使用no(一氧化氮)供體誘導動脈生成的製作方法

2023-06-01 12:17:56

使用no(一氧化氮)供體誘導動脈生成的製作方法【專利摘要】本發明主要涉及一種促進側支循環的方法，包括使受試者暴露於治療有效量的NO供體的步驟，其中該治療有效量的NO供體促進動脈生成，從而足以在生理學或病理學條件下加強側支循環。【專利說明】使用NO(-氧化氮）供體誘導動脈生成【
技術領域：
】[0001]本發明涉及通過給予NO(-氧化氮）供體來治療或預防動脈供血不足的方法。【
背景技術：
】[0002]心血管疾病以及涉及心血管的其他疾病，更具體地，動脈供血不足影響越來越多的患者群體、主要國際死亡率和發病率統計並且具有重要的經濟意義。例如，在德國，每年約有280000名患者患上心肌梗塞，而約有65000名患者死亡。[0003]心血管疾病的一個重要原因是動脈血管部分或完全閉塞，導致由動脈血管供應的組織的氧和營養物質的供應減少。[0004]心絞痛，即胸痛，是一種反映對於心肌代謝的要求的供氧不足的臨床症狀，導致局部缺血，其通常是由阻塞（狹窄）、冠狀動脈的痙攣或微血管功能障礙造成的。[0005]動脈生成是一種其中已經預先存在的小動脈旁系能夠發育成完全功能化的電導動脈（conductanceartery)的過程，其與動脈閉塞的部位旁通和/或補償血流至由不足的動脈供血提供的缺血性範圍。因此，動脈生成是一種用於在動脈血管中的急性或慢性閉塞事件之後維持並再生血流的高度有效內源性機制。在這種情況下，側支血管（collateral)能夠起到天然旁路的作用。[0006]動脈生成是一種不同於血管生成或新血管生成的過程，其中發生動脈血管的重新（de-novo)形成（BuschmannI.和SchaperW.，JournalofPathology,2000,190:338-342)。[0007]從數十年前就開始在心血管疾病如冠狀動脈疾病（CAD，也被稱為缺血性心臟病或冠狀動脈疾病）中使用硝化甘油（硝酸甘油）作為血管舒張劑，其是世界範圍內導致死亡和殘疾的主要原因（McGraeMcDermottM·，JournaloftheAmericanMedicalAssociation,2007,297(11):1253-1255)。由於硝化甘油對於靜脈和動脈的血管舒張作用，使得心臟的工作負荷和能量消耗降低（通過減少預負荷（preload)和後負荷（afterload))以及增加心肌供氧（通過擴張冠狀動脈），其已被單獨使用以用於治療這些疾病的症狀，例如穩定心絞痛。這些症狀包括胸痛、壓迫感、不安、或呼吸困難。然而，硝化甘油還沒有被用於治癒基礎疾病（underlyingdisease)或改善其預後。[0008]因此，硝化甘油已被用於並且主要用於心絞痛發作的急性釋放或預防，心絞痛發作是CAD的最常見症狀（FoxK.等人·，Guidelinesonthemanagementofstableanginapectoris:fulltext.TheTaskForceontheManagementofStableAnginaPectorisoftheEuropeanSocietyofCardiology.EuropeanHeartJournaldoi:10.1093/eurheartj/ehl002;GibbonsR.J.等人，ACC/AHA/ACP-ASIMGuidelinesfortheManagementofPatientsWithChronicStableAngina.JournaloftheAmericanCollegeofCardiology，1999,33(7):2092-2197)〇[0009]在現有技術中，已經描述了硝化甘油在已連續給予該物質（硝化甘油）的情況下不能誘導血管生成（新血管生成）或動脈生成（HopkinsS.P.等人，JournalofVascularSurgery,1998,27(5):886-894;TroidlΚ·等人，JournalofCardiovascularPharmacology,2010,55(2):153-160)。[0010]包含二醇二氮烯鑰和三醇二氮烯鑰（也被稱為NONOate類）的長效NO供體已被證明在動脈疾病的治療中以連續流泵送給予的方式能夠誘導和/或改善形成側支血管(Schaperff.,DE102008005484Al)〇[0011]需要提供用於促進側支循環的藥劑。【
發明內容】[0012]在第一個方面，本發明涉及一種治療或預防動脈供血不足的方法，其中，以有效誘導動脈生成的量以間斷的方式向受試者給予NO供體。[0013]在本發明的上下文中，已經出人意料地發現，NO供體的動脈生成的誘導是有效的，即使沒有連續給予NO供體而是以血漿水平僅在短時間內升高的方式給予也是如此（參見實施例部分）。因此，本發明提供了用於促進側支循環的有效藥劑。基於NO供體能夠誘導動脈生成的發現，本發明現提供了一種用於預防和治療動脈供血不足的有效工具。[0014]根據本發明，術語"治療"或"預防"意指不僅意指疾病的症狀被緩解而且還意指疾病本身被治療或預防。在一種優選的實施方式中，術語"治療"意指改善所述疾病的預後。[0015]根據本發明，術語"動脈供血不足"是指任何供血或供氧不足或由動脈提供的組織的其他供應不足。這種供應不足能夠通過本發明的方法和用途得到克服，其中使用NO供體來增加給定組織的供應。在身體休息過程中和運動過程中都會發生動脈供血不足。[0016]在本發明的一種優選實施方式中，動脈供血不足是在身體休息或運動過程中由於由動脈或旁路或分流供應的組織的供氧或供血不足造成的。[0017]根據一種進一步優選的實施方式，動脈供血不足是由於由於由動脈或旁路或分流供應的組織的氧或血流需求增加造成的。[0018]這種氧或血流的需求增加可具有幾個原因，包括但不限於，增加運動或身體活動，以及增加精神活動或需要增加的氧或血流的疾病。[0019]根據一種進一步優選的實施方式，動脈供血不足的特徵在於動脈血管的部分（狹窄）或完全閉塞。在本發明的上下文中，術語"部分閉塞"等同於狹窄。[0020]動脈血管的部分或完全閉塞是一種公知的現象。其能夠具有多種原因，包括但不限於，血管中物質的沉積（包括不可血管重建的狹窄）、來自鄰近血管的外部組織或流體的壓力（包括舒張性心肌鬆弛中的幹擾）、血管痙攣、導致運動過程中反常血管收縮的血管內皮細胞的功能障礙或者由於血管內皮功能障礙或平滑肌細胞異常造成的微血管損傷。[0021]在一種優選的實施方式中，動脈供血不足是由於血管中物質的沉積造成的。[0022]血管中物質的沉積是一種公知現象，例如導致動脈粥樣硬化。[0023]在另一種優選的實施方式中，動脈供血不足是由於動脈的外部或內部壓力造成的。[0024]動脈的內部壓力可以是由於水腫造成的，但也可以是由於腫瘤向動脈施加壓力造成的。此外，其包括動脈的血管痙攣性收縮，例如在變異型心絞痛（Prinzmetal's心絞痛）中。另外，其還包括反常性血管收縮（paradoxicvasoconstriction)，例如有時在由於內皮或平滑肌細胞功能障礙造成的血管內皮功能障礙或收縮的小動脈血管中發生的。[0025]外部壓力可以是由於能夠向動脈施加壓力的意外或外力造成的。[0026]在另一種優選的實施方式中，動脈供血不足為血管疾病。[0027]根據一種進一步優選的實施方式，動脈供血不足為選自由動脈粥樣硬化、缺血性疾病以及慢性動脈疾病組成的組中的疾病。[0028]在另一種優選的實施方式中，動脈供血不足為冠狀動脈供血不足。