一種快速定量檢測血液中毒品的試紙條及檢測方法

2023-05-27 22:57:56

專利名稱：一種快速定量檢測血液中毒品的試紙條及檢測方法
技術領域：
本發明涉及生物應用技術領域，特別涉及一種快速定量檢測血液中毒品的試劑條及檢測方法。
背景技術：
吸毒和藥物濫用是目前倍受全球關注的社會問題。據WHO估計，全球每年因毒品濫用和毒品犯罪致死的人數高達百萬計，已成為許多國家僅次於心腦血管疾病和惡性腫瘤的第三大死因。近年來，受境外毒品活動的影響，吸毒和販毒已再次殃及我國，而且各類毒品案件呈現快速上升趨勢，過境販毒和國內消費共存的現象已經形成。毒品的種類也越來越多，除了常見的海洛因、冰毒、搖頭丸、氯胺酮外，還出現了三唑侖(海樂神)、氯氮卓(利眠寧)、艾司唑侖(舒樂安定)、地西泮(安定)、溴西泮、美沙酮、丁丙諾啡等毒品，毒品的種類呈現多元化的趨勢。因此，為了高效打擊吸毒和販毒，開展體內毒品及其代謝物的系統分析研究、建立濫用藥物種類的檢測方法已成為當務之急。·自70年代以來，國外陸續報導了毒品檢測方法，其中以理化檢測法居多，包括薄層法、氣相色譜法、氣-質聯用法、紅外分光光度法以及高效液相色譜法等，這些方法主要用於尿液樣本中毒品以及其代謝物的鑑定，但存在儀器昂貴、檢測時間長，並且需要專業的技術人員進行操作，因此急需一種能快速、準確、簡便的檢測方法。免疫技術是一種新型的診斷技術，操作簡便、快速及可以大批量檢測等特點，已作為國際上通用的毒品篩選方法，目前檢測最多的樣品是尿液，主要是因為其採集方便，並可重複採集，能得到較大量的樣品。但是，尿樣卻有其不足之處①尿樣的分析檢測只能反映採樣前I 3天的藥物攝入情況尿樣比較容易造假，比如將尿樣進行稀釋可引起假陰性的問題、可人為的加入一些成分等；③由於尿樣檢測的敏感度高，其帶來的假陽性問題也是要考慮的，比如在一些咳嗽糖漿等臨床用藥物中常含有少量的鴉片類藥物，這樣就會出現用藥者被動性尿樣檢測假陽性問題，一般只能用於定性檢驗。由於吸毒者血液中含有較高濃度的毒品及代謝物，利用血液的測定，可以提供反映被檢測者身體受損害程度的依據。因此，開展血液中毒品的定量檢測已成為毒品工作中的重中之重。

發明內容
本發明的目的在於通過對血液中毒品的檢測技術研究，提供了一種快速定量檢測血經濟實用、適合於現場檢測等特點，可以用於臨床毒品成癮者藥物治療濃度的監測，也給公、檢、法等部門提供及時可靠的數據和證明。實現本發明的技術方案為一種快速定量檢測血液中毒品的試紙條,包括上樣墊、標記物墊、NC膜、吸樣墊和支撐薄片，所述試紙條與免疫層析判讀儀配套使用進行毒品的定量檢測，定量檢測範圍為O 2000ng/mL。所述的上樣墊、標記物墊、NC膜和吸樣墊依次粘附於不吸水的支撐薄片，標記物墊上包被有標記的抗毒品單抗，NC膜上分別包被有毒品合成免疫抗原構成的檢測線T線和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線。同時，將貼好的試劑條按照一定的寬帶進行切割，並將切割好的試劑條裝入塑料卡內，塑料卡上設有上樣孔，形成檢測測試卡。所述的抗毒品單抗通過膠體金標記法、乳膠微球標記法、納米磁珠標記法或膠體硒標記法標記於標記物墊上。其中，所述的膠體金標記法包括以下的步驟用氯金酸-檸檬酸三鈉還原法製備直徑為40nm的膠體金溶液，用O. 2M K2C03將溶液pH調到pH7 10，緩慢攪拌，加入抗毒品單抗使其終濃度為5 15 μ g/ml，繼續攪拌，再加入終濃度為O. 2%酪蛋白鈉，O. I %聚乙二醇20000進行封閉20-40分鐘，離心後棄上清，用膠體金工作液復溶至70-80ml，按Iml溶液鋪14-18cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置於溫度20 25°C、溼度小於30%的乾燥間乾燥2 4小時。所述的乳膠微球標記法包括以下的步驟取紅色乳膠微球，加入O. IM pH6. 