抑制sars冠狀病毒n蛋白表達的小幹擾rna分子及其編碼基因的製作方法
2023-06-03 14:18:11 1
專利名稱：抑制sars冠狀病毒n蛋白表達的小幹擾rna分子及其編碼基因的製作方法
技術領域：
本發明涉及抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子及其編碼基因。
背景技術：
引起嚴重急性呼吸綜合症(Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS)的病原體SARS-CoV為一種新型的冠狀病毒，具有棘突蛋白S(spike)，基質蛋白M(matrix)，包膜蛋白E(Envelope)和核蛋白N(Nuclear protein)等數種主要結構蛋白(HolmesKV.SARS-associated coronavirus.N Engl J Med，2003，348(20)1948-51.)。研究表明，S蛋白是該病毒的主要保護性抗原，N蛋白和M蛋白也可以誘導免疫效應，特別是N蛋白具有較強的免疫原性。SARS-CoV N蛋白由422個胺基酸殘基組成，相對分子質量48KD，其編碼基因的長度為1268bp，是SARS-CoV主要的結構蛋白，在冠狀病毒顆粒中，N蛋白位於病毒顆粒的核心部分和基因組RNA結合(Marra MA，JonesSJ，Astell CR，et al.The genome sequence of the SARS-associatedcoronavirus.Science，2003，300(5624)1399-1404.；Wang J，Ji J，Ye J，et al.The structure analysis and antigenicity study of the N protein of SARS-CoV.Genomics Proteomics Bioinformatics，2003，1(2)145-154.)。以往對動物冠狀病毒結構蛋白的研究表明，N蛋白在病毒複製和產生的病理反應中起重要作用(HiscoxJA，Wurm T，Wilson L，et al.The coronavirus infectious bronchitis virusnucleoprotein localizes to the nucleolus.J Virol，2001，75(1)506-512.)。但目前，尚未有直接而有效的抑制SARS-CoV的方法。
RNA幹擾技術(RNAi)是在小雙鏈RNA(dsRNA)分子的介導下特異性降解靶基因的生物技術，能使基因表達沉默，達到拮抗靶基因和實現生物(基因)治療目的。長度為21到22個鹼基的所謂小幹擾RNA(siRNA，small interfering RNA)介導特異性幹擾反應，只降解與其高度互補的特定基因的mRNA(Elbashir，S.M.，Harborth，J.，Lendeckel，W.et al.，Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNAinterference in cultured mammalian cells，Nature，2001，411(6836)494)。RNAi技術因其在疾病治療方面具有巨大潛力而備受關注。迄今為止，有關siRNA可誘導產生針對SARS病毒基因RNA的幹擾效應，從而使該病毒的複製和蛋白表達受到抑制對細胞形成保護作用，在ncbi上已有一些報導，但針對SARS-CoV N蛋白設計的siRNA未見報導。
發明內容
本發明的目的是提供可抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子及其編碼基因。
本發明所提供的抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子，是下述1)和2)中的至少一個雙鏈RNA序列1)正義鏈具有序列表中序列1的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列2的核苷酸序列；2)正義鏈具有序列表中序列3的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列4的核苷酸序列。
將具有1)的雙鏈RNA序列命名為siRNA1，其反義鏈與SARS-CoV N mRNA(序列表中的序列9)的213-233位置序列5』GGGCGUUCCAAUCAACACCAA 3』互補。序列表中序列1由21個鹼基組成，序列的方向從左至右為5′端→3′端；序列表中序列2由21個鹼基組成，序列的方向從左至右為5′端→3′端。
將具有2)的雙鏈RNA序列命名為siRNA2，其反義鏈與SARS-CoV N mRNA的862-883位置序列5』GGGGACCAAGACCUAAUCAGAC 3』互補。序列表中序列3由22個鹼基組成，序列的方向從左至右為5′端→3′端；序列表中序列4由22個鹼基組成，序列的方向從左至右為5′端→3′端。