[0029]在一種優選的實施方式中，冠狀動脈供血不足為動脈粥樣硬化性冠狀動脈供血不足，尤其是冠狀動脈疾病（冠狀動脈性心臟病或缺血性心臟病）、穩定心絞痛、不穩定心絞痛、心肌缺血或慢性心肌缺血、急性冠脈症候群、或心肌梗塞（心力衰竭或缺血性心肌梗塞）。[0030]在另一種優選的實施方式中，冠狀動脈供血不足為非動脈粥樣硬化性，尤其是冠狀動脈微血管疾病或小血管疾病、變異型心絞痛（Prinzmetal's心絞痛）和心臟X症候群。[0031]在另一種優選的實施方式中，動脈供血不足為腦動脈供血不足（顱內或顱外）。[0032]在一種優選的實施方式中，腦動脈供血不足為動脈粥樣硬化性腦動脈供血不足，尤其是腦缺血、顱外頸動脈疾病、顱外椎動脈疾病、中風前、短暫性腦缺血發作（輕度中風(ministroke))、中風、血管性痴呆、缺血性腦病或缺血性腦血管疾病。[0033]腦動脈供血不足可以是缺血性微血管腦疾病、小血管性痴呆、皮質下動脈粥樣硬化性腦病（賓斯旺格氏病）、阿爾茨海默病或帕金森病。[0034]在一種優選的實施方式中，動脈供血不足為外周動脈供血不足。[0035]在一種優選的實施方式中，外周動脈供血不足為動脈粥樣硬化性外周動脈供血不足，尤其是外周血管疾病（周圍動脈疾病（PAD)或周圍動脈閉塞疾病（PAOD)、包括下肢動脈疾病和上肢動脈疾病）。[0036]在一種優選的實施方式中，外周動脈供血不足為非動脈粥樣硬化性外周動脈供血不足，尤其是雷諾氏症候群（血管痙攣性疾病）、血栓閉塞性脈管炎、閉塞性脈管炎或Buerger病（手足的小動脈和中等動脈以及靜脈的復發進行性炎症和血栓形成（凝血））、血管炎症性疾病（血管炎）、糖尿病性局部缺血、糖尿病神經病變和筋膜室症候群.。[0037]在另一種優選的實施方式中，動脈供血不足可以是腸動脈供血不足，尤其是動脈粥樣硬化性腸動脈供血不足，尤其是缺血性腸病、腸繫膜缺血或腸繫膜梗塞.[0038]在另一種優選的實施方式中，動脈供血不足可以是泌尿生殖器動脈供血不足，尤其是動脈粥樣硬化性泌尿生殖器動脈供血不足，尤其是勃起功能障礙、腎動脈疾病、腎缺血或腎梗死。[0039]在另一種優選的實施方式中，動脈供血不足可以是神經動脈供血不足，尤其是耳鳴。[0040]此外，動脈供血不足可在硬皮病（系統性硬化症）的情況下出現。[0041]此外，動脈供血不足可在纖維肌性發育不良的情況下出現。[0042]在一種優選的實施方式中，動脈供血不足為視網膜中央動脈供血不足，尤其是動脈粥樣硬化性視網膜中央動脈供血不足，尤其是眼動脈供血不足。[0043]在另一種優選的實施方式中，動脈供血不足的特徵在於，不存在血管內皮功能障礙。[0044]血管內皮功能障礙是一種內皮細胞的公知病理學狀態，其能夠被廣泛定義為由內皮細胞產生的或作用於內皮細胞的血管舒張和血管收縮物質之間的不平衡。[0045]在另一種優選的實施方式中，動脈供血不足為慢性動脈供血不足。在本發明的上下文中，術語"慢性動脈供血不足"意指動脈供血不足的病程是慢性的並且經常是進行性的。[0046]根據一種進一步優選的實施方式，慢性動脈供血不足包括血管內皮功能障礙、動脈粥樣硬化、冠狀動脈疾病（冠狀動脈心臟病或缺血性心臟病）、穩定型心絞痛、冠狀動脈微血管疾病或小血管疾病、變異型心絞痛（Prinzmetars心絞痛）和心臟X症候群(cardiacsyndromeX)、血管性痴呆、缺血性腦病或缺血性腦血管疾病、缺血性微血管腦疾病、小血管性痴呆、皮質下動脈粥樣硬化性腦病（賓斯旺格病（Binswanger'sdisease))、阿爾茨海默病、帕金森病、周圍血管疾病（周圍動脈疾病（PAD)或周圍動脈閉塞疾病(PAOD)、血栓閉塞性脈管炎、閉塞性脈管炎或伯格氏病（Buerger'sdisease)、血管炎症性疾病（血管炎）、纖維肌性發育不良、糖尿病性局部缺血、糖尿病神經病變、缺血性腸病、勃起功能障礙、腎動脈疾病、耳鳴、和硬皮病（系統性硬化症）。[0047]根據本發明，術語"N0供體"是指一氧化氮本身或能夠在向受試者給藥後釋放NO的任何分子。[0048]優選地，NO供體為一氧化氮、硝普鈉、硝化甘油（硝酸甘油）、單硝酸異山梨醇酯、硝酸異山梨醇酯、季戊四醇四硝酸酯（PETN)、嗎多明、亞硝酸戊酯或尼可地爾。[0049]在一種優選的實施方式中，NO供體可選自以下：[0050]無機物（Anorganic)：[0051]-氧化氮[0052]亞硝酸鹽[0053]硝酸鹽[0054]有機硝酸酷類：[0055]GTN(硝酸甘油；硝化甘油）[0056]PETN(季戊四醇四硝酸酯）[0057]ISDN(硝酸異山梨醇酯）[0058]ISMN(單硝酸異山梨醇酯）[0059]尼可地爾[0060]有機亞硝酸酷類：[0061]IAN(亞硝酸異戊酯；亞硝酸戊酯）[0062]IBN(亞硝酸異丁酯）[0063]N-亞硝基化合物:[0064]N-亞硝胺：[0065]Dephostatin[0066]NDMA[0067]N-甲基-N-亞硝基脲的衍生物[0068]N-輕基-亞硝胺：[0069]制多巴素[0070]銅鐵靈[0071]阿拉諾新[0072]2-(甲基亞硝基氨基）_1，4-苯二酷（N-Nitrosimines)[0073]N-二醇二氮燔錄[類（NONOate)：[0074]精胺NONOate[0075]DEA-NONOate[0076]DETA-NONOate[0077]S-亞硝基硫醇類：[0078]S-亞硝基-N-乙醯青黴胺（SNAP)[0079]S-亞硝基穀胱甘肽[0080]金屬-NO-配合物:[0081]鐵配合物：[0082]硝普酸鈉（硝普鈉）[0083]雙亞硝醯基-鐵配合物[0084]鐵-硫簇亞硝醯類（例如，陸森紅鹽、陸森黑鹽、陸森紅酯）[0085]釕配合物[0086]釋放的NO的雜環類：[0087]雜環N-氧化物類：[0088]氧化呋咱[0089]介離子雜環類：[0090]斯德酮亞胺類（Sydnonimine)(例如，嗎多明、林西多（SIN-I)、環西多明、哌多明、達西多明）[0091]介離子噁三唑類[0092]胍類和N-羥基胍類：[0093]L-精氨酸[0094]L-高精氨酸[0095]N-羥基-L-精氨酸[0096]N-羥基-L-高精氨酸[0097]其他:[0098]烷基C-亞硝基化合物[0099]芳基C-亞硝基化合物[0100]肟類化合物[0101]N-羥基脲類[0102]在一種優選的實施方式中，NO供體為具有甘油骨架的有機硝酸酯。[0103]在另一種優選的實施方式中，NO供體選自由硝化甘油（硝酸甘油）、1，2-二硝酸甘油酯（1，2-GDN)和1，3-二硝酸甘油酯（1，3-GDN)、1-硝酸甘油酯（I-GMN)和2-硝酸甘油酯（2-GMN)組成的組。[0104]在一種尤其優選的實施方式中，NO供體為硝化甘油。[0105]優選地，NO供體為短效NO供體。根據本發明，術語"短效NO供體"是指NO自身或短暫釋放NO的NO供體，在向受試者給予後其具有小於例如45分鐘、30分鐘或優選15分鐘的短半衰期。短效NO供體的實例為硝化甘油（硝酸甘油）、亞硝酸戊酯和硝普鈉。[0106]根據本發明的短效NO供體也可以包括通常被稱為長效硝酸酯（類）的NO供體，但其可起到短效硝酸酯的作用，這取決於其給予方式、劑量和劑型（標準釋放vs.緩釋或延遲製劑）。這樣的NO供體包括，但不限於，有機硝酸酯硝酸異山梨醇酯（ISDN)，當經頰給予或舌下給予時其具有15至35分鐘直至60分鐘的可變半衰期，例如以噴霧劑的形式或者作為片劑。以低劑量給予後的半衰期為約30至60分鐘或在延遲釋放或緩釋製劑中半衰期增加至幾小時。