5MES 混勻，加入10mg/mlNHS和10mg/ml EDC · HC1，離心，去上清，沉澱用硼砂緩衝液重懸，振蕩、超聲處理即成活化後的乳膠微球；用0. IM pH7 10的硼砂緩衝液將毒品單抗稀釋，然後加入活化乳膠微球，振蕩、離心、去上清，沉澱用酪蛋白溶液重懸，經超聲粉碎、振蕩後，重複離心，去上清，沉澱重懸，再次超聲粉碎、離心，沉澱加保存液懸浮，即為乳膠微球標記嗎啡單克隆抗體結合物，用工作液稀釋乳膠抗體結合物溶液，按Iml溶液鋪14-18cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置於溫度20 25°C、溼度小於30%的乾燥間乾燥2 4小時。所述的納米磁珠標記法包括以下的步驟取磁珠，用50mM MES (pH5. 7)配製成I %的納米磁珠溶液，加入水溶性EDC，35-40°C lOmin，再加入毒品單隆，35-40°C孵育I. 5 2. 5小時，然後用磁力架吸附磁珠，將緩衝液更換至O. OlM pH7. 2的PBS，含O. 5% BSA, O. 5%Tween,完成標記；再用工作液製成O. 3-0. 7mg/ml的溶液，按Iml溶液鋪20-24cm2的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜上，乾燥2-4小時。所述的膠體硒標記法包括以下的步驟用抗壞血酸還原亞硒酸製備膠體硒溶液，以O. 2MK2C03將溶液pH調到pH7 10，然後將溶液置於磁力攪拌器上緩慢攪拌，緩慢加入安非他命單克隆抗體使其終濃度為5 15 μ g/ml，繼續攪拌，再加入10%的BSA至終濃度為I %進行封閉，12000轉離心，棄上清，用工作液復溶至原體積的1/10，按Iml溶液鋪14-18cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置於溫度20 25°C、溼度小於30%的乾燥間乾燥2 4小時。所述的NC膜(5)按如下方法進行製備用O. OlM pH7. 2PBS將毒品合成免疫抗原分別稀釋成O. 2 I. Omg/ml，然後用噴膜儀在NC膜上按I. 0-1. 5 μ Ι/cm劃線包被，同時包被羊抗鼠IgG抗體作為C線，包被完成後將NC膜置於乾燥間乾燥8 10小時。一種快速定量檢測血液中毒品的方法，該方法包括以下步驟(I)加樣將被檢血液樣本平衡至室溫，將製備好的試劑卡平放，向加樣孔加入待檢樣本10 20 μ I，然後在上樣墊上加稀釋液60 100 μ I ;(2)根據試劑條上線條的顏色強度以及免疫層析判讀記錄儀中內存的標準曲線，可定量檢測出血液中毒品的濃度。具體的檢測方法為檢測時將試劑條平放，向加樣孔加入待檢樣本10 20 μ 1，然後在上樣墊上加稀釋液60 100 μ I或者直接在上樣墊上加入待檢樣本進行檢測；10-15分鐘後將試紙條放入配套的免疫層析判讀記錄儀中判讀；若樣本中含有毒品，則與固定在硝酸纖維素薄膜上的毒品合成免疫抗原競爭有限的標記抗體結合位點，當樣本中毒品濃度達到一定量時，它將佔據所有的抗體結合位點，因而阻止了檢測區毒品抗原與其抗體的結合，這樣，檢測區無線條出現；若樣本中不含毒品，其標記的抗體結合物將隨同樣品溶液在NC膜上擴散，與毒品合成免疫抗原結合呈現出一肉眼可見的線條；線條顏色強度可用配套的免疫層析判讀記錄儀定量測試；根據儀器內存標準曲線，可快速定量血液中的毒品含量，定量範圍為O 2000ng/mL,超過2000ng/mL,可對樣本進行適量稀釋，同樣可得到定量結果O與現有技術相比，本發明涉及的快速定量檢測血液中毒品的試劑條及方法具有如下優點和顯著的進步(I)多功能性10分鐘可出定性結果，20分鐘可定量檢測出血液中毒品含量；(2)快速定量配套的免疫層析判讀記錄儀將人肉眼觀察到檢測區反應顯色的 顏色深淺程度進行了量化，根據儀器內存標準曲線，在一定的範圍內，反應線條顏色的深淺與被測物的濃度可以呈現出一定的關係，20分鐘內即可準確對樣本中毒品濃度進行定量；(3)可保存和追溯數據和圖片目前市場用於檢測毒品的快速試劑由於本身的特點即在一定時間內顯示的顏色有效，所以大多數都是看完結果後就把試劑卡扔棄了，本試劑配套的判讀記錄儀不僅能保存產品有效測試時間內判定結果的圖像資料，也能保存原始的整個圖像信息。