上述抑制SARS-CoV N蛋白表達的小幹擾RNA分子的編碼基因可具有下述1)和2)中至少一個雙鏈核苷酸序列1)有義鏈(正義鏈)(不做模板的DNA鏈)具有序列表中序列5的核苷酸序列或在高嚴謹條件下可與序列表中序列5限定的DNA序列雜交的核苷酸序列；反義鏈(做模板的DNA鏈)具有序列表中序列6的核苷酸序列或在高嚴謹條件下可與序列表中序列6限定的DNA序列雜交的核苷酸序列；2)有義鏈(正義鏈)(不做模板的DNA鏈)具有序列表中序列7的核苷酸序列或在高嚴謹條件下可與序列表中序列7限定的DNA序列雜交的核苷酸序列；反義鏈(做模板的DNA鏈)具有序列表中序列8的核苷酸序列或在高嚴謹條件下可與序列表中序列8限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。
所述高嚴謹條件可為在0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃下雜交並洗膜。
將具有1)的雙鏈寡核苷酸序列編碼基因命名為siDNA1，編碼siRNA1。序列表中序列5由58個鹼基組成，序列的方向從左至右為5′端→3′端；序列表中序列6由54個鹼基組成，序列的方向從左至右為3′端→5′端。
將具有2)的雙鏈寡核苷酸序列編碼基因命名為siDNA2，編碼siRNA2。序列表中序列7由60個鹼基組成，序列的方向從左至右為5′端→3′端；序列表中序列8由56個鹼基組成，序列的方向從左至右為3′端→5′端。
含有上述抑制SARS-CoV N蛋白表達的小幹擾RNA分子的編碼基因的表達載體、轉基因細胞系和宿主菌均屬於本發明的保護範圍。
本發明提供的siRNA1和siRNA2小幹擾RNA分子均可對SARS冠狀病毒N蛋白的表達產生幹擾效應，且隨著含有siRNA1編碼基因的RNAi幹擾載體的轉染量的增加，SARS-CoV N蛋白的表達量逐漸下降，表明針對SARS-CoV N蛋白設計的siRNA的有效性和其抑制SARS-CoV N蛋白表達的劑量效應，為SARS冠狀病毒N蛋白的功能研究奠定了基礎，為進一步研究SARS-CoV N蛋白在SARS-CoV的致病機制中的作用提供了新的平臺，對於揭示SARS的致病機制具有重要意義，同時也為預防和治療SARS提供了新的思路和方法。本發明將在SARS的特異性預防和治療方法中具有潛在的應用價值，特別是在製備以抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子或攜帶所述抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子編碼基因的表達載體為活性成分的藥物中將發揮重要作用。
圖1為SARS-CoV N蛋白的RNAi載體pBS/U6+1abcd和pBS/U6+2abcd的酶切鑑定結果圖1b為抑制SARS-CoV N蛋白表達的RNAi幹擾載體的工作原理示意2為含SARS-CoV N蛋白的全基因序列的真核重組表達載體pcMyc+N的酶切鑑定結果圖3為重組SARS-CoV N蛋白表達的westernblot檢測結果圖4為RNAi幹擾載體對SARS-CoV N蛋白表達的幹擾效應的westernblot檢測結果圖5為上樣與圖4完全對應的對照(內參)β-actin的Western blot檢測結果圖6為RNAi幹擾載體對SARS-CoV N蛋白幹擾效應的定量分析結果具體實施方式
下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規方法，所用DNA序列均由上海生工合成。
實施例1、抑制SARS-CoV N蛋白表達的小幹擾RNA分子的設計、RNAi幹擾載體的構建及其酶切鑑定一、抑制SARS-CoV N蛋白表達的小幹擾RNA分子的設計按下述方法設計抑制SARS-CoV N蛋白表達的小幹擾RNA分子1、在SARS-CoV N的mRNA序列(序列表中序列9)中篩選連續的「GGG」序列，該序列通常應選擇在AUG下遊至少100bp後；2、截取GGG後18-19bp的序列，以使加上GGG後序列總長度為21-22bp；3、對經步驟1和2獲得的siRNA序列進行篩選，具體篩選要求為1)21-22bp siRNA的G/C％為45-65％；2)在ncbi上對siRNA序列進行序列同源性比對，以確保所篩選的抑制SARS-CoVN蛋白表達的siRNA序列經檢測和除SARS-CoV外的其它種屬序列無同源性。
經上述步驟獲得了兩對抑制SARS-CoV N蛋白表達的小幹擾RNA分子，分別命名為siRNA1(序列表中序列1和序列2)和siRNA2(序列表中序列3和序列4)，siRNA1作用於SARS-CoV N mRNA(序列表中的序列9)的213-233位置序列5』GGGCGUUCCAAUCAACACCAA 3』，siRNA2作用於SARS-CoV N mRNA的862-883位置序列5』GGGGACCAAGACCUAAUCAGAC 3』。
