一種醋酸潑尼鬆快速檢測方法與流程
2023-06-01 19:20:31 2
本發明屬於分析化學檢測領域，涉及一種醋酸潑尼松的快速檢測方法。
（二）
背景技術：
近年來，人們對健康和藥物安全愈來愈重視，由於保健品和中成藥大部分來源於天然物質，療效溫和，具有較高安全性，在哮喘等慢性疾病的治療中受到國內外患者的青睞，但其存在起效慢或效果不明顯的缺點。為謀取暴利，部分不法分子利用人們急於見效的心理，在沒有經過任何藥理和毒理研究的情況下，在其中隨意非法添加起效快、療效確切的具有止咳作用的化學藥品，目前常見的有茶鹼、地塞米松等。保健品和中成藥的化學成分非常複雜，不同廠家工藝不統一，不能與化學藥品一樣進行全程檢測，非法添加的化學藥物不易被識別，極具隱蔽性和欺騙性。消費者在不知情的情況下長期服用，極易誘發不良反應，使健康受到不同程度的危害，嚴重者甚至可導致死亡。
醋酸潑尼松(Prednisone Acetate)是目前市場上佔有率較高的腎上腺皮質激素類止咳平喘藥物，主要用於過敏性與自身免疫性炎症性疾病，適用於結締組織病，系統性紅斑狼瘡，重症多肌炎，嚴重的支氣管哮喘，皮肌炎，血管炎等過敏性疾病，目前報導的主要不良反應為柯興氏徵，誘發神經精神症狀以及消化系統潰瘍、骨質疏鬆、生長發育受抑制、並發和加重感染等，另外醋酸潑尼松與對乙醯氨基酚多種藥物之間可發生相互作用，對人體產生不同程度的危害。由於醋酸潑尼松止咳起效快速顯著，且便宜易得，被非法添加到止咳類保健品和中成藥中的風險指數很高，因此亟需開發快速、可靠的醋酸潑尼松的檢測方法，以保障人民群眾的飲食用藥安全。
醋酸潑尼鬆化學名為17α，21-二羥基孕甾-1，4-二烯-3，11，20-三酮21-醋酸酯，白色或幾乎白色的結晶性粉末，不溶於水，微溶於乙醇、乙酸乙酯，略溶於丙酮，易溶於氯仿。化學結構中具有C17-α-醇酮基團，具有還原性。在強鹼性條件下能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲臢(formazan)，呈色，因此利用四氮唑比色反應可以快速鑑別醋酸潑尼松。但中成藥和保健品中成分複雜，有大量有色物質(如植物色素等)，他們中有些能溶於有機溶劑，而有些則可溶於水，如不分離，則會嚴重幹擾快速檢測方法的顯色反應的觀察，難以得出正確的判斷結果。
目前，國家藥品監督管理局批准的檢查中成藥中非法添加醋酸潑尼松的快速檢查為薄層色譜法（TLC法），對操作人員的要求較高，不利於在基層部門廣泛開展，人們需要一種操作簡單、速度較快、成本較低的檢測方法，以便快速鑑別出保健品和中成藥中是否添加醋酸潑尼松。利用化學反應的快速鑑別法，以其成本低、反應迅速、現象易觀察、操作步驟簡單等優點得到很多人的重視，非常適合在基層尤其是偏遠地區的推廣。本發明針對目前市場上的大部分保健品和中成藥提供一種準確快速的醋酸潑尼松非法添加的檢測方法，以滿足檢驗及監管的需要。
（三）
技術實現要素：
本發明針對現有技術中存在的上述缺點，提供一種醋酸潑尼松的快速檢測方法，具有分析成本低、不需要對照品及較大型分析儀器、專屬性強、靈敏度高、檢驗結果正確率高等優點，適用於中成藥和保健品中是否添加醋酸潑尼松的現場快速檢測。
本發明是通過如下技術方案實現的：
一種醋酸潑尼松的快速檢測方法，檢測步驟為：
1)取膠囊劑的內容物、片劑（包衣片除去著色包衣）或顆粒劑，研細，取0.5g（1/3～1次口服劑量）作為待測樣品；或取口服溶液3ml（1/3～1次口服劑量）作為待測樣品；
2) 取待測樣品，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖2～4min，離心或靜置使分層；
3) 取2)上層溶液，置具塞離心管中，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心或靜置使分層；
4)取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加0.5%氯化三苯四氮唑無水乙醇試液5滴，混合均勻，加3)上層溶液5滴，2分鐘內溶液顏色變紅色為待測樣品中含醋酸潑尼松。
2.根據權利要求1所述的一種醋酸潑尼松的快速檢測方法，其特徵為：
步驟1)中，取膠囊劑的內容物、片劑或顆粒劑（1/3～1次口服劑量），研細，有利於目標物醋酸潑尼松溶解；若片劑為有色包衣，應除去有色包衣，減小色素幹擾結果的判定；若供試品為口服溶液，取3ml（1/3～1次口服劑量）試驗；