圖I為快速定量檢測血液中毒品的試紙條結構示意圖；圖2為快速定量檢測血液中毒品的試劑卡平面圖；I、上樣墊；2、標記物墊；3、檢測線T線；4、質控線C線；5、硝酸纖維素(NC)膜；6、吸樣墊；7、加樣孔；8、塑料板。
具體實施例方式以下是本發明涉及的快速定量檢測血液中毒品的方法的具體實施例，對本發明的技術方案做進一步作描述，但是本發明的保護範圍並不限於這些實施例。凡是不背離本發明構思的改變或等同替代均包括在本發明的保護範圍之內。實施例I美沙酮膠體金檢測試紙條的製備及檢測應用I. I膠體金標記美沙酮單克隆抗體標記物的製備用氯金酸-檸檬酸三鈉還原法製備直徑為40nm的膠體金溶液，製備完成後用
O.2MK2C03可將溶液pH調到pH7 10，然後將溶液置於磁力攪拌器上緩慢攪拌，緩慢加入美沙酮單克隆抗體使其終濃度為5 15 μ g/ml。繼續攪拌I小時，再加入終濃度為O. 2%酪蛋白鈉，O. I %聚乙二醇20000進行封閉30分鐘，12000轉離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復溶至76. 5ml，按Iml溶液鋪16cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置乾燥間溫度20 25°C，溼度小於30%乾燥2 4小時，製成標記物墊，備用。I. 2美沙酮合成免疫抗原包被用O. OlM PH7.2PBS將美沙酮合成免疫抗原分別稀釋成O. 2 I. Omg/ml，然後用噴膜儀在NC膜上按I. 3 μ 1/cm劃線包被，同時包被羊抗鼠IgG抗體作為C線，包被完成後將NC膜置於乾燥間乾燥3 4小時，備用。I. 3試紙條的裝配在乾燥室內溫度20 25°C，溼度小於30 %，取塑料支撐板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板的中部粘貼，在NC膜T線一側搭接標記物墊，在標記物墊另一側搭接粘貼上樣墊；在NC膜C線一側搭接吸樣墊。然後用裁剪機將貼好的塑料板切成合適寬度的試紙條。最終結構為上樣墊I、標記物墊2、NC膜5和吸樣墊6依次粘附於不吸水的支撐薄片8，標記物墊2上包被有膠體金標記的美沙酮單抗，NC膜5上分別包被有美沙酮合成免疫抗原構成的檢測線T線3和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線4。參見圖I。最後，切好的試紙條裝入塑料卡內，且塑料卡上設有上樣孔7，由此製成美沙酮檢測試劑卡，參見圖2。快速定量檢測血液中美沙酮的試紙條可以與免疫層析判讀記錄儀配套 使用。I. 4檢測方法將被檢血液樣本平衡至室溫，將製備好的試劑卡平放，向加樣孔加入待檢樣本10 20 μ I，然後在上樣墊上加稀釋液60 100 μ I，或者直接在上樣墊上加入3滴待檢樣本進行檢測。10分鐘內觀察定性結果，同時線條顏色強度可用配套的免疫層析判讀記錄儀定量測試。根據儀器內存標準曲線，10-15分鐘可定量檢測出血液中的毒品濃度。I. 5結果判斷陰性，在檢測線⑴和質控線(C)位置各出現一條色帶。陽性，只在質控線(C)位置出現一條色帶。無色帶出現或僅在檢測線位置出現一條色帶，說明檢測無效，應重新檢測。定量範圍為O 2000ng/mL,超過2000ng/mL,可對樣本進行適量稀釋，同樣可得到定量結果。實施例2嗎啡乳膠法檢測試紙條的製備及檢測應用2. I乳膠微球標記嗎啡單克隆抗體標記物的製備取紅色乳膠微球1ml，加入9ml O. IM pH6. 5MES混勻，加入O. 75ml lOmg/mlNHS和Iml I Omg/ml EDC ·Η(1,離心20min,去上清,沉澱用硼砂緩衝液重懸,振蕩、超聲處理即成活化後的乳膠微球。