二、抑制SARS-CoV N蛋白表達的RNAi幹擾載體的構建及其酶切鑑定1、根據siRNA1和siRNA2所作用的靶序列以及載體pBS/U6(Sui GC etal.PNAS.2002 April；99(8)5515-5520)的使用要求，設計siRNA1和siRNA2的siDNA序列，分別命名為siDNA1和siDNA2，具體序列如下(下劃線鹼基序列為針對SARS-CoV NmRNA的靶序列)siDNA1正義鏈5』-gggcgttccaatcaacaccaaa agcttttggtgttgattggaacgccctttttctgca -3(序列5)siDNA1反義鏈3』-cccgcaaggttagttgtggttttcga aaaccacaactaaccttgcgggaaaaag -5』(序列6)siDNA2正義鏈5』-ggggaccaagacctaatcaggaca agcttgtctgattaggtcttggtcccctttttctgca-3(序列7)siDNA2反義鏈3』-cccctggttctggattagtctgttcga acagactaatccagaaccaggggaaaaag-5』(序列8)2、根據所設計的siDNA1和siDNA2序列合成8條寡核苷酸，序列如下1a5』-ggcgttccaatcaacaccaaa-3』1b3』-ccgcaaggttagttgtggttttcga-5』1c5』-agcttttggtgttgattggaacgccctttttctgca-3』1d3』-aaaccacaactaaccttgcgggaaaaag-5』
2a5』-gggaccaagacctaatcagaca-3』2b3』-ccctggttctggattagtctgttcga-5』2c5』-agcttgtctgattaggtcttggtcccctttttctgca-3』2d3』-acagactaatccagaaccaggggaaaaag-5』將上述8條兩兩互補的寡核苷酸片斷經煮沸後緩慢退火得到1ab、1cd、2ab、2cd四條雙鏈dsRNA，對1ab和2ab分別進行以下操作用限制性內切酶Apa I和HindIII進行雙酶切，將酶切產物克隆入經同樣酶酶切的含有U6啟動子的載體pBS/U6中，將含有1ab的載體命名為pBS/U6+1ab，將含有2ab的載體命名為pBS/U6+2ab。再將1cd分別用限制性內切酶Hind III和Pst I進行雙酶切後克隆入經同樣酶酶切的載體pBS/U6+1ab中，得到以5』GGGCGUUCCAAUCAACACCAA 3』為靶序列的SARS-CoV N蛋白的RNAi載體，將其命名為pBS/U6+1abcd；將2cd用同樣方法克隆入載體pBS/U6+2ab中，得到以5』GGGACCAAGACCUAAUCAGACA 3』為靶序列的SARS-CoV N蛋白的RNAi載體，將其命名為pBS/U6+2abcd。對pBS/U6+1abcd和pBS/U6+2abcd用EcoRI Kpn I、SalI Kpn I分別進行雙酶切鑑定(以空載體pBS/U6為對照)，結果如圖1所示(泳道M為Marker，泳道1為pBS/U6+2abcd的EcoRI和Kpn I雙酶切產物，泳道2為pBSU6+1abcd的EcoRI和Kpn I的雙酶切產物，泳道3為pBS/U6的EcoRI和Kpn I的雙酶切產物，泳道4為pBS/U6+2ab的Sal I和Kpn I的雙酶切產物，泳道5為pBS/U6+1ab的Sal I和Kpn I的雙酶切產物，泳道6為pBS/U6的Sal I和Kpn I的雙酶切產物)，空載體pBS/U6經雙酶切可以釋放長度約為500bp左右的DNA片段，而構建的載體pBS/U6+1ab、pBS/U6+2ab、pBS/U6+1abcd和pBS/U6+2abcd因插入dsRNA使限制酶切位點缺失而不能釋放該長度約為500bp左右的DNA片段，表明正確構建了分別含有siDNA1和siDNA2抑制SARS-CoV N蛋白表達的RNAi幹擾載體，其工作原理示意圖如圖1b所示。
實施例2、SARS-CoV N蛋白的真核重組表達載體的構建及表達以及用western blot法檢測RNAi幹擾載體對SARS-CoV N蛋白表達的幹擾效應及定量分析一、SARS-CoV N蛋白的真核重組表達載體的構建及該蛋白的表達1、SARS-CoV N蛋白的真核重組表達載體的構建根據SARS-CoV N蛋白的CDS區設計引物，引物序列如下引物1(上遊引物)5』-TATAGAATTCTGTCTGATAATGGACCCCAAT-3』；(劃線部分鹼基為EcoRI識別位點)引物2(下遊引物)5，-TATAGGTACCTTATGCCTGAGTTGAATCAG-3』(劃線部分鹼基為Kpn I識別位點)