[0107]因此，根據本發明的"短效NO供體"還指在以特定給予方式向受試者給予之後以60分鐘或更短的半衰期釋放NO的NO供體，優選當向受試者頰內或舌下給予時。[0108]在本發明的上下文中，已經出人意料地發現給予短效NO供體對於促進側支循環是尤其適合的。這可通過由短效NO供體誘導的側支血管的短期擴張來解釋，當重複應用時這種短期擴張反過來又會顯著改善動脈生成的效果。本申請的實施例1中具體示例性描述了短效NO供體對於新的側支血管形成的改善效果，以及因而帶來的對側支循環的改善。[0109]因此，在本發明的一種優選實施方式中，NO供體為短效供體。[0110]硝化甘油是這樣的短效NO供體的一個尤其優選的實例。[0111]根據本發明，以能夠誘導動脈生成的量給予該NO供體。本領域技術人員知曉這種量將取決於給予NO供體的受試者。通常，所給予的量可以為0.Img/天至8mg/天，但該量能夠由於受試者體重、對NO供體的血液動力學反應和/或疾病的嚴重程度而變化。[0112]所給予的NO供體的量也可以為0.Img/天至IOmg/天，或者可替代地，為0.Img/天至40mg/天，這取決於NO供體的性質和/或其給予方式。也就是說，如果NO供體以有機硝酸酯硝酸異山梨醇酯（ISDN)的形式給予，則當向受試者頰內或舌下給予時，所給予的量可以為1至40mg/天，優選5mg/天、IOmg/天、15mg/天、20mg/天、25mg/天、30mg/天、35mg/天或40mg/天。[0113]因此，硝酸異山梨醇酯（ISDN)是這樣的短效NO供體的一個同等優選的實例。[0114]在一種優選的實施方式中，所施加的NO供體的量為0.2mg至0.8mg(0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.6mg、0.8mg)的劑量，每天至少1次至最多4次，使得最大的每日劑量為3.2mg。當NO供體為硝化甘油的情況下具體應用這些數值。[0115]根據本發明，術語"NO供體的給予"意指給予給定劑量的NO供體。根據給予的方式，本領域技術人員將知曉該給予會花費一些時間。在一種優選的實施方式中，該NO供體以噴霧劑、可噴霧或可注射溶液、可咀嚼膠囊、可吸入氣體、可吸入氣霧劑或粉劑、顆粒劑、粉劑或片劑的形式給予，優選為舌下、頰內或可咀嚼片劑，其意指給藥可在幾秒鐘內完成。然而，NO供體的給予也可以花費更長時間，例如，如果以輸注方式或通過膏劑或凝膠劑或貼劑給予NO供體時。下文中進一步討論了給予NO供體的方式。[0116]此外，根據本發明，以能夠誘導動脈生成的方式給予NO供體。[0117]如實施例中所示出的，本發明的發明人已經出人意料地發現，當以間斷的方式給予時，NO供體能夠誘導動脈生成。[0118]根據本發明，術語"間斷方式"意指以其血漿或組織水平在給予該NO供體之後僅以短期方式升高之後再次下降的方式給予NO供體。例如當NO供體為上文中所定義的短效NO供體並且向受試者給予該短效NO供體，然後不給予，然後再次給予NO供體的情況下能夠實現。此外，這種給藥方式避免了受試者發展針對NO供體的耐受性並且避免了受試者發展血管內皮功能障礙。[0119]血管內皮功能障礙的誘導是在患有冠狀動脈疾病的患者中具有預後顯著性的一個參數。耐受性的發展和血管內皮功能障礙的誘導是由持續長期暴露於NO供體造成的公知缺陷（UxaA.等人，JournalofCardiovascularPharmacology,2010,56(4):354-359)〇[0120]而且，以間斷的方式給予短效NO供體具有改善的效果，其模仿生物體的生理學狀態，該生理學狀態例如可與運動訓練之後NO的內源性釋放類似（comparable，相比較）。換言之，當以間斷的方式施加時，本發明的NO供體起到仿生物質的作用。這清楚地顯示出優於現有技術的改善，其中到目前為止僅在以連續，從而非間斷的方式給予長效NO供體之後觀察到動脈生成的誘導。[0121]因此，在一種尤其優選的實施方式中，該NO供體為以間斷的方式給予的短效NO供體。[0122]然而，該NO供體同樣有可能是長效NO供體。然而，在本例中，為了實現血漿或組織水平的下降，需注意長效NO供體的給予僅是短暫的並且所獲的血漿或組織水平不太高。[0123]在一種優選的實施方式中，該NO供體的血漿或組織水平升高不超過180分鐘、120分鐘或60分鐘，或者不超過50分鐘、40分鐘、30分鐘、15分鐘、10分鐘或5分鐘。[0124]此外，這還暗示了NO供體能夠以慢性方式給予，S卩，不考慮用NO供體進行急性治療的疾病發展。此外，其還暗示了能夠不考慮用NO供體進行急性治療的疾病發展而建立治療計劃。[0125]在本發明的上下文中，除其他之外，給予NO供體以誘導動脈生成。這暗示了也能夠在不需要血管舒張並且類似於疼痛緩解的這種症狀緩解的時間點或時期給予NO供體。[0126]這與過去使用NO供體（例如硝化甘油）來實現相應疾病症狀的緩解或急性（即，立即）預防不同。這些症狀例如包括心血管疾病情況下的疼痛和/或呼吸困難，以及症狀的緩解或急性預防是通過血管舒張以及其所帶來的疼痛和/或呼吸困難緩解來實現的。然而，如上文中所討論的，給予NO供體的目的並不在於治療基礎疾病，因為該疾病不能通過血管舒張或疼痛緩解而得到治療是公知的。[0127]因此，NO供體作為前動脈型藥劑（pro-arteriogenicagent)的作用(identification，鑑定）還使得NO供體能夠在不需要如疼痛緩解的這種症狀緩解的時間點或時間段給予。在另一種優選的實施方式中，NO供體也可以在沒有如呼吸困難或疼痛的相應症狀的情況下或者在沒有預期這樣的症狀的情況下給予。[0128]在本發明的上下文中，術語"間歇地"還意指NO供體，尤其是短效NO供體不是連續地給予（例如以長期靜脈輸注的方式給予或藉助於向受試者恆定遞送NO供體的移植泵給予）。而該術語還意指在兩次給予NO供體之間存在間隔，並且多次給予NO供體，例如每天至少1、2、3、4、5、6、8、9、12或16次。[0129]如本領域技術人員將會理解的，一次給予NO供體可以包括以一個或多個劑量形式給予，例如片劑或在噴霧給藥時吸入（呼出）。例如，一次給藥可以包括給予兩片片劑或一至三次吸入（呼出）。[0130]對於給藥的時間安排，本領域技術人員知曉可以存在許多方式以實現這種間斷性給藥。例如，可以每天至少一次且每周至少一天給予NO供體，並持續至少兩周。然而，如果在該周內多次給予NO供體，同樣也可以僅給予NO供體一周。[0131]優選地，每天一次、兩次或三次給予NO供體，其中甚至更優選在兩次給予NO供體之間的時間段為至少4小時，尤其是8小時，尤其是至少10小時或12小時。[0132]儘管可以這樣做，但兩次給予NO供體之間的時間段並不一定是相同的。而是，優選這些時間段是不同的，取決於個體給藥時間方案。[0133]在一種優選的實施方式中，一周至少一天給予NO供體。然而，也可以在一周的第2、3、4、5、6或7天給予NO供體。在一種尤其優選的實施方式中，一周的至少第3或4天給予NO供體。[0134]根據本發明，可以給予NO供體持續數周或數月的一段時間。為了有效誘導動脈生成，這是尤其優選的，但也可以進行二分之一周的短期給藥。[0135]在一種優選的實施方式中，NO供體給予2至8周。同樣優選的是給予NO供體3至6周、3至8周、3至10周或4至8周、4至10周或4至12周。這些數字僅僅是舉例並且可根據受試者的個體時間安排變化。[0136]在一種優選的實施方式中，NO供體每周給藥至少一次並且持續至少8周，尤其是持續至少12周。