用O. IM硼砂緩衝液(pH 8. 5)將嗎啡單克隆抗體稀釋成5mg/ml，取適量嗎啡單克隆抗體加入O. 5ml活化乳膠微球，振蕩、離心、去上清，沉澱用I %酪蛋白溶液重懸，經超聲粉碎、振蕩後，重複離心I次，去上清，沉澱同上重懸，再次超聲粉碎、離心，沉澱加保存液適量懸浮，即為乳膠微球標記嗎啡單克隆抗體結合物，用工作液稀釋乳膠抗體結合物溶液成合適濃度，按Iml溶液鋪16cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置乾燥間溫度20 25°C，溼度小於30%乾燥2 4小時，製成標記物墊，備用。2. 2嗎啡合成免疫抗原包被用O. OlM pH7. 2PBS將嗎啡合成免疫抗原分別稀釋成O. 2 I. Omg/ml，然後用噴膜儀在NC膜上按I. 3 μ 1/cm劃線包被，同時包被羊抗鼠IgG抗體作為C線，包被完成後將NC膜置於乾燥間乾燥8 10小時，備用。2. 3試紙條的裝配在乾燥室內溫度20 25°C，溼度小於30 %，取塑料支撐板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板的中部粘貼，在NC膜T線一側搭接標記物墊，在標記物墊另一側搭接粘貼上樣墊；在NC膜C線一側搭接吸樣墊。然後用裁剪機將貼好的塑料板切成合適寬度的試紙條。最終結構為上樣墊I、標記物墊2、NC膜5和吸樣墊6依次粘附於不吸水的支撐薄片8，標記物墊2上包被有乳膠標記的嗎啡單抗，NC膜5上分別包被有嗎啡合成免疫抗原構成的檢測線T線3和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線4。參見圖I。最後，切好的試紙條裝入塑料卡內，且塑料卡上設有上樣孔7，由此製成嗎啡檢測試劑卡，參見圖2。快速定量檢測血液中嗎啡的試紙條可以與免疫層析判讀記錄儀配套使用。2. 4檢測方法將被檢血液樣本平衡至室溫，將製備好的試劑卡平放，向加樣孔加入待檢樣本10 20 μ I，然後在上樣墊上加稀釋液60 100 μ I，或者直接在上樣墊上加入3滴待檢樣本進行檢測。10分鐘內觀察定性結果，同時線條顏色強度可用配套的免疫層析判讀記錄儀定量測試。根據儀器內存標準曲線，10-15分鐘可定量檢測出血液中的嗎啡濃度。2. 5結果判斷陰性，在檢測線(T)和質控線(C)位置各出現一條色帶。陽性，只在質控線(C)位置出現一條色帶。
無色帶出現或僅在檢測線位置出現一條色帶，說明檢測無效，應重新檢測。定量範圍為O 2000ng/mL,超過2000ng/mL,可對樣本進行適量稀釋，同樣可得到定量結果。實施例3氯胺酮納米免疫磁珠檢測試紙條的製備及檢測應用3. I納米磁珠標記氯胺酮單克隆抗體標記物的製備取IOmg磁珠，用50mM MES (pH5. 7)配製成10A的納米磁珠溶液，加入O. 5mg水溶性EDC, 370C lOmin，再加入適量氯胺酮單克隆抗體，37°C孵育2小時，然後用磁力架吸附磁珠，將緩衝液更換至O. OlM PBS(pH7. 2)，含O. 5% BSA,O. 5% Tween，完成標記。再用工作液製成O. 5mg/ml的溶液，按Iml溶液鋪22cm2的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜上，乾燥2_4小時，製成納米免疫磁珠-抗體標記物墊，備用。3. 2氯胺酮合成免疫抗原包被用O. OlM pH7. 2PBS將嗎啡合成免疫抗原分別稀釋成O. 2 I. Omg/ml，然後用噴膜儀在NC膜上按I. 3 μ 1/cm劃線包被，同時包被羊抗鼠IgG抗體作為C線，包被完成後將NC膜置於乾燥間乾燥8 10小時，備用。3. 3試紙條的裝配在乾燥室內溫度20 25°C，溼度小於30 %，取塑料支撐板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板的中部粘貼，在NC膜T線一側搭接標記物墊，在標記物墊另一側搭接粘貼上樣墊；在NC膜C線一側搭接吸樣墊。