步驟2)中，鹽酸溶液為水溶液，濃度為0.5～1mol/L，優選lmol/L；
步驟2)中選擇的有機萃取液乙酸乙酯，為普通化學試劑,實驗中分別用乙醚、氯仿進行了試驗，在鹼性條件下，乙醚、氯仿乳化嚴重，不利於與水相分層，乙醚揮發性更強，氯仿更不利於環保，本試驗優化萃取液為乙酸乙酯；
步驟3)中，氫氧化鈉溶液為水溶液，濃度為0.5～1mol/L，優選lmol/L；
步驟4)中，氯化三苯四氮唑試液為氯化三苯四氮唑的無水乙醇溶液，濃度為0.5%；
步驟4)中1mol/L氫氧化鈉溶液：取醋酸潑尼松5mg，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖2～4min，離心使分層，取上層溶液，置具塞離心管中，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心，上層液作為供試品溶液，本試驗優化1mol/L氫氧化鈉溶液用量1滴（40～60μl）；
步驟4)中供試品溶液溶液和氯化三苯四氮唑試液用量的優化：
取醋酸潑尼松5mg，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖2～4min，離心使分層，取上層溶液，置具塞離心管中，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心，上層液作為供試品溶液，本試驗優化氯化三苯四氮唑試液和供試品溶液的用量均為5滴；
步驟4)中實驗反應溫度和觀測時間：
本試驗在常溫條件下，陽性反應在20秒後開始，能夠觀測到試劑顏色逐漸變紅，2分鐘後顏色不再加深。
本發明與現有技術相比，有益效果如下：
1)待測樣品通過提取、洗滌、與氯化三苯四氮唑溶液和強鹼溶液反應顯色三步即可檢出樣品中是否含有醋酸潑尼松，且所用提取液、洗滌液、檢測劑均為普通的化學試劑，操作簡便，分析成本低；
2)待測樣品經預處理後再與檢測劑反應，可以排除相關因素的的幹擾，更有利於對溶液顏色的觀察，對樣品中是否有醋酸潑尼松做出更準確地判斷；
3)本發明的檢測方法中，所用提取液、洗滌液、萃取液、檢測劑的專屬性強，通過提取、洗滌、萃取過程中三次利用不同物質溶解性差異分離除去幹擾物質，使顯色反應的靈敏度提高、檢測結果正確率高、顯色反應迅速，現象明顯，適用於現場快速檢測。
（四）具體實施方式
下面結合具體實施例進一步描述本發明，在不脫離本發明上述技術思想情況下，根據本領域普通技術知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均包括在本發明的範圍內。
實施例1: 顆粒的檢測
試劑配製：提取液為乙酸乙酯；1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸9ml，加水適量使成100ml，搖勻；1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，加水100ml，振搖使溶解；氯化三苯四氮唑試液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加無水乙醇使溶解為100ml。
待測樣品：小兒肺熱咳喘顆粒（上海醫藥集團青島國風藥業有限公司生產，批號：160304，規格3g/袋，LC-MS/MS方法測定本品不含醋酸潑尼松）。
檢測方法，步驟為：取1袋，研細，取0.5g，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陰性反應（不顯紅色）。
結果分析：本品不含醋酸潑尼松，結果與實際相符。
實施例2: 模擬陽性顆粒樣品的檢測
試劑配製：提取液為乙酸乙酯；1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸9ml，加水適量使成100ml，搖勻；1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，加水100ml，振搖使溶解；氯化三苯四氮唑試液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加無水乙醇使溶解為100ml。
待測樣品：小兒肺熱咳喘顆粒（上海醫藥集團青島國風藥業有限公司生產，批號：160304，規格3g/袋），每袋樣品中加入醋酸潑尼松10mg。