[0137]在另一種優選的實施方式中，NO供體給藥不超過6個月、8個月或12個約。然而，也可以給予NO供體持續2年、3年或甚至更多年。此外，也可以基於NO供體持續數十年或甚至貫穿受試者終生。[0138]在長期給藥的情形中，優選每周給予NO供體一次或兩次或者每周給予至少一次或兩次。[0139]前文中已經描述了個體中的搏動剪切力（pulsatileshearforce)的外源性刺激會導致動脈生成。此外，還描述了如何測量搏動剪切力（W02010/072416)。[0140]因此，在一種優選的實施方式中，NO供體的給予與動脈中的搏動剪切力的外源性刺激聯合起來。[0141]對於本發明的所述實施方式，NO供體應該以當施加外源性刺激時其在受試者身體內是活性的方式給予。在這種情形中，活性意指NO釋放尚未終止或者從NO供體釋放的NO仍存在且有活性。根據所使用的具體NO供體、其在受試者體內的生理學半衰期以及其配方，本領域技術人員能夠確定何時必須向該受試者給予該NO供體以確保在外源性刺激後其是活性的。[0142]在硝化甘油的情況下，已對例如在靜脈或舌下施加之後該受試者體內的半衰期和存留時間進行了重點研宄，其中在血漿中其為2至5分鐘，參見例如ArmstrongP.W.等人，Circulation,1979,59:585-588或ArmstrongP.W.等人，Circulation,1980,62:160-166。[0143]通常，硝化甘油在血漿中的半衰期為2至5分鐘。[0144]應該理解，在本發明的上下文中，術語"半衰期"是指NO供體在受試者體內的半衰期和/或半衰期時間，尤其是在受試者的血漿中。[0145]在一種優選的實施方式中，NO供體在外源性刺激發生前30分鐘直至外源性刺激終止後的30分鐘的時間段內給予。[0146]更優選地，NO供體在外源性刺激之前15分鐘、優選5分鐘、更優選2分鐘直至外源性刺激發生（onset)後30分鐘、優選15分鐘、更優選5分鐘的時間段內給予。[0147]在另一種優選的實施方式中，NO供體在外源性刺激之前2-5分鐘給予，每天給予一次，每周給予5次，持續6周。[0148]搏動剪切力的外源性刺激可通過任意已知的方式實現。其包括藉助於藥物進行的刺激，如增加血壓的藥物。[0149]在一種優選的實施方式中，所述刺激是通過體育鍛鍊或向動脈血管施加內力實現的。[0150]根據本發明，術語"體育鍛鍊"意指受試者的任何訓練，包括但不限於室內運動訓練，慢跑，、步行、越野行走（nordicwalking，北歐式健走）、遊泳、跳舞、騎車和遠足。本領域技術人員將理解，在本發明的情況下任何訓練都將是有幫助的，條件是其與NO供體的給予結合進行。優選地，術語"體育鍛鍊"不包括無人監督的、非醫生指定的常規運動，如休閒散步或家務。[0151]如上文中所討論的，已經發現在本發明的情形下NO供體能夠誘導動脈生成。這不僅能夠治療已經存在的疾病。而是，在本發明的上下文中，還可以預防該疾病。因此，在本發明的一種優選實施方式中，該方法的目的在於預防所述動脈供血不足。[0152]如實施例部分中所示，在本發明的上下文中，在已經存在閉塞的情況下減少梗死面積是可能的。此外，減少受試者中的心律失常也是可能的。因此，在本發明的一種優選實施方式中，該方法使得梗死面積減小、心律失常減少或ST段抬高減少。[0153]能夠以任何適合的方式給予NO供體，以使得其能夠結合至受試者中。這包括口月艮、腸胃外或靜脈內給予以及將NO供體注射到受試者體內，但可以向受試者的黏膜給藥。[0154]因此，在本發明的一種優選實施方式中，NO供體可以經舌（Iingually)、舌下、吸入、頰內、經黏膜（transmucosally)或經口腔黏膜（oromucosally)給予。[0155]在經舌、舌下、或口腔黏膜給予的情況下，優選該NO供體，優選硝化甘油藉助於噴霧劑、可噴霧或可注射溶液、可咀嚼膠囊或以片劑，優選舌下、頰內或可咀嚼片劑、粉劑或顆粒劑的形式給予，或甚至通過NO供體能夠容易地從其被吸入或吸收的吸入器裝置給予。同等優選以可吸入氣體、氣霧劑或粉劑的形式給予該NO供體。[0156]優選地，NO供體的給予是非局部給藥，S卩，NO供體不是向受試者的皮膚給予。在本發明的上下文中，術語"皮膚"不包括受試者的黏膜。[0157]NO供體能夠以任何適合的方式配製以用於上述給藥方式。這樣的配方是本領域技術人員已知的，並且包括在適合的緩衝液中，在氣體中的配方、氣溶膠、片劑、粉劑或顆粒劑。[0158]在一種優選的實施方式中，以使得NO供體能夠從製劑快速釋放的方式配製該NO供體。這包括，例如，不能長時間阻礙NO供體，但可在例如45分鐘、30分鐘或15分鐘、10分鐘、5分鐘或1分鐘內釋放NO供體的製劑。[0159]在本發明全文中，優選施加NO供體的受試者是人類受試者。[0160]在另一方面，本發明還涉及在用於預防或治療動脈供血不足的方法中使用的NO供體，其中該NO供體以對於動脈生成的誘導有效的量和方式給予。[0161]上文中所討論的有關治療或預防動脈供血不足的方法的所有特徵和優選實施方式也適用於根據本發明的這方面用途的NO供體。[0162]在另一方面，本發明還涉及抑制與動脈供血不足的任何治療相關的負面影響的方法，其中該治療為抗動脈生成的（anti-ateriogenic)或抑制動脈生成，該方法包括以對於動脈生成的誘導有效的量和方式向接受所述治療的受試者給予NO供體。[0163]在一種優選的實施方式中，所述治療是乙醯水楊酸（ASA)、糖蛋白IIbIIIa拮抗劑、或依那西普（可溶性腫瘤壞死因子α受體）治療。[0164]本領域已知ASA是一種動脈生成抑制劑（SingerΕ.等人，Vasa，2006,35(3):174-177)。因此，儘管心血管疾病的ASA治療是一種標準治療，但其具有顯著的副作用和缺陷。在本發明的上下文中，已經發現NO供體能夠克服與ASA治療相關的屬格效應（genitiveeffect)(參見實施例部分）。基於這些發現，發明人得出結論認為與其他藥物如糖蛋白IIbIIIa拮抗劑或依那西普治療相關的負面副作用也能夠被減少。[0165]此外，本發明還涉及在與動脈供血不足的任何治療相關的負面影響的抑制的方法中使用的NO供體，其中該治療為抗動脈生成的（anti-ateri〇genic)或抑制動脈生成，其中以對於動脈生成的誘導有效的量和方式向接受所述治療的受試者給予NO供體。[0166]在一種優選的實施方式中，所述治療為乙醯水楊酸（ASA)、糖蛋白IIbIIIa拮抗劑、或依那西普（可溶性腫瘤壞死因子α受體）治療。[0167]上文中所討論的有關治療或預防動脈供血不足的方法的所有特徵和優選實施方式也適用於根據本發明這方面的用於抑制負面影響的方法或根據本發明這方面的用途的NO供體。[0168]在又一個方面，本發明還涉及一種用於預防或治療心律不齊的方法，其中以對於治療所述心律不齊有效的量和方式向受試者給予NO供體。此外，本發明還涉及在用於預防或治療心律不齊（心律失常）的方法中使用的NO供體，其中以對於治療所述心律不齊有效的量和方式向受試者給予該NO供體。[0169]在本發明的上下文中，發明人發現了NO供體能夠預防和治療心律失常（參見實施例部分）。[0170]上文中所定義的有關NO供體以及其配製和給藥的所有特徵和優選實施方式也適用於根據本發明用途的這個方法或NO或供體。[0171]本發明還涉及促進側支循環的方法，包括使受試者暴露於治療有效量的NO供體的步驟，其中，所述治療有效量的NO供體在生理學或病理學條件下促進動脈生成從而足以增強側支循環。