然後用裁剪機將貼好的塑料板切成合適寬度的試紙條。最終結構為上樣墊I、標記物墊2、NC膜5和吸樣墊6依次粘附於不吸水的支撐薄片8，標記物墊2上包被有納米免疫磁珠標記的氯胺酮單抗，NC膜5上分別包被有氯胺酮合成免疫抗原構成的檢測線T線3和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線4。參見圖I。最後，切好的試紙條裝入塑料卡內，且塑料卡上設有上樣孔7，由此製成氯胺酮檢測試劑卡，參見圖2。快速定量檢測血液中氯胺酮的試紙條可以與免疫層析判讀記錄儀配套使用。3. 4檢測方法將被檢血液樣本平衡至室溫，將製備好的試劑卡平放，向加樣孔加入待檢樣本10 20 μ I，然後在上樣墊上加稀釋液60 100 μ I，或者直接在上樣墊上加入3滴待檢樣本進行檢測。10分鐘內觀察定性結果，同時線條顏色強度可用配套的免疫層析判讀記錄儀定量測試。根據儀器內存標準曲線，10-15分鐘可定量檢測出血液中的氯胺酮濃度。3. 5結果判斷陰性，在檢測線⑴和質控線(C)位置各出現一條色帶。陽性，只在質控線(C)位置出現一條色帶。無色帶出現或僅在檢測線位置出現一條色帶，說明檢測無效，應重新檢測。定量範圍為O 2000ng/mL,超過2000ng/mL,可對樣本進行適量稀釋，同樣可得到定量結果。實施例4安非他命(搖頭丸)膠體硒檢測試紙條的製備及檢測應用4. I膠體硒標記安非他命單克隆抗體標記物的製備用抗壞血酸還原亞硒酸製備膠體硒溶液，以O. 2MK2C03將溶液pH調到pH7 10，然後將溶液置於磁力攪拌器上緩慢攪拌，緩慢加入安非他命單克隆抗體使其終濃度為5 15 μ g/ml ο繼續攪拌I小時，再加入10%的BSA至終濃度為1%進行封閉30分鐘，12000轉離心30分鐘，棄上清，用工作液復溶至原體積的1/10，按Iml溶液鋪16cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置乾燥間溫度20 25°C，溼度小於30%乾燥2 4小時，製成硒標記物墊，備用。4. 2安非他命合成免疫抗原包被
用O. OlM PH7.2PBS將安非他命合成免疫抗原分別稀釋成O. 2 I. Omg/ml，然後用噴膜儀在NC膜上按I. 3 μ 1/cm劃線包被，同時包被羊抗鼠IgG抗體作為C線，包被完成後將NC膜置於乾燥間乾燥8 10小時，備用。4. 3試紙條的裝配在乾燥室內溫度20 25°C，溼度小於30 %，取塑料支撐板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板的中部粘貼，在NC膜T線一側搭接標記物墊，在標記物墊另一側搭接粘貼上樣墊；在NC膜C線一側搭接吸樣墊。然後用裁剪機將貼好的塑料板切成合適寬度的試紙條。最終結構為上樣墊I、標記物墊2、NC膜5和吸樣墊6依次粘附於不吸水的支撐薄片8，標記物墊2上包被有膠體硒標記的安非他命單抗,NC膜5上分別包被有安非他命合成免疫抗原構成的檢測線T線3和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線4。參見圖I。最後，切好的試紙條裝入塑料卡內，且塑料卡上設有上樣孔7，由此製成安非他命檢測試劑卡，參見圖2。快速定量檢測血液中安非他命的試紙條可以與免疫層析判讀記錄儀配套使用。4. 4檢測方法將被檢血液樣本平衡至室溫，將製備好的試劑卡平放，向加樣孔加入待檢樣本10 20 μ I，然後在上樣墊上加稀釋液60 100 μ I，或者直接在上樣墊上加入3滴待檢樣本進行檢測。10分鐘內觀察定性結果，同時線條顏色強度可用配套的免疫層析判讀記錄儀定量測試。根據儀器內存標準曲線，10-15分鐘可定量檢測出血液中的安非他命濃度。4. 5結果判斷陰性，在檢測線(T)和質控線(C)位置各出現一條色帶。陽性，只在質控線(C)位置出現一條色帶。無色帶出現或僅在檢測線位置出現一條色帶，說明檢測無效，應重新檢測。定量範圍為O 2000ng/mL,超過2000ng/mL,可對樣本進行適量稀釋，同樣可得到定量結果。實施例5甲基安非他命(冰毒)金標免疫滲濾法試劑的製備5. I膠體金標記抗原的製備