以經SARS-CoV HKU-39849株(Zeng FW et al Exp Biol Med(Maywood).2003Jul；228(7)866-73)感染的vero E6細胞(ATCC)的RNA提取物為模板，在引物1和引物2的引導下，用RT-PCR法擴增SARS-CoV N蛋白的全基因序列並在其兩端分別添加限制性內切酶EcoRI和Kpn I識別位點，然後將SARS-CoV N蛋白的全基因序列克隆入質粒載體pGEM-T easy(promega公司)中，再利用限制性內切酶EcoRI和KpnI將SARS-CoV N蛋白的全基因序列亞克隆入真核表達載體pCMV-Myc(美國Clontech公司)中，將重組載體命名為pcMyc+N，並對其進行酶切鑑定(以空載體pCMV-Myc為對照)，結果如圖2所示(泳道M為Marker，泳道1為pcmyc+N的BamHI單酶切產物，泳道2為pCMV-Myc的Apa I和Kpn I雙酶切產物，泳道3為pcmyc+N的ApaI和Kpn I雙酶切產物，泳道4為pCMV-Myc的BamHI單酶切產物)，表明重組載體pcMyc+N比空白載體pCMV-Myc多釋放一條1200bp左右的DNA片段，該片段大小與SARS-CoV N蛋白的全基因序列的大小相符，證明獲得了正確的含有SARS-CoV N蛋白全基因序列的真核重組表達載體pcMyc+N。
2、SARS-CoV N蛋白的表達將pcMyc+N用脂質體法轉染(所用轉染試劑TfxTM-20購自promega公司)293細胞(ATCC，用購自美國Gibco公司的MEM培養基培養)，以pCMV-Myc空白載體為對照，48小時後收穫細胞，將細胞裂解後進行westernblot檢測SARS-CoV N蛋白的表達情況，結果如圖3所示(泳道1為用pcMyc+N轉染的細胞裂解物，泳道2為用pCMV-Myc轉染的細胞裂解物)，表明用pcMyc+N轉染的293細胞表達有分子量大小約為48kD的蛋白，與SARS-CoV N蛋白的分子量大小一致，而對照空白載體pCMV-Myc沒有蛋白表達。
二、用western blot法檢測RNAi幹擾載體對SARS-CoV N蛋白表達的幹擾效應將步驟一構建的SARS-CoV N蛋白的真核表達載體pcmyc+N、RNAi幹擾載體pBS/U6+1abcd和pBS/U6+2abcd分別用脂質體法共轉293細胞檢測其對SARS-CoV N蛋白表達的幹擾效應，同時設定不同劑量關係測定RNAi幹擾載體pBS/U6+1abcd及pBS/U6+2abcd幹擾SARS-CoV N蛋白表達的劑量效應，具體方法為在保證總轉染量和pcmyc+N轉染量相同的情況下，改變RNAi幹擾載體pBS/U6+1abcd或pBS/U6+2abcd的轉染量，即分別以pcmyc+NRNAi幹擾載體為1∶1、1∶3和1∶6的比例(質量比)共轉293細胞，48小時後收穫細胞，將細胞裂解後進行westernblot檢測SARS-CoV N蛋白的表達情況(選擇購自Santa Cruz公司的小鼠anti-Myc單克隆抗體和HRP標記的羊抗小鼠IgG及ECL試劑)，結果如圖4所示(泳道1為pcMyc pBS/U6+2abcd，泳道2為pcmyc+NpBS/U6+2abcd(1∶6)，泳道3為pcmyc+NpBS/U6+2abcd(1∶3)，泳道4為pcmyc+NpBS/U6+2abcd(1∶1)，泳道5為pcmyc+NpBS/U6，泳道6為pcmyc+NpBS/U6+1abcd(1∶1)，泳道7為pcmyc+NpBS/U6+1abcd(1∶3)，泳道8為pcmyc+NpBS/U6+1abcd(1∶6)，泳道9為pcmycpBS/U6+1abcd，泳道M為蛋白Marker)，表明SARS-CoV N蛋白的表達隨著siRNA劑量的增加被明顯的抑制，然後相對應於上述的劑量和條件下以293細胞自身表達的β-actin作內參，用Western blot法作鑑定(選擇購自Santa Cruz公司的山羊anti-β-actin單克隆抗體和HRP標記的鼠抗羊IgG及ECL試劑)，結果如圖5所示，可按下述方法對SARS-CoVN蛋白表達水平進行定量分析。
三、RNAi幹擾載體對SARS-CoV N蛋白幹擾效應的定量分析通過UVISoft UVIBand Application V97.04軟體對圖5中的SARS-CoV N蛋白和β-actin進行定量測定，通過計算統一β-actin內參為固定值並設定只轉染pcmyc+N的SARS-CoV N蛋白表達量為1(100％)，分析RNAi幹擾載體和SARS-CoV N蛋白表達載體共轉後SARS-CoV N蛋白表達下降的百分比，結果如圖6所示，縱坐標為SARS-CoV N蛋白表達量，橫坐標為pcmyc+N與RNAi幹擾載體pBS/U6+1abcd或pBS/U6+2abcd的質量比。圖6結果表明隨著RNAi幹擾載體轉染量的增加(從1∶0增加到1∶6)，SARS-CoV N蛋白的表達百分比下降顯著，1∶6時表達百分比僅為只轉染pcmyc+N時的20％，說明RNAi對SARS-CoV N蛋白的表達具有明顯抑制作用。