[0172]術語側支循環描述了通過所謂的側支血管的血液循環。這些血管是小動脈，其是互連動脈分支的灌注區域的網絡的一部分。在主動脈本身不能為組織提供充分的供血時的情況下，例如由於動脈的閉塞，這些側支血管就被募集起來並且能夠發育成大的通道動脈、發育成動脈的閉塞處的旁路和/或向由該動脈或供血不足的動脈供血的動脈缺血性區域補償血流。在本發明的上下文中，側支循環的促進經由動脈生成發生。[0173]根據本發明，術語"生理學條件"代表不涉及任何疾病的受試者的任何條件。[0174]根據本發明，術語"病理學條件"代表與疾病相關的受試者的任何條件。[0175]優選地，該受試者患有動脈供血不足。[0176]上文中所討論的關於治療或預防動脈供血不足的方法的所有特徵和優選實施方式也適用於促進側支循環的方法。[0177]關於上文中所定義的其中以足以誘導動脈生成的方式給予NO供體的方面，該方式優選為上文中所定義的間斷方式。[0178]通過附圖和實施例進一步描述了本發明，附圖和實施例意在舉例說明，而不是意在限制本發明。【專利附圖】【附圖說明】[0179]圖1:5_天和10-天-對照-組的FP0(=最終閉塞以誘導梗塞）之後每次搏動的ST段抬高的時程（course)。中等灰色部分的ECG圖表示5天RIPPBS，η=8:0.104±0.016mV;黑色部分的ECG圖表示5天SHAMPBS，n=8:0.134±0.034mV;淺灰色部分的ECG圖表示10天RIPPBS,η=7:0.055±0.033mV;深灰色部分的ECG圖表示10天SHAMPBS，n=7:0.124±0·039mV。[0180]在FPO之後的90分鐘記錄ECG。在最初1200次搏動時每次搏動的ST段抬高的時程揭露了在5-和10-天-空白（sham，假手術）-組和5-天-RIP-組之間不存在差異。只在10-天-RIP-組中觀察到較低的ST段抬高。[0181]圖2:5_和10-天-對照-組的ST段抬高。第1欄示出了5天SHAMPBS組的ST段抬高；第2欄示出了5天RIPPBS組的ST段抬高；第3欄示出了10天SHAMPBS組的ST段抬高；第4欄示出了10天RIPPBS組的ST段抬高；以誤差條表示標準差；星號表示與10天SHAMPBS相比顯著（定類p值〈0·025);雙星號表示與5天RIPPBS相比顯著（定類p值〈0·025)。[0182]圖表示出了每組的最大ST段抬高的平均值。5天後在RIP和SHAM之間沒有發現顯著差異。10天後，RIP組中的最大ST段抬高顯著低於空白（sham)(*)和5-天RIP對照(**)(*、**定類P值〈〇·025)。[0183]圖3:FP0後每次搏動的ST段抬高的時程（模塊1:假手術，無RIP)。黑色部分的ECG圖表示5天SHAMPBS,η=8:0.134±0.034mV;淺灰色部分的ECG圖表示5天SHAMNTG,n=7:0.124±0.058mV;中等灰色部分的ECG圖表示5天SHAMNTG-安慰劑，n=6:0.131±0·043mV。[0184]FPO後每次搏動的ST段抬高的時程揭露了在5天後空白對照和治療組之間無差異。[0185]圖4:ST段抬高（模塊1:假手術，無RIP)。第1欄示出了5天SHAMPBS;第2欄示出了5天SHAMNTG-安慰劑；第3欄示出了5天SHAMNTG;以誤差條表示標準差。[0186]圖表示出了每組的最大ST段抬高的平均值。在空白對照（shamcontrol)和治療組之間沒有發現最大ST段抬高的差異。[0187]圖5:FP0後每次搏動的ST段抬高的時程（模塊2:N0間歇（NTG))。淺灰色部分的ECG圖表示5天RIPPBS，n=8:0.104±0.016mV;中等灰色部分的ECG圖表示5天NTG-安慰劑，η=6;0·096±0·061mV;黑色部分的ECG圖表示5天RIPNTG，n=7:0.052±0·030mV。[0188]相比於用PBS或NTG-安慰劑進行的對照治療，在RIP後5天在用NTG治療後檢測到較低的ST段抬高時程。[0189]在NTG組（"5天RIPNTG"）中，ST段抬高顯著低於PBS和NTG-安慰劑組。在PBS和NTG-安慰劑-組之間無顯著性。[0190]圖6:ST段抬高（模塊2:NO間歇（NTG))。第1欄示出了5天RIPPBS;第2欄示出了5天NTG-安慰劑；第3欄示出了5天RIPNTG;以誤差條表示標準差，星號表示相比於PBS和NTG-安慰劑組，ST段抬高顯著減少（定類p值〈0.017)。[0191]圖表示出了每組的最大ST段抬高的平均值。在用NTG治療後，在RIP後5天，相比於PBS和NTG-安慰劑治療，最大ST段抬高顯著減少（*定類p值〈0.017)。[0192]圖7:FPO後每次搏動的ST段抬高的時間程（模塊3:NO連續（ISDN延遲））。淺灰色部分的ECG圖表示5天RIPPBS，n=8:0.104±0.016mV;中等灰色部分的ECG圖表示5天ISDN-安慰齊IJ，η=7:0.110±0.069mV;黑色部分的ECG圖表示5天RIPISDN,η=7:0.062±0.027mV。[0193]相比於用PBS或ISDN-安慰劑進行的對照治療，RIP後5天在用ISDN治療後檢測到較低的ST段抬高時程。[0194]相比於PBS組，ISDN組（"5天RIPISDN"）中的ST段抬高降低，但與PBS和ISDN-安慰劑-組之間無顯著性。[0195]圖8:ST段抬高（模塊3:NO連續（ISDN延遲））。第1欄示出了5天RIPPBS;第2欄示出了5天RIPISDN-安慰劑；第3欄示出了5天RIPISDN;以誤差條表示標準差。[0196]圖表示出了每組的最大ST段抬高的平均值。在用ISDN治療後，相比於RIP後5天的PBS和ISDN-安慰劑治療，最大ST段抬高沒有顯著減少。[0197]圖9:FPO(模塊4:NO間歇+ASA)之後的每次搏動的ST段抬高的時程。淺灰色部分的ECG圖表示5天RIPPBS，n=8;0.104±0.016mV;中等灰色部分的ECG圖表示5天RIPASA+PBS,η=7:0.138±0·098mV;深灰色部分的ECG圖表示5天RIPASA+NTG-安慰劑，η=6:0.144±0·091mV;黑色部分的ECG圖表示5天RIPNTG+ASA，n=7:0.088±0·071mV。[0198]將用NTG+ASA的治療與用PBS+ASA、NTG-安慰劑+ASA和PBS的治療進行比較。通常，所有的曲線在相同的範圍重疊。[0199]用PBS和ASA處理組的ST段抬高高於PBS對照組，但沒有顯著性，與ASA+NTG-安慰劑-組之間也無顯著性。相比於用ASA和PBS處理的組，在ASA+NTG-組中的ST段抬高減少。[0200]圖10:ST段抬高（模塊4:NO間歇+ASA)。第1欄示出了5天RIPPBS;第2欄示出了5天RIPPBS+ASA;第3欄示出了5天RIPNTG-安慰劑；第4欄示出了5天RIPNTG-安慰劑+ASA;第5欄示出了5天RIPNTG;第6欄示出了5天RIPNTG+ASA;以誤差條表示標準差。[0201]圖表示出了每組的最大ST段抬高的平均值。將用NTG+ASA處理與PBS+ASA,NTG-安慰劑+ASA和PBS進行比較。此外，將所有的ASA組（PBS+ASA、NTG-安慰劑+ASA、NTG+ASA)與它們的對照（PBS、NTG-安慰劑、NTG)進行比較。未檢測到顯著差異。[0202]圖11:FPO過程中的心律失常（模塊1:假手術（無RIP))。以組IVb中的欄的連貫順序給出欄數。第1欄示出了5天SHAMPBS;第2欄示出了5天SHAMNTG-安慰劑；第3欄示出了5天SHAMNTG.