取IOml膠體金溶液，加入O. 2MK2C03將溶液pH調到pH7 10，然後加入適量的冰毒合成抗原溶液，室溫搖動15min，然後加入終濃度為O. 2%的聚乙二醇20000和終濃度為
I%的牛血清白蛋白，繼續攪拌15min，然後置4°C冰箱2h，於4°C、10000r/min離心20min，棄上清，用稀釋液恢復到原體積，於4°C、10000r/min離心20min,棄部分上清液至金標抗原恢復到原體積的1/10，放置在4°C冰箱備用。5. 2硝酸纖維膜抗體包被將硝酸纖維素膜裁剪成I X lcm，將冰毒合成免疫抗原產生的抗體用O. Olmol/LPBS (pH7. 2)稀釋成I : 20，然後取I μ I點在硝酸纖維膜檢測點，同時將羊抗鼠IgG抗體稀釋成合適比例，點在硝酸纖維膜指控點，室溫包被15min，然後浸在含I % BSA O. Olmol/LPBS(pH7. 2)中室溫封閉lOmin，取出晾乾，將其放入裝有多層吸水紙的單項測試盒，4°C密封保存備用。
5. 3試紙條的裝配 在乾燥室內溫度20 25°C，溼度小於30 %，取塑料支撐板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板的中部粘貼，在NC膜T線一側搭接標記物墊，在標記物墊另一側搭接粘貼上樣墊；在NC膜C線一側搭接吸樣墊。然後用裁剪機將貼好的塑料板切成合適寬度的試紙條。最終結構為上樣墊I、標記物墊2、NC膜5和吸樣墊6依次粘附於不吸水的支撐薄片8，標記物墊2上包被有膠體硒標記的甲基安非他命單抗,NC膜5上分別包被有甲基安非他命合成免疫抗原構成的檢測線T線3和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線4。參見圖I。最後，切好的試紙條裝入塑料卡內，且塑料卡上設有上樣孔7，由此製成安非他命檢測試劑卡，參見圖2。快速定量檢測血液中安非他命的試紙條可以與免疫層析判讀記錄儀配套使用。5. 4檢測方法取適量待測血液樣本加入裝置孔內，待滲入，然後取適量金標抗原加入孔內，待滲入。最後加入200 μ I洗漆液，待滲入，10分鐘後觀察結果。5. 5結果判斷陰性，在檢測點和質控點位置各出現一個紅色圓點。陽性，只在質控點位置出現一個紅色圓點。無紅色圓點出現或僅在檢測點位置出現一個紅色圓點，說明檢測無效，應重新檢測。
權利要求
1.一種快速定量檢測血液中毒品的試紙條，包括上樣墊(I)、標記物墊(2)、NC膜(5)、吸樣墊(6)和支撐薄片(8)，其特徵在於，所述的上樣墊(I)、標記物墊(2)、NC膜(5)和吸樣墊(6)依次粘附於不吸水的支撐薄片(8)，標記物墊(2)上包被有標記的抗毒品單抗，NC膜(5)上分別包被有毒品合成免疫抗原構成的檢測線T線(3)和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線(4)，所述試紙條與免疫層析判讀儀配套使用進行毒品的定量檢測，定量檢測範圍為 O 2000ng/mL。
2.根據權利要求I所述的試紙條，其特徵在於，所述的抗毒品單抗通過膠體金標記法、乳膠微球標記法、納米磁珠標記法或膠體硒標記法標記於標記物墊⑵上。
3.根據權利要求2所述的試紙條，其特徵在於，所述的膠體金標記法包括以下的步驟用氯金酸-檸檬酸三鈉還原法製備直徑為40nm的膠體金溶液，用O. 2M K2CO3將溶液pH調到pH7 10，緩慢攪拌，加入抗毒品單抗使其終濃度為5 15 μ g/ml，繼續攪拌，再加入終濃度為O. 2%酪蛋白鈉，O. I %聚乙二醇20000進行封閉20-40分鐘，離心後棄上清，用膠體金工作液復溶至70-80ml，按Iml溶液鋪14_18cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置於溫度20 25°C、溼度小於30%的乾燥間乾燥2 4小時。