序列表1609210121121212RNA213人工序列220
223
4001gggcguucca aucaacacca a21210221121212RNA213人工序列220
223
4002uugguguuga uuggaacgcc c 21210321122212RNA213人工序列220
223
4003ggggaccaag accuaaucag ac22210421122212RNA213人工序列220
223
4004gucugauuag gucuuggucc cc22210521158212DNA213人工序列220
223
4005gggcgttcca atcaacacca aaagcttttg gtgttgattg gaacgccctt tttctgca 58210621154212DNA213人工序列
220
223
4006gaaaaagggc gttccaatca acaccaaaag cttttggtgt tgattggaac gccc54210721160212DNA213人工序列220
223
4007ggggaccaag acctaatcag acaagcttgt ctgattaggt cttggtcccc tttttctgca 60210821156212DNA213人工序列220
223
4008gaaaaagggg accaagacct aatcagacaa gcttgtctga ttaggtcttg gtcccc 5621092111269212mRNA213人工序列
220
223
4009augucugaua auggacccca aucaaaccaa cguagugccc cccgcauuac auuuggugga60cccacagauu caacugacaa uaaccagaau ggaggacgca auggggcaag gccaaaacag120cgccgacccc aagguuuacc caauaauacu gcgucuuggu ucacagcucu cacucagcau180ggcaaggagg aacuuagauu cccucgaggc cagggcguuc caaucaacac caauaguggu240ccagaugacc aaauuggcua cuaccgaaga gcuacccgac gaguucgugg uggugacggc300aaaaugaaag agcucagccc cagaugguac uucuauuacc uaggaacugg cccagaagcu360ucacuucccu acggcgcuaa caaagaaggc aucguauggg uugcaacuga gggagccuug420aauacaccca aagaccacau uggcacccgc aauccuaaua acaaugcugc caccgugcua480caacuuccuc aaggaacaac auugccaaaa ggcuucuacg cagagggaag cagaggcggc540agucaagccu cuucucgcuc cucaucacgu agucgcggua auucaagaaa uucaacuccu600ggcagcagua ggggaaauuc uccugcucga auggcuagcg gaggugguga aacugcccuc660gcgcuauugc ugcuagacag auugaaccag cuugagagca aaguuucugg uaaaggccaa720caacaacaag gccaaacugu cacuaagaaa ucugcugcug aggcaucuaa aaagccucgc780caaaaacgua cugccacaaa acaguacaac gucacucaag cauuugggag acguggucca840gaacaaaccc aaggaaauuu cggggaccaa gaccuaauca gacaaggaac ugauuacaaa900cauuggccgc aaauugcaca auuugcucca agugccucug cauucuuugg aaugucacgc960auuggcaugg aagucacacc uucgggaaca uggcugacuu aucauggagc cauuaaauug1020gaugacaaag auccacaauu caaagacaac gucauacugc ugaacaagca cauugacgca1080uacaaaacau ucccaccaac agagccuaaa aaggacaaaa agaaaaagac ugaugaagcu1140cagccuuugc cgcagagaca aaagaagcag cccacuguga cucuucuucc ugcggcugac1200auggaugauu ucuccagaca acuucaaaau uccaugagug gagcuucugc ugauucaacu1260caggcauaa1269