檢測方法，步驟為：取加入醋酸潑尼松10mg的1袋樣品，研細，取0.5g，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陽性反應（顯紅色）。
結果分析：本品為加入醋酸潑尼松的模擬陽性樣品，結果檢出醋酸潑尼松，結果與實際相符。
實施例3: 糖漿的檢測
試劑配製：提取液為乙酸乙酯；1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸9ml，加水適量使成100ml，搖勻；1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，加水100ml，振搖使溶解；氯化三苯四氮唑試液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加無水乙醇使溶解為100ml。
待測樣品：強力批把露（濰坊天陽藥業有限公司生產，批號：160401，規格180ml/瓶，LC-MS/MS方法測定本品不含醋酸潑尼松）
檢測方法，步驟為：取3ml，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陰性反應（不顯紅色）。
結果分析：本品不含醋酸潑尼松，結果與實際相符。
實施例4: 模擬陽性糖漿樣品的檢測
試劑配製：提取液為乙酸乙酯；1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸9ml，加水適量使成100ml，搖勻；1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，加水100ml，振搖使溶解；氯化三苯四氮唑試液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加無水乙醇使溶解為100ml。
待測樣品：強力批把露（濰坊天陽藥業有限公司生產，批號：160401，規格180ml/瓶；取3ml，加醋酸潑尼松2mg）
檢測方法，步驟為：取加入醋酸潑尼松2mg 的口服溶液3ml，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陽性反應（顯紅色）。
結果分析：本品為加入醋酸潑尼松的模擬陽性樣品，結果檢出醋酸潑尼松，結果與實際相符。
實施例5:片劑的檢測
試劑配製：提取液為乙酸乙酯；1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸9ml，加水適量使成100ml，搖勻；1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，加水100ml，振搖使溶解；氯化三苯四氮唑試液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加無水乙醇使溶解為100ml。
待測樣品：珍菊降壓片（江蘇中興藥業有限公司生產，批號：160401，規格0.24g，LC-MS/MS方法測定本品不含醋酸潑尼松）
檢測方法，步驟為：取5片，除去著色包衣，研細，取0.5g，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陰性反應（不顯紅色）。
結果分析：本品不含醋酸潑尼松，結果與實際相符。
實施例6模擬陽性片劑樣品的檢測
試劑配製：提取液為乙酸乙酯；1mol/L鹽酸溶液：取鹽酸9ml，加水適量使成100ml，搖勻；1mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，加水100ml，振搖使溶解；氯化三苯四氮唑試液：取氯化三苯四氮唑0.5g，加無水乙醇使溶解為100ml。
待測樣品：珍菊降壓片（江蘇中興藥業有限公司生產，批號：160401，規格0.24g），取5片，除去著色包衣，加醋酸潑尼松10mg。
檢測方法，步驟為：取5片，除去著色包衣，加醋酸潑尼松10mg，研細，取0.5g，置具塞離心管中，加1mol/L鹽酸溶液5ml，振搖1min，再加乙酸乙酯5ml，強烈振搖3min，離心使分層，取上層溶液，加等體積的1mol/L氫氧化鈉溶液，振搖1min，離心使分層，上層液作為供試品溶液；取1mol/L氫氧化鈉溶液1滴，置白色瓷點滴板上，加氯化三苯四氮唑試液5滴，混合均勻，加供試品溶液5滴，顏色呈陽性反應（顯紅色）。
結果分析：本品為加入醋酸潑尼松的模擬陽性樣品，結果檢出醋酸潑尼松，結果與實際相符。