度為 8.0%左右時加2倍95%乙醇沉澱；8、 用85%和95%乙醇依次脫水，抽乾，8(TC以下乾燥，得到硫酸軟骨 素純品。經檢測，本純化方法所得到的硫酸軟骨素純品的純度為99.7%，蛋白含量為0.2%，其它雜質約0.1%。 實施例31 、按照以下方法預處理強酸性陽離子交換樹脂732號(購自上海樹脂廠): (1).用純水浸泡新樹脂24小時；(2)加入1N鹽酸溶液浸泡樹脂12小時，純水洗至pH5.0; G)加0.5N氫氧化鈉溶液浸樹脂12小時，純水洗至pH8.0; (4)用柱床體積2倍1N鹽酸溶液流經樹脂柱床，流速為每小時1倍柱床體積，鹽酸合部加完後，加純水洗至pH5.0備用；2、 按照以下方法預處理大孔弱鹼陰離子交換樹脂(魯抗樹脂廠生產，其 型號為D-845)， (l).用純水浸泡新購樹脂24小時；(2)加1N氫氧化鈉溶液 浸泡樹脂12小時，純水洗至pH8.0; (3)加0.5N鹽酸溶液浸泡樹12小時， 純水洗至pH5.0; (4).用柱床體積2倍量1N氫氧化鈉溶液流經樹脂柱床，流 速為每小時l倍柱床體積，氫氧化鈉完全加完後，加純水洗至pH7.0備用；3、 按陰、陽樹脂體積交換當量的三分之一計算(按樹脂標示交換當量3/1 計算)出粗品硫酸軟骨素的重量，加20倍純水溶解，再用板框過濾得到澄清 溶液；4、 先步驟(3)所得到的澄清溶液通過陽離子交換樹脂，收集pH3.0以 下部份溶液，最後用純水洗脫，當pH高於3.0時，停止收集；樹脂按常規方 法再生備下次使用；5、 將步驟(4)所收集溶液控制流速為每小時1倍柱床體積，通過大孔 弱鹼陽離子交換柱，全部加注完成後先用純水洗脫，再用4%氯化鈉洗脫雜質；6、 繼續用8.0%氯化鈉洗脫，從硫酸軟骨素鈉鹽流出開始收集至無產品 流出(或較少產品流出)；7、 將流出液板框過濾，0.2微米微孔濾膜過濾後，再用10000分子量超 濾膜反覆加純水超濾至氯化鈉濃度低於2.0%或調整至2.0% 。體積濃縮至硫 酸軟骨素濃度為8.0%左右時加2倍95%乙醇沉澱。8、 用85%和95%乙醇依次脫水，抽乾，80'C以下乾燥，得到硫酸軟骨 素純品；經檢測，本純化方法所得到的硫酸軟骨素純品的純度為99.4%，蛋 白含量為0.4%，其它雜質約0.2%。
權利要求
1、一種硫酸軟骨素鈉鹽的純化方法，包括(1)將粗品硫酸軟骨素鈉鹽經水溶解後上強酸陽離子交換樹脂柱，收集過柱液；用純水洗脫，收集洗脫液與過柱液合併，備用；(2)將步驟(1)所收集的過柱液和洗脫液上大孔弱鹼陽離子交換柱，依次用純水、1-5％的氯化鈉溶液洗脫雜質；(3)用7-10％的氯化鈉溶液洗脫硫酸軟骨素鈉鹽，收集洗脫液，過濾，超濾脫鹽，用乙醇沉澱，乾燥，即得。
2、 按照權利要求1的純化方法，其特徵在於步驟(1)中所收集的過 柱液或洗脫液的pH值小於3.0。
3、 按照權利要求1的純化方法，其特徵在於步驟(2)中用3-5%的氯 化鈉溶液洗脫雜質。
4、 按照權利要求1的純化方法，其特徵在於步驟(3)中用8%的氯化 鈉溶液洗脫硫酸軟骨素鈉鹽。
5、 按照權利要求1的純化方法，其特徵在於步驟(3)中所述的過濾 是將洗脫液板框過濾後再用0.2微米微孔濾膜過濾。
6、 按照權利要求1的純化方法，其特徵在於步驟(2)中所述的超濾 脫鹽是用10000分子量超濾膜反覆加純水超濾至氯化鈉濃度低於2.0%。
全文摘要
本發明公開了一種硫酸軟骨素鈉鹽的純化方法，該純化方法包括(1)將粗品硫酸軟骨素鈉鹽經水溶解後上強酸陽離子交換樹脂柱，收集過柱液；用純水洗脫，收集洗脫液，備用；(2)將步驟(1)所收集的洗脫液上大孔弱鹼陽離子交換柱，依次用純水、氯化鈉溶液洗脫，收集洗脫液；洗脫液過濾後，超濾脫鹽，用乙醇沉澱，乾燥，即得硫酸軟骨素鈉鹽純品。由本發明方法所純化的硫酸軟骨素鈉鹽純度達到99.0％以上，雜質少，可蛋白質含量降到1.0％以下。應用本發明方法提純，1000升樹脂每天可得到100公斤高純度硫酸軟骨素鈉鹽，可實現大規模生產。
文檔編號C08B37/08GK101215339SQ20081000063
公開日2008年7月9日 申請日期2008年1月11日 優先權日2008年1月11日
發明者張國志 申請人:張國志