權利要求
1.抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子，是下述1)和2)中的至少一個雙鏈RNA序列1)正義鏈具有序列表中序列1的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列2的核苷酸序列；2)正義鏈具有序列表中序列3的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列4的核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述的小幹擾RNA分子，其特徵在於所述小幹擾RNA分子是一個正義鏈具有序列表中序列1的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列2的核苷酸序列的雙鏈RNA序列。
3.根據權利要求1所述的小幹擾RNA分子，其特徵在於所述小幹擾RNA分子是一個正義鏈具有序列表中序列3的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列4的核苷酸序列的雙鏈RNA序列。
4.權利要求1-3任一所述的抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子的編碼基因。
5.根據權利要求4所述的基因，其特徵在於所述抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子的編碼基因具有下述1)和2)中至少一個雙鏈核苷酸序列1)有義鏈具有序列表中序列5的核苷酸序列或在高嚴謹條件下可與序列表中SEQID №5限定的DNA序列雜交的核苷酸序列；反義鏈具有序列表中序列6的核苷酸序列或在高嚴謹條件下可與序列表中SEQ ID №6限定的DNA序列雜交的核苷酸序列；2)有義鏈具有序列表中序列7的核苷酸序列或在高嚴謹條件下可與序列表中SEQID №7限定的DNA序列雜交的核苷酸序列；反義鏈具有序列表中序列8的核苷酸序列或在高嚴謹條件下可與序列表中SEQ ID №8限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。
6.根據權利要求5所述的基因，其特徵在於所述抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子的編碼基因為一個雙鏈核苷酸序列，其有義鏈具有序列表中序列5的核苷酸序列；反義鏈具有序列表中序列6的核苷酸序列。
7.根據權利要求5所述的基因，其特徵在於所述抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子的編碼基因為一個雙鏈核苷酸序列，其有義鏈具有序列表中序列7的核苷酸序列的核苷酸序列；反義鏈具有序列表中序列8的核苷酸序列的核苷酸序列。
8.含有權利要求4-7任一所述的抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子編碼基因的表達載體、轉基因細胞系和宿主菌。
9.以權利要求1所述的抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子或攜帶所述抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子編碼基因的表達載體為活性成分的藥物。
全文摘要
本發明公開了抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子及其編碼基因與應用。該抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子，是下述1)和2)中的至少一個雙鏈RNA序列1)正義鏈具有序列表中序列1的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列2的核苷酸序列；2)正義鏈具有序列表中序列3的核苷酸序列，反義鏈具有序列表中序列4的核苷酸序列。本發明將在製備以抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子或攜帶所述抑制SARS冠狀病毒N蛋白表達的小幹擾RNA分子編碼基因的表達載體為活性成分的藥物中發揮重要作用。
文檔編號A61P11/00GK1837362SQ200510057000
公開日2006年9月27日 申請日期2005年3月25日 優先權日2005年3月25日
發明者曹穎莉, 劉力, 張雲, 王樹惠 申請人:中國醫學科學院基礎醫學研究所