4.根據權利要求2所述的試紙條，其特徵在於，所述的乳膠微球標記法包括以下的步驟取紅色乳膠微球，加入O. IM pH6. 5MES混勻，加入lOmg/mlNHS和10mg/ml EDC .HCl，離心，去上清，沉澱用硼砂緩衝液重懸，振蕩、超聲處理即成活化後的乳膠微球；用O. 1ΜρΗ7 10的硼砂緩衝液將毒品單抗稀釋，然後加入活化乳膠微球，振蕩、離心、去上清，沉澱用酪蛋白溶液重懸，經超聲粉碎、振蕩後，重複離心，去上清，沉澱重懸，再次超聲粉碎、離心，沉澱加保存液懸浮，即為乳膠微球標記嗎啡單克隆抗體結合物，用工作液稀釋乳膠抗體結合物溶液，按Iml溶液鋪14-18cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置於溫度20 25°C、溼度小於30%的乾燥間乾燥2 4小時。
5.根據權利要求2所述的試紙條，其特徵在於，所述的納米磁珠標記法包括以下的步驟取磁珠，用50mM MES (pH5. 7)配製成I %的納米磁珠溶液，加入水溶性EDC，35-40°C lOmin，再加入毒品單隆，35-40°C孵育I. 5 2. 5小時，然後用磁力架吸附磁珠，將緩衝液更換至O. OlM ρΗ7· 2的PBS，含O. 5% BSA,O. 5% Tween，完成標記；再用工作液製成O.3-0. 7mg/ml的溶液，按Iml溶液鋪20-24cm2的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜上，乾燥2_4小時。
6.根據權利要求2所述的試紙條，其特徵在於，所述的膠體硒標記法包括以下的步驟用抗壞血酸還原亞硒酸製備膠體硒溶液，以O. 2MK2C03將溶液pH調到pH7 10，然後將溶液置於磁力攪拌器上緩慢攪拌，緩慢加入安非他命單克隆抗體使其終濃度為5 15μ g/ml，繼續攪拌，再加入10%的BSA至終濃度為I %進行封閉，12000轉離心，棄上清，用工作液復溶至原體積的1/10，按Iml溶液鋪14-18cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置於溫度20 25°C、溼度小於30%的乾燥間乾燥2 4小時。
7.根據權利要求I所述的試紙條，其特徵在於，所述的NC膜(5)按如下方法進行製備用O. OlM pH7. 2PBS將毒品合成免疫抗原分別稀釋成O. 2 I. Omg/ml，然後用噴膜儀在NC膜上按I. 0-1. 5 μ Ι/cm劃線包被，同時包被羊抗鼠IgG抗體作為C線，包被完成後將NC膜置於乾燥間乾燥8 10小時。
8.一種快速定量檢測血液中毒品的方法，其特徵在於，所述方法包括以下步驟(1)加樣將被檢血液樣本平衡至室溫，將製備好的試劑卡平放，向加樣孔加入待檢樣本10 20 μ I， 然後在上樣墊上加稀釋液60 100 μ I ; (2)根據試劑條上線條的顏色強度以及免疫層析判讀記錄儀中內存的標準曲線，可定量檢測出血液中毒品的濃度。
全文摘要
一種快速定量檢測血液中毒品的試紙條及檢測方法，所述的試紙條包括上樣墊、標記物墊、NC膜、吸樣墊和支撐薄片，所述的上樣墊、標記物墊、NC膜和吸樣墊依次粘附於不吸水的支撐薄片，標記物墊上包被有標記的抗毒品單抗，NC膜上分別包被有毒品合成免疫抗原構成的檢測線T線和羊抗鼠IgG抗體構成的質控線C線。該試紙條具有簡便、準確、快速定量、靈敏度和特異性高、經濟實用、適合於現場檢測等優點。
文檔編號G01N33/532GK102890152SQ20111020301
公開日2013年1月23日 申請日期2011年7月20日 優先權日2011年7月20日
發明者李洲, 許俊豔 申請人:天津中新科炬生物製藥有限公司