[0203]根據Lown分級，所有的空白組主要被劃分為IVb級。[0204]在"5天SHAMPBS"組中，87.5%的大鼠具有IVb類心律失常且12.5%具有IVa類心律失常。在"5天SHAMNTG-安慰劑"組中，83.3%的大鼠具有IVb類心律失常且16.7%具有IVa類心律失常，而在"5天SHAMNTG"組中，85.7%的大鼠具有IVb類心律失常且14.3%具有IIIa類心律失常。[0205]圖12:FPO過程中的心律失常（模塊2:NO間歇（NTG))。以組IVb中的欄的連貫順序給出欄數。第1欄示出了5天RIPPBS;第2欄示出了5天RIPNTG-安慰劑；第3欄示出了5天RIPNTG。[0206]當兩個對照組PBS和NTG-安慰劑中的心律失常主要被劃分為IVb級時，NTG處理組更經常被劃分為0級。[0207]在"5天RIPPBS"組中，75.0%的大鼠具有IVb類心律失常，12.5%的IVa類心律失常和12.5%的0類心律失常。對於"5天RIPNTG-安慰劑"組，50.0%的大鼠顯示出IVb類心律失常、16.7%的IVa類、16.7%的IIIb類和16.7%的0類心律失常。感興趣的是，"5天RIPNTG"組顯示出42.9%的IVb類心律失常和57.1%的0類心律失常。[0208]圖13:FPO過程中的心律失常（模塊3:NO連續（ISDN延遲））。以組IVb中的欄的連貫順序給出欄數。第1欄示出了5天RIPPBS;第2欄示出了5天RIPISDN-安慰劑；第3欄示出了5天RIPISDN。[0209]在所有的組中，心律失常類似地更經常地被劃分為IVb類。[0210]在"5天ISDN-安慰劑"組中，57.1%的大鼠具有IVb類心律失常，14.3%的IVa類心律失常和28.6%的IIIb類心律失常。"5天RIPISDN"組顯示出較低嚴重性的心律失常，具有57.1%的IVb類、28.6%的IIIb類和14.3%的0類心律失常。[0211]圖14:FPO過程中的心律失常（模塊4:NO間歇+ASA)。以組IVb中的欄的連貫順序給出欄數。第1欄示出了5天RIPASA+PBS;第2欄示出了5天RIPASA+NTG-安慰劑；第3欄示出了5天RIPASA+NTG。[0212]在所有的組中，心律失常類似地更多地被劃分IVb級。[0213]在"5天RIPASA+PBS"組中，在用ASA+NTG-安慰劑處理的組中和"5天RIPASA+NTG"組中，83.3%的大鼠為IVb類心律失常且16.7%的為IIIa類心律失常。[0214]圖15:VPB-評分。第1欄示出了SHAMPBS;第2欄示出了SHAMNTG-安慰劑；第3欄示出了SHAMNTG;第4欄示出了RIPPBS;第5欄示出了RIPNTG-安慰劑；第6欄示出了RIPNTG;第7欄示出了RIPPBS;第8欄示出了RIPISDN-安慰劑第9欄示出了RIPISDN;第10欄示出了RIPPBS+ASA;第11欄示出了RIPNTG-安慰劑+ASA;第12欄示出了RIPNTG+ASA。[0215]對於每一組的每個Lown級別的百分比，能夠確定VBP評分。顯示出較高級別的動物越多，VBP評分就越高。[0216]VBP評分顯示出每一組的每個Lown級別的百分比。空白組（shamgroups)具有較高的VBP-評分。相比於具有缺血性實驗方案的組（對照組，用PBS處理），更多的大鼠顯示出嚴重的心律失常。用NTG處理顯示減少的心律失常，並且因此較低的VPB-評分。單獨用ASA處理的組或用NTG+ASA處理的組中的VPB-評分高於對照組（用PBS處理）。[0217]圖16:5-天-和10-天-對照-組的梗死面積。第1欄示出了5天SHAMPBS,η=8:13.36±5·22%;第2欄示出了5天RIPPBS，n=8:11.05±5·12%;第3欄示出了10天SHAMPBS，n=7:13·71±6·04%;第4欄示出了10天RIPPBS，n=6:6·57±3·26%;以誤差條表示標準差；星號表示相比於空白的顯著性（定類P值〈〇.013)。[0218]在5天的缺血性實驗方案後，沒有測量到顯著更小的梗死面積，但在10天的RIP後梗死區域相比於空白顯著減少（定類P值〈〇.013)。[0219]在LAD閉塞後90分鐘和再灌注20分鐘後，分析梗死面積。[0220]"10天RIPPBS"組相比於"10天SHAMPBS"組具有顯著更小的梗死區域。兩個5天組之間沒有顯著性。[0221]圖17:梗死面積（模塊1:假手術（無RIP))。第1欄示出了5天SHAMPBS,η=8:13.36±5·22%;第2欄示出了5天SHAMNTG-安慰劑，η=6:14.21±5·79%;第3欄示出了5天SHAMNTG,η=7:14.09±5.18%;以誤差條表示標準差。[0222]梗死面積顯示出SHAM組之間無差異。[0223]三個SHAM組之間無顯著性。[0224]圖18:梗死面積（模塊2:ΝΟ間歇（NTG))。第1欄示出了5天RIPPBS,η=8:11·05±5·12%;第2欄示出了5天NTG-安慰劑：η=6;9·80±6·79%;第3欄示出了5天RIPNTG,η=7:3.61±2.08%;以誤差條表示標準差，星號表示相比於5天RIPPBS的顯著性（定類P值〈〇·017)。[0225]在用NTG處理後梗死面積比對照（用PBS處理）顯著更小（定類ρ值〈0·033)。[0226]相比於"5天RIPPBS"，在"5天RIPNTG"組中觀察到顯著更小的梗死區域。在PBS和NTG-安慰劑-組之間無顯著性。[0227]圖19:梗死面積（模塊3:ΝΟ連續（ISDN延遲））。第1欄示出了5天RIPPBS,η=8:11.05±5·12%;第2欄示出了5天ISDN-安慰劑，η=6:9.97±3·65%;第3欄示出了5天RIPISDN，n=7:7.59±4.38%;以誤差條表示標準差。[0228]用ISDN處理後的梗死面積小於對照（用PBS或ISDN-安慰劑處理），但無顯著性。[0229]ISDN組（"5天RIPISDN"）中的梗死面積小於PBS組，以及ISDN-安慰劑-組。[0230]圖20:梗死面積（模塊4:NO間歇+ASA)。第1欄示出了5天RIPPBS,η=8;11·05±5·12%;第2欄示出了5天RIPASA+PBS，n=6:12·51±3·05%;第3欄示出了5天NTG-安慰劑：n=6;9.80±6.79%;第4欄示出了5天RIPNTG-安慰劑+ASA，n=6:13.92土L71%;第5欄示出了5天RIPNTG，n=7:3.61±2.08%;第6欄示出了5天RIPNTG+ASA，n=6:13.00±3.82%;以誤差條表示標準差，星號表示相比於5天RIPNTG的顯著性（定類P值〈〇·017)。[0231]用NTG+ASA處理後的梗死面積相比於僅用NTG顯著增加（定類ρ值〈0.017)。[0232]用ASA處理的組（"5天ASA+PBS"）中的梗死面積相比於PBS對照組稍微增加，同樣對於ASA+NTG-安慰劑-組。ASA+NTG-組和用ASS和PBS處理的組之間無差異。然而，NTG組中的梗死區域顯著小於ASA+NTG組。[0233]圖21:TTC_染色。照片顯示出三個水平的切片。梗塞的組織染色為灰白色因為其缺少TTC與之反應的酶。因此，壞死的區域明顯可辨別和可計量。[0234]圖22:ROI的側支血管直徑（模塊1:假手術（無RIP))。第1欄示出了5天SHAMPBS,η=3:82·7±3·7μπι;第2欄示出了5天SHAMNTG-安慰齊IJ，η=3:89.6μm±10.6μm;第3欄示出了5天SHAMNTG，n=3:86.8±9.Ομπι;以誤差條表示標準差。[0235]在SHAM之間無可測量的側支血管生長且無可測量的差異。[0236]三個SHAM-組之間無顯著性。[0237]圖23:ROI的側支血管直徑（模塊2:NO間歇（NTG))。第1欄示出了5天RIPPBS,η=3:129.8±6.9以111;第2欄示出了5天1?1?階^-安慰劑：11=3;127.0±12.14111;第3欄示出了5天RIPNTG,η=3:158.4±9.2μπι;以誤差條表示標準差，星號表示相比於5天RIPNTG顯著（定類ρ值〈0·033)。[0238]通過用NTG處理，側支血管的直徑相比於對照處理（用PBS或NTG-安慰劑處理）顯著增加（定類P值〈0.033)。[0239]相比於"5天RIPPBS"，"5天RIPNTG"組中的ROI中的側支血管直徑顯著增加。PBS和NTG-安慰劑-組之間無差異。[0240]圖24:R0I的側支血管直徑（模塊3:Ν0連續（ISDN延遲））。第1欄示出了5天RIPPBS,η=3:129.8±6.9μm;第2欄示出了5天ISDN-安慰齊IJ，η=3:133.0±IL5μm;第3欄示出了5天RIPISDN,η=3:148.2±11.3μπι;以誤差條表示標準差。[0241]在用ISDN或ISDN-安慰劑處理之後側支血管的直徑沒有可測量的差異。[0242]相比於PBS組，以及相比於ISDN-安慰劑組，ISDN組（"5天RIPISDN"）中側支血管的直徑增加。[0243]圖25:R0I的側支血管直徑（模塊4:N0間歇+ASA)。第1欄示出了5天RIPPBS,η=3;129·8±6·9μπι;第2欄示出了5天RIPPBS+ASA，n=3:102.5±8·0μπι;第3欄示出了5天RIPNTG-安慰劑：η=3;127·0±12·Ιμπι;第4欄示出了5天NTG-安慰劑+ASA，n=3:97.1±8·6μπι;第5欄示出了5天RIPNTG，n=3:158·4±9·2μπι;第6欄示出了5天RIPASA+NTG,η=3:124.4±5·6μπι;以誤差條表不標準差，一個星號表不相比於5天RIPPBS顯著（定類ρ值〈0·039);雙星號表示相比於5天RIPASA+NTG顯著（定類ρ值<0.039)〇[0244]在用ASA處理後側支血管直徑顯著小於對照（用PBS處理）（*定類ρ值〈0·039)。用額外的NTG的處理消除了ASA的抑制作用，但單獨用NTG-處理顯示出相比於用NTG+ASA處理直徑顯著增加（**相比於5天RIPASA+NTG顯著，定類ρ值〈0.039)。[0245]用PBS和ASA處理的組中的直徑顯著小於PBS對照組，但相比於ASA+NTG-安慰劑-組無顯著性。在ASA+NTG-組中，相比於用PBS和ASA處理的組，直徑顯著增加。[0246]圖26:"ROI"的MicroCT成像：⑷"5天SHAMPBS";⑶"5天SHAMNTG";（C)"5天RIPISDN"；（D)"5天RIPPBS"；（E)"5天RIPNTG"；（F)"5天RIPASA+PBS;(G)"5天RIPASA+NTG"。[0247]照片顯示出通過用PBS(D)、NTG(E)、或ISDN(C)處理的缺血性實驗方案感興趣區域中側支血管直徑相比於用PBS(A)或NTG(B)處理的SHAM的生長。通過用ASA(F)處理對側支血管生長的抑制被用NTG(G)的額外處理部分地抵消。[0248]圖27:研宄流程圖。基線期的時長估計為大約兩周。介入期的時長為六周。隨訪期包括立刻調查（介入期後1天至最多3天）和長期隨訪調查（介入期後1個月）。【具體實施方式】[0249]實施例1[0250]臨床前研宄[0251]L簡介[0252]動脈生成的一個重要機制是誘導剪切應力跨過募集的側支動脈（副動脈）。[0253]NO在本方案中起基礎性作用，因為其調節動脈的血管舒張能力以及側支動脈的平滑肌細胞上的治療性增殖方面。[0254]在本文中，我們評價了Nitrolingualakut?Spray(G.Pohl-BoskampGmbH&Co.KG,Hohenlockstedt,德國；U.S.美國商標名Nitro丨ingual?Pumpspray)在單一非-心肌梗塞動脈生成模型中的作用。在該模型中，通過左前降冠狀動脈（LAD)的重複閉塞誘導側支血管生長。測量在這些動物中的梗死面積作為實驗末的終點。因此，在心肌梗塞和動脈生成之間沒有會削弱實驗的幹擾。此外，我們還評價了乙醯水楊酸（ASA)在該重複冠狀動脈閉塞模型中作為動脈生成的可能抑制劑的作用。我們評價了NO的伴隨應用（間歇使用硝化甘油）是否可以補償ASA的負面作用。[0255]2.材料和方法[0256]2.1動物準備[0257]實驗使用雄性Sprague-Dawley大鼠（研宄開始時體重為300g;n=182)。對於手術（第0天），對大鼠進行預治療（腹膜內氯胺酮50mg/ml+甲節噻嘆4mg/ml)和插管。在直接觀察聲帶的條件下用耳鏡進行口腔插管（I4-G聚乙烯管）。通過吸入異氟烷引入一般麻醉並維持（1.0%至2.0%，具有100%氧）。通過電加熱桌將體溫控制在37C。利用無菌技術實施手術。開始時將動物置於其背側上並用皮夾固定。利用偶接於PowerLab數據採集系統（ADInstruments)的BioAmp差分放大器，在手術期間監測並記錄ECG參數（心率）。心臟通過左胸廓切開術暴露。將微型氣動抓捕封堵器（細節參見微型氣動抓捕封堵器部分）植入到中部附近以最接近冠狀動脈左前降支（LAD)。在膨脹過程中通過觀察左心室（LV)變白和運動功能減退和觀察心電圖（ST抬高）來初始確定封堵器的功能確認，即產生心肌缺血。將大鼠隨機分為4個治療模塊：[0258]模塊1:假手術[0259]模塊2:N0間歇（硝化甘油）[0260]模塊3:N0連續（硝酸異山梨醇酯的延遲製劑）[0261]模塊4:NO間歇+ASA[0262]在裝設儀器和測量後，在呼氣末正壓（positiveend-expiratorypressure)下關閉胸腔，並且排空胸腔的空氣。封堵器在皮下打開通道並在肩胛骨之間取出。通過連接於在肩胛骨之間皮下固定的環的不鏽鋼彈簧圈來保護這些導管。手術後，給予鎮痛劑（丁丙諾啡0.05mg/kgSC)和抗生素（恩氟沙星10mg/kgSC)。在恢復籠舍中觀察大鼠2小時並且然後轉移至動物保健設施，在其中由技術人員持續監控。術後，每天兩次給予丁丙諾啡(0.5mg/kgSC)用於止痛持續8天或13天。在手術後第3天（第3天），開始缺血性實驗方案。實驗方案（第8天或第13天）的對應5天或10天後（僅在模塊IA和2A中），將大鼠麻醉，並通過正中開胸術打開胸腔。在顯微-CT組中，立即切除心臟。對於最終梗死面積檢測，LAD被永久性堵塞（最終永久性閉塞，FP0)，通過TTC染色測量梗死面積。[0263]1.2用於大鼠心臟的微型氣動抓捕封堵器（Mini-PneumaticSnareOcclude)[0264]使用微型氣動抓捕封堵器，由微球囊（mini-balloon)、鞘管（sheathtubing)、縫合線和導管儀器構成。球囊（7mm長）由軟膠乳膜製成並且足夠柔韌以在球囊緊縮過程中在冠狀動脈血管上提供可忽略的物理力。將該球囊安裝在傘形護鞘中（直徑為3.2或4.8mm，長度為12mm;保護球囊免受纖維性浸潤）。將普理靈（5-0)繞過LAD並連接於護鞘，確保封堵器連接至心臟，以使得發生由球囊膨脹產生的心肌缺血。膨脹體積小（0.2至0.25mL空氣），但通過兩個物理動作發生閉塞：向上/向外"捲曲"LAD並通過膨脹的球囊/護鞘壓縮LAD。將球囊連接於從腹腔取出的導管（PE-50)。從大鼠籠舍外控制球囊膨脹和緊縮。[0265]I.3ECG參數的測量[0266]在全部四個模塊（1-4))中在實驗方案（RIP)的開始（第3天）和結束（分別為第8天與第13天）時，冠狀動脈閉塞進行40秒（等於在RIP中閉塞，參見第6頁）並且在FPO中進行90分鐘（分別第8天與第13天），測量ECG參數以檢驗心率和ST抬高。此夕卜，確定FPO過程中發生的心律失常。根據Lown's分級，每隻動物顯示出特定級別。級別越高，心律失常就越嚴重。為了更具體地說明整個組的平均嚴重性，確定了VPB評分。鑑於此，每個Lown級別被稱為特定因數（0級=因數0;1級=因數1;11級=因數2;IIIa級=因數3;IIIb級=因數4;VIa級=因數5;VIb級=因數6和V級=因數7)。每個組具有不同百分比的代表每個級別的動物。各個級別的百分比乘以適當的因數得到單個結果，然後將其總結成整個組的VPB評分。因此，具有較高Lown級別的一組動物具有相應較高的VPB評分。[0267]1.4利用顯微-CT進行的冠狀動脈微血管成像[0268]另外，使用顯微-CT作為進一步終點以使側支血管成像。準備一組大鼠（每個模塊中的每個組為3隻大鼠；總共36隻大鼠）用於經由顯微-CT的冠狀動脈血管可視化。通過修改大鼠顯微-CT研宄的方法使冠狀動脈循環填充有造影劑（黃色microfil)。造影劑的粘度使得能夠填充至冠狀動脈小動脈水平（coronaryarteriolarlevel)而沒有或僅有少量填充毛細血管。通過主動脈插管立即通過導管插入切除的心臟，且在85mmHg下逆向灌注冠狀動脈循環。使用灌流液（25°C至27°C的鹽水，含有2%普魯卡因）以避免心肌代謝收縮並且最大程度上擴張冠狀動脈血管系統。通過二尖瓣經由左心耳將聚乙烯管插入到LV中以卸載LV。在85mmHg壓力下在3分鐘內注射溫熱的造影劑（42°C)，同時監測灌注壓力。通過浸入冷的鹽水中來冷卻心臟（〇°C至4°C)直至其（黃色microfil)變硬。然後，除去心臟並在4%多聚甲醛溶液（4°C)中固定過夜。整個心臟被用於冠狀動脈側支血管生長的顯微-CT成像。利用顯微-CT使冠狀動脈血管系統可視化。簡言之，整個心臟以Γ的增量關於其由頂至底（apex-to-base)縱向軸被360°掃描。本研宄中選擇的空間解析度具有18*18*18m3的體素尺寸（voxelsize)以聚焦於側支血管的尺寸並且使來自較小血管的信號最小。最後，將CT數據重構為3D圖像。這些圖像的主要目的是建立存在或不存在動脈-動脈的吻合連接。對於多個組由獨立的觀察者來測量側支血管，即動脈的-動脈吻合連接。用Amira5.2.2軟體（VisageImaging,柏林，德國）來分析側支動脈的網絡形態。[0269]1.5實驗方案[0270]利用以下實驗方案通過封堵器的自主膨脹引入重複缺血實驗方案（RIP):每20分鐘進行40秒的閉塞，持續2小時20分鐘，之後"休息"（緊縮）一段時間持續5小時40分鐘。該8-小時組每天重複3次持續5或10天（僅在模塊IA和2A中）。通過除去膨脹或緊縮通過導管自主地發生LAD閉塞。在空白大鼠中（參見模塊1)，植入球囊，但不施加RIP。在RI實驗方案下將大鼠隨機分為三個模塊2、3和4。[0271]1.6梗死面積檢測[0272]在最終永久性閉塞之後通過TTC染色檢測梗死面積。在實驗方案的5或10天（只在模塊IA和2A中）後，使封堵器永久性膨脹90分鐘。通過TTC染色（η=10/組）測量梗死面積。因此，將大鼠麻醉並再次經歷ECG記錄以確認閉塞（ST抬高）並計算ECG參數和心律失常的數目。在沒有側支血管的動物中，冠狀動脈閉塞造成系統性血液動力學的惡化和心律失常，包括室性早搏、室性心動過速和心室纖維性顫動；在具有良好發育的側支血管的動物中，注意到沒有這樣的不良反應。利用計算機化程序（Labchart7)來記錄和分析ECG參數。[0273]通過正中開胸術打開胸腔。立即切除心臟並且平行於房室溝從頂至底將其切成厚度為2m的橫向切片。在37°C以含有1.0%氯化三苯四唑（TTC)和8%右旋糖苷的0.09mol/L磷酸鈉緩衝液培養切片20分鐘。在10%甲醛中固定切片並且然後用安裝在立體顯微鏡上的數位照相機拍照。利用計算機化的平面程序（AdobePhotoshop)測量梗塞的尺寸。以TTC-陰性組織確定梗塞的面積並將其表示為左心室（LV)面積的百分比。[0274]1.7關於測試化合物的細節【權利要求】1.一種在用於預防或治療動脈供血不足的方法中使用的NO供體，其中，以間斷的方式以誘導動脈生成有效的量給予所述NO供體。2.根據權利要求1所述用途的NO供體，其中，所述動脈供血不足的特徵在於動脈血管的部分或完全閉塞。3.根據權利要求1或2中任一項所述用途的NO供體，其中，所述動脈供血不足是由於所述血管中的物質沉積造成的，或者其中所述動脈供血不足是由於動脈的外部或內部壓力造成的。4.根據權利要求1至3中任一項所述用途的NO供體，其中，所述動脈供血不足為血管疾病，或者其中所述動脈供血不足為選自由動脈粥樣硬化、缺血性疾病以及另外的慢性動脈疾病組成的組中的疾病，或者其中所述動脈供血不足為冠狀動脈供血不足、腦動脈供血不足、外周動脈供血不足、腸動脈供血不足、泌尿生殖器動脈供血不足、神經動脈供血不足、硬皮病或視網膜中央動脈供血不足。5.根據權利要求1至4中任一項所述用途的NO供體，其中，所述NO供體為一氧化氮、硝普鈉、硝化甘油（硝酸甘油）、單硝酸異山梨醇酯、硝酸異山梨醇酯、季戊四醇四硝酸酯(PETN)、嗎多明、亞硝酸戊酯或尼可地爾，尤其是其中所述NO供體為硝化甘油。6.根據權利要求1至5中任一項所述用途的NO供體，其中，所述NO供體為短效NO供體。7.根據權利要求1至6中任一項所述用途的NO供體，其中，所述NO供體每天給予至少一次，並且每周給予至少一天，持續至少兩周。8.根據權利要求1至7中任一項所述用途的NO供體，其中，所述NO供體持續給予數周或數月。9.根據權利要求1至8中任一項所述用途的NO供體，其中，所述NO供體與所述動脈中的搏動剪切力的外源性刺激聯合給予。10.根據權利要求9所述用途的NO供體，其中，所述NO供體在外源性刺激發生前30分鐘直至外源性刺激終止後的30分鐘的時間段內給予。11.根據權利要求9或10中任一項所述用途的NO供體，其中，所述刺激是通過體育鍛鍊或向動脈血管施加內力實現的。12.根據權利要求1至11中任一項所述用途的NO供體，其中，所述方法的目的在於防止所述動脈供血不足。13.根據權利要求1至12中任一項所述用途的NO供體，其中，所述NO供體經舌、舌下、吸入、頰內、經黏膜或經口腔黏膜給予。14.一種在抑制與動脈供血不足的任何治療相關的負面影響的方法中使用的NO供體，其中所述治療為抗動脈生成的或抑制動脈生成，其中以對於動脈生成的誘導有效的量和方式向接受所述治療的受試者給予NO供體，尤其是，其中所述NO供體是如權利要求2至13中任一項中所限定的。15.-種在用於預防或治療心律不齊的方法中使用的NO供體，其中，以對於治療所述心律不齊有效的量和方式向受試者給予NO供體，尤其是，其中所述NO供體是如權利要求5至13中任一項中所限定的。【文檔編號】A61K33/00GK104519881SQ201380028543【公開日】2015年4月15日申請日期:2013年5月29日優先權日:2012年5月31日【發明者】米凱拉·哥拉斯申請人:G.波爾博斯坎普兩合股份有限公司